沉默ERCC1基因对卵巢癌细胞A2780顺铂耐药性的影响

目的：研究RNA干扰切除修复交叉互补基因1（ERCC1）的表达后,卵巢癌细胞A2780对顺铂耐药性的变化。方法：A2780细胞分别转染ERCC1基因的siRNA和GFPsiRNA,并给予顺铂（使其终浓度达到3μmol／L）,蛋白质印迹法分别检测顺铂给药前后ERCC1蛋白的表达,并用MTT法检测顺铂不同浓度下A2780细胞的存活率。结果：①转染ERCC1 siRNA后,实验组蛋白质表达量较对照组显著降低;@ERCC1 siRNA＋顺铂组的ERCC1蛋白表达要弱于ERCC1 siRNA＋PBS组,而GFPsiRNA＋顺铂组的蛋白表达要弱于GFPsiRNA＋PBS组;③顺铂（浓度在0．75—12μmol／L之间）呈浓度依赖性地降低A2780细胞的存活率;④在相同浓度顺铂的作用下,与GFPsiRNA组相比,ERCC1 siRNA组的顺铂量效曲线左移。结论：顺铂能抑制沉默ERCC1基因后A2780细胞的生长,且在一定浓度范围内呈浓度依赖性;ERCC1是参与顺铂耐药性产生的重要因素之一。     

RNA干扰抑制PARP-1基因表达对卵巢癌细胞增殖及耐药性的影响

目的研究PARP-1基因在卵巢癌化疗耐药发生机制中的作用,探讨以该基因为靶向的小干扰RNA(siR-NA)能否有效逆转C13*细胞对顺铂(CDDP)的耐药性。方法采用实时荧光定量PCR(RFQ-PCR)和蛋白印迹法(Western blotting)检测C13*、OV2008细胞中PARP-1 mRNA和蛋白表达差异;转染PARP1-siRNA后,通过RFQ-PCR和Western法验证干扰效果;应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察转染后细胞对CDDP敏感性变化及对细胞增殖活性的影响。结果 C13*细胞中PARP-1 mRNA和蛋白的表达量分别是OV2008细胞表达量的(2.12±0.97)和(1.89±0.23)倍;特异性PARP1-siRNA能有效降低C13*细胞中PARP-1 mRNA、蛋白水平及其对顺铂的半数抑制浓度(IC50),分别下降(71.23±5.41)%、(73.84±3.78)%和(89.77±10.06)%(P<0.05),且C13*细胞的生长活力明显下降(P<0.05)。结论 PARP-1蛋白在卵巢上皮性癌细胞中的表达与顺铂敏感性相关;靶向PARP-1基因的siRNA可在转录和翻译水平抑制PARP-1基因表达,并能有效逆转C13*细胞对CDDP的耐药性。     

miR-200b与miR-200c靶向DNA甲基转移酶对卵巢癌细胞顺铂耐药性的影响

目的探讨miR-200b与miR-200c靶向DNA甲基转移酶1(DNMT1)、DNMT3A和DNMT3B对卵巢癌细胞顺铂耐药性的影响。方法以人卵巢癌细胞株(A2780)、人卵巢癌顺铂耐药细胞株(A2780/DDP)作为研究对象,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测A2780、A2780/DDP细胞株中miR-200b与miR-200c表达量。耐药细胞株A2780/DDP转染后分为si-miR-200b组、si-miR-200c组、si-NC组,MTT法检测转染后3组细胞IC50值;蛋白印迹免疫法(Western blotting)检测转染后3组细胞DNMT1、DNMT3A和DNMT3B蛋白表达水平;流式细胞术检测转染后细胞凋亡率。结果qRT-PCR结果显示A2780细胞系中miR-200b与miR-200c表达高于A2780/DDP细胞系(P＜0.05)。 si-miR-200b组和si-miR-200c组IC50值、DNMT1、DNMT3A 和DNMT3B 蛋白表达水平低于si-NC组(P＜0.05)。结论miR-200b与miR-200c高表达能抑制DNMT1、DNMT3A和DNMT3B基因表达,从而逆转卵巢癌细胞对顺铂的耐药性。     

