TGF-β1对结直肠癌细胞株侵袭转移及IL-22表达的影响

目的 探讨转化生长因子β1（TGF-β1）对结直肠癌细胞株侵袭转移及白细胞介素22（IL-22）蛋白表达的 影响。方法 以结直肠癌HCT116细胞株为研究对象,以不同浓度（0、5、10、15、20、30、50 μg/L）TGF-β1处理24、48 h 后,CCK-8法检测结直肠癌HCT116细胞体外增殖情况;将结直肠癌HCT116细胞株分为对照组和10 μg/L TGF-β1 处理组。Transwell侵袭迁移实验和划痕实验检测TGF-β1对HCT116细胞侵袭迁移能力的影响;采用RT-PCR检测 TGF-β1对HCT116细胞TGF-β1、IL-22 mRNA表达的影响;免疫细胞化学染色和Western blot 检测HCT116细胞中 TGF-β1、IL-22、信号转导和转录激活因子3（STAT3）、E-钙黏蛋白（E-cadherin）表达水平。结果 CCK-8结果显示, 0、5、10、15、20、30、50 μg/L TGF-β1 溶液刺激 24、48 h 后,不同 TGF-β1 浓度处理组结直肠癌 HCT116 细胞光密度 （OD）值差异均无统计学意义（均P＞0.05）。10 μg/L TGF-β1处理HCT116细胞48 h后,细胞侵袭能力、迁移能力和 迁移距离均明显升高（均P＜0.01）;TGF-β1处理组TGF-β1 mRNA表达水平明显高于对照组,而IL-22 mRNA表达水 平明显低于对照组（均P＜0.01）;免疫细胞化学染色和Western blot结果显示,TGF-β1处理组TGF-β1、STAT3蛋白表 达水平明显高于对照组,而IL-22、E-cadherin蛋白表达水平明显低于对照组（均P＜0.05）。结论 TGF-β1可能促进 HCT116细胞侵袭和迁移,但对HCT116细胞的增殖影响不明显,结直肠癌HCT116细胞中TGF-β1可能抑制IL-22蛋 白的表达。     

五味子乙素对HK-2细胞缺氧损伤的保护作用

卢爱龙 1, 谭小月 2, 张勉之 3△, 吴银娜摘要： 目的 探讨五味子乙素 （Sch B） 对氯化钴 （CoCl2） 诱导的人类近端肾小管上皮 （HK-2） 细胞缺氧损伤的保护作用及其可能机制。方法 取离体培养 HK-2 细胞, 随机分为 4 组。对照 （C） 组： 细胞未经任何处理。CoCl2组 （化学乏氧组）： 加入 600 μmol/L 的 CoCl2 处理 24 h。Sch B 预保护（CoCl2+ Sch B）组： 分别加入终浓度为 1 μmol/L 和 10 μmol/L Sch B 预处理 2 h 后, 其余操作同 CoCl2 组。Sch B 组： 分别加入终浓度 1 μmol/L 和 10 μmol/L Sch B 处理 2 h。CCK-8 试剂盒检测各组细胞活性; AnnexinV-FITC/PI 双标记流式细胞仪检测各组细胞凋亡率; Western Blot 检测各组缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）蛋白表达; RT-PCR 检测各组 HIF-1α和诱导型一氧化氮合酶（iNOS） mRNA 表达。结果 与对照组相比, CoCl2组细胞活性明显降低, 细胞凋亡率、 HIF-1α蛋白表达量和 iNOS mRNA 表达量显著增加, HIF-1α mRNA 表达量差异无统计学意义; Sch B 预保护组较 CoCl2组细胞活性显著增加, 细胞凋亡率、 HIF-1α蛋白表达量、 HIF-1α及 iNOS mRNA 表达量均显著减少; Sch B 组与对照组细胞活性、 细胞凋亡率差异无统计学意义, Sch B 组几乎不表达 HIF-1α蛋白。结论 Sch B 可能通过抑制 HIF-1α蛋白和 iNOS mRNA 的表达减少 HK-2 细胞的凋亡, 从而对 HK-2 细胞缺氧损伤起保护作用。     

