番茄红素对巨噬细胞源性荷脂细胞胆固醇代谢及其相关蛋白Srebp-1、Caveolin-1表达的影响

目的:研究番茄红素对巨噬细胞源性荷脂细胞胆固醇代谢及其相关蛋白固醇调节元件结合蛋白1(Srebp-1)、小凹蛋白1(Caveolin-1)表达的影响。方法:建立巨噬细胞源性荷脂细胞模型,采用高效液相色谱法考察不同浓度(12.5、25、50μmol/L)番茄红素作用于荷脂细胞24h及25μmol/L番茄红素作用于荷脂细胞不同时间(12、24、48、72h)后细胞内总胆固醇(TC)、游离胆固醇(FC)和胆固醇酯(CE)的含量;蛋白印迹法检测番茄红素(25μmol/L、24h)组及其与Srebp-1蛋白抑制剂ALLN(20μmol/L、24h)联用组对荷脂细胞中Srebp-1、Caveolin-1蛋白表达的影响。另设立正常巨噬细胞组和荷脂细胞组进行比较。结果:与正常巨噬细胞组比较,荷脂细胞组细胞内TC、FC、CE含量均明显升高,Srebp-1、Caveolin-1蛋白表达明显减弱(P<0.05);与荷脂细胞组比较,番茄红素组荷脂细胞内TC、FC、CE含量均明显降低且呈一定的浓度和时间依赖性,Srebp-1、Caveolin-1蛋白表达明显增强(P<0.05);与番茄红素组比较,联用组细胞内Srebp-1、Caveolin-1蛋白表达均明显减弱(P<0.05)。结论:番茄红素能引起巨噬细胞源性荷脂细胞内TC、FC、CE含量降低,且可能与Srebp-1及Caveolin-1蛋白的表达上调有一定关系。     

Rolipram对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出和ABCA1表达的影响

目的　以THP 1巨噬细胞源性泡沫细胞为研究对象 ,探讨磷酸二酯酶抑制剂rolipram对THP 1巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1表达及细胞内胆固醇流出的影响。方法　用液体闪烁计数器检测细胞内胆固醇流出 ,运用逆转录 -多聚酶链反应和Westernblot印迹分别检测ABCA1mRNA与ABCA1蛋白的表达 ,采用低pH值EIA法测定细胞内cAMP水平。结果　实验显示PDE4抑制剂rolipram能引起THP 1巨噬细胞源性泡沫细胞cAMP水平、ABCA1表达和apoA 1介导的胆固醇流出成平衡增加 ,而细胞内总胆固醇、游离胆固醇与胆固醇酯明显减少。结论　PDE4抑制剂rolipram增加THP 1巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1表达及细胞内胆固醇流出 ,这为防治动脉粥样硬化发生发展提供一个新的策略     

罗格列酮对人单核巨噬细胞THP-1中胆固醇代谢的影响机制研究

目的:研究罗格列酮(RG)对氧化低密度脂蛋白(oxLDL)诱导的人单核巨噬细胞THP-1源性泡沫细胞中胆固醇代谢的影响机制。方法:将THP-1巨噬细胞分为空白对照组、oxLDL(100 mg.L-1)组和oxLDL(100 mg.L-1)+RG(10μmol.L-1)组,后2组先加oxLDL培养48 h,最后1组再加RG培养48 h,采用高效液相色谱法检测每组细胞内游离胆固醇(FC)和胆固醇酯(CE)的含量,逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)、蛋白质印迹法分别检测每组细胞中三磷酸腺苷结合盒转运蛋白(ABC)A1、ABCG1 mRNA及蛋白的表达情况。结果:与空白对照组比较,oxLDL组FC、CE含量明显升高,ABCA1、ABCG1 mRNA及蛋白表达均明显降低(P<0.01);与oxLDL组比较,oxLDL+RG组FC、CE含量明显降低,ABCA1、ABCG1 mRNA及蛋白表达均明显升高(P<0.01)。结论:RG可能通过上调THP-1巨噬细胞ABCA1、ABCG1的表达,减少FC在细胞内的蓄积,促进细胞内胆固醇代谢,进而抑制动脉粥样硬化的形成。     