miR-130a对卵巢癌A2780细胞顺铂耐药性的影响及其机制的研究

目的 探讨miR-130a表达的改变对卵巢癌A2780细胞（包括顺铂敏感细胞株A2780s和耐药株A2780/DDP）顺铂耐药性的影响及其机制。方法 将A2780s、A2780/DDP细胞各分为4组,分别予以单纯脂质体处理、转染阴性对照小RNA、miR-130a模拟物(可使miR-130a表达增加)、miR-130a抑制物(降低miR-130a表达)处理,MTS法检测各组细胞增殖情况和对顺铂的耐药性,RT-PCR、Western blot 法检测未处理和处理后细胞多耐药基因1（MDR1）、抑癌基因（PTEN） mRNA和蛋白的表达。结果 A2780/DDP细胞MDR1 mRNA和MDR1的表达产物P-糖蛋白(P-gp）的表达高于A2780s细胞（PMDR1 mRNA和P-gp表达水平;下调miR-130a的表达,同样不影响细胞的增殖, 但增强其对顺铂的敏感性, 并可降低MDR1 mRNA和P-gp的表达,提高PTEN蛋白的表达。结论 miR-130a抑制物通过上调PTEN蛋白和下调P-gp的表达来逆转卵巢癌A2780细胞系对顺铂的耐药性。miR-130a有望成为耐药性卵巢癌基因治疗的新靶点。     

RNA干扰GCF2基因沉默对人肝癌BEL-7404细胞侵袭能力的影响

目的 探讨沉默GCF2基因表达对人肝癌BEL-7404细胞侵袭能力的影响.方法 实验分为GCF2-siRNA组、NC-siRNA组及MOCK组,GCF2-siRNA组转染靶向GCF2基因的RNA干扰序列GCF2-siRNA,阴性对照组转染阴性对照序列NC-siRNA,MOCK组不转染任何序列.将靶向GCF2基因的RNA干扰序列 (GCF2-siRNA) 瞬时转染BEL-7404细胞以沉默GCF2表达,采用CCK-8法检测细胞增殖活性,体外侵袭实验检测细胞侵袭能力,Western blot检测基质金属蛋白酶(MMP)-9及GCF2靶基因MMP-23蛋白表达.结果 转染GCF2-siRNA使GCF2表达下调,后者导致BEL-7404增殖受阻;GCF2-siRNA组的穿膜细胞数较阴性对照组(NC-siRNA)及未转染组(MOCK)明显减少(穿膜细胞数分别为41.5±0.95、61.3±1.57、64.5±1.65,P<0.05);MMP-9和MMP-23蛋白表达较两个对照组明显下降(P<0.05).结论 下调GCF2表达能抑制BEL-7404侵袭能力, 提示GCF2促进肝癌细胞的侵袭可能是其参与肝癌发展进程的重要途径.     

bcl-2-反义寡核苷酸对卵巢癌顺铂耐药细胞株的耐药逆转作用

目的：探讨bcl-2—反义寡核苷酸(bck-2—AODN)对卵巢癌顺铂(DDP)耐药细胞耐药性的逆转作用。方法：以卵巢癌顺铂耐药细胞株A2780/DDP为模型,用脂质体转染的方法,将bck-2-AODN转染A2780/DDP细胞,同时以转染bcl-2正义链(bcl-2-SODN)作对照。采用DNA凝胶电泳检测转染后是否诱导细胞出现凋亡,应用免疫组织化学技术检测Bcl—2蛋白表达变化,RL-PCR检测Bcl—2mRNA表达水平的变化。MTT法检测细胞抑制率与药物半数抑制浓度。结果：脂质体转染bcl-2反义寡核苷酸12h后,倒置显微镜下即可见A2780/DDP有40％细胞出现变化,收集细胞检测,bcl-2蛋白表达降低;实验组bcl—2mRNA表达水平与转染前相比,基因扩增条带亮度明显减弱,mRNA表达率下降(P＜0．05);DNA凝胶电泳出现梯带状条带;细胞药物半数抑制浓度下降(P＜0．05)。结论：bcl-2-AODN可通过增加细胞的凋亡而一定程度地逆转卵巢癌细胞的顺铂耐药性,提高卵巢癌细胞对化学治疗药物的敏感性。     

