β_1整联蛋白、Fas蛋白在晶状体上皮细胞中的表达与白内障的关系

目的:了解糖尿病性白内障及并发性(高度近视)白内障患者晶状体上皮细胞(LECs)中1β整联蛋白与Fas蛋白的表达情况与LECs凋亡的关系。方法:应用流式细胞和共聚焦显微镜分别定量及定位检测1β整联蛋白、Fas蛋白两种蛋白在LECs中的表达。结果:LECs中1β整联蛋白Fas蛋白的表达在两种白内障间差异有统计学意义(P<0.05)。发现1β整联蛋白与Fas蛋白大部分共同定位于LECs的细胞膜上。结论:在糖尿病性白内障的形成中1β整联蛋白的作用很可能是一种促进LECs凋亡的蛋白,它与Fas蛋白一起促进LECs凋亡。     

TGF-β1介导新生大鼠心肌成纤维细胞Ⅰ型和Ⅳ型胶原合成的研究

目的:观察TGF-β1对原代培养的新生大鼠心肌成型与Ⅳ胶原表达的影响。方法:取出生3~7d的SD大鼠心脏,利用酶消化法结合差速贴壁体外培养心肌成纤维细胞;分别用不同浓度的TGF-β1(TGF-β1=10 ng/mL、1ng/mL、0 ng/mL)干预心肌成纤维细胞,分别于干预后5h、24h,采用RT-PCR检测I型胶原和Ⅳ型胶原的表达。结果:1.用0ng/mL(对照组),1ng/mL和10ng/mL的TGF-β1干预心肌成纤维细胞5h,RT-PCR检测I型胶原/β-actin光密度值分别为0.61±0.02,0.73±0.03和0.86±0.04,光密度值随着TGF-β1浓度的增加而增加,各组比较,差异有显著性(P<0.01);干预心肌成纤维细胞24h后,RT-PCR检测I型胶原/β-actin光密度值分别为0.65±.03,0.91±0.02和0.98±0.02,光密度值随着TGF-β1浓度的增加而增加,各组比较,差异有显著性(P<0.01)。2.用0 ng/mL(对照组),1ng/mL and 10ng/mL的TGF-β1干预心肌成纤维细胞5h,RT-PCR检测Ⅳ型胶原/β-actin光密度值分别为0.58±0.06,0.71±0.02,0.87±0.02,光密度值随着TGF-β1浓度的增加而增加,各组比较,差异有显著性(P<0.01);干预心肌成纤维细胞24h后,RT-PCR检测Ⅳ型胶原/β-actin光密度值分别为0.62±0.01,0.83±0.05,0.96±0.02,光密度值随着TGFβ1浓度的增加而增加,各组比较,差异有显著性(P<0.01)。结论:TGFβ1能加强I型和Ⅳ型胶原的表达,在24小时内呈时间和剂量依赖性。     

转化生长因子β1和波形蛋白及结蛋白在糖尿病大鼠肾皮质中早期表达的研究

目的:探讨糖尿病大鼠早期不同阶段转化生长因子β1(TGF-β1)和波形蛋白(vimentin)、结蛋白(desmin)在大鼠肾皮质中表达的变化规律及其相互关系.方法:建立STZ诱导的SD大鼠糖尿病模型;用RT-PCR法半定量检测早期各观察时点糖尿病大鼠肾皮质中TGF-β1和vimentin、desmin mRNA的表达水平.结果:①随着糖尿病病情的进展,TGF-β1和vimentin mRNA的表达量分别从模型建立后第7 d和第14 d起逐渐增多(P=0.001),desmin mRNA表达从第14 d起却逐渐减少(P＜0.05).②糖尿病组的TGF-β1与vimentin的mRNA表达呈正相关(r＝0.740,P=0.000),desmin与TGF-β1的mRNA表达呈负相关(r＝-0.695,P=0.000),desmin与vimentin的mRNA表达也呈负相关(r＝-0.591,P=0.002).结论:糖尿病大鼠早期肾皮质中TGF-β1和vimentin的表达逐渐增多,desmin的表达却逐渐减少,提示TGF-β1可能促进小管上皮细胞向成纤维细胞转化.     

