血清miR-141和miR-145联合检测非小细胞肺癌

目的:探讨miR-141、miR-145作为非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)生物标志物的诊断价值.方法:采用实时荧光定量PCR技术检测80例正常人和80例非小细胞肺癌患者血清中miR-141、miR-145的表达量,分析miR-141、miR-145的表达与非小细胞肺癌临床病理参数的关系,并绘制ROC曲线分析其诊断非小细胞肺癌的价值.结果:非小细胞肺癌患者miR-141、miR-145表达与对照组比较有统计学差异(P＜0.05),二者联合的诊断效能分别为:灵敏度92％ (95％ CI:0.86 ～0.96),特异度83％,(95％CI:0.73～0.88),阳性预测值(PPV) 86％,阴性预测值(NPV) 92％.结论:血清中miR-141、miR-145测定的诊断性能较高,可以作为非小细胞肺癌的潜在的诊断标志物.     

人食管鳞状细胞癌细胞株hsa-miR-143/145基因簇表达生物学信息的分析

目的:探讨hsa-miR-143/145基因簇在人食管鳞状细胞癌(ESCC)细胞株中的表达,并对其生物学特征以及功能进行预测分析.方法:通过实时荧光定量PCR法,检测人ESCC细胞株KYSE-150和正常食管上皮细胞株Het-1A中hsa-miR-143/145基因簇的相对含量;应用miRBase获取并分析hsa-miR-143/145基因簇序列特征并比较其同源性大小;应用TargetScan 6.1、PicTar及miRanda预测hsa-miR-143/145基因簇的靶基因,取三者预测结果的交集,并结合已证实的靶基因进行功能注释(GO)和通路富集分析.结果:人ESCC细胞株KYSE-150中hsa-miR-143表达水平为0.000 2±0.000 5,显著低于正常食管上皮细胞Het-1A的0.000 6±0.000 7,t=10.301,P=0.001;hsa-miR-145的表达水平为0.000 5±0.000 1,显著低于正常食管上皮细胞Het-1A的0.001 2±0.000 2,t=6.139,P=0.004.应用3种靶标预测软件预测hsa-miR-143和hsa-miR-145的靶基因,取交集有119个基因,结合已证实的靶标基因,共224个.hsa-miR-143/145基因簇在21个物种上都显示了很好的同源性,其靶基因显著富集在癌症通路、与癌症发生相关的信号通路以及心肌通路中.结论:Hsa-miR-143/145基因簇可能参与ESCC的发病机制,其预测靶基因集合富集于多个生物学过程并且显著富集于癌症通路,为后续Hsa-miR-143/145基因簇生物学功能的研究奠定了基础.     

miR-145在非小细胞肺癌中的表达及临床病理意义

摘 要：［目的］ 探讨miR-145在配对的非小细胞肺癌 (non-small cell lung cancer,NSCLC) 患者肿瘤组织和癌旁组织中的表达情况,分析其与临床病理因素和预后的关系。［方法］ 应用实时定量聚合酶链反应（q-RT-PCR）检测miR-145在配对的NSCLC患者肿瘤组织和癌旁组织中的表达水平。［结果］ miR-145在NSCLC患者肿瘤组织中的表达水平明显低于癌旁组织（P＜0.001)。miR-145诊断NSCLC的ROC曲线下面积为0.895。miR-145在Ⅲ~Ⅳ期和中低分化的NSCLC患者肿瘤组织中的表达水平明显低于Ⅰ~Ⅱ期和高分化的肿瘤组织（P＜0.05）。miR-145低表达组的总生存率明显低于miR-145高表达组（P＜0.05）。［结论］ miR-145在NSCLC组织中的表达下调,在NSCLC的发生中可能发挥抑癌基因的作用,可能是NSCLC的诊断及预后标志物之一。     