Bcl2-siRNA提高人肺腺癌细胞A549/DDP对顺铂敏感性的研究

目的 探讨Bcl2-siRNA 对人肺腺癌顺铂耐药细胞株A549/DDP 对顺铂敏感性的影响.方法 在人肺腺癌顺铂耐药细胞株A549/DDP 细胞中转染bcl2-siRNA,48h 后加入不同浓度(0、3、6、9、12、15μg/ml) 新鲜配置的顺铂溶液,药物作用48h后,用CCK-8 法检测细胞生长抑制率.荧光实时定量PCR(Real time RT-PCR) 检测A549/DDP 细胞转染bcl2-siRNA 后Bcl-2mRNA 的变化,Western Blot 检测A549/DDP 细胞转染bcl2-siRNA 后Bcl-2 蛋白的变化.结果 在A549/DDP 细胞中转染bcl2-siRNA 后,细胞Bcl-2 mRNA 降低92.6%(P<0.05),Bcl-2 蛋白表达也明显降低,同时细胞对顺铂的敏感性增加57.8%(P<0.05).结论 Bcl2-siRNA 能降低A549/DDP 中Bcl-2 mRNA 及蛋白的表达,增加A549/DDP 对顺铂的敏感性.     

RNA干扰ERCC1基因表达对卵巢癌细胞耐药的影响

目的:观察RNA干扰沉默ERCC1基因对卵巢癌细胞耐药的影响。方法:体外合成靶向于ERCC1基因的小干扰RNA(ERCC1-siRNA),用脂质体法转染至卵巢癌耐药细胞系COC1/DDP,RT-PCR方法检测转染前后细胞内ERCC1 mRNA的表达,W estern blot方法检测ERCC1基因蛋白表达的改变,MTT实验检测转染前后COC1/DDP细胞对顺铂敏感性的变化。结果:转染ERCC1-siRNA后,COC1/DDP细胞中ERCC1基因的mRNA和蛋白表达均明显减少。RNA干扰联合顺铂用药能明显提高COC1/DDP细胞对顺铂的敏感性。结论:RNA干扰ERCC1基因能明显抑制COC1/DDP细胞内ERCC1基因mRNA和蛋白的表达,增加COC1/DDP细胞对化疗药顺铂的敏感性。     

卵巢癌细胞系Smac基因的表达及意义

目的 探讨Smac基因在卵巢癌细胞系A2780、COC1及其顺铂(DDP)耐药株A2780/DDP、COC1/DDP中的表达及其意义.方法 半定量逆转录-聚合酶链反应和免疫印迹法检测卵巢癌细胞A2780、COC1及其顺铂耐药株A2780/DDP、COC1/DDP中Smac mRNA和蛋白的表达.结果 卵巢癌细胞A2780、COC1及其顺铂耐药株A2780/DDP、COC1/DDP四种细胞系中均有Smac mRNA和蛋白的表达;Smac在A2780、COC1中的表达高于其顺铂耐药株.结论 低表达Smac抑制凋亡,低表达Smac可能与耐药有关.     