TGF-β1通过Jagged1/Notch激活小鼠肝星状细胞

目的：研究转化生长因子-β1（transforming growth factor β1,TGF-β1）激活小鼠肝星状细胞（mouse hepatic stellate cells,mHSC）的具体机制。方法：实验选用mHSC-T25细胞株为实验对象,随机分为激活组（mHSC-T25+10 ng/mL TGF-β1）、抑制组（mHSC-T25+1 μmol/L TGF-β-R1抑制剂）和对照组（mHSC-T25）。qRT-PCR检测α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin,α-SMA）、TGF-β1、转化生长因子β受体1（transforming growth factorβreceptor1,TGF-β-R1）、Jagged1、血管内皮生长因子（vas－cular endothelial growth factor,VEGF）、肝细胞生长因子（hepatocyte growth factor,HGF）等的mRNA表达;细胞免疫荧光法检测α-SMA、Jagged1等蛋白的表达;Western blot检测TGF-β1、α-SMA、TGF-β-R1、Jagged1、Smad2/3、p-Smad2/3等蛋白的表达。结果：①TGF-β1刺激组中α-SMA、TGF-β1、TGF-β-R1、Jagged1、VEGF、HGF等mRNA表达量均较对照组明显增加而抑制组均明显下降。α-SMA：激活组（315.1±6.2）%,抑制组（34.3±4.5）% （F=3291.956,P=0.000）;TGF-β1：激活组（524.8±14.3）%,抑制组 （29.0±10.7）%（F=469.534,P=0.000）;TGF-β-R1：激活组（235.5±15.2）%,抑制组（17.0±2.8）%（F=392.239,P=0.000）;Jagged1：激活组（548.7±16.6）%,抑制组（17.4±4.7）%（F=364.166,P=0.000）;VEGF：激活组（331.9±19.8）%,抑制组（19.5±3.7）%（F=278.407,P=0.000）;HGF：激活组（376.00±6.51）%,抑制组（16.2±2.7）%（F=640.340,P=0.000）。②激活组高表达α-SMA、Jagged1等蛋白,而对照组、抑制组表达明显较少。α-SMA：激活组0.880±0.016,对照组0.481±0.007,抑制组0.207±0.014 （F=2098.556,P=0.000）;Jagged1：激活组0.796±0.015,对照组0.474±0.021,抑制组0.167±0.005（F=1242.556,P=0.000）。③TGF-β1激活组中TGF-β1、α-SMA、TGF-β-R1、Jagged1、Smad2/3、p-Smad2/3的蛋白表达量均较对照组明显上调而抑制组均明显下调。TGF-β1：激活组1.180±0.138,对照组0.654±0.061,抑制组0.359±0.012（F=67.706,P=0.000）;α-SMA：激活组1.076±0.063,对照组0.689±0.022,抑制组0.374±0.011（F=239.186,P=0.000）;TGF-β-R1：激活组1.192±0.142,对照组0.710±0.380,抑制组0.378±0.069 （F=57.235,P=0.000）;Jagged1：激活组1.582±0.247,对照组0.817±0.116,抑制组0.364±0.059（F=43.649,P=0.000）;Smad2/3：激活组2.057±0.114,对照组1.203±0.105,抑制组0.664±0.063（F=158.856,P=0.000）;p-Smad2/3：激活组2.088±0.120,对照组1.168±0.107,抑制组0.573±0.120 （F=136.369,P=0.000）。上述实验结果提示,激活组、抑制组与对照组比较,差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论：TGF-β1通过Jagged1/Notch激活小鼠肝星状细胞并调控其相关生物学活性。     

