食管鳞状细胞癌P53蛋白表达和基因突变与预后的关系

目的 检测食管鳞癌P53蛋白表达和基因突变状况与临床病理及预后的关系。方法 采用免疫组织化学(LSAB法)检测222例食管鳞癌P53蛋白表达；用聚合酶链反应-单链构象多态分析(PCR-SSCP)检测55例食管鳞癌P53基因突变，并进行生存分析。结果 食管鳞癌P53蛋白表达阳性率为51．80％，与组织学分级(P=0．001)、TNM分期(P=0．005)、肿瘤浸润深度(P=0．000)、淋巴结转移(P=0．035)有关；P53蛋白阳性表达患者预后差于不表达者(P=0．0190)，特别是TNMⅡ期患者(P=0．0084)。食管鳞癌P53基因大多数变异位于外显子5—8，其中变异热点在密码子24l和282位，P53基因第5，6，7，8，10外显子突变率分别为14．5％、1．8％、5．5％、18．2％、1．8％，总突变率为41．80％。P53基因突变阳性组与阴性组间患者生存时间有显著性差异(P=0．0417)。P53蛋白表达与P53基因突变符合率为82．14％。结论 P53蛋白的过量表达及基因突变，可以作为判断食管鳞癌生物学行为和预后的指标。     

胃肠道间质瘤60例中c-kit和PDGFRA基因突变的检测

目的:探讨c-kit基因和PDGFRA基因在我国胃肠道间质瘤(GIST)中的突变状况.方法:用PCR扩增和直接测序的方法,检测60例GIST c-kit基因9号、11号、13号和17号外显子突变以及PDGFRA基因12号和18外显子突变.结果:60例GIST中kit基因突变率为63.3%,绝大多数为杂合性突变,少数为纯合性突变.其中以编码近膜区的11号外显子突变最为常见(58.3%);其次为编码胞外区的9号外显子突变(3.3%);偶见编码胞内酪氨酸激酶结构域的13号外显子突变(1.7%),是一个新的突变位点L641P;未检出17号外显子突变.11号外显子的突变位点多集中在5'端的经典热点(42.9%),表现为密码子第557-560的点突变和框内缺失.第二个热点位于11号外显子的3'端,为框内串联重复.后者主要发生在胃部,女性患者多见.60例GIST中PDGFRA基因突变率为5%,表现为编码胞内酪氨酸激酶结构域的18号外显子D842V点突变,且均为CD117阴性.未见编码近膜区的12号外显子突变.结论:CD117阳性GIST主要表现为c-kit突变,分布在11号外显子经典热点和3'端热点,后者与老年女性胃GIST相关.PDGFRA基因突变主要见于CD117阴性GIST,多发生在后腹膜,具高度侵袭危险性.     

肾上腺皮质癌患儿TP53基因的一个新生殖系突变

目的 研究1例肾上腺皮质癌患儿TP53基因突变情况,为该病的基因诊断与遗传咨询提供依据.方法 提取1例肾上腺皮质癌患儿及父母外周血基因组DNA,针对TP53基因设计特异性引物,采用聚合酶链式反应(PCR)扩增基因的全部编码及侧翼序列,对扩增产物进行直接测序.结果 PCR结合DNA测序发现患者TP53基因第5外显子存在异常:第522与523位核苷酸间插入一个鸟嘌呤(c.522-523insG),导致P53蛋白DNA结合域第175位密码子由精氨酸(R)变为丙氨酸(A),并从突变位置起发生移码,产生移码突变(p.R175AfsX6).患者父亲带有相同的突变,而母亲未发现此突变.结论 TP53基因p.R175AfsX6生殖系突变是导致该例患者肾上腺皮质癌的特异突变.     

高通量测序平台对卵巢癌基因突变的检测及意义

目的:利用高通量测序平台研究卵巢癌基因突变的分布和特点,寻找相应的突变靶点,并对突变位点的类型和频度进行分析。方法:取自临床上卵巢癌的组织石蜡标本16例,运用高通量基因测序Ion torrent PGM平台,对50个基因2835个位点进行检测。结果:50个基因中突变集中在EGFR、KDR、KIT、KRAS、NOTCH1、SMAD4、TP53等7个基因21个位点上。其中TP53突变比例高达75%,且突变点是4号外显子c.215C>G的比例最高。结论:卵巢癌患者可以根据基因突变靶点进行精准治疗,TP53的高突变比例提示其在肿瘤的发生发展中起着重要的作用,结合临床可为复发转移预测提供依据。     