miR-141-3p表达与卵巢癌细胞顺铂化疗敏感性的相关性研究

［摘要］ 目的 探讨miR-141-3p在卵巢癌细胞对顺铂耐药中的表达和作用。 方法 采用实时荧光定量PCR法检测A2780/DDP细胞中miR-141-3p的表达水平;下调/过表达miR-141-3p后,采用CCK-8法检测卵巢癌细胞对顺铂的增殖率并计算药物IC50;采用Western blot法检测增殖相关蛋白（proliferating cell nuclear antigen,PCNA）表达水平。 结果 miR-141-3p在顺铂耐药的卵巢癌细胞株A2780/DDP中的表达显著高于顺铂敏感的卵巢癌细胞株A2780（P＜0.05）。与对照组比较,A2780细胞中过表达miR-141-3p后可显著增加细胞对顺铂的IC50,增殖相关蛋白PCNA表达亦增加（P＜0.05）。与对照组比较,A2780/DDP细胞中下调miR-141-3p表达后,细胞对顺铂的IC50显著下降,增殖相关蛋白PCNA表达下降（P＜0.05）。 结论 miR-141-3p在顺铂耐药卵巢癌细胞的耐药机制中表达增加,下调miR-141-3p可增加顺铂耐药的卵巢癌细胞对顺铂的敏感性。     

沉默ADRB2基因对卵巢上皮性癌细胞生物学特性及顺铂敏感性的影响

目的 探讨下调β2型肾上腺素受体(beta-2 adrenergic receptor,ADRB2)基因表达对卵巢上皮性癌细胞顺铂敏感性以及细胞增殖、凋亡的影响及机制。 方法 以人卵巢癌细胞株SKOV3/DDP为研究对象,采用小RNA干扰技术沉默ADRB2的表达,实验分为4组:ADRB2 shRNA1感染组、ADRB2 shRNA2感染组、阴性对照shRNA感染组、未感染的SKOV3/DDP细胞作为空白对照组。采用不同浓度(0、2.5、5、10、20、40 μmol/L)顺铂作用后,采用CCK-8法检测4组卵巢癌细胞的生长抑制率,流式细胞仪检测4组细胞的凋亡率,Western blot法检测4组卵巢癌细胞中caspase-9、Bcl-2及Bax蛋白的表达,采用单因素方差分析进行比较。 结果 不同浓度的顺铂处理后,4组细胞的生长抑制率均逐渐升高,且呈剂量依赖性。2组ADRB2 shRNA感染细胞的顺铂耐药IC50分别为(29±8)μmol/L和(32±11)μmol/L,明显低于阴性对照组[(104±15)μmol/L,P<0.01]和空白对照组[(112±10)μmol/L,P<0.01];4组细胞的凋亡率逐渐增加,且呈剂量依赖性。2组ADRB2 shRNA感染细胞的凋亡率均明显高于阴性对照组(P<0.01)。4组细胞的caspase-9、Bax蛋白的表达水平逐渐增加,且呈浓度依赖性,2组ADRB2 shRNA感染细胞的caspase-9、Bax蛋白水平均明显高于阴性对照组(均P<0.05)。4组细胞的Bcl-2蛋白的表达水平逐渐降低,且呈浓度依赖性,2组ADRB2 shRNA感染细胞的Bcl-2蛋白水平均明显低于阴性对照组(均P<0.05)。 结论 顺铂诱导可使ADRB2基因下调的顺铂耐药卵巢癌细胞的增殖减少、凋亡增加,其可能机制为通过调节caspase-9、Bcl-2和Bax凋亡家族蛋白的表达,从而增加细胞对顺铂的敏感性。      

RNA干扰靶向沉默FLIP基因对卵巢癌细胞A2780生物学特性的影响及生长抑制作用

目的探讨靶向FLIP基因的小干扰RNA（siRNA）对人卵巢癌细胞A2780生物学特性的影响及生长抑制作用。方法设计并体外化学合成FLIP序列特异性双链RNA，在脂质体（LipofectamineTM2000）介导下转染人卵巢癌细胞株A2780。采用半定量RT-PCR和Western blot法检测FLIP siRNAs转染前后A2780细胞FLIP基因mRNA和蛋白表达的变化,并筛选出抑制作用最强的FLIP-siRNA。采用四甲基偶氮唑盐（MTT）法、Annexin-V-PI双染法流式细胞术（FCM）分别检测FLIP-siRNA转染对A2780细胞的生长抑制作用和对凋亡的影响。结果特异性FLIP-siRNAs片段能有效降低A2780细胞中FLIP的 mRNA和蛋白水平（P＜0.01）,最大抑制率分别为77.4％和66.1％；转染FLIP-siRNA后，A2780细胞的生长活力明显下降（P＜0.05），RNA干扰组的细胞凋亡也显著增加（P＜0.05）。结论靶向FLIP基因的siRNAs可在转录和翻译水平抑制FLIP基因表达；并可抑制卵巢癌A2780细胞生长，促进其凋亡。     