TGF-β1/Smad3信号通路调控MMP-13/TIMP-1蛋白表达在糖尿病膀胱纤维化中的作用研究

目的探讨转化生长因子β1（TGF-β1）/细胞信号转导分子3（Smad3）信号通路调控基质金属蛋白酶13（MMP-13）/基质金属蛋白酶抑制剂1（TIMP-1）蛋白表达在糖尿病膀胱纤维化中的作用。方法将80只雄性Wistar大鼠按随机数字表法分为糖尿病组和正常对照组，每组40只；另取20只糖尿病大鼠按随机数字表法分为TGF-β1敲除组和Smad3敲除组，每组10只。采用链脲佐素65mg/kg一次性给药法建立糖尿病模型；采用Cas9genetargeting技术分别敲除TGF-β1或Smad3基因。采用HE或VG染色法观察糖尿病组与正常对照组大鼠膀胱组织病理学形态 Westernblot法检测并比较糖尿病组与正常对照组、糖尿病组与TGF-β1敲除组、糖尿病组与Smad3敲除组大鼠膀胱平滑肌组织中相关信号通路因子蛋白表达组与正常对照组、糖尿病组与TGF-β1敲除组、糖尿病组与Smad3敲除组大鼠膀胱平滑肌组织中相关信号通路因子蛋白表达显示，糖尿病组大鼠膀胱组织胶原纤维明显增多。糖尿病组大鼠膀胱平滑肌组织中TGF-β1、Smad3、MMP-13、TIMP-1蛋白表达水平均明显高于正常对照组，MMP-13、TIMP-1、colⅠ、colⅢ蛋白表达水平均明显高于TGF-β1敲除组、Smad3敲除组，差异均有统计学意义（均P＜0.05）。结论MMP-13、TIMP-1在糖尿病膀胱纤维化中呈高表达。TGF-β1/Smad3信号通路过调控MMP-13/TIMP-1蛋白表达参与糖尿病膀胱纤维化的发生、发展。     

吡格列酮对糖尿病大鼠足细胞的保护作用

目的 研究不同剂量盐酸吡格列酮(PIO)对链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病大鼠肾脏足细胞的保护作用.方法 将SD大鼠随机分为正常对照组(NC组),糖尿病组(DM组),糖尿病低剂量PIO组(DR1组),糖尿病中剂量PIO组(DR2组)和糖尿病高剂量PIO组(DR3组).于0、8周末测尿白蛋白、尿nephrin、尿转化生长因子-β1(TGF-β1)和尿肌酐(UCr),并计算尿白蛋白/肌酐(UACR)、nephrin/肌酐(UNER)和TGF-β1/肌酐(UTGR).每周监测血糖(BG),8周末取血测糖化血红蛋白(HbA1c),免疫组化检测肾组织nephrin及TGF-β1蛋白表达.结果 ①糖尿病大鼠各时间点BG及8周末HbA1c显著高于NC组(P＜0.05),糖尿病大鼠组间差异无统计学意义.②8周末,各PIO组UACR、UNER和UTGR均显著低于DM组(P＜0.05),且DR2、DR3组UACR和UNER低于DR1组(P＜0.05);肾脏nephrin蛋白表达:NC组＞各PIO组＞DM组(P＜0.05),DR1、DR2和DR3组间差异无统计学意义;肾脏TGF-β1蛋白表达:DM组＞各PIO组＞NC组(P＜0.05),DR1、DR2和DR3组间差异无统计学意义.③UNER与UTGR呈显著正相关(r=0.787,P＜0.01),肾脏nephrin蛋白与TGF-β1蛋白呈显著负相关(r=-0.669,P＜0.01).结论 PIO对糖尿病大鼠足细胞有一定的保护作用,该作用可能与其上调足细胞nephrin表达和抑制肾组织局部TGF-β1表达有关.     

泽黄煎剂对糖尿病肾病大鼠细胞外基质表达的影响

目的:探讨泽黄煎剂对MMP-2,TIMP-1,TGF-β1,Ⅳ-C,LN和FN在糖尿病大鼠肾脏中表达的调节及其与糖尿病肾脏病变的关系.方法:SD大鼠随机分成正常组、模型组、对照组和观察组,每组10只.用高糖高脂饲料刺激、加小剂量STZ诱导2型糖尿病大鼠模型,于第16周末处死大鼠,用免疫组织化学的方法分别检测肾组织中MMP-2,TIMP-1,TGF-β1,Ⅳ-C,LN和FN的表达,同时检测血糖、尿蛋白及肾功能.结果:对照组、观察组与模型组比较,TGF-β1,TIMP-1,Ⅳ-C和LN的表达减少(P＜0.05),FN的表达减少(P＜0.01),MMP-2的表达增高(P＜0.05).同时,MMP-2及Ⅳ-C表达的改变分别与尿蛋白排泄率升高相关(P＜0.05).结论:肾组织中的MMP-2,TIMP-1,TGF-β1,Ⅳ-C,LN和FN的表达改变与糖尿病肾病(DN)有关,泽黄煎剂通过调节上述指标而对DN的治疗产生作用.     

