香加皮杠柳苷联用TRAIL对胃癌SGC-7901和MGC-803细胞的作用及其机制

目的:探讨香加皮杠柳苷(cortex periplocae,CPP)联用肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumor necrosis factor related apoptosis inducing ligand,TRAIL)对胃癌细胞的作用及其机制.方法:人胃癌细胞系SGC-7901、MGC-803培养完成后,采用50、100、200 ng/ml的CPP和1μg/ml的TRAIL单用或联合处理.MTS法检测SGC-7901和MGC-803细胞的增殖情况,流式细胞术检测其凋亡率,Westcm boltting检测pro-BID、Mcl-l、cleaved caspase-3、DR4、DR5的表达水平.结果:SGC-7901和MGC-803细胞经CPP (50、100、200 ng/ml)和TRAIL(1 μg/ml)联合处理24 h后,细胞增殖率明显低于空白对照组和对应的CPP各剂量单独处理组(/＜0.05或P＜0.01).SGC-7901和MGC-803细胞凋亡率均明显高于空白对照组和对应的CPP各剂量单独处理组(P＜0.05或P＜0.01).SGC-7901和MGC-803细胞中pro-BID、Mcl-1表达水平明显降低(均P＜0.05),cleaved caspase-3表达水平明显升高(P＜0.05),DR4和DR5受体的表达水平升高(均P＜0.05).结论:CPP协同TRAIL可明显诱导人胃癌SGC-7901和MGC-803细胞凋亡,增强人胃癌细胞对TRAIL的敏感性.     

香加皮杠柳苷诱导人食管癌细胞凋亡及其作用机制的研究

目的:探讨中药香加皮醇提物杠柳苷诱导人食管癌细胞凋亡及其作用机制.方法:应用MTT法检测香加皮醇提物杠柳苷对食管癌细胞TE-13、Eca-109、TE-1和TE-10增殖的影响,并计算其对食管癌细胞的半数抑制浓度(half inhibition concentration ,IC50);在光学显微镜下观察经杠柳苷处理后细胞的形态学改变;Wright-Giemsa染色观察Eca-109细胞凋亡的形态学变化;FCM检测杠柳苷对Eca-109细胞凋亡的影响;RT-PCR法检测经杠柳苷处理后细胞凋亡相关基因mRNA表达的改变;caspase-3/7蛋白酶活性检测试剂盒检测细胞caspase蛋白酶活性的变化.结果:香加皮醇提物杠柳苷对人食管癌细胞的增殖具有明显的抑制作用;经杠柳苷处理后,Eca-109细胞出现明显的凋亡形态学变化,与未处理组比较,细胞凋亡率明显上升(P<0.05);经杠柳苷处理后,Eca-109 细胞中survivin和bcl-2 mRNA的表达下调(P<0.05),bax mRNA的表达水平升高(P<0.05),xiap、caspase-3和caspase-7 mRNA的表达水平无明显变化,而caspase-3/7蛋白酶活性明显增加(P<0.05).结论:杠柳苷可明显抑制食管癌细胞的增殖,其作用机制可能是通过下调凋亡抑制基因的表达而诱导细胞凋亡.     

香加皮杠柳苷对结肠癌细胞SW480体内外生长的影响

背景与目的： 观察香加皮杠柳苷(periplocin extracted from cortex periplocae, CPP)对人结肠癌细胞SW480体内外生长的抑制作用。 材料与方法： 应用MTT法检测CPP不同浓度(0.125、0.25、0.5、1.0、2.0 μg/ml)处理SW480细胞后,对细胞增殖的影响;并于CPP (0.5 μg/ml)处理SW480细胞24 h 后用光学显微镜及透射电镜观察细胞凋亡形态学变化;免疫细胞化学检测细胞Survivin蛋白表达变化。采用裸鼠移植瘤模型进行体内移植瘤抑制实验。以上各实验均设立对照组。 结果： 与对照组比较,CPP对SW480细胞增殖具有明显的抑制作用(P<0.01),并呈剂量和时间依赖效应;CPP 处理SW480细胞后,细胞出现典型的细胞凋亡形态学改变;CPP可明显下调SW480细胞survivin蛋白表达阳性率和表达水平(P<0.01);以30 mg/kg CPP对SW480细胞裸鼠移植瘤进行治疗后,荷瘤小鼠的肿瘤重量和体积均被明显抑制,抑瘤率为61.41％(P<0.01)。CPP治疗组小鼠的移植瘤组织出现明显炎性细胞浸润和坏死性变化。 结论： CPP对人结肠癌细胞SW480的体内外生长均具有明显抑制作用,其作用机制可能与抑制细胞survivin蛋白表达、诱导细胞凋亡有关。     