脂联素对巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1及胆固醇含量的影响及机制

目的探讨脂联素对RAW264.7巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1及胆固醇含量的影响及其可能的机制。方法体外培养RAW264.7细胞,加入20 mg/L氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)共同孵育48 h,将其诱导成泡沫细胞,加入不同浓度(0、1、5、10μg/mL)的脂联素干预24 h,RT-PCR测定ABCA1 mRNA的表达,高效液相色谱测定细胞内胆固醇含量。观察脂联素对泡沫细胞中ABCA1表达的影响。结果脂联素显著增加RAW264.7巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1 mRNA的表达(P<0.05),并增加细胞内胆固醇含量,且呈浓度依赖性(P<0.05)。结论脂联素可以增加巨噬源性泡沫细胞ABCA1转录水平,促进胆固醇流出,延缓AS的发生发展。     

洛伐他汀、普罗布考对小鼠巨噬细胞源性泡沫细胞内胆固醇含量的影响

目的　观察不同剂量下洛伐他汀和普罗布考对巨噬细胞源性泡沫细胞中胆固醇含量的影响 ,借此进一步探讨药物在促进胆固醇外流中的作用。方法　离体培养小鼠腹膜巨噬细胞 ,利用氧化的低密度脂蛋白蓄积胆固醇形成泡沫细胞 ,给予不同剂量的洛伐他汀与普罗布考后 ,利用高效液相方法测定细胞内胆固醇的含量。结果　模型组胆固醇酯(CE)的含量和胆固醇酯 /总胆固醇 (CE/TC)比值均较正常组和血清对照组升高 ,且CE/TC >5 0 % ,提示泡沫细胞模型建立成功。洛伐他汀可明显减少泡沫细胞内TC、CE含量 ,降低CE/TC比值 ,且有一定剂量依赖性。普罗布考可明显减少泡沫细胞内TC、CE含量 ,但无剂量依赖性 ,对CE/TC比值亦无明显影响。结论　洛伐他汀可促进泡沫细胞内胆固醇外流、降低细胞内胆固醇含量 ,减轻泡沫细胞化。普罗布考可降低细胞内胆固醇含量但对泡沫细胞化的影响不明显。     

EGCG通过miR-33a上调ABCA1表达减少巨噬细胞脂质蓄积

目的研究EGCG是否通过影响miR-33a的表达,进而调控ABCA1表达,促进巨噬细胞内胆固醇流出。方法先建立THP~(-1)巨噬细胞源性泡沫细胞,然后用EGCG处理,Real time PCR检测细胞miR-33a表达。细胞随机分为3组:空白对照组、50μmol·L~(-1)EGCG处理组、50μmol·L~(-1)EGCG+80 nmol·L~(-1)miR-33a mimic处理组,Real time PCR和Werstern blot检测细胞ABCA1 mRNA和蛋白表达,油红O染色和高效液相色谱法检测细胞内脂质含量,[3H]法检测细胞内胆固醇流出。结果在不影响细胞活性状况下,EGCG呈浓度和时间依赖性下调miRNA33a表达;EGCG能明显上调ABCA1 mRNA和蛋白的表达,但能被转染miRNA33 mimic抑制;EGCG可减少THP~(-1)巨噬细胞源性泡沫细胞中的脂质蓄积,但能被细胞中转染miRNA33 mimic所弱化;EGCG减少细胞内胆固醇蓄积是与其促进细胞内胆固醇流出有关,细胞中转入过量miRNA33a可以抑制胆固醇流出。结论 EGCG可通过减少miRNA33a的生成,进而上调ABCA1表达,促进巨噬细胞中胆固醇流出,这可能是EGCG抗动脉粥样硬化作用的分子机制之一。     

