人参皂苷Rg3对乳腺癌MCF-7细胞增殖和侵袭的影响

目的 观察人参皂苷Rg3对雌激素受体阳性的乳腺癌细胞MCF-7增殖和侵袭的影响,并探讨其可能的作用机制。方法 采用MTT法检测细胞的增殖能力,流式细胞仪分析细胞周期分布以及凋亡比率,通过Transwell小室观察细胞侵袭力,RT-PCR法检测细胞中的MMP-9 mRNA的表达。结果 与对照组相比,人参皂苷Rg3能显著抑制MCF-7细胞的增殖;G₀/G₁期及S期细胞比例减少,而G₂/M期细胞比例显著增加;同时细胞凋亡比率亦明显提升,而细胞侵袭指数降低,且呈现良好的剂量、时间依赖性。同时人参皂苷Rg3还能显著抑制细胞中MMP-9 mRNA的表达水平(P<0.05)。结论 人参皂苷Rg3能抑制MCF-7细胞的增殖和侵袭,其作用机制可能与其能降低MMP-9基因的表达有关。     

人参皂甙Rg3对乳腺癌MCF-7线粒体凋亡途径的影响

目的探讨20(R)–人参皂甙Rg3(SPG-Rg3)对人乳腺癌MCF-7细胞的诱导凋亡作用及其可能机制。方法人乳腺癌细胞MCF-7细胞株分为空白对照组、实验对照组及SPG-Rg3多个浓度组。利用MTT法观察人参皂甙Rg3对MCF-7细胞生长的抑制作用,并计算出IC-50,进一步确定其有效浓度;流式细胞术检测人参皂甙Rg3作用后MCF-7细胞周期的变化;利用AnnexinV-EGFP/PI双染法,检测人参皂甙Rg3诱导MCF-7细胞凋亡情况;免疫细胞化学染色检测MCF-7细胞凋亡与Fas、FasL蛋白表达的关系。结果 SPG-Rg3作用48h的IC-50为244.54μg/mL。流式细胞仪检测Rg3使MCF-7的S期细胞比率明显增加(P<0.01),凋亡率明显增加(P<0.01)。免疫细胞化学显示Rg3能使MCF-7细胞胞浆内细胞色素C增加(P<0.01)。结论 SPG-Rg3能诱导乳腺癌MCF-7细胞凋亡,其机制可能与诱导线粒体释放细胞色素C有关。     

人参皂苷Rg_3对失巢凋亡耐受乳腺癌细胞MCF-7抑制作用

目的研究人参皂苷Rg3对失巢凋亡耐受的乳腺癌细胞MCF-7生长抑制作用。方法应用多聚2-羟乙基甲基丙烯酸酯(poly-hema)覆盖的细胞培养板,筛选出具有失巢凋亡耐受的乳腺癌细胞MCF-7,考察失巢凋亡耐受癌细胞的生长速率和侵袭力,并利用流式细胞仪检测人参皂苷Rg3对失巢凋亡耐受癌细胞MCF-7的周期分布和细胞凋亡。结果与阿霉素对照组相比,人参皂苷Rg3能显著抑制失巢凋亡耐受的乳腺癌细胞MCF-7的生长(P<0.01),并导致失巢凋亡耐受细胞MCF-7的G0/G1期细胞比例显著增加(P<0.05)。结论人参皂苷Rg3有效抑制失巢凋亡耐受的乳腺癌细胞MCF-7生长,其作用机制可能与人参皂苷Rg3使失巢凋亡耐受乳腺癌细胞MCF-7细胞周期停滞有关。     

姜黄素对人乳腺癌MCF-7细胞增殖及血管生成相关基因表达的影响

目的研究姜黄素对人乳腺癌MCF-7细胞增殖的抑制作用,并研究对血管生成相关基因mRNA表达的影响,探讨姜黄素抑癌可能的分子机理。方法体外培养人MCF-7细胞,细胞分为姜黄素高、中、低剂量组、空白对照组、溶剂对照组。采用MTT法检测姜黄素对人MCF7细胞增殖的抑制作用;应用RT-PCR检测各组细胞血管生成相关基因ANGPTL3、VEGF mRNA的表达。结果①姜黄素对MCF-7细胞的生长有明显的抑制作用。②经姜黄素处理后MCF-7细胞的ANGPTL3、VEGF的mRNA表达水平下调。结论①姜黄素在体外对MCF7细胞生长具有抑制作用。②姜黄素能显著下调MCF-7细胞血管生成相关基因ANGPTL3、VEGF mRNA的表达。③姜黄素对人MCF-7细胞增殖的抑制效应可能与ANGPTL3、VEGF下调有关。     

