尿足细胞数量及podocalyxin蛋白与IgA肾病的相关性

目的 探讨尿足细胞数量和podocalyxin蛋白表达与IgA肾病发病、发展的相关性,探索IgA肾病的诊断、病情和预后评估提供的新指标.方法 采用间接免疫荧光法检测陕西省第四人民医院体检的健康人群和150例IgA肾病患者尿足细胞数量及podocalyxin蛋白表达水平,观察健康人群和IgA肾病患者尿足细胞数量差异和不同肾脏病理Lee分级IgA肾病患者尿足细胞数量和podocalyxin蛋白表达水平差异,分析不同肾脏病理Lee分级IgA肾病患者尿足细胞数量和podocalyxin蛋白表达与肾小球滤过率、24 h尿蛋白定量、血清肌酐、尿素氮等临床指标的相关性.结果 健康人群组尿沉渣细胞涂片染色标本未见尿足细胞,而IgA肾病组尿沉渣细胞涂片染色标本尿足细胞数量为每20个高倍视野(12.54±2.89);不同肾脏病理Lee分级IgA肾病患者的尿足细胞数量、podocalyxin蛋白表达和24 h尿蛋白定量比较,差异有统计学意义(P＜0.05),且不同肾脏病理Lee分级IgA肾病患者尿足细胞数量与24 h尿蛋白定量呈正相关(r=0.835 3,P＜0.05),podocalyxin蛋白表达与24 h尿蛋白定量呈负相关(r =0.886 8,P＜0.05).结论 尿足细胞数量、podocalyxin蛋白表达与IgA肾病的发病、发展密切相关.     

尿足细胞与IgA肾病风湿证的相关性研究

目的研究尿足细胞与IgA肾病临床病理及风湿内扰证的相关性,探求早期无创识别风湿证候的微观辨证指标。方法 72例Ig A肾病患者根据尿足细胞检测,可分为足细胞阳性组和足细胞阴性组;将这些患者按有无风湿内扰证分成两组,并对相关临床和病理指标进行比较分析。结果风湿内扰证组患者蛋白尿、大量血尿水平及肾病理活动性指数(AI)较非风湿内扰证组高(P0.05),eGFR较非风湿内扰证组下降(P0.05),但与血肌酐、肾病理慢性指数(CI)等无明显相关性(P0.05)。与尿足细胞阴性组的患者比较,尿足细胞阳性的患者大量血尿、24 h蛋白尿、肌酐水平较高,eGFR水平低,差异有统计学意义(P0.05),且其在病理上活动性积分(AI)、细胞性新月体比例、肾小球硬化率较足细胞阴性组高(P0.05)。风湿内扰证组患者尿足细胞阳性水平较非风湿内扰证组高,且尿足细胞阳性组风湿证候积分较足细胞阴性组高。结论足细胞尿是IgAN患者活动性损伤的指标,在一定程度上可以提示IgA肾病的活动性病变及疾病进展,尿足细胞排泄水平与肾病理活动性及风湿证候有相关性,可以作为风湿证候微观辨证的客观依据。     

基质金属蛋白酶-9在IgA肾病足细胞损伤中表达变化的意义

目的 探讨基质金属蛋白酶-9(MMP-9)在IgA肾病患者肾组织足细胞损伤中表达变化的意义.方法 48例经肾穿刺活检明确诊断的IgA肾病,采用免疫组织化学技术定量肾组织足细胞表面特异性标记物Wilms肿瘤蛋白(WT1)和MMP-9的变化.结果 组织学分级Ⅰ～Ⅲ级组IgA肾病患者肾小球MMP-9表达量与足细胞WT1表达量呈正相关(r=0.556,P＜0.05),Ⅳ～Ⅴ级组IgA肾病患者肾小球MMP-9表达量与足细胞WT1呈负相关性(r=-0.773,P＜0.01),IgA肾病患者足细胞WT1表达与血压、尿蛋白无明显相关性,但与血清肌酐水平呈正相关(r=0.756,P＜0.01).MMP-9在正常肾小球少量表达或无表达;随着新月体、增殖性病变加重表达也增加,肾小球MMP-9的表达与血压无相关性,但与尿蛋白呈正相关(r=0.812,P＜0.01),与血清肌酐呈负相关(r=-0.657,P＜0.01).结论 MMP-9的异常表达可能是影响IgA肾病足细胞损伤的因素之一.     