青光眼患者房水中转化生长因子-β2的定量研究

目的:通过检测青光眼患者房水中转化生长因子-β2(transforming growth factor-β2,TGF-β2)的水平,探讨TGF-β2在青光眼发病机制中的作用.方法:在手术中收集了31份青光眼患者房水样本,其中原发性开角型青光眼(primary open-angle glaucoma,POAG)11眼、原发性闭角型青光眼(primary angle-closure glaucoma,PACG)10眼、青少年型青光眼(juvenile glaucoma,JG)10眼.另收集10份白内障患者的房水样本作为对照.采用双抗体夹心酶联免疫吸附法检测房水中TGF-β2的含量.结果:POAG和JG组房水中成熟(有生物活性)TGF-β2的浓度分别为256.7±93.3 pg/ml和277.0±103.8 pg/ml,比PACG组151.4±81.0 pg/ml和白内障组136.9±57.7 pg/ml有显著性升高(P＜0.01).而POAG组、JG组和PACG组TGF-β2的总量(有生物活性的+潜活的)分别为1677.5±564.6 pg/ml、1739.4±592.0 pg/ml和1499.2±490.4 pg/ml,各组间比较无显著性差异(P＞0.05),它们与白内障组1004.9±372.1 pg/ml比较均有显著性差异(P＜0.05).结论:POAG和JG患者房水中成熟TGF-β2的水平明显增高,高水平的成熟TGF-β2可能在POAG和JG的发病机制中起着重要作用.     

大鼠股骨骨折合并脑外伤时骨愈合过程中TGF-1β的作用

目的:研究大鼠股骨骨折合并脑外伤时骨痂组织中TGF-β1的表达及血清TGF-β1水平,探讨TGF-β1与骨折合并脑外伤时愈合加快的关系.方法:将64只大鼠随机分为4组∶正常对照组、脑外伤组、骨折组和骨折合并脑外伤组各16只.建立大鼠脑外伤和骨折模型,分别于2 wk和3 wk取血清,酶联免疫吸附法测血清中TGF-β1水平,骨折标本拍计算机X线摄像片,骨痂组织作HE染色和SP法免疫组化.结果:2 wk时大鼠血清TGF-β1水平在骨折合并脑外伤组(4.68±0.61)μg/L,脑外伤组(5.92±0.84)μg/L,骨折组(6.23±0.78)μg/L,与正常对照组(8.37±0.65)μg/L相比均有显著性降低(P<0.05);骨折合并脑外伤组与脑外伤组、骨折组比较有显著性降低(P<0.05);3 wk时各实验组大鼠血清TGF-β1水平有所恢复,骨折合并脑外伤组与正常对照组相比未见有统计学差异.骨痂组织TGF-β1免疫组化染色平均阳性细胞百分数骨折合并脑外伤组(85.2±9.2)%比骨折组(77.0±6.7)%有显著性增加(P<0.05).结论:伴有脑外伤的骨折愈合加快,TGF-β1可能是脑外伤后骨折愈合加速的因素之一.     