人参皂苷Rg3对低氧条件诱导的Hep-2细胞作用机制的初步研究

目的:研究人参皂苷Rg3对低氧条件下人喉鳞癌细胞Hep-2中低氧诱导因子-1α(HIF-1α)及血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响.方法:通过体外低氧培养Hep-2人喉鳞癌细胞株,同时设立阴性对照组和阳性对照组(顺铂).人参皂苷Rg3作用24 h后,应用免疫细胞化学技术和流式细胞技术检测Hep-2细胞HIF-1α和VEGF蛋白表达的变化;应用RT-PCR技术检测HIF-1α和VEGF mRNA表达的变化.结果:在低氧条件下,Rg3组和顺铂对照组的Hep-2细胞中的HIF-1α和VEGF蛋白表达低于阴性对照组(P<0.05);Rg3组的HIF-1α和VEGF mRNA水平明显低于阴性对照组(P<0.05),顺铂组的HIF-1α和VEGFmRNA水平无明显变化.结论:低氧条件下,人参皂苷Rg3抑制Hep-2细胞中的HIF-1α和VEGF蛋白和mRNA的表达,这可能是Rg3抗肿瘤作用的机制之一.     

乳腺癌血管生成拟态及其与基质金属蛋白酶-2表达的相关性研究

目的 探讨乳腺癌中是否存在血管生成拟态(VM),并通过研究其与基质金属蛋白酶-2(MMP-2)表达的相关性,初步探讨VM形成的机制.方法 选取女性乳腺癌的石蜡标本共146例作为试验组,再选取20例女性乳腺的良性病变作为对照组,进行过碘酸雪夫氏反应以及CD34的双重染色,观察VM是否存在,再对VM阳性者和阴性者均进行MMP-2染色,比较二者相互关系.结果 VM的阳性表达与肿瘤大小、病理分级和淋巴结转移有关(P＜0.05).高分化和中低分化乳腺癌组织中VM的阳性率比较,差异有统计学意义(P＜0.05).在有淋巴结转移的乳腺癌组织中及无淋巴结转移的乳腺癌组织中VM的阳性率比较,差异有统计学意义(P＜0.05).MMP-2在乳腺癌组织中表达阳性率与乳腺良性病变比较,差异有统计学意义(P＜0.05).MMP-2在乳腺癌组织中的阳性表达率与病理学分级、淋巴结转移有关.高分化的乳腺癌组织MMP-2阳性率和中低分化乳腺癌组织比较,差异有统计学意义(P＜0.05).有淋巴结转移的乳腺癌组织MMP-2阳性率和无淋巴结转移的乳腺癌组织比较,差异有统计学意义(P＜0.05).MMP-2在VM阳性组中阳性表达率显著高于阴性组,二者在乳腺癌组织中的表达呈正相关性(r=0.550,P＜0.05).结论 乳腺癌是中存在VM的,MMP-2表达同VM具有相关性.     

人参皂苷Rg3联合沉默MMP-9抑制乳腺癌肿瘤细胞的生长和转移

目的 研究人参皂苷Rg3联合沉默MMP-9基因对乳腺癌肿瘤生长和转移的作用,为探讨新的乳腺癌治疗方式和潜在靶点提供理论基础.方法 培养高转移性乳腺癌细胞系MDA-MB-231,使用Rg3处理细胞,并且转染MMP-9过表达载体或MMP-9 siRNA沉默载体.细胞划痕实验检测细胞迁移能力变化、采用Transwell小室使...     

粉防己碱对人肺癌A549细胞血管生成拟态的影响

目的:研究粉防己碱对人肺癌A549细胞血管生成拟态的影响。方法:采用细胞黏附试验观察粉防己碱对A549细胞黏附作用的影响;通过细胞迁移试验检测粉防己碱对A549细胞迁移能力的影响;通过血管生成拟态试验观察粉防己碱对A549细胞体外类血管生成的作用;实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)法检测粉防己碱对A549细胞血管生成拟态相关基因表达的影响。结果:5、10、20μmol/L粉防己碱作用A549细胞30 min后,细胞的黏附作用受到抑制,并与浓度呈正相关;与对照比较,5、10、20μmol/L粉防己碱处理A549细胞12、24 h后,A549细胞迁移数减少,A549细胞管腔形成数明显减少,管腔长度明显缩短;A549细胞以粉防己碱处理后,血管生成拟态相关基因VE-cadherin、VEGF的表达减弱。结论:粉防己碱可抑制A549细胞黏附、细胞迁移和血管生成拟态,其机制可能与抑制血管生成拟态相关基因VE-cadherin、VEGF的表达有关。     