香加皮杠柳苷通过抑制Wnt／β-catenin信号通路诱导结肠癌细胞SW480凋亡

背景与目的：Wnt／β-catenin信号通路在人类肿瘤尤其在大肠癌的发生发展中起着重要作用。本研究分析了香加皮杠柳苷（periplocin extracted fromcortex periplocae,CPP）对人结肠癌细胞SW480增殖的抑制作用,及对Wnt／β-catenin信号通路的调控作用。方法：MTT法检测CPP对SW480细胞增殖的影响,流式细胞技术检测细胞周期的变化和凋亡。Western blot法检测CPP处理组与对照组细胞总蛋白、细胞浆蛋白及细胞核蛋白中β-catenin表达变化,电泳迁移率改变法分析CPP作用后SW480细胞核TCF复合物与其特异性DNA结合序列结合能力变化。半定量RT—PCR法检测CPP作用后细胞中β-catenin、survivin、c—myc和cyclin D1mRNA的表达。结果：CPP明显抑制SW480细胞增殖（P〈0．01）,并呈时间和浓度依赖性;0．5μg／mLCPP可将SW480细胞阻滞于G0／G1期,并诱导细胞凋亡（P〈0．05）。CPP作用后SW480细胞总蛋白、胞浆蛋白及细胞核蛋白中的B—catenin表达均明显降低（P〈0．01）,细胞核中TCF复合物与其特异性DNA结合序列结合能力受到抑制,其下游靶基因mRNA表达水平下降（P〈0．01）,而β-cateninmRNA表达未见明显改变。结论：CPP可明显抑制SW480细胞增殖并诱导细胞凋亡,其作用机制与抑制细胞Wnt／β-catenin信号转导通路有关。     

香加皮杠柳苷对MCF-7细胞周期及p21WAF1/CIP1表达的影响

 目的：研究香加皮杠柳苷（CPP）对人乳腺癌MCF-7细胞周期及p21^WAF1/CIP1表达的影响 ,探讨其抗肿瘤作用及作用机制。方法：采用MTT法检测不同浓度CPP（1.25、2.50、5.00、 10.00、20.00 ng/ml）作用不同时间（24、48、72 h）对MCF-7细胞的增殖抑制作用;应用流 式细胞术分析不同浓度CPP （2.50、5.00、10.00 ng/ml）分别作用于MCF-7细胞6、12、24、 48、72 h对肿瘤细胞周期的影响;并采用RT-PCR和免疫细胞化学技术检测细胞周期相关因子 p21^WAF1/CIP1的表达。结果：CPP能明显抑制MCF-7细胞的增殖,并呈浓度及时间依赖性,作用 于MCF-7细胞48 h的IC₅₀为（4.88±0.16）ng/ml。流式细胞术结果显示,CPP作用MCF-7细胞24 h时,G₀/G₁期细胞明显增多,而S期和G₂/M期细胞显著减少,与对照组相比差异有统计学意义 （P<0.05）,其中5.00 ng/ml组G₀/G₁期细胞由对照组的（49.33±3.25）%升高至（79.47± 2.40）%,S期和G₂/M期细胞由对照组的（28.47±1.59）%和（22.20±2.09）%分别下降至（10.13±3.26）%和（10.40±1.41）%。经CPP处理的MCF-7细胞中p21^WAF1/CIP1 mRNA的表达明显增强,p21^WAF1/CIP1/β-actin光吸度比值与对照组相比明显增高（P<0.05）。免疫细胞化学结果显示,CPP组MCF-7细胞中p21^WAF1/CIP1 蛋白的表达随作用浓度的增加而增强,其中10.00 ng/ml组肿瘤细胞p21^WAF1/CIP1的表达呈强阳性。结论：香加皮杠柳苷（CPP）具有显著的体外抗肿瘤作用,且有效剂量很小,其IC₅₀仅为（4.88±0.16）ng/ml。CPP可使MCF-7细胞发生G₀/G₁期阻滞,并可使细胞周期相关基因p21^WAF1/CIP1的mRNA及蛋白表达增强,提示阻滞细胞周期可能是CPP体外抗肿瘤的作用机制之一。     