TGF-β1及其受体mRNA在哮喘大鼠肺组织中的表达

目的研究哮喘大鼠肺组织中TGF-β1及受体TGF-βRⅠ、TGF-β RⅡmRNA的表达水平,以了解TGF-β1在哮喘中的作用及其受体对其作用的调节机制.方法将30只成年雌性SD大鼠分为正常对照组,单纯致敏组和哮喘模型组,采用卵清蛋白(OVA)腹腔注射法复制大鼠哮喘模型,利用RT-PCR法检测肺组织中TGF-β1、TGF-βRⅠ及TGF-βRⅡmRNA的表达水平.结果TGF-β1mRNA的表达水平致敏组与正常组相比增加(70.21±11.68 vs 53.07±10.27,P＜0.05),哮喘组与正常组相比显著增加(114.14±16.57 vs 53.07±10.27,P＜0.01),TGF-β R Ⅰ mRNA的表达水平在致敏组和哮喘组相当,均较正常组下调(83.21±11.52 vs 100.14±16.13,85.76±12.95 vs 100.14±16.13,P＜0.05).TGF-βRⅡmRNA的表达水平致敏组与正常组相比有下降(89.04±9.23 vs 103.05±11.46,P＜0.05),哮喘组与正常组相比则显著下降(56.53±7.34 vs 103.05±11.46,P＜0.01).结论TGF-β1可能作为一个抗炎因子在哮喘的变应性炎症前阶段及炎症过程中起着重要作用,TGF-β RⅠ、TGF-β RⅡ的表达水平在哮喘组和致敏组的下降说明TGF-β1信号通路在哮喘的变应性炎症中和炎症前阶段的活化程度,TGF-βRⅡ表达水平在哮喘组的显著下降则显示TGF-β1信号通路可能被下调从而抑制其抗炎作用的发挥.     

利鲁唑对戊四氮致癫痫大鼠海马CA3区IL-1β、TNF-α的影响

目的 探讨利鲁唑对戊四氮(PTZ)致癫痫大鼠海马CA3区白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的影响.方法 将45只大鼠按完全随机设计方法分为对照组、癫痫模型组(PTZ组)和利鲁唑组(Riluzole组),每组15只;造模大鼠连续给予PTZ(35 mg·kg-1·d-1)腹腔注射30 d,3次Ⅳ级或以上发作大鼠为癫痫造模成功;免疫组织化学法检测各组大鼠海马CA3区IL-1β、TNF-α的表达和分布.结果 对照组、PTZ组及Riluzole组大鼠的IL-1β阳性细胞平均光密度值(OD)分别为(0.210±0.002)、(0.241±0.002)和(0.220±0.002),不同组间比较差异均有统计学意义(P<0.05);TNF-α阳性细胞OD值分别为(0.191±0.003)、(0.230±0.003)和(0.202±0.003),不同组间比较差异均有统计学意义(P<0.05);大鼠海马CA3区IL-1β与TNF-α表达水平呈显著正相关(r=0.969,P<0.01).结论 利鲁唑通过抑制癫痫大鼠脑内神经细胞过度表达IL-1β、TNF-α,可能降低其对正常神经细胞的损伤作用,可能减缓癫痫发病对正常神经细胞的损伤,产生神经保护作用.     

BMP-2 TGF-β1和VEGF在骨性关节炎滑膜组织中的表达

目的 探讨骨形成蛋白-2(BMP-2)、转化生长因子-β1(TGF-β1)和血管内皮生长因子(VEGF)在人膝关节骨性关节炎(OA)各期滑膜组织中的表达及作用.方法 收集2012~2014年内蒙古自治区人民医院骨关节科原发性膝关节OA患者滑膜组织标本,男性35例,女性45例,作为试验组,根据Kellgren-Lawrence(K-L)分级标准将试验组分为OA1组(10例,K-LⅠ级)、OA2组(16例,K-LⅡ级)、OA3组(28例,K-LⅢ级)、OA4组(26例,K-LⅣ级).另选取4例正常膝关节滑膜作为对照组.采用免疫组织化学法观察BMP-2、TGF-β1和VEGF在各组滑膜中的表达情况.结果 与对照组各细胞因子的表达(BMP-2:0.087±0.015,TGF-β1:0.103±0.018,VEGF:0.095±0.017)比较,试验组4组滑膜中BMP-2、TGF-β1和VEGF表达率(OA1组,BMP-2:0.112±0.022,TGF-β1:0.173±0.019,VEGF:0.135±0.008;OA2组,BMP-2:0.214±0.012,TGF-β1:0.288±0.03,VEGF:0.271±0.021;OA3组,BMP-2:0.298±0.030,TGF-β1:0.416±0.032,VEGF:0.368±0.025;OA4组,BMP-2:0.330±0.024,TGF-β1:0.471±0.020,VEGF:0.300±0.033)增高(P<0.05).OA1、OA2、OA3、OA4各组滑膜中BMP-2、TGF-β1和VEGF表达水平依次递增,且差异均有统计学意义(P<0.05).结论 滑膜中高表达的BMP-2、TGF-β1和VEGF可能是OA的病理进程中的重要因素之一.     