miRNA-451逆转非小细胞肺癌A549/DDP细胞对顺铂的耐药性及其机制研究

目的:探讨microRNA-451(miR-451)逆转非小细胞肺癌A549/DDP细胞对顺铂的耐药性及其可能的作用机制.方法:应用实时荧光定量PCR法(real-time fluorescent quantitative PCR,qRT-PCR)检测耐DDP细胞株A549/DDP及其亲本细胞株A549中miR-451的表达差异,同时检测A549/DDP细胞转染miR-451 mimic后miR-451表达的变化;分别应用MTT法、克隆形成实验、流式细胞术检测转染后A549/DDP细胞对DDP药物敏感度,细胞增殖能力,联合DDP处理后细胞凋亡变化;Western印迹法检测转染后A549/DDP细胞Akt、p-Akt( Ser473)、bcl-2和bax的表达变化.结果:miR-451在耐DDP细胞株A549/DDP中的表达量显著低于敏感细胞株A549 (P ＜0.05),A549/DDP细胞转染miR-451 mimic24h后,细胞中miR-451的表达水平较对照组明显提高(P＜0.05).在A549/DDP细胞中过表达miR-451可产生以下效应:相较于对照组,DDP对A549/DDP/miR-451细胞的半数抑制浓度(half inhibition concentration,IC50)减低(P＜0.05),A549/DDP/miR-451细胞的增殖能力减弱,A549/DDP/miR-451经过DDP处理后细胞凋亡增多(P＜0.05).Western印迹法结果显示,与对照组比较,转染miR-451 mimic的A549/DDP细胞p-Akt ( Ser473)、bcl-2表达水平降低;bax表达水平升高.结论:miR-451可能通过诱导细胞凋亡,抑制细胞增殖,上调bax蛋白及下调p-Akt( Ser473)、bcl-2蛋白表达而逆转A549/DDP细胞对DDP的耐药性.     

miR-145通过靶向抑制SMAD3的表达抑制非小细胞肺癌细胞侵袭能力

目的:探讨miR-145靶向调控SMAD3的表达对非小细胞肺癌细胞侵袭能力的影响。方法:采用qRT-PCR检测miR-145和SMAD3在30例非小细胞肺癌组织和癌旁组织中的表达水平并分析其相关性。利用靶基因预测网站预测miR-145的潜在靶基因SMAD3,利用双荧光素酶报告基因实验验证。利用细胞转染实验对非小细胞肺癌A549细胞进行了miR-145 mimics、miR-145 inhibitor、siRNA SMAD3及其相关对照的细胞转染,采用Transwell实验检测转染后A549细胞侵袭能力的变化。使用Western blot检测上调或下调miR-145表达对A549细胞中SMAD3蛋白表达的影响。结果:qRT-PCR结果显示,非小细胞肺癌组织中miR-145低表达,SMAD3高表达,且两者表达水平呈负相关。靶基因预测及验证实验结果显示miR-145可以与SMAD3 的 3'-UTR特异性结合,SMAD3是miR-145的靶基因。Western blot 结果显示,转染miR-145 mimics可以显著降低SMAD3蛋白的表达水平（P<0.001）,转染miR-145 inhibitor则显著提高SMAD3蛋白的表达水平（P<0.01）。Transwell体外侵袭实验结果显示,与对照组相比,转染miR-145 mimic显著降低了A549细胞的侵袭能力（P<0.001）,转染miR-145 inhibitor显著提高了A549细胞的侵袭能力（P<0.05）;与对照组相比,敲低SMAD3的表达A549细胞的侵袭能力减弱（P<0.001）;与单独敲低SMAD3相比,共同转染siRNA SMAD3和miR-145 mimics A549细胞的侵袭能力减弱（P<0.05）,共同转染siRNA SMAD3和miR-145 inhibitor A549细胞的侵袭能力无显著差异（P>0.05）。结论:miR-145在非小细胞肺癌组织中低表达,miR-145通过靶向抑制SMAD3的表达发挥对非小细胞肺癌细胞侵袭能力的抑制作用,为临床综合治疗提供了新的作用靶点。     

miRNA-451逆转非小细胞肺癌A549／DDP细胞对顺铂的耐药性及其机制研究’