低氧对HTR-8/SVneo细胞增殖及HIF-1α、VEGF、MMP-9、TIMP-1表达的影响

目的 采用二氯化钴（CoCl2）模拟体外低氧环境,探讨低氧状态对滋养细胞株HTR-8/SVneo细胞增殖及缺 氧诱导因子（HIF）-1α、血管内皮生长因子（VEGF）、基质金属蛋白酶（MMP）-9、基质金属蛋白酶组织抑制因子 1 （TIMP-1）蛋白表达的影响。方法 采用0、50、100、200、400、800、1 000、1 200 μmol/L的CoCl2处理HTR-8/SVneo细 胞,建立化学缺氧模型,CCK8法检测以上浓度培养24 h、48 h后对HTR-8/SVneo细胞增殖的影响;根据CCK8实验结 果拟定 CoCl2低、中、高浓度组,Western blot 检测 CoCl2低、中、高浓度组作用 48 h 对 HTR-8/SVneo 细胞中 HIF-1α、 VEGF、MMP-9、TIMP-1蛋白表达的影响。结果 CCK8实验提示低氧状态激活HTR-8/SVneo细胞增殖,CoCl2作用于 HTR-8/SVneo细胞48 h后,OD值随浓度增加而上升;同一CoCl2浓度作用下,作用48 h较作用24 h的OD值均上升。 选择100、200、400 μmol/L的CoCl2作为CoCl2低、中、高浓度组。与空白组对比,CoCl2低、中、高浓度组HTR-8/SVneo 细胞中HIF-1α、MMP-9蛋白表达水平上调（P＜0.05）,MMP-9/TIMP-1比例上升,呈浓度依赖性（P＜0.05）,CoCl2中、 高浓度组的VEGF的蛋白表达水平上调（P＜0.05）,CoCl2低、中、高浓度组的TIMP-1蛋白表达水平下降,但随CoCl2浓 度增加而呈上升趋势。结论 低氧状态可增强 HTR-8/SVneo 细胞的增殖能力,并可能通过 HIF-1α 的介导上调 VEGF的表达与MMP-9/TIMP-1比值。     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素通过上调Slug促进结直肠癌细胞上皮-间质转化的研究

目的 研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素(TSA)诱导结直肠癌细胞HCT116发生上皮-间质转化(EMT)的潜在分子机制.方法 TSA处理结直肠癌细胞HCT116,观察细胞形态变化;划痕实验观察细胞迁移侵袭能力的变化.实时定量PCR、Western blot检测HCT116细胞EMT标志物以及Slug的表达情况.siRNA敲除Slug表达,Western blot检测HCT116细胞EMT标志物表达变化,以及细胞形态变化.结果 TSA可以促进结直肠癌细胞HCT116的迁移能力,诱导HCT116细胞发生EMT转化,包括细胞形态改变,EMT标志物表达变化.TSA可以促进EMT关键转录因子Slug的表达,包括蛋白和mRNA水平;敲除Slug表达可以抑制TSA诱导的EMT转化过程.结论 组蛋白去乙酰化酶抑制剂TSA通过上调Slug的表达促进结直肠癌细胞HCT116发生EMT转化,从而提高其迁移能力.     