香加皮杠柳苷对SW480细胞在裸鼠体内的成瘤抑制作用及其机制研究

背景与目的:研究香加皮杠柳苷(periploein extracted from cortex periplocae,CPP)对人结肠癌SW480细胞株在裸鼠体内的成瘤抑制作用及其机制.材料与方法:将SW480细胞经皮下接种Balb/c-nu/nu裸小鼠,构建裸鼠SW480细胞荷瘤动物模型,观察CPP作用后移植瘤体积和重量的变化,HE染色光镜下观察移植瘤组织形态学变化,免疫组织化学方法检测瘤组织内Wnt/β-catenin信号通路中核心成分β-catenin及其下游靶蛋白Survivin和C-myc表达的变化. 结果:CPP在体内能明显抑制SW480细胞荷瘤小鼠移植瘤的生长,其肿瘤体积和重量均被明显抑制,抑瘤率为61.4l%(P<0.01).CPP治疗组小鼠的移植瘤组织出现明显炎性细胞浸润和坏死性变化;肿瘤组织内β-catenin、Survivin和C-myc蛋白表达水平明显下降(P<0.05或P<0.01).结论:CPP可抑制结肠癌细胞SW480在小鼠体内的增殖,其作用机制可能与Wnt/β-catenin信号分子的表达下调有关.     

杠柳苷对人食管癌细胞增殖的抑制作用及与Rb蛋白表达的关系

背景与目的： 分析中药香加皮醇提物杠柳苷(CPP)对食管癌细胞株TE_13的生长抑制作用,探讨其诱导细胞凋亡和周期阻滞与Rb蛋白表达的关系。 材料与方法： 取对数生长期的人食管癌细胞TE_13,接种于96孔培养板,分为实验组、阴性对照组和阳性对照组。实验组加入不同浓度的CPP,阴性对照孔加入完全培养基,阳性对照孔加入化疗药物羟甲基喜树碱,应用MTT法检测CPP对TE_13细胞的抑制作用;光镜下观察TE_13细胞的形态学变化;流式细胞技术检测细胞凋亡率;免疫组化法检测TE_13细胞经药物处理前后去磷酸化Rb蛋白表达的变化。 结果： CPP对TE_13细胞增殖具有明显的抑制作用(P<0.01),其药物浓度越大,作用时间越长,抑制效应越强;CPP作用48 h时,对TE_13细胞的半数抑制浓度(IC50)为0.61 μg/ml。出现亚二倍体和凋亡峰(Ap);CPP能提高TE_13细胞中Rb蛋白的表达(P<0.01)。 结论： CPP能显著抑制TE_13细胞的增殖,促进其凋亡,其作用机制可能与CPP提高Rb蛋白的表达有关。     

芦荟大黄素诱导胃癌细胞株MGC-803细胞凋亡药效学作用研究

目的:观察芦荟大黄素诱导人胃癌细胞株MGC-803凋亡药效作用研究.方法:用50、100、500、1000μmol/L浓度芦荟大黄素作用胃癌细胞株48h,倒置显微镜下观察细胞增殖情况;MTT法检测芦荟大黄素对细胞增殖的抑制作用;电镜观察、判定凋亡细胞;凋亡检测试剂盒检测细胞凋亡.结果:倒置显微镜下,随着芦荟大黄素作用浓度升高,细胞增殖能力随之下降;MTT法亦检测到上述结果;当芦荟大黄素作用浓度是1000μmol/L时,可检测到明显的凋亡细胞.结论:高浓度的芦荟大黄素可诱导胃癌细胞株MGC-803细胞的凋亡.     

