血管紧张素Ⅰ化学发光免疫分析方法的建立

目的:建立人血管紧张素Ⅰ(AngⅠ)化学发光免疫分析方法,通过测定血浆中血管紧张素Ⅰ的含量计算肾素活性。方法:用生物素标记AngⅠ抗原,荧光素标记AngⅠ抗体,将抗荧光素抗体包被于化学发光板,以链亲和素酶为催化剂,采用竞争法建立AngⅠ化学发光免疫分析方法。结果:本方法的测量范围为100~7 800 pg/ml,灵敏度为24.3 mU/ml,批内变异为5.6%~8.7%,批间变异为6.8%~10.4%,回收率为95.4%~105.3%,稀释实验测定值与理论值呈线性相关,相关系数为r=0.999。与放射免疫分析试剂盒的相关性方程分别为y=0.95x+235.70,相关系数r=0.973。包被板、生物素标记AngⅠ抗原以及荧光素标记AngⅠ抗体在37℃存放一周稳定性良好。结论:方法学鉴定结果符合免疫分析的基本要求。     

促甲状腺激素生物素-亲和素酶促化学发光免疫分析方法的建立

目的建立一种低成本、高灵敏度的检测血清促甲状腺激素(TSH)的生物素-亲和素酶促化学发光免疫分析方法。方法引入生物素-亲和素放大系统,一株抗TSH的单克隆抗体包被微孔板,另一株标记生物素,辣根过氧化物酶标记链亲和素,鲁米诺作为发光底物,采用夹心法,建立TSH酶促化学发光免疫分析方法。结果方法分析灵敏度为0.01mIU/L,批内变异系数为2.01%～5.40%,批间变异系数为2.96%～17.9%,回收率为90.6%～114.4%,高值促甲状腺激素血清样品经系列倍比稀释后,测定值与稀释度呈线性关系,相关系数大于0.99,与原子高科TSH免疫放射分析方法和罗氏电化学发光分析法的测定值具有良好的相关性。结论生物素-亲和素TSH酶促化学发光免疫分析方法具有成本低、灵敏度高、特异性高和稳定性好的特点,具有广阔的应用前景。     

制备醛固酮多克隆抗体建立检测血浆醛固酮的化学发光免疫分析法

目的：制备可用于免疫分析的醛固酮(ALD)多克隆抗体,并建立基于生物素-链霉亲和素放大系统的ALD化学发光免疫分析方法,用于测定人血液中的ALD含量。 方法：对ALD进行化学改造,制备醛固酮肟,再与BSA偶联制备免疫原,免疫兔,制备抗ALD多克隆抗体。以生物素-链霉亲和素放大系统采用竞争法建立ALD化学发光免疫分析方法。结果：经检测免疫的3号兔获得的抗ALD抗体灵敏度最高,50%抑制率（IC₅₀）ALD浓度是268 pg/ml。用该抗体建立的化学发光免疫分析法的检测范围为62.5~2 000 pg/ml,灵敏度为 23.7 pg/ml,批内变异系数为6.9%~9.5%,批间变异系数为8.5%~12.7%,回收率范围为93.1%~104.1%,稀释实验测定值与理论值呈线性相关,相关系数为r=0.996,与放射免疫分析试剂盒的相关性方程分别为y=0.932x+4.596,相关系数r=0.948（n=95）。结论：建立的检测ALD的化学发光免疫分析法符合临床应用的基本要求。     

平足蛋白吖啶酯化学发光免疫分析方法的建立及在乳腺癌检测中的临床应用

目的 建立一种以活化吖啶酯标记抗人平足蛋白抗体为标记物检测人血清中平足蛋白(PDPN)的磁微粒化学发光免疫检测方法并进行在乳腺癌相关疾病方面的临床应用验证。方法 以包被链酶亲和素磁微粒-活化生物素标记抗人平足蛋白抗体为固相分离载体，生物素标记一株鼠抗人平足蛋白单克隆抗体，吖啶酯标记另一株鼠抗人平足蛋白单克隆抗体，建立人血清样本中PDPN定量免疫分析方法。结果 在线性范围1.00～800.00ng/mL内，相关系数r为0.9990,检出限为0.52ng/mL;批内重复性不超过5.0%,批间差不超过10.0%;正常参考区间为小于4.50ng/mL;测定乳腺癌临床样本，特异性为88%和灵敏度为87%。结论 建立了定量检测人血清中PDPN水平的化学发光免疫分析法，对乳腺癌的发生发展起了辅助诊断作用。     