天花粉对人乳腺癌MCF-7细胞凋亡及相关基因表达的影响

目的研究天花粉对人乳腺癌MCF-7细胞凋亡及相关基因表达的影响。方法取对数生长期人乳腺癌MCF-7细胞以30,60,90,120μg·m L^-1的天花粉蛋白处理,作为实验组,对照组用等量的0.9%Na Cl处理,继续培养24,48,72h。观察并比较各组细胞形态学及细胞核凋亡形态学变化,以噻唑蓝(MTT)比色法检测各组人乳腺癌MCF-7细胞增殖抑制情况,分光光度法检测天花粉蛋白对人乳腺癌MCF-7细胞胱天蛋白酶(caspase)-3和caspase-8表达的影响。结果实验组人乳腺癌MCF-7细胞呈现明显的细胞凋亡及核凋亡现象,且随天花粉蛋白质量浓度的增加,其细胞核凋亡现象越明显;干预24 h后,30,60,90,120μg·mL^-1实验组增殖抑制率分别为(1.61±0.94)%,(2.81±1.01)%,(7.05±1.03)%和(9.59±1.12)%;干预48 h后增殖抑制率分别为(2.13±1.01)%,(6.14±1.12)%,(9.05±1.09)%和(19.60±1.15)%;干预72 h后增殖抑制率分别为(3.28±1.07)%,(7.18±1.51)%,(18.39±1.81)%和(29.59±1.63)%。实验组人乳腺癌MCF-7细胞增殖抑制率随作用时间的延长及天花粉蛋白质量浓度的增大而逐渐升高(均P<0.01);90μg·m L^-1实验组24,48,72 h caspase-3分别为1.49±0.15,2.36±0.25,2.15±0.23;caspase-8分别为1.94±0.26,1.56±0.19,1.39±0.20。对照组人乳腺癌MCF-7细胞caspase-3及caspase-8随作用时间的延长无显著变化(均P>0.05),而90μg·mL^-1实验组caspase-3先升高后降低(P<0.05或P<0.01),以48 h时最高;caspase-8则逐渐降低(P<0.01);且各时间点90μg·m L^-1实验组caspase-3及caspase-8均显著高于对照组(均P<0.01)。结论天花粉蛋白可有效促进人乳腺癌MCF-7细胞凋亡,抑制其增殖,且增殖抑制作用呈时间-剂量依赖性,其作用机制可能与上调人乳腺癌MCF-7细胞caspase-3及caspase-8表达相关。     

脑膜瘤中HIF-1α、VEGF和MMP-9的表达及其意义

目的 探讨脑膜瘤中低氧诱导因子1α(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)和基质金属蛋白酶9(MMP-9)表达与脑膜瘤组织学分级、复发的关系.方法 采用免疫组化方法检测脑膜瘤标本中HIF-1α、VEGF和MMP-9表达情况,分析它们相互间以及与脑膜瘤组织学分级、复发的关系.结果 (1)52例脑膜瘤标本中HIF-1α、VEGF和MMP-9的阳性表达率分别为78.8%、84.6%和73.1%;表达强度均与脑膜瘤的病理级别呈正相关(rs=0.499、0.448、0.583,P＜0.01);(2)VEGF表达强度与HIF-1α的表达强度呈正相关(rs=0.714,P＜0.01),MMP-9表达强度与HIF-1α、VEGF的表达强度无关(rs=-0.0066,rs=-0.095,P＞0.05);(3)52例脑膜瘤中有7例复发,复发率为13.5%;脑膜瘤复发与性别、发病年龄不相关(P＞0.05);而与病理分级以及HIF-1α、VEGF和MMP-9表达强度相关(P＜0.01).结论 HIF-1α、VEGF和MMP-9表达与脑膜瘤分级及术后复发密切相关.HIF-1α可有诱导血管生成的作用.     

Mitogen-activated protein kinase (MAPK) pathway mediates the oestrogen-like activities of ginsenoside Rg1 in human breast cancer (MCF-7) cells

Background and purpose:

The present study was designed to determine how ginsenoside Rg1, an active ingredient in ginseng root, exerts its oestrogenic effects. We hypothesize that Rg1 may exert oestrogen-like actions in MCF-7 cells by activating the mitogen-activated protein kinase (MAPK) pathway in a ligand-independent manner.