c-Myc通过缺氧诱导因子-1α调控结肠癌细胞HT-29的增殖

目的研究癌基因c-Myc对人结肠癌细胞HT-29中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)的影响及其对肿瘤细胞增殖的作用。方法构建高表达c-Myc的质粒pcDNA3.1-c-Myc;将构建好的pcDNA3.1-c-Myc质粒转染入HT-29细胞中,通过Western blot印迹法检测c-Myc在HT-29细胞中的表达情况。应用Real-time PCR和Western blot印迹法检测常氧和乏氧状态下HT-29细胞系中HIF-1α的mRNA和蛋白水平,同时检测HIF-1α下游靶基因血管内皮生长因子(VEGF)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)的mRNA水平。共转染pcDNA3.1-c-Myc质粒和HIF-1α的siRNA入HT-29细胞中。应用噻唑蓝(MTT)法检测HT-29细胞的增殖情况。结果成功构建pcDNA3.1-c-Myc质粒;常氧、乏氧状态下转染pcDNA3.1-c-Myc质粒后,HT-29细胞系中HIF-1α的mRNA水平无变化,VEGF和eNOS的mRNA水平明显升高,HIF-1α蛋白水平明显增高。高表达c-Myc的HT-29细胞增殖能力明显增强。共转染pcDNA3.1-c-Myc质粒和HIF-1α的siRNA后,HT-29细胞的增殖能力明显降低。结论在HT-29细胞系中c-Myc通过HIF-1α调控HT-29细胞的增殖。     

胰岛素样生长因子-1对氯化钴诱导的PC12细胞凋亡的抑制作用

目的 探讨胰岛素样生长因子-1（IGF-1）对氯化钴（CoCl2）诱导的肾上腺嗜铬细胞瘤 PC12细胞凋亡的作 用及机制。方法 取对数生长期的 PC12细胞,分别以 10、20、40、80 μmol/L的 CoCl2溶液和 100、200、400 μg/L的 IGF- 1溶液处理细胞,CCK-8法检测细胞活力,得出 CoCl2和 IGF-1最佳干预浓度。根据选定的实验条件,应用 CoCl2处理 PC12细胞建立 HIE细胞模型,实验分为对照组、CoCl2处理组、IGF-1+CoCl2处理组。分组处理 24 h后采用 CCK-8法 检测细胞存活率;TUNEL染色检测细胞凋亡情况;Western blot检测各组细胞 Bax、Bcl-2及 Caspase-3的蛋白的表达 水平。最后在上述实验的基础上,设 CoCl2处理组、CoCl2+IGF-1处理组、HIF-1α抑制剂 2-甲氧雌二醇（2-MeOE2）+ CoCl 2组和 CoCl2+2-MeOE2+IGF-1组,Western blot观察 IGF-1、2-MeOE2及两者共用对 PC12细胞 HIF-1α及 Bax的表 达水平的影响。结果 CCK-8检测结果显示,40 μmol/L CoCl2和 200 μg/L IGF-1为最佳干预浓度。利用以上浓度分 组干预细胞 24 h后,与 CoCl2组相比,IGF-1+CoCl2处理组细胞存活率明显提升,TUNEL阳性细胞数和细胞比例降低, 同时抗凋亡蛋白 Bcl-2表达上调,促凋亡蛋白 Bax、Caspase-3,HIF-1α表达下调,差异均有统计学意义（均P＜0.05）。 应用 2-MeOE2对细胞进行预处理后,CoCl2+2-MeOE2组与 2-MeOE2+IFG-1组 HIF-1α和 Bax蛋白表达差异无统计 学意义,但均较 CoCl2+IGF-1组明显下调（P＜0.01）。结论 IGF-1可抑制 CoCl2诱导的 PC12细胞凋亡,其保护作用 可能与 HIF-1α表达下调有关。     

外源性干扰 PVT1表达对结直肠癌细胞增殖、侵袭和凋亡的影响

目的：外源性干扰PVT1表达对结直肠癌（CRC）细胞增殖、侵袭和凋亡的影响。方法体外转染小干扰RNA（siRNA）干扰RKO和HCT116细胞PVT1表达（si‐PVT1组）;另设阴性对照siRNA（si‐NC）组。MTT实验和克隆形成实验检测 RKO和 HCT116细胞增殖力,Transwell实验检测RKO和HCT116细胞侵袭力,qRT‐PCR及Western blot检测相关抑癌基因SMAD4的表达。结果与si‐NC组相比,si‐PVT1组RKO和HCT116细胞增殖力抑制（P＜0．05或P＜0．01）,细胞克隆数减少（P＜0．01）,细胞侵袭数目减少（P＜0．05或P＜0．01）,且SMAD4 mRNA和蛋白表达水平均升高（P＜0．05）。结论 PVT1能促进CRC细胞增殖和侵袭,抑制CRC细胞凋亡。     