香加皮杠柳苷对人食管癌细胞TE-13生长抑制作用

目的：分析中药香加皮醇提物杠柳苷（periplocin from cortex periplocae，CPP）对食管癌细胞株TE-13的生长抑制作用，探讨其诱导细胞周期阻滞的机制。方法：应用MTr法检测CPP对TE-13细胞的抑制作用；Gimsa染色法分析TE-13细胞的形态学变化；FCM法检测细胞周期分布和凋亡率；Western印迹法检测TE-13细胞经药物处理前后细胞周期蛋白依赖性激酶CDK4、CDK2蛋白表达的变化。结果：CPP对TE-13细胞增殖具有明显的抑制作用（P〈0．01），并呈时间和浓度依赖性，药物浓度越大，作用时间越长，抑制效应越强，CPP作用48h时，对TE-13细胞的半数抑制浓度（IC50）为0．61μg／mL。经2μg／mL的CPP作用48h后，TE-13细胞发生明显的凋亡形态学变化；G0／G1期细胞明显增多（P〈0．01），S期细胞明显减少（P〈0．01），G2／M期细胞没有明显变化（P〉0．05）。不同浓度CPP作用48h后能降低TE-13细胞中CDK4蛋白的表达（P〈0．01），对CDK2蛋白的表达则没有明显影响（P〉0．05）。结论：CPP能显著抑制，TE-13细胞的增殖，其作用机制可能与CPP诱导细胞周期阻滞和细胞凋亡有关。     

槐定碱诱导人胃癌MGC-803细胞凋亡的实验研究

目的 探讨槐定碱对人胃癌MGC-803细胞抑制作用及其诱导凋亡机理。方法 用MTT法测定槐定碱对MGC-803细胞的IC50，荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞仪和DNA凝胶电泳等技术观察细胞凋亡。结果 实验显示0．4～3.2mg／ml的槐定碱对体外培养的MGC-803细胞有明显的抑制作用并可诱导其发生凋亡，凋亡细胞表现为细胞固缩，核染色质聚集或碎裂、胞质空泡化等；DNA电泳可见DNA“梯形”条带；流式细胞仪检测Sub-G1凋亡峰在G1期前出现，S期细胞比例增高。结论 槐定碱对体外培养MGC-803细胞生长有抑制作用，机理与通过阻止细胞周期的进程，诱导肿瘤细胞凋亡有关。     

蟾蜍毒素联合紫杉醇抑制人胃癌MGC803细胞增殖和诱导凋亡的作用

目的探讨蟾蜍毒素联合紫杉醇抑制人胃癌MGC803细胞增殖及诱导凋亡的作用。方法应用MTT法检测不同浓度蟾蜍毒素及紫杉醇单药及联合对胃癌细胞MGC803增殖抑制作用;流式细胞术分析细胞凋亡和周期阻滞;Westernblot法检测C-FLIPL、Caspase-8蛋白的表达。结果(1)蟾蜍毒素及紫杉醇单药均抑制MGC803细胞增殖,呈剂量-时间依赖效应,且联合用药的细胞增殖抑制率明显高于单药组,差异有统计学意义(P<0.05)。24、48及72 h联合指数(CI)分别为0.77、0.86、0.72;(2) 40 nmol/L蟾蜍毒素、25 ng/ml紫杉醇单药及联合作用细胞24 h,流式细胞仪检测凋亡率分别为14.13%、19.74%及53.30%,联合组与单药组比较差异有统计学意义(P<0.05);(3)Western blot结果显示,蟾蜍毒素、紫杉醇单药组及联合组作用细胞24 h后,C-FLIPL蛋白表达依次下降至对照组的78.38%、64.71%、46.73%,Caspase-8蛋白表达上调至对照组的150.25%,156.86%,180.58%。结论蟾蜍毒素协同紫杉醇诱导胃癌MGC803细胞凋亡,且可能与下调C-FLIP、上调Caspase-8蛋白有关。     

Hyperin Extracted from Manchurian Rhododendron Leaf Induces Apoptosis in Human Endometrial Cancer Cells Through a Mitochondrial Pathway