食管鳞癌组织中EGFR、KRAS及PIK3CA基因突变的检测及其临床意义分析

目的 分析食管鳞癌组织中表皮生长因子受体（EGFR）、Kirsten鼠类肉瘤病毒癌基因（KRAS）和磷脂酰肌醇3激酶（PIK3CA）基因的突变情况及其与患者临床特征的关系。方法 选取2006年1月至2012年12月在新疆医科大学第一附属医院确诊的210例食管鳞癌患者的组织标本进行DNA提取和目标位点扩增,再利用一代测序的方法对EGFR18号和21号外显子、KRAS2号外显子、PIK3CA9号外显子进行测序,探讨各基因突变情况及其与临床病理特征的关系,并分析不同基因突变之间的相关性。结果 210例食管鳞癌标本中EGFR基因突变率为27.14%,KRAS基因突变率为14.29%,PIK3CA基因突变率为18.59%,EGFR和KRAS双基因联合突变率为4.76%,EGFR和PIK3CA双基因联合突变率为5.71%,EGFR、KRAS、PIK3CA三基因联合突变率为1.43%。EGFR基因突变与性别、肿瘤直径、分化程度具有相关性（P<0.05）,KRAS基因突变与肿瘤直径、分化程度、T分期、临床分期具有相关性（P<0.05）,PIK3CA基因突变与性别、肿瘤直径、分化程度具有相关...     

胃肠道间质瘤分子靶向治疗继发性耐药基因突变的研究

目的探讨胃肠道间质瘤(GIST)患者酪氨酸激酶受体(KIT)和血小板源性生长受体(PDGFRA)基因突变的特点,以及伊马替尼的继发耐药机制。方法对98例GIST患者肿瘤组织进行DNA抽提、聚合酶链反应(PCR)扩增和直接测序,检测KIT基因外显子9、11、13、17和PDGFRA基因12、18外显子突变;并对伊马替尼继发耐药的65例患者进行2次检测。结果 98例患者中,KIT突变79例(80.6%),其中外显子11突变61例(62.2%),外显子9突变18例(18.4%);PDGFRA突变3例(3.1%)。不同性别、年龄以及晚期GIST患者和潜在恶性的GIST患者间突变比较差异无统计学意义(P>0.05);而不同部位GIST的KIT外显子11突变发生率差异有统计学意义(P<0.05)。65例继发耐药病例中,4例患者发生二次突变,表现为KIT基因第17外显子密码子第2467位点的T为G所替换(T2467G),导致823密码子编码氨基酸由酪氨酸转变为天冬氨酸。结论 KIT基因突变在GIST患者中常见,不同部位间KIT外显子11突变发生率差异有统计学意义。伊马替尼继发耐药可能与KIT基因第17外显子密码子第2467位点T为G所替换(T2467G)相关。     

食管癌前病变P53肿瘤抑制基因突变分析

利用聚合酶链反应－单链构型－ＤＮＡ序列测定技术对食管癌高发区河南辉县和林县居民食管癌前病变和癌组织进行Ｐ５３肿瘤抑制基因第５，６，７和８外显子突变分析。在３７例非癌患者活检组织中共发现８例突变。其中１例发生在正常上皮，３例发生在基底细胞增生，４例发生在间变。突变均发生在第５外显子。３例在１７５密码子，２例在１７６密码子，其余３例分别在１５９，１３２和１３５密码子，２９例鳞癌组织检查发现１６例Ｐ５３基因突变（５５％）。突变多分布在第５和７外显子。点突变中，７５％为碱基转换，２５％为碱基颠换。结果提示Ｐ５３基因突变在食管癌的早期阶段已发生。     

非小细胞肺癌中表皮生长因子受体基因突变的筛查

目的检测非小细胞肺癌患者的表皮生长因子受体(EGFR)基因外显子的突变情况。方法收集24例肺腺癌和25例肺鳞癌手术标本,抽提组织DNA,对EGFR基因的1-28号外显子进行扩增并测序,筛查EGFR基因的突变。结果在8例肺腺癌患者中检出EGFR突变,在肺鳞癌患者中未检测到突变。检测到的突变位点位于19-21号外显子内,且均为非吸烟患者,占非吸烟肺腺癌患者的61.5%(8/13)。结论 EGFR基因突变在非吸烟的肺腺癌患者具有较高的发生率,突变主要集中发生于19-21号外显子。     