目的：探讨microRNA-451（miR-451）逆转非小细胞肺癌A549／DDP细胞对顺铂的耐药性及其可能的作用机制。方法：应用实时荧光定量PCR法（real～timefluorescentquantitativePCR,qRT—PCR）检测耐DDP细胞株A549／DDP及其亲本细胞株A549中miR-451的表达差异,同时检测A549／DDP细胞转染miR-451mimic后miR-451表达的变化;分别应用MTT法、克隆形成实验、流式细胞术检测转染后A549／DDP细胞对DDP药物敏感度,细胞增殖能力,联合DDP处理后细胞凋亡变化;Western印迹法检测转染后A549／DDP细胞Akt、P—Akt（Ser473）、bcl-2和bax的表达变化。结果：miR-451在耐DDP细胞株A549／DDP中的表达量显著低于敏感细胞株A549（P〈0．05）,A549／DDP细胞转染miR-451mimic24h后,细胞中miR-451的表达水平较对照组明显提高（P〈0．05）。在A549／DDP细胞中过表达miR-451可产生以下效应：相较于对照组,DDP对A549／DDP／miR-451细胞的半数抑制浓度（half inhibitioncon centration,IC50）减低（P〈0．05）,A549／DDP／miR-451细胞的增殖能力减弱,A549／DDP／miR-451经过DDP处理后细胞凋亡增多（P〈0．05）。Western印迹法结果显示,与对照组比较,转染miR-451mimic的A549／DDP细胞P—Akt（Ser473）、bcl-2表达水平降低;bax表达水平升高。结论：miR-451可能通过诱导细胞凋亡,抑制细胞增殖,上调bax蛋白及下调P—Akt（Ser473）、bcl-2蛋白表达而逆转A549／DDP细胞对DDP的耐药性。     

循环血液外泌体miR145、miR-200与非小细胞肺癌患者放化疗后复发、转移的关系

目的 探讨循环血液外泌体微小RNA-145(miR145)、微小RNA-200(miR-200)与非小细胞肺癌患者放化疗后复发、转移的关系。方法 回顾性选取72例非小细胞肺癌患者作为实验组,并选取同期72例健康体检者作为对照组。实验组患者均接受放化疗治疗,出院后展开为期1年的随访,对比2组患者循环血液外泌体miR145、miR-200表达量,分析实验组患者不同病理特征miR145、miR-200表达量;以KM曲线法绘制复发转移曲线分析miR145、miR-200表达量对患者放化疗后复发、转移的影响。结果 与对照组相比,实验组miR145水平显著更低,miR-200显著更高,差异具有统计学意义(P<0.05)。实验组循环血液外泌体miR145和miR-200表达量在不同TNM分期和淋巴结转移情况方面差异比较具有统计学意义(P<0.05);高miR145组(n=42)与低miR145组(n=30)2年内复发转移率分别为28.57%(12/42)和73.33%(22/30),两者差异具有统计学意义(P<0.05);高miR-200组(n=27)与低miR-200组(n=45...     

结肠癌细胞中miR-145-5p、miR-143-3p的表达变化对多药耐药的影响

目的:探讨人结肠癌细胞中miR-145-5p、miR-143-3p的表达发生变化后对P-gp和MRP的影响。方法:采用Western Blot和qRT-PCR法检测人结肠癌细胞分别转染miR-145-5p mimics/inhibitor、miR-143-3p mimics/inhibitor后P-gp 和MRP的表达。结果:转染miR-145-5p mimics后P-gp和MRP的蛋白和基因表达均降低（P<0.05）,转染miR-145-5p inhibitor后P-gp 和MRP的蛋白和基因表达均升高（P<0.05）。转染miR-145-5p mimics NC和miR-145-5p inhibitor NC后P-gp 和MRP的蛋白和基因表达无明显变化（P>0.05）。转染miR-143-3p mimics后P-gp和MRP的蛋白和基因表达均降低（P<0.05）,miR-143-3p inhibitor后P-gp和MRP的蛋白和基因表达均升高（P<0.05）。转染miR-143-3p mimics NC和miR-143-3p inhibitor NC后P-gp 和MRP的蛋白和基因表达无明显变化（P>0.05）。结论:miR-145-5p及miR-143-3p对多药耐药蛋白P-gp、MRP具有调控作用,参与了结肠癌的多药耐药。     