土贝母皂苷甲增强人卵巢癌A2780/DDP细胞对顺铂的敏感性

目的探讨土贝母皂苷甲(tubeimoside 1,TBMS1)促进人卵巢癌A2780/DDP细胞对顺铂(cisplatin,DDP)的增敏作用。方法采用MTT法分别检测顺铂和TBMS1对A2780/DDP细胞作用的半抑制浓度值(IC50),将实验分为对照组:只加等量生理盐水;顺铂组:给予6μmol/L顺铂处理;联合用药Ⅰ组:6μmol/L顺铂+3μmol/L TBMS1;联合用药Ⅱ组:6μmol/L顺铂+6μmol/L TBMS1。按上述方法处理细胞后,MTT法检测细胞活力;电泳法检测细胞内DNA损伤;流式细胞技术检测细胞凋亡及周期;Western blot分析周期蛋白A(Cyclin A)和周期蛋白D1(Cyclin D1)的表达。结果 TBMS1(3、6μmol/L)与顺铂(6μmol/L)联用使人卵巢癌A2780/DDP细胞对顺铂的敏感性增强;细胞的DNA损伤随TBMS1浓度的增加而明显增多;细胞周期被阻滞在S期,联合用药Ⅰ和Ⅱ组S期所占比例分别为(51.23±3.53)%、(77.34±2.80)%;细胞凋亡率为(5.19±0.78)%、(7.11±1.06)%;Cyclin A的表达为1.89±0.28及2.91±0.43,CyclinD1为0.66±0.09及0.28±0.05(P<0.05,P<0.01)。结论 TBMS1显著增加顺铂对A2780/DDP细胞增殖抑制作用,Cyclin A、Cyclin D1可能参与其调节。     

Kif15调控大鼠星形胶质细胞增殖、细胞周期及凋亡的研究

目的:探讨Kif15调控星形胶质细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响及机制。方法:从出生1 d的大鼠分离出星形胶质细胞,分别用NC-小干扰RANA（siRNA）（NC-siRNA组）、Kif15-siRNA转染细胞（Kif15-siRNA组）,不做任何处理的细胞作为空白对照组（Control组）,48 h后收集细胞,Western blotting检测各组细胞中Kif15的蛋白表达,CCK-8法检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞周期及细胞凋亡率;Western blotting检测增殖细胞核抗原（PCNA）、细胞周期素D₁（cyclinD1）、Cleaved caspase3、p38、p-p38蛋白表达情况。结果:转染Kif15-siRNA能显著抑制Kif15的蛋白表达;与对照组及NC-siRNA组比较,Kif15-siRNA组细胞存活率、G₂/M期细胞及PCNA、cyclinD1、p-p38蛋白表达显著降低,细胞凋亡率、G₁期细胞及Cleaved caspase3蛋白表达显著升高（P<0.01）,p38蛋白表达在各组细胞间差异无统计学意义（P>0.05）。结论:抑制星形胶质细胞中Kif15的表达,可显著降低细胞的增殖,阻滞细胞于G₁期,促进细胞凋亡,其机制与抑制p38信号通路有关。     