三七总皂苷对小鼠巨噬细胞源性泡沫细胞形成的影响

目的:观察三七总皂苷(PNS)对小鼠巨噬细胞源性泡沫细胞形成的影响,以探讨PNS抗动脉粥样硬化(AS)作用的机制。方法:采用小鼠腹腔巨噬细胞与40mg.L-1的氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)孵育72h建立泡沫细胞模型,用PNS进行干预。油红O染色观察细胞内脂质堆积情况,酶法测定细胞内总胆固醇(TC)、游离胆固醇(FC)、胆固醇酯(CE)的含量及CE/TC比值。结果:模型组细胞中TC、FC、CE及CE/TC均显著高于对照组细胞(P<0.01);与模型组比较,PNS高、中剂量组细胞内TC、FC、CE及CE/TC均有显著性降低(P<0.01);且PNS各剂量组间有显著性差异。形态学上,PNS高、中剂量组细胞的油红O染色阳性细胞数显著减少。结论:PNS可能通过抑制泡沫细胞的形成发挥抗AS的作用。     

坎地沙坦对泡沫细胞胆固醇代谢的影响

目的观察坎地沙坦(CAN)对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导急性单核白血病细胞(THP-1)源性泡沫细胞及对三磷腺苷结合盒转运子A1(ABCA1)表达水平的作用。方法 THP-1源性细胞加入160 nmol.L-1佛波酯,在RPMI-1640液中孵育48 h,将其诱导分化为巨噬细胞后随机分为3组,对照组加入50 mg.L-1ox-LDL培养液孵育48 h;血管紧张肽Ⅱ(AngⅡ)组加入1×10-6mol.L-1AngⅡ后再加入50 mg.L-1ox-LDL培养液孵育48 h;CAN组加入1×10-6mol.L-1CAN后再加入1×10-6mol.L-1AngⅡ孵育,然后以50 mg.L-1ox-LDL处理48 h。分别采用油红O染色观察细胞内脂滴变化,酶化学法测定总胆固醇和胆固醇酯含量,Western blotting法检测ABCA1蛋白表达水平。结果 AngⅡ作用后,细胞内脂滴明显增多,细胞内总胆固醇和胆固醇酯含量及胆固醇酯/总胆固醇比值明显升高,ABCA1蛋白表达水平降低(P<0.05)。CAN能减少泡沫细胞内脂滴形成,导致细胞内总胆固醇和胆固醇酯含量及胆固醇酯/总胆固醇比值明显降低,一定程度上调泡沫细胞转运蛋白ABCA1表达(P<0.05),促进细胞内胆固醇酯流出。结论 AngⅡ减少泡沫细胞中ABCA1的表达,CAN可通过阻断AngⅡ1型受体促进ABCA1的表达及胆固醇酯流出。     

黄精多糖对小鼠腹腔源性巨噬泡沫细胞形成的抑制作用

目的:研究黄精多糖对小鼠腹腔源性巨噬泡沫细胞(MFC)形成的抑制作用。方法:体外传代培养细胞,以20 mg/L氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)培养细胞以复制MFC模型。试验分为空白对照(常规培养基)组、模型(常规培养基)组与黄精多糖高、中、低浓度(质量浓度分别为80、40、20 mg/L)组,复制模型的同时给药培养,连续72 h。以油红O染色,显微镜下观察细胞形态,计数10个视野内的细胞总数与MFC数并计算MFC形成率;测定细胞中总胆固醇(TC)、游离胆固醇(FC)含量并计算胆固醇酯(EC)量;Western blot法测定CD36、三磷酸腺苷结合转运子(ABCA)1、胆固醇酰基转移酶(ACAT)1蛋白的表达。结果:空白对照组细胞体积未见明显增大,油红O染色阳性细胞数量少。与空白对照组比较,模型组细胞体积增大,镜下可见细胞红油O染色阳性细胞数量增多,MFC形成率升高,TC、FC、EC含量增加,CD36、ACAT1蛋白表达增强,ABCA1蛋白表达减弱,差异有统计学意义(P<0.01)。与模型组比较,黄精多糖高、中、低浓度组细胞接近梭形,油红O染色阳性细胞数量减少,MFC形成率降低,TC、FC、EC含量减少,CD36、ACAT1蛋白表达减弱,ABCA1蛋白表达增强,差异有统计学意义(P<0.01或P<0.05)。结论:黄精多糖可抑制因ox-LDL诱导的MFC的形成。其机制可能与减少巨噬细胞内胆固醇的含量,下调CD36、ACAT1蛋白,并上调ABCA1蛋白表达有关。     