MicroRNA-145增强非小细胞肺癌细胞对吉非替尼敏感性及其机制探讨

目的:探讨微小RNA-145（microRNA-145,miR-145）对非小细胞肺癌细胞系吉非替尼耐药的作用及其可能的潜在机制。方法:实时荧光定量PCR（Q-PCR）方法检测正常细胞及非小细胞肺癌细胞中miR-145的表达差异;不同时间5 μmol/L吉非替尼干预肺癌细胞SPC-A-1和A549后,Q-PCR检测miR-145表达变化;miR-145 mimics和miR-145 inhibitors分别转染SPC-A-1和A549肺癌细胞后,CCK8检测细胞活力变化;双荧光素酶报告系统检测miR-145与ADAM19的靶向结合;miR-145 mimics转染SPC-A-1和A549肺癌细胞,Western blot检测ADAM19蛋白表达;Western blot检测5 μmol/L吉非替尼干预后,SPC-A-1和A549肺癌细胞中ADAM19蛋白的表达;miR-145 mimics转染SPC-A-1和A549肺癌细胞,再用5 μmol/L吉非替尼干预,Western blot检测ADAM19蛋白的表达;采用siRNA抑制ADAM19表达,再用5 μmol/L吉非替尼干预,CCK8检测细胞活力;采用BALB/C雌性裸鼠皮下接种肿瘤细胞的方法,观察上述效应。结果:Q-PCR结果显示,与正常肺上皮细胞系BEAS-2B相比较,肺癌细胞SPC-A-1和A549中miR-145表达明显降低;5 μmol/L吉非替尼干预SPC-A-1和A549细胞后,miR-145表达显著上调;转染miR-145 mimics后,CCK8结果显示两种细胞细胞活力下降;双荧光素酶报告系统结果显示,miR-145靶向结合ADAM19基因的3'-UTR区;Western blot结果显示,5 μmol/L吉非替尼诱导SPC-A-1和 A549细胞后,两种细胞中ADAM19蛋白表达均降低;miR-145 mimics转染SPC-A-1和A549细胞,之后给予5 μmol/L吉非替尼治疗,ADAM19蛋白表达下调;siRNA抑制SPC-A-1和A549细胞中ADAM19表达,再给予5 μmol/L吉非替尼治疗,CCK8结果显示,两种细胞的细胞活力显著降低;过表达BALB/C雌性裸鼠的miR-145后,显著抑制皮下肿瘤生长,并且增强吉非替尼的抗肿瘤效果。结论:miR-145显著增强肺癌细胞SPC-A-1和A549对吉非替尼的敏感性,其机制可能是通过靶向结合AMDM19基因的3'-UTR区域,从而抑制其表达。miR-145有可能成为治疗非小细胞肺癌吉非替尼耐药的有效靶点。     

miRNA-192对非小细胞肺癌A549／DDP细胞顺铂耐药性的影响

目的 探讨抑制microRNA-192（miR-192）在非小细胞肺癌A549／DDP细胞对顺铂（DDP）耐药性方面的影响及可能机制。方法 通过实时荧光定量PCR（qRT-PCR）法检测人肺腺癌耐DDP细胞株A549／DDP及其亲本细胞株A549细胞中miR-192的表达水平,A549／DDP细胞转染miR-192抑制剂（inhibitor）和miR-阴性对照（NC）48h后采用qRT-PCR检测转染效率,分别采用MTT法、克隆形成实验及流式细胞术检测转染48h后A549／DDP细胞对DDP的药物敏感性、细胞增殖能力及细胞凋亡变化,Western blotting检测转染48h后细胞中Bax和Bcl-2的表达变化。结果 miR-192在A549／DDP细胞中的表达水平高于A549细胞（P＜0.05）;转染miR-192 inhibitor 48h后的A549／DDP细胞miR-192水平低于转染miR-NC者（P＜0.05）;转染miR-192 inhibitor后,A549／DDP细胞的增殖能力减弱、凋亡细胞增多、DDP对其半数抑制浓度降低、Bax蛋白水平升高和Bcl-2蛋白水平下降,与转染miR-NC者比较,差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论 抑制miR-192能够降低A549／DDP细胞对DDP的耐药性,其作用机制可能是通过增加细胞凋亡以及下调Bcl-2蛋白和上调Bax蛋白表达来实现的。     