抑制miR-23a表达增强卵巢癌顺铂敏感性的分子机制

目的分析抑制miR-23a表达后,耐药卵巢癌A2780细胞对化疗药物顺铂的敏感性变化及其分子机制。方法选择顺铂耐
药卵巢癌A2780细胞株为研究样本,并分为两组,其中对照组仅加入顺铂,实验组加入顺铂及antagomir-23a。应用MTT法检测
antagomir-23a抑制miR-23a并经顺铂处理后细胞增殖抑制率;应用流式细胞仪分析细胞周期分布情况;应用Hoechst33258染色
分析细胞凋亡形态学变化;应用Western blot法分析耐药糖蛋白P-gp的表达变化。结果抑制miR-23a并经顺铂处理后,细胞增
殖抑制率显著上升（P<0.01）,顺铂中效浓度（IC50）为17.89 μmol/L,比对照组IC50 110.18 μmol/L降低了83.76%（P<0.01）,细胞被
阻滞于G0/G1期且凋亡率增加（P<0.01）;Hoechst33258染色见细胞核浓缩、染色增强。Western blot检测提示细胞P-gp蛋白表
达随着顺铂浓度加大而逐渐减低（P<0.01）。结论抑制耐药卵巢癌A2780细胞内miR-23a表达后,细胞对顺铂的敏感性显著增
加,这可能miR-23a靶基因负性调控因素得以缓解,并由此引发P-gp蛋白表达受抑有关。
     

沉默MSH3表达增强舌癌细胞对顺铂的敏感性

目的设计靶向DNA错配修复基因MSH3的siRNA干扰片段,观察MSH3有效沉默对舌癌细胞顺铂耐药性的影响。方 法针对MSH3基因CDS区序列,设计3条siRNA片段,体外化学合成小干扰RNA（siRNA）片段,通过脂质体介导转染人舌癌细 胞CAL27。Real-time PCR及Western 检测干扰后MSH3 的表达。MTS,凋亡双染法及细胞免疫荧光检测顺铂处理后细胞存 活、凋亡及DNA双链断裂的情况。结果3 条siRNA 片段转染细胞后,与对照组相比,3 号siRNA 片段转染后能显著降低 MSH3 mRNA及蛋白质表达水平,该片段被选为后续实验。MSH3表达下调后,顺铂的半数抑制浓度（IC50值）分别由21.32降 至13.95 μmol/L（P<0.05）,凋亡指数分别由4.23±1.27升至11.32±1.82（P<0.05）,舌癌细胞中γ-H2AX焦簇（Foci）的数量显著增 加。结论MSH3表达下调可以明显增加舌癌细胞对顺铂的敏感性,减少DNA双链断裂修复是其主要机制之一。     

MDR1 and MDR3 Genes and Drug Resistance to Cisplatin of Ovarian Cancer Cells

To investigate the relationship between MDR1 and MDR3 gene and drug resistance to cisplatin of ovarian cancer cells. Two siRNAs (MDR1, MDR3) which specifically targeted MDR1 and MDR3 genes were transfered into A2780/DDP cells. Then double staining with Annexin- V-FITC/PI was used to detect cell apoptosis by the flow cytometry (FCM). A2780/DDP cell viability was determined by MTT. MDR1 and MDR3 mRNA were assessed by RT-PCR. Caspase-3 protein was detected by Western blotting. Transfection of MDR1 and MDR3 siRNA into A2780/DDP cells failed to reverse the drug-resistance of A2780/DDP cells to cisplatin (P>0.05). No significant differ- ence in the apoptosis efficiency was observed between the MDR1 and MDR3 siRNA, pSuppressor- Neo vector transfection cells and untreated cells (P>0.05). In the presence of cisplatin of different concentrations, the viability of A2780/DDP cells was not significantly decreased after the transfection. No changes in MDR1 and MDR3 mRNA were found in MDR1 and MDR3 siRNA-transfected A2780/DDP cells. As compared with pSuppressorNeo and untreated groups, no significant difference existed in the expression of MDR1 and MDR3 mRNA (P>0.05). The expression of caspase-3 protein in MDR1 and MDR3 siRNA transfected A2780/DDP cells was not significantly increased. It is con- cluded that multidrug resistance induced by cisplatin in ovarian carcinoma cell lines is not due to overexpression of MDR1 and MDR3 gene. The drug resistance of ovarian carcinoma cells to cisplatin is not mediated by P-glycoprotein.     