Experimental approach:

MCF-7 cells were co-incubated with the MAPK inhibitor PD98059 to determine whether the stimulant effects of Rg1 on cell proliferation, the induction of IGF-IR and pS2, the functional transactivation of oestrogen receptor-α (ERα), as well as ERα phosphorylation are dependent on MAPK. The time-dependent responses of mitogen-activated protein kinase kinase (MEK) and extracellular signal-regulated protein kinase (ERK) to Rg1 in MCF-7 cells were studied. The responses of MEK phosphorylation to Rg1 in oestrogen receptor (ER)-negative HEK293 cells were also determined. The effects of Rg1 on cell proliferation and IGF-IR protein expression were studied in the presence of tyrosine kinase inhibitor genistein to elucidate the involvement of tyrosine kinase in mediating these effects.

Key results:

The oestrogenic effects of Rg1 in MCF-7 cells were abolished in the presence of PD98059. Rg1 could induce MEK protein expression and the phosphorylation level of MEK and ERK significantly in a time- and dose-dependent manner. Rg1 activated MEK phosphorylation in ER-negative HEK293 cells in a time- and dose-dependent manner. Rg1 induction of cell proliferation and IGF-IR protein expression was abolished by co-treatment with genistein.

Conclusions and implications:

Taken together, these results show that the MAPK pathway is involved in mediating the oestrogen-like actions of Rg1 in MCF-7 cells and suggest that Rg1 may activate ERα via MEK/ERK in a ligand-independent manner.     

山慈菇提取液对乳腺癌大鼠肿瘤组织血管内皮生长因子和基质金属蛋白酶-9表达的影响

目的研究山慈菇提取液对乳腺癌大鼠肿瘤组织中血管内皮生长因子(VEGF)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达水平的影响。方法选取健康雌性未孕SD大鼠为研究对象,用含有二甲基苯蒽的芝麻油建立乳腺癌模型。将造模成功的SD大鼠随机分为模型组、对照组、实验A组和实验B组,每组各16只;另取16只健康大鼠为空白组。模型组和空白组均予以灭菌0.9%Na Cl 1m L,qd,灌胃;对照组予以0.6 mg·m L^-1枸橼酸他莫昔芬1 m L,qd,灌胃;实验A、B组分别予以1.5,3.0 mg·m L^-1山慈菇提取液1 m L,qd,灌胃,5组大鼠均干预6周。比较5组大鼠的抑瘤率、肿瘤组织中VEGF和MMP-9表达水平。结果治疗后,对照组、实验A组和实验B组的抑瘤率分别为70.74%,21.51%和59.88%,两两比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。治疗后,空白组、模型组、对照组、实验A组和实验B组肿瘤组织中VEGF分别为(5454.68±754.37),(35485.58±4638.36),(9975.75±1243.44),(24564.35±3028.43)和(14346.54±1976.56)DPI,肿瘤组织中MMP-9分别为(3353.26±406.34),(29584.37±3856.56),(8143.32±1043.82),(19473.46±2315.47)和(10865.47±1324.43)DPI,两两比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论山慈菇提取液能有效抑制乳腺癌大鼠肿瘤生长,且呈剂量依赖性,其可能与抑制肿瘤组织中VEGF及MMP-9的表达有关。     

铜绿假单胞茵注射液对人乳腺癌细胞的体外杀伤及促凋亡作用研究

目的研究铜绿假单胞菌（pseudo—monas aeruginosa,PA-MSHA）注射液在体外实验中对人乳腺癌细胞（MCF-7）凋亡和增殖的影响,并探讨其可能的作用机制。方法应用MTT比色法检测铜绿假单胞菌注射液对体外培养的MCF-7细胞增殖抑制作用,应用流式细胞术检测铜绿假单胞菌注射液诱导乳腺癌细胞凋亡,检测其对细胞周期的影响。用Hoechst33258染色法染色,荧光显微镜检测铜绿假单胞菌注射液诱导体外培养的MCF-7肿瘤细胞凋亡的形态学改变。结果铜绿假单胞菌注射液抑制MCK7细胞增殖,呈剂量和时间依赖性;与对照组相比,铜绿假单胞菌注射液组MCF7细胞的凋亡率明显增高（P〈0．01）、G0／G1期细胞比例明显增高、S期细胞所占百分比明显降低（P〈0．05）,染色荧光显微镜检测发现PAMSHA能诱导体外培养的肿瘤细胞呈现明显的凋亡图像。结论铜绿假单胞菌注射液可能通过对细胞周期中G0／G1期阻滞,诱导MCF-7细胞凋亡,从而抑制MCF-7细胞的增殖。     