金花茶叶醇提物通过调节胆固醇逆向转运关键蛋白的表达抑制动脉粥样硬化

目的：探讨金花茶叶醇提物调节胆固醇逆向转运（RCT）关键蛋白细胞质膜微囊蛋白-1（caveolin-1）、清道夫受体B1（SR-B1）、A1型三磷酸腺苷结合盒转运体（ABCA1）、蛋白激酶A（PKA）的表达而抑制巨噬细胞向泡沫细胞衍变、拮抗动脉粥样硬化（AS）的潜在药理作用机制。方法：乙醇回流提取获得金花茶叶醇提物,制备金花茶叶醇提物含药大鼠血清。体外测试金花茶叶醇提物含药血清对巨噬细胞经典活化、吞噬氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）并衍变为泡沫细胞以及caveolin-1、SR-B1、ABCA1、PKA表达的调节作用。高脂饲喂雄性ApoE^-/-小鼠建立AS小鼠模型,体内测试金花茶叶醇提物对小鼠主动脉弓AS斑块形成以及内膜caveolin-1、SR-B1、ABCA1、PKA表达的调节作用。结果：10%金花茶叶醇提物含药血清显著抑制巨噬细胞经典活化,阻止其衍变为泡沫细胞,上调caveolin-1、SR-B1、ABCA1、PKA表达。金花茶叶醇提物显著上调AS小鼠主动脉内膜caveolin-1、SR-B1、ABCA1、PKA表达,抑制AS斑块形成。结论：金花茶叶醇提物可阻止巨噬细胞向泡沫细胞衍变,抑制AS斑块形成,可能与其上调RCT关键蛋白caveolin-1、SR-B1、ABCA1、PKA表达有关。     

CDK5介导的PPARγ磷酸化在动脉粥样硬化泡沫细胞形成过程中的作用

摘要：目的 探讨细胞周期素依赖蛋白激酶5（CDK5）介导的过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）磷酸化在 动脉粥样硬化中的作用。方法 常规培养小鼠Raw264.7巨噬细胞,实验设对照组（C组）、氧化低密度脂蛋白（oxLDL）组（O组,50 mg/L ox-LDL）、Roscovitine+ox-LDL组（R组,15 μmol/L Roscovitine+50 mg/L ox-LDL）。待细胞融合 至70%左右,R组加入15 μmol/L Roscovitine预处理30 min,之后O组和R组分别加入50 mg/L ox-LDL继续培养24 h, 使其转化为泡沫细胞;C组不作处理。利用Western blot检测各组pPPARγ、tPPARγ、p35和CDK5蛋白表达的变化,油 红O染色和异丙醇萃取实验分析各组细胞内脂质聚积情况,酶法测定细胞内胆固醇含量,反转录PCR（RT-PCR）检 测各组ox-LDL摄取相关基因CD36、SR-A1和胆固醇外流相关基因ABCA1、ABCG1的mRNA表达水平。结果 oxLDL诱导后,O组pPPARγ/tPPARγ比值、p35/CDK5比值、细胞内脂质聚积、总胆固醇含量、游离胆固醇含量、胆固醇 酯/总胆固醇比值均较 C 组明显升高（P＜0.05）;CDK5 抑制剂干预后,R 组上述指标均较 O 组降低（P＜0.05）。RTPCR结果显示,ox-LDL诱导后,O组ox-LDL摄取相关基因CD36、SR-A1的mRNA表达水平升高,而胆固醇外流相关 基因ABCA1、ABCG1的mRNA表达水平降低（P＜0.05）;CDK5抑制剂干预后,上述指标变化与O组呈相反趋势（P＜ 0.05）。结论 CDK5/pPPARγ途径参与动脉粥样硬化泡沫细胞的形成。     