应用FITC系统建立雌二醇直接竞争化学发光免疫分析方法

目的利用异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate,FITC)系统建立人血清雌二醇(estradiol,E_2)直接竞争化学发光免疫分析方法。方法采用兔抗-FITC抗体、FITC-抗-E_2两步包被制备预包被板,采用直接竞争法原理建立E_2化学发光免疫分析检测体系,并对FITC-anti-E_2包被浓度、酶标抗原稀释比例、缓冲体系、反应时间等各种影响因素进行优化。结果本系统线性范围为30～3000 pg/mL,空白检测限4.8pg/mL,定量检测限30 pg/mL,分析内精密度5.6%,批间精密性8.7%,平均回收率95.9%,与雌三醇、睾酮、孕酮均无明显交叉反应,与贝克曼全自动化学发光试剂同时测定164份样本,二者测定结果的相关系数r为0.979。结论成功建立了雌二醇直接竞争化学发光免疫分析方法 ,该方法性能指标优秀,具有一定的临床应用价值。     

链霉亲和素-生物素化学发光免疫分析血清胰岛素方法建立及临床应用

目的：建立链霉亲和素-生物素双抗体夹心一步法测量人胰岛素化学发光免疫分析方法,并进行临床应用检测。方法：以链霉亲和素包被微孔板,生物素化一株单克隆抗体,辣根过氧化物酶标记另一株单克隆抗体。校准品与胰岛素国家标准品进行溯源,建立免疫分析方法,进行性能参数测试。收集40例正常人、12例1型、29例2型糖尿病人血清,统计整理参考值,并与国外同类试剂盒进行对比。结果：该方法回收率94.13%,线性范围（2～200）μIU/ml,灵敏度0.05μIU/ml,批内、批间变异系数（CV）分别为2.87%～7.06%和3.24%～9.14%,与牛胰岛素、猪胰岛素、人前胰岛素原、胰岛素样生长因子Ⅰ交叉反应率分别为27.2%、19.7%、0.16%、0.07%,与C肽、胰高血糖素、生长抑素无交叉反应。本法与国外同类试剂盒同时检测40份正常人葡萄糖耐量试验血清,r为0.9869,本法37℃7d热稳定性良好,建立一组正常人葡萄糖耐量参考值。结论：本法各项指标均满足临床检测要求,达到国外同类产品水平,反应快速,操作简单,便于临床检验应用。     

C-肽化学发光免疫分析方法学研究

目的：建立人血清C-肽化学发光免疫分析法。方法：采用两株高特异的抗C-肽单克隆抗体，以一株包被微孔板制成固相抗体，另一株标记碱性磷酸酶，以金刚烷衍生物为底物，双抗体夹心法测定人血清C-肽浓度。结果：以5μg/ml单克隆抗体包被微孔板，酶结合物以1：5000稀释，在C-肽浓度0．1～15ng／ml范围内线性良好，线性方程为y=0．9575x-0．0869，相关系数0．99；灵敏度为0．01ng／ml，批内、批间变异系数分别为5．8％、8．4％；平均回收率98．4％，范围91．5％～105．0％。结论：文中建立的人血清C-肽化学发光免疫分析法，首次建立小分子人血清C-肽双抗体夹心化学发光免疫法测定。线性好，灵敏度较常规高出一个数量级，准确度和精密性高，能够满足一般临床诊断和科研的应用。     