Update of Research on Drug Resistance in Small Cell Lung Cancer Chemotherapy

Small cell lung cancer (SCLC) is characterized by a short cell doubling time, rapid progression and earlyoccurrence of blood-borne and lymph metastasis. The malignancy is the highest of all lung cancer types.Although SCLC has a relatively good initial response to chemotherapy as well as radiotherapy, relapse or diseaseprogression may occur quickly after the initial treatment. Drug resistance, especially multi-drug resistance, isthe most important cause of failure of SCLC chemotherapy. This article provides a brief update of research onmechanisms of drug resistance in SCLC and reversal strategies.     

小细胞肺癌合并抗利尿激素异常分泌综合征研究进展

小细胞肺癌患者常合并抗利尿激素异常分泌综合征(SIADH),其发生目前认为主要是肿瘤细胞分泌及药物应用引起体内抗利尿激素增多,引起体内水钠代谢平衡紊乱,导致不同程度的低钠血症,临床症状多样,表现无特异性,尤其与肿瘤引起的症状类似,极易造成误诊、漏诊.治疗上在积极治疗原发肿瘤基础上,严格限水是有效和主要的方法,小细胞肺癌患者合并抗利尿激素异常分泌综合征预后相关研究结果不一致,多认为是预后不良的独立因子.     

小细胞肺癌患者的临床特点及预后分析

目的 分析小细胞肺癌(SCLC)的临床特点及预后影响因素.方法 收集明确诊断的SCLC患者260例,给予综合治疗(同步放化疗或化疗±放疗±手术),对比不同治疗方法患者的生存期差异,采用Kaplan Meier法绘制生存曲线,寿命表法计算生存率,SPSS单因素、COX多因素分析预后因素.结果 260例中局限期189例,广泛期71例,全组中位生存期25个月,局限期为29个月,广泛期为13个月,两者生存期差异有统计学意义(P =0.000),全组1年、3年、5年生存率分别为82.3％、21.5％、4.6％,其中局限期患者1年、3年、5年生存率分别为87.1％、28.0％、6.5％,广泛期患者1年、3年、5年生存率分别为70.3％、5.4％、0％.单因素分析示:一线治疗效果、分期、治疗方式、预防性颅脑放疗可影响生存期,伴有少量胸腔积液、锁骨上淋巴结转移患者的预后与局限期患者更相近,伴有上腔静脉综合征的患者预后介于局限期及广泛期患者之间.多因素COX分析示:一线治疗是否有效、分期、治疗方法是影响患者预后的主要因素.结论 对于一般情况良好的小细胞肺癌患者,T1～2No手术治疗、同步放化疗、提高完全缓解率、复发及进展后进一步治疗,均可提高其生存率,有利于患者长期生存.     

哈萨克族食管癌组织中miR-143、miR-145和Survivin mRNA的表达及其临床病理意义

目的:检测新疆哈萨克族食管癌组织中miR-143、miR-145和Survivin mRNA的表达,探讨其在哈萨克族食管癌发生发展中的作用及临床意义。方法:采用实时荧光定量PCR方法检测47例哈萨克族食管癌及癌旁组织标本中miR-143、miR-145和Survivin mRNA的表达水平,分析它们与临床病理指标的关系。结果:miR-143、miR-145在哈萨克族食管癌组织中表达较癌旁组织降低(P均<0.01);Survivin mRNA在哈萨克族食管癌组织中表达较癌旁组织升高(P=0.000);miR-143的表达与肿瘤分化程度、淋巴结转移、临床分期相关(P=0.018、0.004、0.022);miR-145的表达与分化程度、淋巴结转移相关(P=0.007、0.039);Survivin mRNA的表达与淋巴结转移及临床分期相关(P=0.042、0.034)。miR-143的表达与miR-145呈正相关(r=0.662,P=0.000),与Survivin mRNA呈负相关(r=-0.313,P=0.002);结论:在哈萨克族食管癌中miR-143、miR-145低表达、Survivin mRNA高表达,miR-143/145基因簇、Survivin mRNA可能共同参与哈萨克族食管癌发生发展过程。     

The miR-143/-145 cluster regulates plasminogen activator inhibitor-1 in bladder cancer

Background:

Upregulation of the proto-oncogene plasminogen activator inhibitor-1 (PAI-1) is a common hallmark of various solid tumours, but the mechanisms controlling its expression are not fully understood.