Background: A number of effective prevention measures have been introduced in attempts to substantiallyreduce both the incidence and mortality due to many kinds of cancer. The search for new anti-cancer compoundsin foods or in plant medicines is one realistic and promising approach to prevention. Chinese medicines provide arich pool of novel and efficacious agents for cancer prevention and treatment. Previously it was demonstratratedthat hyperin extracted from the Manchurian rhododendron leaf reduces the proliferation of many cancer cells.The present study was carried out to evaluate its effects on human endometrial cancer cell viability and apoptosisand to investigate its mechanisms of action in RL952 cells. Methods: Cell viability was measured using the MTTassay. Intracellular calcium ions were detected using laser-scanning confocal microscopy. The effects of hyperinon apoptosis related proteins in RL952 cells were examined using Western blot analysis. Results: The growth ofRL952 cells was inhibited by treatment with hyperin. OD values of caspase-3 and caspase-9 were increased andexpression of bcl-2 was increased and bax was decreased in protein levels in RL952 cells after 24 h of hyperintreatment, Moreover, intracellular calcium accumulation occurred in hyperin-treated cells. Conclusions: Theseresults suggest that hyperin may play an important role in tumor growth suppression by inducing apoptosis inhuman endometrial cells via a Ca2+-related mitochondrion apoptotic pathway in RL952 cells.     

Silibinin Inhibits Proliferation,Induces Apoptosis and Causes Cell Cycle Arrest in Human Gastric Cancer MGC803 Cells Via STAT3 Pathway Inhibition

Background: To investigate the effect of silibinin on proliferation and apoptosis in human gastric cancer cell line MGC803 and its possible mechanisms. Materials and Methods: Human gastric cancer cell line MGC803 cells were treated with various concentration of silibinin. Cellular viability was assessed by CCK-8 assayandapoptosis and cell cycle distribution by flow cytometry. Protein expression and mRNA of STAT3, and cell cycle and apoptosis regulated genes were detected by Western blotting and real-time polymerase chain reaction, respectively. Results: Silibinin inhibits growth of MGC803 cells in a dose- and time-dependent manner. Silibinin effectively induces apoptosis of MGC803 cells and arrests MGC803 cells in the G2/M phase of the cell cycle, while decreasing the protein expression of p-STAT3, and of STAT3 downstream target genes including Mcl-1, Bcl-xL, survivin at both protein and mRNA levels. In addition, silibinin caused an increase in caspase 3 and caspase 9 protein as well as mRNA levels. Silibinin caused G2/M phage arrest accompanied by a decrease inCDK1 and Cyclin B1 at protein and mRNA levels.. Conclusions: These results suggest that silibinin inhibits the proliferation of MGC803 cells, and it induces apoptosis and causes cell cycle arrest by down-regulating CDK1, cyclinB1, survivin, Bcl-xl, Mcl-1 and activating caspase 3 and caspase 9, potentially via the STAT3 pathway.     

miR-711对胃癌MGC-803细胞侵袭转移及上皮间质转化的影响

目的 探讨 miR-711对胃癌MGC-803细胞侵袭转移及上皮间质转化（epithelial mesenchymal transition, EMT）的影响。方法 通过脂质体瞬时转染法将 miR-711 过表达（miR-711 mimics）、miR-711抑制表达（miR-711 inhibitors）、miRNA 空质粒转染人胃癌细胞株MGC-803。以 miRNA 空质粒转染组作为阴性对照组（NC 组）,以空白转染组作为空白对照组（K组）。转染48 h后在荧光显微镜下观察转染效率,然后采用Transwell 侵袭小室实验检测细胞的侵袭能力,细胞划痕实验检测细胞的迁移能力,Western blot实验检测上皮蛋白和间质蛋白表达量的变化。结果 Transwell侵袭实验结果显示：与阴性对照组穿膜细胞数（120.00±4.58）及空白对照组穿膜细胞数（119.67±5.13）分别比较,miR-711 mimics组穿膜细胞数（70.67±5.51）明显下降（P均<0.05）;划痕实验显示：划痕48 h,与阴性对照组细胞愈合率（32.52±1.73）%及空白对照组细胞愈合率（32.15±1.55）%分别比较,miR-711mimics组细胞愈合率（7.08±0.73）%明显下降（P均<0.05）;Western blot实验显示：miR-711 mimics组与阴性对照及空白对照组分别比较,上皮标志物（E-cadherin蛋白）相对蛋白表达量增多,差异有统计学意义（P均<0.05）;间质标志物（vimentin蛋白）相对蛋白表达量水平减少,差异有统计学意义（P均<0.05）。结论 过表达miR-711可抑制胃癌MGC-803细胞侵袭迁移及上皮间质转化的发生。     