西红花苷抑制NFATc3活性促进与肿瘤成纤维细胞共培养的结直肠癌细胞放射敏感性

目的 探究西红花苷对与肿瘤成纤维细胞（CAFs）共培养的结直肠癌细胞放射敏感性的影响,并探究分子机制。方法 通过实时荧光定量聚合酶链式反应（qRT-PCR）和蛋白质免疫印记（Western blotting）比较人正常结肠上皮细胞NCM460和结直肠癌细胞系SW480、SW620、HCT116、LOVO中活化T细胞核因子c3（NFATc3）表达差异。建立CAFs与HCT116细胞共培养体系,西红花苷处理细胞后经不同剂量（0、2、4、6、8 Gy）X射线照射,细胞克隆形成实验分析细胞存活分数（SF）。再将HCT116细胞分为对照组、6 Gy组、CAFs/HCT116＋6 Gy组、CAFs/HCT116＋西红花苷＋6 Gy组,进行对应处理后,MTT法检测各处理组HCT116细胞活性,流式细胞术检测各处理组HCT116细胞凋亡率,Hoechst 33258染色观察各处理组HCT116细胞凋亡形态,qRT-PCR和Western blotting测定各处理组HCT116细胞中NFATc3表达水平。结果 相较于人正常结肠上皮细胞NCM460,人结直肠癌细胞系SW480、SW620、HCT116、LOVO中的NFATc3 mRNA和蛋白相对表达量均显著上调（P＜0.05）。与HCT116细胞比较,与CAFs共培养的HCT116细胞经辐射后的SF显著增高（P＜0.05）;与CAFs共培养的HCT116细胞比较,与CAFs共培养的HCT116细胞经西红花苷处理再进行辐射的SF显著降低（P＜0.05）。与6 Gy组比较,CAFs/HCT116＋6 Gy组HCT116细胞存活率显著升高（P＜0.05）,细胞凋亡率显著下降（P＜0.05）,细胞内染色也较为均匀,未见致密浓染的凋亡状细胞,细胞中NFATc3 mRNA和蛋白相对表达量均显著上调（P＜0.05）;而与CAFs/HCT116＋6 Gy组比较,CAFs/HCT116＋西红花苷＋6 Gy组HCT116细胞存活率显著降低（P＜0.05）,细胞凋亡率显著升高（P＜0.05）,细胞中有较多致密浓染、碎裂荧光块,同时,细胞中NFATc3 mRNA和蛋白相对表达量显著下调（P＜0.05）。结论 西红花苷能够明显提高与CAFs共培养的结直肠癌HCT116细胞的放射敏感性,从而促进细胞发生凋亡,该作用可能与抑制NFATc3有关。     

LncRNA TMPO-AS1调节miR-340-5p/RUNX1轴对结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的 探讨长链非编码RNA TMPO反义RNA1(LncRNA TMPO-AS1)调控miR-340-5p/RUNT相关转录因子1(RUNX1)轴对结直肠癌(CRC)细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法 qRT-PCR检测人正常结肠上皮细胞HCoEpiC、人CRC细胞SW480、HCT116、LOVO、HT-29中TMPO-AS1、miR-340-5p、RUNX1表达;将HCT116细胞随机分为：si-ctrl组、si-TMPO-AS1组、mimics NC组、miR-340-5p组、si-TMPO-AS1+anti-miR-ctrl组、si-TMPO-AS1+anti-miR-340-5p组;qRT-PCR检测6组HCT116细胞TMPO-AS1、miR-340-5p、RUNX1水平;CCK-8法检测HCT116细胞活力;EDU法检测HCT116细胞增殖;Transwell检测HCT116细胞迁移和侵袭;western blot检测HCT116细胞RUNX1、PCNA、MMP-2表达;双荧光素酶报告基因实验分别验证TMPO-AS1和miR-340-5p、miR-340-5p和RUNX1的...     