miR-130a-3p下调CYLD表达对乳腺癌MCF-7细胞功能的影响

目的：探讨miR-130a-3p对人乳腺癌MCF-7细胞功能的影响及其可能的靶向基因。方法：应用脂质体介导方法将miR-130a-3p模拟物（实验组）或对照模拟物（对照组）转染MCF-7细胞,分别采用MTT方法和细胞划痕实验检测细胞增殖和迁移能力变化,印迹法检测细胞中miR-130a-3p靶基因圆柱瘤基因（CYLD）的表达。结果：与对照组比较,实验组MCF-7细胞的增殖和迁移能力增强（P＜0.05）,细胞中CYLD蛋白表达水平明显下调（P＜0.05）。结论：miR-130a-3p可能通过靶向调节CYLD蛋白表达增强人乳腺癌MCF-7细胞的增殖和迁移。     

乳腺癌MCF-7细胞系中侧群细胞分选及其生物学特性

目的 分离乳腺癌MCF-7细胞系中的侧群细胞(SP)并观察其生物学特性.方法 利用流式细胞荧光分选法将乳腺癌MCF-7细胞系分成SP和非SP细胞两个亚群.对两个亚群细胞采用软琼脂克隆形成实验观察其增殖能力.结果 MCF-7细胞株中分选出SP细胞占(6.5±0.4)％;SP细胞的体外克隆形成率为(38.5±9.4)％,高于非SP细胞的(8.4±2,6)％(t=5.34,P＜0.05).结论 乳腺癌MCF-7细胞中的SP细胞富集了乳腺癌于细胞,其增殖能力强于非SP细胞,表明SP表型的肿瘤细胞在乳腺癌的生长中具有重要的地位.     

地塞米松预处理人乳腺癌MCF-7细胞对多西他赛抗肿瘤活性的影响

目的 探讨地塞米松预处理人乳腺癌MCF-7细胞后,对化疗药物多西他赛(艾素)抗肿瘤活性的影响.方法 以不同浓度(1×10-8～1×10-6 mol·L-1)的地塞米松预先作用于人乳腺癌MCF-7细胞后,再以艾素(5×10-6 mol·L-1)处理,在以上药物作用的相应时间段,通过流式细胞仪技术测定细胞凋亡,采用细胞计数观察细胞生长密度、形态.结果 地塞米松对MCF-7细胞增殖有抑制作用(P＜0.01),艾素能够明显抑制MCF-7细胞增殖,促进其凋亡(P＜0.01),地塞米松预处理后艾素干预MCF-7细胞的增殖抑制作用较单用艾素减弱(P＜0.01),且随地塞米松浓度的增加,其对化疗药艾素的凋亡抑制作用的影响增强.结论 地塞米松预处理对艾素诱导的人乳腺癌MCF-7细胞的凋亡具有明显的阻抑作用,抑制了多西他赛的抗肿瘤活性.     

人参皂苷Rg3差异调节前列腺癌细胞PC3和DU145增殖

目的 探讨人参皂苷Rg3对前列腺癌细胞PC3和DU145细胞增殖的调节作用。方法 100 µmol/L人参皂苷 Rg3处理体外培养的前列腺癌细胞 PC3和 DU145,使用 CCK-8实验检测细胞的增殖能力;DCFH-DA活性氧荧光探针试剂盒检测人参皂苷 Rg3处理的 DU145细胞中活性氧（ROS）水平;JC-1法检测 PC3和 DU145细胞线粒体膜电位的去极化;RT-PCR和免疫印迹法检测PC3和DU145细胞中氧化还原相关蛋白的表达差异。结果 CCK-8实验结果表明,100 µmol/L人参皂苷 Rg3能够显著抑制 PC3细胞增殖,而对 DU145细胞的增殖没有显著调节作用;DCFHDA活性氧荧光探针试剂盒检测结果表明,人参皂苷 Rg3能够显著上调 DU145细胞和 PC3细胞中 ROS水平;JC-1检测实验表明,人参皂苷Rg3能够诱导PC3和DU145细胞中线粒体膜电位去极化;RT-PCR和免疫印迹实验表明,抗氧化蛋白谷胱甘肽过氧化物酶-1（GPX-1）和超氧化物歧化酶2（SOD2）在DU145细胞中的表达显著高于PC3细胞。结论 人参皂苷Rg3对PC3和DU145细胞的增殖表现出不同的调节作用,可能与细胞中抗氧化蛋白的表达差异有关。