转染TRIM29-siRNA对胶质瘤U87MG细胞周期和凋亡的影响

目的：探讨转染三结构域蛋白（TRIM）家族成员三结构域蛋白29（TRIM29）-siRNA对胶质瘤U87MG细胞周期和凋亡的影响,阐明TRIM29在胶质瘤发生发展中的作用。方法：将体外培养的U87MG细胞分为对照组（未转染）、NC-siRNA组（转染阴性对照NC-siRNA）和TRIM29-siRNA组（转染TRIM29-siRNA）,采用实时荧光定量PCR法检测3组U87MG细胞中TRIM29 mRNA表达水平,流式细胞术检测3组不同细胞周期U87MG细胞百分率和凋亡率,Western blotting法检测3组细胞中TRIM29、CyclinD1、P21、Bcl-2和Bax蛋白表达水平。结果：3组细胞中TRIM29、CyclinD1、P21、Bcl-2和Bax蛋白表达水平,TRIM29 mRNA表达水平,G₀/G₁期、S期、G₂/M期U87MG细胞百分率及细胞凋亡率比较差异有统计学意义（P<0.05）。与对照组比较,NC-siRNA组U87MG细胞中TRIM29 mRNA和TRIM29、CyclinD1、Bcl-2蛋白表达水平和G₁/G₀期、S期、G₂/M期U87MG细胞百分率及细胞凋亡率差异无统计学意义（P>0.05）;与对照组和NC-siRNA组比较,TRIM29-siRNA组U87MG细胞中TRIM29 mRNA和TRIM29、CyclinD1、Bcl-2蛋白表达水平以及S期和G₂/M期U87MG细胞百分率均明显降低（P<0.05）,G₀/G₁期U87MG细胞百分率和细胞凋亡率以及P21、Bax蛋白表达水平明显升高（P<0.05）。结论：转染TRIM29-siRNA可诱导U87MG细胞周期阻滞和凋亡,其作用机制可能与下调CyclinD1、Bcl-2蛋白表达和上调P21、Bax蛋白表达有关。     

RNAi抑制Aurora B激酶对卵巢癌A2780细胞增殖和周期的影响

目的研究RNAi抑制Aurora B激酶对卵巢癌A2780细胞增殖和周期的影响。方法采用RNAi方法,将AURKB RNAi转入A2780细胞,RT-PCR、Western blot检测Aurora B mRNA和蛋白的表达,MTT检测A2780细胞增殖情况,流式细胞术检测A2780细胞周期改变。结果①通过RT-PCR、Western blot检测到人类5种卵巢癌细胞株A2780、SKOV3、CAOV3、A2780/taxol及AD6中均明显表达Aurora B mRNA和蛋白;②A2780细胞转染AURKBRNAi后,Aurora B mRNA和蛋白的表达明显下降,转染浓度至200 pmol/L RNAi 48 h后,Aurora B mRNA和蛋白的表达被完全抑制;③MTT检测和锥虫蓝染色结果显示,于转染200 pmol/L AURKB RNAi第4天开始,A2780细胞增殖明显受到抑制,吸光度值与空白对照组和阴性对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05);④Flow cytometry检测显示,转染200 pmol/L AURKB RNAi 24 h,大量A2780细胞进入有丝分裂期,并形成多倍体细胞,于72 h多倍体细胞比例达到峰值20.54%,转染后96 h转染组细胞凋亡率(11.67%)显著高于对照组(0.57%);⑤Hoechst 33258染色观察细胞凋亡结果显示,与A2780对照和阴性对照相比,转染200 pmol/L浓度AURKB RNAi 96 h后A2780细胞凋亡明显增多。结论 Aurora B的抑制使A2780细胞增殖受到明显抑制;导致多倍体形成,使细胞基因组严重不稳定,最终导致细胞凋亡,Aurora B可能是卵巢癌治疗的有效分子靶点。