缺氧诱导因子-1α和M2型丙酮酸激酶在胆管癌细胞中的表达及对糖酵解的影响

目的分析缺氧诱导因子-1α和M2型丙酮酸激酶在胆管癌细胞中的表达情况及其对糖酵解的影响。方法分别以不同浓度的氯化钴溶液诱导的缺氧条件下培养胆管癌QBC939细胞,测定并比较培养24h后各组细胞HIF-1α、PK-M2蛋白表达水平和乳酸分泌量。结果缺氧组的HIF-1α、PK-M2蛋白表达水平均显著高于常氧组,胆管癌QBC939细胞24h乳酸分泌量,随氯化钴浓度逐渐增加,且均显著高于常氧培养时分泌的乳酸量,比较差异具有统计学意义(P0.05)。经Pearson相关分析法分析,PK-M2与HIF-1α呈显著正相关(r=0.436,P=0.002)。结论缺氧诱导因子-1α和M2型丙酮酸激酶在人胆管癌QBC939细胞中的蛋白表达水平显著提高,且均在胆管癌细胞糖酵解水平的升高过程中发挥重要作用。     

丹参酮ⅡA对缺氧诱导下鼻咽癌CNE-2细胞增殖、VEGF表达及NO分泌水平的影响

目的 研究丹参酮ⅡA对缺氧诱导下鼻咽癌CNE-2细胞增殖、VEGF表达及NO分泌水平的影响.方法 实验设常氧对照组、缺氧组(CoCl2处理进行缺氧诱导)和实验组(CoCl2缺氧诱导加不同浓度丹参酮ⅡA处理).丹参酮ⅡA浓度分别取0.5、1.0、2.0、5.0mg/L,处理时间分别为12h、24h和48h;MTT法检测丹参酮ⅡA对CNE-2细胞增殖的影响;ELISA方法检测VEGF蛋白表达水平:硝酸还原酶法检测NO分泌水平.结果 MTT实验表明,丹参酮ⅡA呈时间、剂量依赖性抑制缺氧诱导下CNE-2细胞的增殖(均P＜0.05),5.0mg/L丹参酮ⅡA处理48h后其抑制率达到52.79%.ELISA实验发现丹参酮ⅡA可呈剂量依赖性降低缺氧诱导下CNE-2细胞VEGF的蛋白表达水平(剂量大于1.0mg/L后均P＜0.05),5.0mg/L丹参酮ⅡA处理24h后VEGF表达水平降低37.21%;丹参酮可呈剂量依赖性降低CNE-2细胞NO分泌水平.结论 丹参酮ⅡA可有效抑制缺氧诱导下CNE-2细胞的增殖,降低其VEGF蛋白的表达及NO分泌水平.     