新型固相竞争性时间分辨荧光免疫检测血清孕酮方法的建立

本研究以血清孕酮为对象,在国内首次建立了小分子类固醇激素的时间分辨荧光免疫分析法。将半抗原——载体蛋白分子即孕酮——BSA 包被微量滴定条后,再行无水乙醇处理,制成固相抗原;纯化的抗孕酮抗体 IgG 与生物素偶联;E_u~3 则与链亲和素标记,作为通用标记物。该法曲线范围是0.1～100ng/ml,灵敏度为0.05ng/ml,平均批内及批间 C、V 分别为6.45%及8.93%,平均回收为89.95%,血清线性稀释实验测得值与期望值接近.40例样本同时用 TRFIA 及 RIA 测量,相关性良好,r=0.9619。     

总PSA光激化学发光免疫分析法的建立

为了采用光激化学发光免疫分析技术建立快速定量检测总前列腺特异性抗原(tPSA)的方法。用两株配对的tPSA单克隆抗体,一株tPSA单克隆抗体包被受体微球,另一株tPSA单克隆抗体用生物素标记,与链霉亲合素的供体微球共同组成检测试剂。结果:自制tPSA试剂分析灵敏度为0.006ng/ml,线性测量范围为0.006～150ng/ml,分析内和分析间的精密度分别为3.90%～6.67%、4.71%～6.90%,与AFP、CA125、CA19-9和人白蛋白无明显交叉反应,136份临床血清样本用本试剂与罗氏化学发光试剂检测,其相关系数为0.979。提示:自制tPSA光激化学发光免疫分析试剂各项指标均能达到临床要求,有望替代国外同类产品。     

高灵敏电化学发光法特异性测定人血清抗甲状腺球蛋白抗体

目的 通过竞争法一步法原理,建立一种检测人血清抗甲状腺球蛋白抗体(anti-TgAb)的电化学发光免疫分析(ELICA)方法.方法 将样本、三联吡啶钌标记抗体和生物素标记甲状腺结合球蛋白(thyroglobulin,Tg)抗原三者共同孵育形成抗体-抗原复合体,再加入链霉亲和素包被的磁微粒与该复合物共同孵育形成钌标记抗体-生物素抗原-链霉亲和素磁颗粒复合物,通过磁场固定洗涤去除游离物质;然后加入三丙胺得到相对光子强度(relative light units,RLU).检测该方法的灵敏度、线性范围、精密度、准确度及稳定性,并与罗氏公司的anti-TgAb检测试剂盒进行对比.结果 anti-TgAb的最低检测限为5 IU/mL,线性范围为10～1000 IU/mL,准确度为0.900～1.100,批内变异和批间变异均小于5％.与罗氏公司anti-TgAb检测试剂盒的相关系数r=0.996(n=50),稳定性测试(37℃,8d)中,各项性能指标变异程度均符合标准[线性相关系数r=0.9998,准确度低值0.94,准确度高值0.93,批内精密度(CV)高值3.77％,低值4.34％].结论 该方法各项性能指标(灵敏度、精密度、准确度、稳定性等)均能达到临床检测要求,可供临床检测使用.     

FSH双标记液相IRMA的方法建立及实验研究

目的：探讨磁性微粒子双标记IRMA检测FSH的临床应用价值及其重要意义。方法：利用^125Ⅰ和异硫氰酸荧光素（FITC）分别标记的单克隆抗体（McAb）与抗原进行夹心反应,然后加入抗荧光素抗体包被的磁性微粒进行沉淀分离。结果：检测样品值两法高度相关（r〉0．9900）,双标记液相IRMA法批间变异CV（n=10）5．8％,包被管固相法批间变异CV（n=10）8．5％,两法差异显著。结论：双标记液相IRMA技术是一种快速有效、灵敏度高、特异性好的定量检测方法。     