二烯丙基二硫增强胃癌细胞对5-Fu敏感性的研究

目的探讨二烯丙基二硫(DADS)对5-Fu诱导胃癌MGC803细胞增殖与凋亡的作用及机制。方法采用四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT),测定DADS对5-Fu诱导MGC803细胞增殖活性的作用;应用流式细胞仪检测细胞凋亡率;Westernblot检测MGC803细胞Bcl-2,Bax,Mcl-1蛋白的表达情况。结果1mg/L、3mg/L的DADS分别与5-Fu联合应用,可增强5-Fu对MGC803细胞增殖抑制作用。DADS(1mg/L)能促进5-Fu诱导MGC803细胞的凋亡。DADS作用于MGC803细胞后,Bcl-2、Mcl-1蛋白表达水平下调,Bax蛋白表达水平上调呈浓度依赖方式。结论ADS能增强5-Fu对MGC803细胞增殖抑制和诱导凋亡,起化疗增敏作用,可能与其下调Bcl-2、Mcl-1蛋白表达水平,上调Bax蛋白表达水平有关。     

PRKAA1 Promotes Proliferation and Inhibits Apoptosis of Gastric Cancer Cells Through Activating JNK1 and Akt Pathways

PRKAA1 (protein kinase AMP-activated catalytic subunit 1) is a catalytic subunit of AMP-activated protein kinase (AMPK), which plays a key role in regulating cellular energy metabolism through phosphorylation, and genetic variations in the PRKAA1 have been found to be associated with gastric cancer risk. However, the effect and underlying molecular mechanism of PRKAA1 on gastric cancer tumorigenesis, especially the proliferation and apoptosis, are not fully understood. Our data showed that PRKAA1 is highly expressed in BGC- 823 and MKN45 cells and is expressed low in SGC-7901 and MGC-803 cells in comparison with the other gastric cancer cells. PRKAA1 downregulation by shRNA or treatment of AMPK inhibitor compound C significantly inhibited proliferation as well as promoted cell cycle arrest and apoptosis of BGC-823 and MKN45 cells. Moreover, the expression of PCNA and Bcl-2 and the activity of JNK1 and Akt signaling were also reduced in BGC-823 and MKN45 cells after PRKAA1 downregulation. In vivo experiments demonstrated that tumor growth in nude mice was significantly inhibited after PRKAA1 silencing. Importantly, inactivation of JNK1 or Akt signaling pathway significantly inhibited PRKAA1 overexpression-induced increased cell proliferation and decreased cell apoptosis in MGC-803 cells. In conclusion, our findings suggest that PRKAA1 increases proliferation and restrains apoptosis of gastric cancer cells through activating JNK1 and Akt pathways.     

香加皮乙酸乙酯提取物诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡的研究

目的:研究香加皮乙酸乙酯提取物(ethyl acetate extract from Cortex Periplocae,CPEAE)诱导人乳腺癌细胞系MCF-7凋亡作用及其作用机制。方法:采用MTT法观察不同浓度CPEAE对乳腺癌细胞株MCF-7增殖的抑制作用;应用吖啶橙/溴化乙锭(AO/EB)荧光染色法和透射电镜观察凋亡细胞形态;应用流式细胞术分析CPEAE对细胞凋亡率的影响;RT-PCR法检测用药前后细胞凋亡相关基因survivin和bax的mRNA表达情况。结果:CPEAE呈浓度及时间依赖性抑制MCF-7细胞的增殖(P<0.05),作用48 h的IC50为(0.943±0.005)μg/mL。CPEAE作用48 h后MCF-7细胞发生了特征性的凋亡形态学改变,流式细胞仪检测可见典型的凋亡峰,2.0μg/mL CPEAE作用72 h时细胞的凋亡率达(30.24±1.26)%。CPEAE作用后MCF-7细胞的survivin mRNA表达降低,而bax mRNA表达增加。结论:香加皮乙酸乙酯提取物(CPEAE)可诱导乳腺癌细胞系MCF-7发生凋亡,可能通过下调survivin基因、上调bax基因的mRNA水平而发挥诱导细胞凋亡作用。