lncRNA FOXCUT调控Notch通路抑制结肠癌细胞增殖、侵袭的实验研究#br#

目的　研究长链非编码RNA（lncRNA）FOXC1启动子临近转录体（FOXCUT）对结肠癌细胞（HCT116）增殖、侵袭的影响及作用机制。方法　向HCT116细胞转染FOXCUT siRNA（FOXCUT siRNA组）,以转染阴性siRNA为阴性对照组（FOXCUT siRNA-NC组）,未转染组为正常对照组（NC组）,通过qPCR法确定FOXCUT干扰效果,并检测结肠癌及癌旁组织、人结肠癌细胞株（SW480、SW620、HCT116、HT29）和人正常结肠上皮细胞（NCM460）中FOXCUT mRNA表达水平;通过CCK-8、集落形成实验和Transwell实验检测沉默FOXCUT对HCT116细胞增殖、集落形成能力及侵袭能力的影响;qPCR检测沉默FOXCUT后HCT116细胞中Notch1、Hes1 mRNA表达变化;蛋白免疫印迹（Western blot）实验检测HCT116细胞中Notch1、Hes1蛋白表达情况。结果　与癌旁组织比较,结肠癌组织中FOXCUT mRNA表达水平显著增高（P＜0.01）;与NCM460细胞比较,SW480、SW620、HCT116、HT29结肠癌细胞株中FOXCUT mRNA表达水平均显著增高（P＜0.05）,其中以HCT116细胞中表达水平最高;与FOXCUT siRNA-NC组比较,FOXCUT siRNA组HCT116细胞中FOXCUT mRNA表达水平显著降低（P＜0.01）;NC组、FOXCUT siRNA-NC组HCT116细胞中FOXCUT mRNA表达水平差异无统计学意义（P＞0.05）;沉默FOXCUT可显著抑制细胞增殖、集落形成能力及侵袭（P＜0.05）,并抑制Notch1、Hes1 mRNA及蛋白表达（P＜0.01）。结论　沉默FOXCUT可抑制结肠癌HCT116细胞增殖及侵袭,可能与抑制Notch通路有关。     

不同浓度七氟醚对人前列腺癌细胞增殖与侵袭能力的影响

目的 观察不同浓度七氟醚对人前列腺癌 PC3 细胞增殖与侵袭的影响。方法 将 PC3 细胞随机分为 4 组： 对照组、 Treat1 组、 Treat2 组和 Treat3 组。对照组仅通入 O2及 CO2, Treat1～3 组在此基础上经 1.7%、 3.4%、 5.1% 七氟醚分别作用 2、 4、 6 h。MTT 检测各组细胞的增殖能力; Transwell 法检测各组细胞的侵袭能力; Western blot 检测各组细胞中缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）蛋白表达水平。结果 与处理前相比, 处理 2、 4 和 6 h 后, 人前列腺癌 PC3 细胞的增殖和侵袭能力均明显增强 （均 P＜0.05）, 细胞中 HIF-1α的蛋白表达水平明显上调 （P＜0.05）, 且 Treat3 组＞ Treat2 组＞Treat1 组（P＜0.05）。结论 七氟醚可增强人前列腺癌 PC3 细胞的增殖与侵袭能力, 且随着时间和浓度变化细胞的增殖与侵袭能力逐渐增强, 其机制可能与上调 HIF-1α的表达有关。     

缺氧对食管癌细胞缺氧诱导因子-1α及己糖激酶表达的影响

目的探讨不同缺氧程度对食管癌细胞株TE1中缺氧诱导因子-1α（Hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α）及糖酵解关键酶表达的影响。方法 TE1细胞分别在正常氧分压和缺氧条件下培养,缺氧时间设定为6、12、24及48h,使用Western blot方法检测缺氧培养不同时间后细胞中HIF-1α及糖酵解关键酶己糖激酶II（Hexokinase-II,HK-II）的蛋白水平表达变化。结果常氧及缺氧条件下TE1细胞中HIF-1α及HK-II均有表达,缺氧后表达均较常氧培养时明显增强,且随缺氧时间不同而呈先增多后减少的动态变化。结论低氧能够增加食管癌细胞中HIF-1α及HK-II表达而促进糖酵解进程,联合抑制HIF-1α和糖酵解酶可能成为治疗食管癌的潜在的靶点。     