阿托伐他汀对糖尿病心肌病大鼠心肌组织赖氨酰氧化酶的影响

目的 探讨阿托伐他汀对糖尿病心肌病(DCM)大鼠心肌组织赖氨酰氧化酶(LOX)表达的影响及机制.方法 将30只DCM大鼠分为DCM组、治疗组(阿托伐他汀2 mg· kg-1·d-1灌胃)、β氨基丙腈(BAPN)组(BAPN 80 mg·kg-1·d-1灌胃),每组10只;另选10只SD大鼠为空白对照组.第8周末处死大鼠.提取心肌组织RNA及蛋白质,RT-PCR和Western blot测定心肌组织LOX、基质金属蛋白酶2(MMP-2)及核因子-κB(NF-κB)mRNA和蛋白表达.结果 DCM组LOX、MMP-2及NF-κB mRNA和蛋白表达明显高于对照组(P＜0.01);与DCM组比较,治疗组及BAPN组LOX、MMP-2及NF-κB mRNA和蛋白表达明显下调(P＜0.01).结论 阿托伐他汀可逆转DCM大鼠心肌组织LOX表达,进而调控MMP-2及NF-κB表达.     

福辛普利对糖尿病大鼠心功能的保护

目的:观察福辛普利对糖尿病大鼠心功能、心肌局部血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)浓度及转化生长因子(TGF-β1)表达的影响。探讨福辛普利通过AngⅡ和TGF-β1保护心功能的机制。方法:30只SD大鼠,随机取20只大鼠建立糖尿病模型后,再随机分为福辛普利治疗组(干预组)及糖尿病未治疗组(未治疗组),每组10只,另10只作为正常对照组。治疗组以福辛普利15 mg/(kg.d)水溶液灌胃,对照组和未治疗组每天以同等体积清水灌胃。9周后,用超声心动图观察心功能,放射免疫法测定心肌局部AngⅡ的水平,用免疫组织化学法检测心肌细胞中TGF-β1的表达含量。结果:糖尿病未治疗组心肌局部AngⅡ含量显著高于正常对照组(5 367.43±498.28和4 340.67±348.37,P<0.01),福辛普利干预组AngⅡ含量显著降低(4 501.50±129.33,P<0.01)。未治疗组心肌局部的TGF-β1表达显著高于对照组(0.266 5±0.049 3和0.135 2±0.050 7,P<0.01);福辛普利干预后TGF-β1表达则明显降低(0.140 9±0.039 6,P<0.01)。未治疗组心功能明显低于对照组(P<0.01);福辛普利干预组心功能显著改善(P<0.01)。相关分析表明:未治疗组心肌局部AngⅡ含量与心肌TGF-β1表达明显正相关(r=0.802,P<0.05);而AngⅡ的含量和TGF-β1的表达分别与心功能明显负相关(r=-0.832P<0.05,r=-0.776,P<0.05)。结论:福辛普利能通过降低心肌局部AngⅡ含量而减少心肌TGF-β1表达,减轻心功能的恶化。     