肺鳞癌、肺腺癌Ki-ras和p53基因序列分析

目的 :研究肺鳞癌、腺癌与Ki-ras基因外显子 1,2及p5 3基因外显子 7,8突变谱并观察肺鳞癌、腺癌预后同Ki-ras和 p5 3基因突变的关系。方法 :用PCR和测序方法分析 33例肺鳞癌和 2 7例肺腺癌Ki-ras基因外显子 1,2和 p5 3基因外显子 7,8错义突变。并追踪观察突变者和非突变者的二年存活率。结果 :肺鳞癌中发现 5例 (15 .16 % )Ki-ras基因突变和 12例 (36 .37% )p5 3基因突变 ;肺腺癌中发现 2例 (7.4 1% )Ki-ras基因突变和 7例 (2 5 .93% ) p5 3基因突变 ,两型肺癌间Ki-ras和p5 3基因突变阳性率差异均无统计学意义 (P>0 .0 5 ) ;肺鳞癌、腺癌中 p5 3基因突变总阳性率为 31.6 7% ,Ki-ras基因突变总阳性率仅 11.6 7% ,p5 3基因突变率高于Ki-ras基因突变率 (P <0 .0 5 )。p5 3基因突变谱与一般报道相似。Ki-ras基因突变情况与一般报道有所不同 ,未发现一般文献报道较多的第 12位等密码子突变 ,发现有第 6位密码子纯合性突变和第 31位和第 79位密码子杂合性突变。预后追踪显示 :无突变的病例 2年生存率为 4 0 % ,存在突变的病例 2年生存率仅 12 %。结论 :肺鳞癌、腺癌的Ki-ras和 p5 3基因突变谱较广 ,肺鳞癌和腺癌的预后均与这两个基因突变有关。     

食管鳞癌p53基因突变和p53功能失活的对照研究

目的研究食管鳞癌p53基因突变在p53功能失活中所占的比例,并初步探索食管鳞癌p53功能失活的原因。方法对45例新鲜食管鳞癌组织（正常食管组织作为对照）进行p53基因突变检测（p53-PCR-SSCP法）、p53sD能失活检测（p53SD能测定法）以及2种p53结合蛋白MDM2和HPV16／18-E6的表达检测（免疫组化sP法）。对上述结果进行统计学分析。结果p53功能失活率为64％,p53基因突变平为49％;p53基因无突变组中,p53功能失活者HPV16／18--E6表达率高于p53功能正常者,也高于p53基因突变组l而3组间MDM2表达率无统计学差异。结论食管鳞癌p53SD能失活率高于p53基因突变率,p53sD能失活有望成为一种评价食管鳞癌生物学特性的新指标;食管鳞癌p53功能失活的原因可分为p53基因突变和非基因突变原因,前者占72％,后者占28％。在非基因突变原因中可能存在p53结合蛋白HPV16／18-E6的参与,而不存在MDM2的参与。     

基于二代测序技术探究食管鳞癌分子生物学特征及临床意义

目的 利用二代测序技术(NGS)对基因突变频率进行分析,探究食管鳞癌(ESCC)基因突变特征,寻找潜在的靶向治疗和免疫治疗靶点。 方法 随机收集49例山东省立医院确诊的ESCC患者的石蜡肿瘤组织样本,进行DNA提取,采用Illumina HiSeq4000测序平台对416个肿瘤相关基因进行捕获测序,测序结果进行生物信息学分析。 结果 发现TP53基因突变频率最高,并发现了多个ESCC潜在治疗靶点。EGFR 19del突变率和扩增率均为4.08%,未见EGFR L858R突变及KRAS突变;HER2和MET基因扩增发生率均为2.04%;BRCA1/2基因失活突变率约为8.06%;另外,MSI阳性率约为4.76%。提示携带相关靶点突变的患者可能是靶向治疗或免疫治疗的潜在获益人群。 结论 通过高通量检测技术发现ESCC多个潜在治疗靶点,对患者临床治疗方案的制定有重要意义。     

MDM2基因多态性与鲁西南汉族人群食管鳞癌风险关联

目的研究MDM2基因多态性在鲁西南汉族人群中的分布并分析其与食管鳞癌的相关性。方法采用聚合酶链反应一限制性内切酶片段长度多态性（FCR—RFLP）技术分析检测132食管鳞癌患者（病例组）和132非食管癌患者（对照组）MDM2SNP309的基因多态性,并比较不同基因型与食管鳞癌发病风险的关系。结果MDM2SNP309基因座位上突变等位基因频率在正常对照组和病例组分别为37．50％和45．45％,基因频率在两组间的分布无显著性差异（P〉0．05）;SNP309基因座中突变等位基因G的纯合子G／G基因型频率在对照组和病例组分别为10．61％和18．94％,频率差异具有统计学意义（P〈0．05）;MDM2SNP309的G／G基因型可增加食管鳞癌的发病风险（OR=2．27;95％CI：1．04～4．97）。结论MDM2基因SNP309位点的G／G基因型可能与鲁西南地区食管鳞癌的发病风险增高具有相关性。     

Survivin在食管鳞癌中的表达及其意义

目的：探讨食管鳞癌中Survivin的表达及其临床病理学意义。方法：通过免疫组织化学sP法对80例食管鳞癌及20例正常食管组织中survivin的表达情况进行检测。结果：80例食管鳞癌sunrivin表达阳性率为65％,20例正常食管组织中未见survivin的表达。survivin表达阳性率与癌组织分化程度、淋巴结转移、TNM分期呈正相关（P〈0．05）。结论：Survivin在食管鳞癌中高表达,可能参与食管癌的发生、发展过程。     