MK801对结肠癌细胞增殖、凋亡和迁移的影响

摘要： 目的 探究 N-甲基-D-天冬氨酸受体亚型 1（NMDAR1）在结肠癌细胞 HT29 和 SW116 中的表达, 以及 NMDAR1 拮抗剂 MK801 对 HT-29 和 SW116 细胞生长抑制、 凋亡和迁移的影响。方法 采用免疫组织化学法检测 结肠癌细胞 HT-29 和 SW116 细胞表面 NMDAR1 的表达; 应用噻唑蓝（MTT）比色法测定 62.5、 125.0、 250.0、 500.0、 1 000.0、 2 000.0 μmol/L 的 MK801 对于 HT-29 和 SW116 细胞增殖作用的影响; 应用流式细胞术检测 2 000 μmol/L 的 MK801 对 HT29 和 SW116 细胞凋亡的影响; 应用细胞划痕实验检测 50 μmol/L MK801 对于结肠癌细胞 HT-29 和 SW116 迁移能力的影响。结果 结肠癌细胞 HT-29 和 SW116 均表达 NMDAR1, 且主要表达于细胞质中; 各浓度的 MK801 对 HT-29 细胞, 以及浓度为 500.0、 1 000.0、 2 000.0 μmol/L 的 MK801 对 SW116 细胞的生长抑制作用具有时 间效应关系, 24、 48 及 72 h 各 MK801 浓度组对 HT-29 和 SW116 细胞的抑制率随浓度升高整体呈增强趋势, 但抑制 率不呈明显的剂量效应关系; MK801 具有促进 HT-29 和 SW116 细胞凋亡的作用, 且主要表现诱导细胞早期凋亡; MK801 可抑制 HT-29 和 SW116 细胞迁移。结论 NMDAR1 在结肠癌细胞胞质中表达, 且 NMDAR1 拮抗剂 MK801 具有抑制肿瘤细胞生长、 迁移, 促进其早期凋亡的作用, 有望成为新一代抗肿瘤药物。     

半边旗提取物5F诱发结直肠癌细胞生长抑制及细胞凋亡

目的：检测半边旗（PsL）提取物5F（ent -11α- hydroxy -15- oxo - kaur -16- en -19- oic - acid）对HCT -116结直肠癌（CRC）细胞的抗增殖及促细胞凋亡效果。方法采用噻唑蓝（MTT）法检测细胞毒性。通过有代表性的细胞凋亡相关蛋白表达及 Annexin V/ PI 染色确定细胞凋亡。采用标准实验方案测量活性氧（ROS）水平。结果5F 以剂量依赖及时间依赖方式抑制 HCT -116细胞增殖。免疫印迹分析表明5F 提高了 HCT -116细胞中的 Bax/ Bcl -2比值。5F 能既够增强顺铂（cisplatin）对 HCT -116细胞生长的抑制效果又能够提高顺铂诱导的 HCT-116细胞凋亡水平。5F 不仅没有提高活性氧水平,反而降低了顺铂诱导的活性氧生成。结论5F 能够诱导结直肠癌细胞凋亡并因此表现出癌症治疗潜力。     

缺氧对肝癌SMMC7721细胞体外黏附和迁移能力的影响

目的研究低氧对体外培养的人肝癌SMMC7721细胞株黏附、迁移能力的影响,并探讨其可能存在的分子机制。方法通过氯化钴诱导SMMC7721细胞缺氧,通过细胞黏附试验、transwell小室方法观察缺氧对细胞黏附和迁移能力的影响;免疫细胞化学方法检测细胞缺氧前后缺氧诱导因子1a(HIF-1a)和血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶2(MMP2)蛋白表达变化。结果黏附试验显示缺氧后细胞黏附力增强(P<0.01),transwell迁移实验显示,缺氧后细胞迁移能力较常氧时明显增加(P<0.05);细胞免疫组织化学检测显示缺氧24h HIF-1a、VEGF、MMP2蛋白表达均较常氧时增加(P<0.05)。结论氯化钴诱导缺氧后,SMMC7721细胞黏附、迁移能力增强;HIF-1a及其下游靶基因VEGF、MMP2的蛋白表达增加参与了这一生物学行为变化。     