枸杞多糖对泡沫细胞泡沫化与胆固醇酯流出的影响及内质网应激作用机制的研究

目的研究枸杞多糖(LBP)对单核细胞源性泡沫细胞泡沫化与胆固醇酯流出的影响及内质网应激的作用机制。方法原代培养单核细胞源性泡沫细胞后,用50、100、200μg.mL-1 LBP孵育72 h,油红O染色法检测泡沫细胞的数量;用荧光分光光度法分析细胞内总胆固醇(TC)、游离胆固醇(FC)和胆固醇酯(CE)的含量;用酶联免疫吸附法检测细胞中氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)及内质网应激蛋白(Grp78,CHOP,Xbp-1)的含量。结果 LBP可减少泡沫细胞的形成和细胞内TC、FC、CE的含量,同时可降低细胞内ox-LDL与内质网应激蛋白的含量(P<0.05,P<0.01)。结论 LBP通过降低ox-LDL及内质网应激蛋白的含量引起泡沫细胞内胆固醇的含量下降从而发挥抗动脉粥样硬化的作用。     

Ezetimibe suppresses cholesterol accumulation in lipid-loaded vascular smooth muscle cells in vitro via MAPK signaling

Aim:

To investigate the mechanisms of anti-atherosclerotic action of ezetimibe in rat vascular smooth muscle cells (VSMCs) in vitro.

Methods:

VSMCs of SD rats were cultured in the presence of Chol:MβCD (10 μg/mL) for 72 h, and intracellular lipid droplets and cholesterol levels were evaluated using Oil Red O staining, HPLC and Enzymatic Fluorescence Assay, respectively. The expression of caveolin-1, sterol response element-binding protein-1 (SREBP-1) and ERK1/2 were analyzed using Western blot assays. Translocation of SREBP-1 and ERK1/2 was detected with immunofluorescence.

Results:

Treatment with Chol:MβCD dramatically increased the cellular levels of total cholesterol (TC), cholesterol ester (CE) and free cholesterol (FC) in VSMCs, which led to the formation of foam cells. Furthermore, Chol:MβCD treatment significantly decreased the expression of caveolin-1, and stimulated the expression and nuclear translocation of SREBP-1 in VSMCs. Co-treatment with ezetimibe (3 μmol/L) significantly decreased the cellular levels of TC, CE and FC, which was accompanied by elevation of caveolin-1 expression, and by a reduction of SREBP-1 expression and nuclear translocation. Co-treatment with ezetimibe dose-dependently decreased the expression of phosphor-ERK1/2 (p-ERK1/2) in VSMCs. The ERK1/2 inhibitor PD98059 (50 μmol/L) altered the cholesterol level and the expression of p-ERK1/2, SREBP-1 and caveolin-1 in the same manner as ezetimibe did.

Conclusion:

Ezetimibe suppresses cholesterol accumulation in rat VSMCs in vitro by regulating SREBP-1 and caveolin-1 expression, possibly via the MAPK signaling pathway.     

Ibrolipim increases ABCA1/G1 expression by the LXRα signaling pathway in THP-1 macrophage-derived foam cells

Aim:

To determine the effects and potential mechanisms of ibrolipim on ATP-binding membrane cassette transporter A-1 (ABCA1) and ATP-binding membrane cassette transporter G-1 (ABCG1) expression from human macrophage foam cells, which may play a critical role in atherogenesis.

Methods:

Human THP-1 cells pre-incubated with ox-LDL served as foam cell models. Specific mRNA was quantified using real-time RT-PCR and protein expression using Western blotting. Cellular cholesterol handling was studied using cholesterol efflux experiments and high performance liquid chromatography assays.

Results:

Ibrolipim 5 and 50 μmol/L significantly increased cholesterol efflux from THP-1 macrophage-derived foam cells to apoA-I or HDL. Moreover, it upregulated the expression of ABCA1 and ABCG1. In addition, LXRα was also upregulated by the ibrolipim treatment. In addition, LXRα small interfering RNA completely abolished the promotion effect that was induced by ibrolipim.

Conclusion:

Ibrolipim increased ABCA1 and ABCG1 expression and promoted cholesterol efflux, which was mediated by the LXRα signaling pathway.