Egr-1蛋白、MMP-2、TGF-β1在肾小管间质纤维化大鼠中的表达及意义

目的 探讨Egr-1(early growth response-1)蛋白、MMP-2、TGF-β1在肾小管间质纤维化大鼠模型中的表达及意义.方法 采用单侧输尿管结扎术(Unilateral Ureteral Obstruction,UUO)致肾小管间质纤维化大鼠模型.将54只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、贝那普利(Benazepril)治疗组[10 mg/(kg·d)].手术后第5、10和15天分别处死各组中6只大鼠,用免疫组化方法观察各组大鼠肾小管间质中Egr-1蛋白,转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1),基质金属蛋白酶-2(matrix metalloProteinase-2,MMP-2)表达情况.行HE、Masson染色后进行图像分析评定各组肾小管间质损害程度.结果 模型组各时间点肾小管间质损伤指数及Egr-1蛋白、TGF-β1表达明显高于假手术组(P＜0.05),MMP-2表达明显低于同期假手术组(P＜0.05);而贝那普利组各时间点肾小管间质损伤指数及Egr-1蛋白、TGF-β1表达明显低于模型组(P＜0.05),MMP-2表达明显高于同期模型组(P＜0.05).结论 Egr-1蛋白参与肾小管间质纤维化过程;贝那普利在肾小管间质纤维化中对肾脏有保护作用.     

糖尿病大鼠肾小球基质金属蛋白酶2和9的表达

目的:对糖尿病大鼠模型的肾组织中的基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、Ⅳ型胶原(C-Ⅳ)和转化生长因子β1(TGF-β1)的表达进行定量和定位研究,探讨糖尿病肾病的发病机理.方法:SD大鼠腹腔注射链脲佐菌素(70 mg/kg)诱发糖尿病,肾标本行常规病理检查,用MMP-2 、MMP-9、C-Ⅳ单克隆抗体及TGF-β1多克隆抗体标记进行免疫组织化学染色、图象分析仪分析.结果:正常大鼠MMP-2、MMP-9主要表达在肾小球系膜细胞、内皮细胞、包曼氏囊壁层上皮细胞、肾小管上皮细胞,偶见浸润的巨噬细胞和中性粒细胞表达.造模后2、4、8周时糖尿病组大鼠肾小球MMP-2较对照组明显下降(P<0.05),而TGF-β1和C-Ⅳ则均较对照组明显上升(P<0.05),且MMP-2与TGF-β1、C-Ⅳ均呈负相关(r=-0.45、-0.69, P<0.05).肾小球MMP-9在三组各时点均未显示显著性差异,糖尿病组肾小球MMP-9较正常对照组似有升高趋势,但无统计学差异(P>0.05).结论:糖尿病时伴有肾小球MMP-2表达水平的下降可能与TGF-β1水平的升高有关,MMP-2的减少导致C-Ⅳ降解减少,可能是引起细胞外基质积聚的原因之一.     

肺纤维化小鼠肺组织中MMP-9和TGF-β1的表达及意义

目的探讨肺纤维化小鼠肺组织中基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和转化生长因子-β1(TGF-β1)的表达及意义。方法将60例C57BL/6小鼠随机均分为实验组、治疗组和对照组,其中实验组和治疗组采用博莱霉素诱导建立肺纤维化小鼠模型,其余20例健康小鼠作为对照组,采用免疫组化SP法测定实验组和对照组肺组织中MMP-9和TGF-β1蛋白的表达情况。并采用格列卫对治疗组进行干预,对治疗前后肺组织中MMP-9和TGF-β1的表达情况进行比较。结果对免疫组化测得的光密度值进行比较,实验组MMP-9和TGF-β1的值明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。将治疗组中进行干预的20只小鼠进行MMP-9和TGF-β1的光密度值测定,干预前后进行比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论肺纤维化小鼠肺组织中MMP-9和TGF-β1呈高表达,格列卫对博莱霉素诱导的小鼠肺纤维化程度可能有抑制作用。     