糖类抗原50化学发光免疫分析方法的建立及评价

目的 建立以异硫氰酸荧光素(FITC)单抗包被磁微粒、吖啶酯为发光标记物的检测糖类抗原50(CA50)的磁微粒全自动化学发光免疫分析方法.方法 根据双抗体夹心法原理,选择抗-FITC单克隆抗体偶联磁微粒,FITC标记一株抗-CA50单克隆抗体,吖啶酯标记另一株抗CA50单克隆抗体,建立CA50化学发光免疫分析方法,同时对该方法的空白限、检出限、线性范围、准确度、重复性、干扰进行了验证,并与迈瑞全自动化学发光试剂检测结果进行了比对.结果 本方法最终采用两步法的反应模式,空白限为0.03U/mL,检出限为2U/mL,线性范围为4.0～500.0U/mL,样本的回收率为99.39％,高、低两份样本变异系数分别为4.05％和2.16％,与迈瑞全自动化学发光免疫测定系统同时测定131份样本,回归方程为Y=1.0177 X-3.0827,r=0.993.同时发现样本中的荧光素钠(FITC-Na)高于2μg/mL时会对本方法造成干扰.结论 成功建立了糖类抗原50的吖啶酯全自动化学发光免疫分析方法,各项指标均满足临床检测的要求,具有一定的临床应用价值.     

人血清癌胚抗原的生物素-亲和素ELISA检测方法的建立

目的:建立检测血清癌胚抗原(CEA)的高灵敏度生物素-亲和素酶联免疫检测(BA-ELISA)方法。方法:亲和层析纯化得到CEA,免疫新西兰家兔制备多克隆抗体。将得到的抗体连接生物素和辣根过氧化物酶,在生物素化BSA包被的96微孔板上建立生物素-亲和素ELISA(BA-ELISA)。对这一体系的线性、灵敏度、特异度、稳定性、回收率等参数进行鉴定,并和常规ELISA、放射免疫检测以及化学发光法相比较检测了临床标本中的CEA浓度。结果:线性检测范围为(0.42～50)U/mL,检测结果表明,体系稳定性良好;灵敏度为0.42 U/mL,批内、批间差异均小于10.0%。该研究建立的方法与常规ELISA对比差异有统计学意义,与放射免疫检测对比差别无统计学意义。与化学发光法相比较,回归方程为:y=0.04825+0.99674x,r=0.994,差异无统计学意义。结论:建立的CEA的BA-ELISA检测方法易于操作、灵敏度高、价格低廉,适合应用于临床检测。     

氯霉素磁分离酶联免疫(MEIA)检测方法的建立

目的:采用磁分离酶联免疫分析法(MEIA)建立定量检测氯霉素(CAP)的一种高灵敏度方法.方法:采用免疫竞争法,用异硫氰酸荧光素(FITC )标记抗CAP抗体,碱性磷酸酶(AP)标记CAP,以羊抗FITC抗体包被的免疫磁珠作为固相分离载体,单磷酸酚酞做显色底物,建立检测CAP的MEIA法.结果:成功建立了检测CAP的MEIA法,检测时间为40 min,检测灵敏度为0.03μg/L,线性范围为0.1～8.1μg/L,批内变异系数(CV) 3.9%-5.3%,批间CV 4.8%-8.1%,回收率为97%～101.5%,与国标方法液相色谱一串联质谱法的检测结果对比,相关系数r=0.9817.结论:检测CAP的MEIA法的灵敏度及准确率高、检测时间短,为食品中氯霉素残留的监测提供了一种新的免疫分析方法.     

竞争性化学发光酶免疫分析法检测睾酮

目的：建立高灵敏度的化学发光酶免疫分析法（ＣＬＥＩＡ）检测睾酮。方法：包被抗体、标记抗原或包被抗原、标记抗体，用辣根过氧化物酶标记，鲁米诺增敏化学发光体系作为酶底物。结果：包被二抗、标记睾酮的方法灵敏度高、操作简便，灵敏度为０．０６３ｎｇ／ｍｌ，睾酮浓度为１．０、５．０和１０．０ｎｇ／ｍｌ时，批内变异５．８％～７．４％（ｎ＝２０），批间变异为６．６％～８．７％（ｎ＝２０），回收率为９８．２％～１０     