大鼠肺动脉平滑肌细胞原代培养及低氧对缺氧诱导因子- 1α的影响

目的获得活力稳定、高度纯化的体外培养大鼠血管平滑肌细胞,为肿瘤研究提供实验材料;并探讨低氧对抗肿瘤药物研究新靶点：缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）的影响。方法无菌下取SD大鼠心肺组织,然后分离出肺动脉段,分离肺动脉中膜层,用组织块贴壁法培养,倒置相差显微镜观察细胞形态、普通免疫组织化学法（SP法）进行细胞鉴定。随后,将体外培养的大鼠PASMCs,设计常氧组、低氧组H2,H6,H12,H24,用Western blotting法检测HIF-1α的蛋白表达。结果用组织贴块法成功培养大鼠PASMCs,得到生长稳定、纯度高的PASMCs,且培养与纯化可以同时进行,可获得稳定传代的细胞;HIF-1α蛋白在常氧组有少量表达,在低氧条件下,其表达明显增加。结论成功建立体外大鼠肺动脉平滑肌细胞原代培养模型;低氧条件下促进其中HIF-1α的表达;这提示HIF-1α蛋白的表达可能是肿瘤细胞适应缺氧环境的重要原因。     

5’-氮杂-2’-脱氧胞苷对结直肠癌细胞株HT-29和LoVo中MGMT基因甲基化状态、mRNA表达及蛋白表达的影响

目的探讨甲基化酶抑制剂5’-氮杂-2’-脱氧胞苷（5’-Aza-CdR）对结直肠癌（colorectal cancer,CRC）细胞株HT-29和LoVo中MGMT基因甲基化水平、mRNA及蛋白表达的影响。方法用0.5、1.0、1.5μmol/L浓度的5’-Aza-CdR处理CRC细胞株HT-29和LoVo。应用MethyLight方法、实时荧光定量PCR方法及蛋白印迹试验（Westernblot）检测药物处理前后HT-29和LoVo细胞中MGMT基因的甲基化状态、mRNA和蛋白表达情况。结果 MethyLight检测HT-29和LoVo细胞中MGMT蛋白在药物作用后异常甲基化得到逆转。实时荧光定量PCR检测5’-Aza-CdR浓度为0.5、1.0、1.5μmol/L组HT-29细胞株和LoVo细胞株MGMT基因mRNA表达水平均较对照组上调,Western blot检测5’-Aza-CdR浓度为0.5、1.0、1.5μmol/L组MGMT蛋白表达水平均较对照组上调,且均具有药物剂量依赖性（P〈0.05,P〈0.01）。结论 CRC细胞株HT-29和LoVo中MGMT基因启动子甲基化可能是导致该基因表达下调甚至失活的主要原因。5’-Aza-CdR能够逆转CRC细胞株HT-29和LoVo中MGMT基因的甲基化状态,并能恢复mRNA及蛋白重新表达。     

低氧对人胃癌SGC7901细胞株SP细胞比例的影响与HIF-2α、OCT-4表达变化的关系

目的:通过观察低氧对人胃癌SGC7901细胞株侧群(side population,SP)细胞比例的影响及其与HIF-2α和OCT-4表达变化的关系,初步研究低氧对肿瘤干细胞的影响及机制.方法:Hoechst33342染色检测人胃癌SGC7901细胞系SP细胞比例,免疫荧光化学法检测OCT-4在SP和非SP细胞中的表达,免疫细胞化学法检测HIF-2α和OCT-4蛋白的表达.结果:常氧下人胃癌SGC7901细胞系中SP细胞的比例为2.36%,低氧诱导24、48、72h后其比例逐渐增加,分别为3.01%、3.23%、3.45%(P<0.05);常氧下OCT-4在SP和非SP细胞中的表达差异无统计学意义(P>0.05),低氧诱导24、48、72h后,OCT-4在SP细胞和非SP细胞中的表达逐渐增强(P<0.05),在SP细胞中的表达要高于非SP细胞.常氧下HIF-2α和OCT-4蛋白呈低水平表达,低氧诱导24、48、72h后,二者的表达逐渐增加(P<0.05),且HIF-2α和OCT-4蛋白呈高度正相关(P<0.05).结论:低氧可使人胃癌SGC7901细胞系中的SP细胞增多,其机制可能与低氧诱导HIF-2α-OCT4通路的表达,促进肿瘤细胞的干细胞化及维持干细胞的未分化状态有关.