MMP-9/TIMP-1在糖尿病大鼠肾小管上皮细胞的表达及缬沙坦对其影响

目的 观察MMP-9/TIMP-1在耱尿病(DM)大鼠肾小管上皮细胞的表达,及缬沙坦对其影响.方法 30只雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组(n=10),糖尿病模型组(n=10)和缬沙坦组(n=10).采用腹腔内一次性注射STZ 55 mg/(kg·d)诱导糖尿病模型.缬沙坦组大鼠于糖尿病成模后给予缬沙坦30 mg/(kg·d)灌胃.分别于第8、16周末,每组随机处死5只大鼠,取肾组织HE和Masson染色观察肾小管间质病变;免疫组化法检测肾小管上皮细胞MMP-9、TIMP-1及TGF-β<,1>的表达并作半定量分析.结果 ①与对照组比较,DM模型组大鼠肾小管间质病变显著加重,肾小管上皮细胞的TGF-β,1、MMP-9、TIMP-1表达增强,但MMP-9/TIMP-1比值下降,其MMP-9与TIMP-1表达失调;②缬沙坦组大鼠上述改变的程度显著小于糖尿病模型组.结论 ①MMP-9/TIMP-1失衡可能是DM肾小管间质病变进展的一个因素;②缬沙坦可通过改善MMP-9/TIMP-1失衡,减轻肾小管阃质病变.     

食饵性高脂血症对糖尿病大鼠肾脏 TGF-β/Smad信号通路的激活

目的:观察食饵性高脂血症对链脲佐茵素(STZ)诱导的糖尿病SD大鼠肾脏皮质TGF-β/Smad信号通路的影响,探讨脂质对糖尿病肾脏损伤的作用机制.方法:STZ腹腔注射法诱导SD大鼠糖尿病成模,正常饮食和高脂饮食分别喂养糖尿病大鼠和非糖尿病大鼠16周.半定量逆转录PCR(RT-PCR)检测各组大鼠肾脏皮质转化生长因子β1(TGF-β1)、转化生长因子Ⅱ型受体(TβR Ⅱ)和Ⅳ型胶原(Col-Ⅳ)mRNA表达的变化;免疫组织化学染色检测各组大鼠肾小球TβR Ⅱ和磷酸化Smad2蛋白(p-Smad2)的表达和定位;Western印迹检测各组大鼠肾皮质TGF-β1和Col-N蛋白表达变化.结果:高脂喂养上调糖尿病SD大鼠肾脏皮质TGF-β1,TβR Ⅱ,p-Smad2和Col-Ⅳ蛋白和mRNA表达水平,高脂喂养对非糖尿病SD大鼠肾脏皮质TGF-β1,TβR Ⅱ,P-Smad2和Col-Ⅳ mRNA和/或蛋白表达无明显影响.结论:高脂血症可能通过激活TGF-β/Smad信号通路,导致糖尿病肾脏损害.     

2型糖尿病肾病患者尿VEGF、TGF-β1、Co-Ⅳ的变化及意义

目的探讨2型糖尿病肾病患者不同时期尿血管内皮生长因子(VEGF)、转化生长因子β1(TGF-β1)、Ⅳ型胶原(Co-Ⅳ)的变化规律及其临床意义.方法将符合1999年WHO诊断标准的108例(男55例,女53例)2型糖尿病患者,根据24h尿白蛋白排泄量分为3组,即正常白蛋白尿组(DM1组,37例)、微量白蛋白尿组(DM2组,34例)和临床白蛋白尿组(DM3组,37例),另设正常对照组(NC组,36例),采用酶联免疫法(ELISA),分别测定四组研究对象尿VEGF、TGF-β1、Co-Ⅳ水平.结果与NC组(2.96±0.98)μg/l相比,DM1组尿VEGF(5.48±1.48)μg/l升高(P＜0.05),而尿TGF-β1(46.57±13.15)μg/l和Co-Ⅳ(10.10±3.81)μg/l无明显变化(P＞0.05).尿VEGF在DM2组(11.17±3.53)μg/l和DM3组(12.07±5.10)μg/l进一步升高,与DM1组比较差异显著(均P＜0.05);而尿TGF-β1和Co-Ⅳ结果仍相似,即在DM2组无明显变化,DM3组[分别为(161.68±59.54)μg/l、(24.15±5.23)μg/l]较DM1组[分别为(46.57±13.15)μg/l、(10.10±3.81)μg/l]与DM2组[分别为(76.51±22.01)μg/l、(15.5±3.44)μg/l]明显升高(均P＜0.05).结论VEGF、TGF-β1和Co-Ⅳ与糖尿病肾病的发生发展有关;并且,尿VEGF可能为早期糖尿病肾病的预示指标,而尿TGF-β、Co-Ⅳ可能为判断糖尿病肾病严重程度的指标.