Methods:

We investigate microRNAs (miRNAs) regulating PAI-1 in a panel of normal bladder urothelial biopsies, superficial Ta bladder tumours and invasive T1–T4 tumours using expression microarrays and qRT–PCR. The prognostic implications of PAI-1 deregulation are established by tissue microarray staining of non-muscle-invasive bladder tumours. MicroRNA repression of PAI-1 is assayed by ectopic miRNA expression, argonaute immunoprecipitation and luciferase assays.

Results:

We found that the miR-143/-145 cluster is downregulated in all stages of bladder cancer and inversely correlated with PAI-1 expression. Mature miR-143 and miR-145 are coordinately expressed, and both directly target the PAI-1 3′UTR, leading to reduced PAI-1 mRNA and protein levels. Furthermore, we show that PAI-1 and miR-145 levels may serve as useful prognostic markers for non-muscle-invasive bladder tumours for which accurate progressive outcome is currently difficult to predict.

Conclusion:

This report provides the first evidence for direct miRNA regulation of PAI-1 in bladder cancer. We also demonstrate mRNA co-targeting by a cluster of non-family miRNAs, and suggest miR-145 and PAI-1 as clinically relevant biomarkers in bladder cancer.     

血管内皮生长因子在小细胞肺癌组织中的表达及其与预后的相关性研究

目的探讨血管内皮生长因子(VEGF)在小细胞肺癌(SCLC)肿瘤组织中的表达及对其预后的影响。方法采用polymer免疫组化方法检测64例SCLC患者肿瘤组织中VEGF水平。结果 64例SCLC患者中VEGF阳性表达率为43.3%,且所有患者均为弱阳性表达。57例获随访的患者中,VEGF表达阳性与阴性患者的中位生存期比较无统计学差异(14个月vs 21个月,P=0.539)。结论 VEGF表达与患者的预后无显著相关。     

肺小细胞癌的X线诊断

本文分析了260例肺小细胞癌临床X线表现,通常分为3种亚型:(1)肺门纵隔型(62％),为最常见的典型表现对称或一侧性肺门纵隔增大及肿块,(2)气道阻塞型(23％),肺门及纵隔变化轻而缺乏肿块,以肺炎或肺不张表现明显。(3)周边肿块型(15％),X线显示肺内结节或肿块,并且肺门纵隔早期转移。本组有10例为特殊表现类似纵隔肿瘤极易误诊,建议为第4亚型即纵隔肿瘤型。另外CT检查在显示支气管继发阻塞性改变方面优于常规X线检查,故对诊断有困难时推荐CT检查是有益的。     

小细胞肺癌骨髓转移29例临床分析

目的探讨小细胞肺癌(SCLC)骨髓转移的临床特征、治疗方法及预后影响因素。方法回顾性分析29例SCLC骨髓转移病例的临床资料,应用SPSS10.0软件包分析其预后影响因素。结果29例SCLC患者中位年龄为52岁。诊断为局限期(LD)11例,广泛期(ED)18例。出现临床症状到确诊为SCLC的中位时间是2个月,诊断SCLC后到确诊骨髓转移的中位时间是20天。全组患者中位生存期为6个月(2～19个月),确诊骨髓转移后中位生存期为5个月(10天～18个月)。患者生存期与临床分期、发病部位、转移部位数目、含铂类化疗方案及骨髓缓解无关。采用含足叶乙甙(VP16)的化疗方案、联合放疗与患者生存期密切相关。结论SCLC骨髓转移后生存期短,治疗仍以化疗为主的综合治疗。采用含VP16的化疗方案、联合放疗对SCLC骨髓转移的预后较好。