食管鳞癌中存活素的表达及临床病理学意义

目的:探讨食管鳞癌存活素(Survivin)的表达与临床病理因素的相关性。方法:应用免疫组化法检测80例食管鳞癌中Survivin的表达。结果:80例食管鳞癌Survivin阳性率为65.0%,Survivin的表达与淋巴结转移、TNM分期呈正相关(P<0.05),还与癌组织分化程度有关(P<0.05)。结论:Survivin在食管鳞癌中高表达,与淋巴结转移密切相关。     

Relationship between hepatitis B virus associated primary hepatocellular carcinoma and alteration of tumor suppressor gene p53

ChronicinfectionofhepatitisBvirus(HBV)isoneoftheimportantfactorsrelatedwithprimaryhepatocellularcarcinoma(PHC).Yetthemecha-nlsmbywh1chHBVpartlcipatesinthedeveIop-mentofPHCremainstobeelucidated.Thoughthechangesofseveraltumorgeneswerethoughttobeinvolved1nthepathogenesisofPHC,itwasbe-Ilevedthatpo3playedakeyrolepartlcularlyinthemutatlonatcodon249ha'.However,verydlfferentresultshavebeenreportedamongPHCfromdiffer-entpopulationsandareasf'.'-.ltwasreportedthatpointmutationofp53geneatcodon249wa…     

p53和ras基因突变及HPV感染与喉鳞癌的关系

①目的　探讨人乳头瘤病毒 16 ,18型 (HPV16 ,18)感染 ,抑癌基因p5 3和癌基因ras突变与喉鳞癌的关系 ,并初步分析 3种致癌因素的相互关系。②方法　应用聚合酶链反应 (PCR)和限制性片段长度多态性 (RFLP)分析技术 ,检测 40例喉鳞状细胞癌组织中 p5 3基因第 5 ,7外显子及ras基因 (N ras ,K ras,H ras)第 12密码子的突变情况 ,同时用PCR技术检测 40例标本中HPV16 ,18的感染情况。③结果　 40例标本检出HPV16阳性标本 14例 ,HPV18阳性标本 4例。 4例标本 p5 3基因第 5外显子第 143密码子发生突变 ,其中 1例HPV16阳性 ,p5 3基因第 7外显子未发现突变。 9例标本ras基因发生突变 (N ras 6例 ,K ras 2例 ,H ras 1例 ) ,其中 2例HPV16阳性 ,但未见 p5 3与ras基因同时发生突变者。HPV阳性和阴性标本中p5 3基因突变率、ras基因突变率的差异均无显著性(χ2 =0 .10 1,1.392 ,P >0 .0 5 )。④结论　HPV感染、p5 3和ras基因突变与喉鳞癌的发生密切相关 ,三者之间的关系尚待进一步探讨。     

食管癌中P^53基因突变和蛋白表达的研究

采用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ－ＥＢ染色法及免疫组化技术检测１４例食管癌手术切除组织中Ｐ＾５３基因５－８外显子基因突变及Ｐ＾５３蛋白的表达。结果：其中７例免疫组化结果阳性,６例检出Ｐ＾５３基因突变。基因及Ｐ＾５３突变。Ｐ＾５３的基因突变和过度表达在食管癌的发生发展中发挥重要作用,Ｐ＾５３基因突变／过度表达可以作为判断食管发生及预后的一个指标。     

RASSF1A基因启动子甲基化与新疆哈萨克族食管癌的相关性研究

目的：探讨抑癌基因RASSF1A甲基化与新疆哈萨克族食管癌的相关性及其临床病理学意义。方法：在新疆哈萨克族食管癌高发区选取了哈族食管鳞癌患者及同地区非食管鳞癌各100例做正常对照,收集蜡块后,运用基质辅助激光解析电离时间飞行质谱仪（MALDI-TOF MS）检测RASSF1A基因启动子的甲基化状态。结果：①RASSF1A基因启动子的CpG单位平均甲基化水平在哈族食管癌样本与哈族正常食管粘膜对照样本中分别为20%和5%两者差异具有统计学意义（P〈0.05）;②RASSF1A基因在哈族食管癌与正常食管粘膜组织中CpG单位11-12与CpG单位16-17及CpG单位24-25平均甲基化水平分别为15%,13%,7.8%,三者的平均甲基化水平明显高于正常对照（5%）,CpG单位的平均甲基化率差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：①RASSF1A基因的甲基化状态与哈萨克族食管癌发生可能有关;②RASSF1A基因CpG单位11-12与CpG单位16-17及CpG单位24-25这三个CpG单位甲基化状态的改变可能与新疆哈萨克族食管癌发生有关。