促甲状腺素光激化学发光免疫测定法的建立和初步应用

采用光激化学发光免疫测定法(LICA)技术建立促甲状腺素(TSH)快速定量检测方法。采用两株针对TSH不同表位的单克隆抗体,一株单抗包被发光微粒,另一株为生物素化单抗,两者与链亲和素包被的感光微粒一起构建双抗体夹心LICA。数据处理采用双对数函数处理程序。方法的灵敏度为0.015mIU/L;批内CV为2.5%～3.6%,批间CV为2.6%～4.4%;平均回收率为100.60%。与时间分辨荧光免疫分析法(TRFIA)比对,相关系数达0.9681;与TRFIA临床测定值呈明显相关;正常值范围为0.33～3.09mIU/L。本文建立的TSH光激化学发光免疫测定法是目前TSH检测中最快速灵敏的方法之一,该方法稳定性好,具有很好的应用前景。     

人血清生长激素化学发光免疫分析方法的建立

建立链霉亲和素-生物素双抗体夹心化学发光免疫分析法(CLIA)测量人血清生长激素(GH),并进行临床应用检测.以链霉亲和素包被微孔板,生物素化一株GH单克隆抗体(McAb),辣根过氧化物酶标记另一株McAb,校准品与国家标准品进行溯源,建立GH CLIA法,进行性能参数测试,与国外试剂盒比对.结果表明本法线性范围为2....     

乳铁蛋白酶免疫分析法的建立及乳品含量检测的初步应用

目的：建立乳铁蛋白（LF）酶免疫分析法,检测LF在血清及乳汁中的水平。方法：用人源的LF多次免疫兔,获得高效价的抗体。纯化后包被成固相酶标板,以识别并结合待测标本中的LF。用生物素标记抗原（Bio-Ag）,同辣根酶标记亲和素（HRP-A）可特异结合。向固相酶标板中同时加入Bio-Ag和不同浓度的标准品,37℃反应1.5h。洗涤后以HRP-A为探针,经酶底物显色后可获得良好的ELISA竞争抑制曲线。结果：该法测定范围：（0.36～9.00）μg/ml,最低检出量0.25μg/ml,批内和批间误差分别为〈6.3%和7.4%。用该法测正常献血员（40名）血清LF水平为（0.438±0.183）μg/ml;人初乳（5名）水平为（7.82±0.51）mg/ml。血清和初乳中的LF经65℃30min处理后活性不变,经100℃3min处理明显降解。结论：该法稳定、简便、特异适于检测人血清和乳汁中的LF水平。     

人血清IL-6电化学发光检测方法的建立

目的通过双抗体夹心一步法的原理,建立一种检测人血清白细胞介素6(IL-6)的电化学发光免疫分析方法。方法将标本、生物素化的IL-6单克隆抗体和三联吡啶钌标记的IL-6单克隆抗体反应以形成抗原抗体夹心复合物,然后与链霉亲和素包被的磁微粒结合,形成的复合物通过磁场清洗,从而将未结合的物质除去。然后加入三丙胺激发缓冲液,从而检测相对光子强度(relative light units,RLU)。结果本研究建立的方法,最低检测限为1.5pg/mL,线性范围为1.5~5000 pg/mL,准确度为0.900~1.100,批内变异小于8%,批间变异小于10%。与罗氏公司IL-6检测试剂盒相关系数为r=0.9996(n=75),经过37℃7 d热处理后的试剂,各项性能指标均达标,检测结果差异不大(线性相关系数r=0.9972,准确度高值0.951,准确度低值0.947,批内精密度(CV)高值2.81%,低值1.63%)。结论该方法灵敏度高、线性范围广、准确度高、稳定性好,各种指标都能达到临床检测要求,可以推广使用。     

促甲状腺素吖啶酯化学发光免疫分析方法的建立

目的 建立一种定量检测人血清促甲状腺素(TSH)的方法.方法 根据双抗体夹心法实验原理,分别用吖啶酯和生物素标记两株不同的单克隆抗体,链霉亲和素包被微粒,通过链霉亲和素-生物素系统分离固相和液相完成检测.结果 本方法的最低检测限为0.01 μIU/mL,线性范围0.3～60μIU/mL,批内变异为1.9％ ～2.3％,总变异为6.4％ ～8.6％,与ROCHE公司的促甲状腺素检测试剂盒(电化学发光法)比对,相关系数r=0.9935.结果 本方法的各项指标均能满足临床检测的要求,可以临床推广应用.