尿液足细胞排泄与IgA肾病的相关关系

目的 探讨尿液足细胞排泄与IgA肾病病理损伤严重程度的相关性.方法 36例IgA肾病患者,按IgA肾病病理组织学Lee分级分为4组,采用免疫酶细胞化学方法,应用小鼠抗人PCX单克隆抗体进行标记,计数足细胞,同时检测临床检验指标,进行尿液足细胞排泄水平及临床检验指标与IgA肾病病理损伤严重程度的分析.结果 IgA肾病4组与1组相比,尿蛋白定量、血清胆固醇、血尿素氮及血清肌酐水平明显升高,血浆白蛋白水平明显降低;3组与1组相比,尿蛋白定量及血尿素氮水平明显升高;2组与1组相比,仅血尿素氮水平明显升高(P<0.05).IgA肾病4组尿液足细胞排泄水平明显高于1组和2组(P<0.05);尿液足细胞排泄水平与IgA肾痛Lee分级水平具有明显的相关性(r=0.432,P=0.01).结论 尿液足细胞的排泄水平随IgA肾病肾脏病理改变的加重而增多,两者具有明显的相关性.     

成人原发性IgA肾病患者肾脏IgM沉积与临床及病理的关系

目的 探讨成人原发性IgA肾病(IgAN)患者肾脏IgM沉积与临床及病理的关系.方法 收集经皮肾活检病理证实为成人原发性IgAN的147例患者,分为IgM阴性组和IgM沉积组,对两组的临床表现、实验室检查及肾脏病理进行比较分析.结果 ① 与IgM阴性组相比,IgM沉积组患者肾病综合征的例数、24 h尿蛋白定量、24 h尿蛋白/肌酐、尿总蛋白及血尿素氮均明显增加,血白蛋白及肾小球滤过率(eGFR)、血IgG明显下降,慢性肾脏病(CKD)分期更重,尿转铁蛋白、尿白蛋白、尿IgG及尿N-乙酰β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)明显增加,差异有统计学意义(P<0.05);② IgM沉积组Lee氏分级Ⅳ级比例增加,但两组间差异无统计学意义;牛津分类中两组间比较,M、E、S差异无统计学意义,T分类中IgM沉积组病理损害更重,且差异有统计学意义(P<0.05);用Katafuchi半定量分析,结果显示IgM沉积组的肾脏病理总积分、肾小管间质积分与IgM阴性组相比差异有统计学意义(P<0.05).结论 肾脏IgM沉积的成人原发性IgAN患者的尿蛋白程度更高,临床表现更重,肾小球损伤明显,病理表现中肾小管间质病变及肾脏总的病理损害更为明显.     

补体C3系膜区沉积强度与IgA肾病病理分型的相关性

目的 探讨补体C3系膜区强度与IgA肾病（IgAN）病理分型的相关性。方法 回顾性收集空军军医大学西京医院2016年1月1日～2019年12月31日行肾活检穿刺诊断为IgAN患者1094例,参照纳入及排除标准,最终入选975例。依据免疫荧光下补体C3在系膜区沉积强度,分为C3阴性组（n=213）和C3阳性组（n=762）。分析肾活检诊断为IgAN患者补体C3系膜区沉积强度与IgA肾病Lee氏分级和牛津分型的相关性,并评估补体C3系膜区沉积强度与临床病理的相关性。结果 C3阴性组较C3阳性组血肌酐水平低,eGFR高和血补体C3水平高,差异有统计学意义（P＜0.05）。C3阴性患者在Lee氏I级的比例最高（50.5%）,之后逐渐递减,Lee氏IV-V级的比例最低（9.8%）,而在Lee氏V级的比例升高（20.5%）,呈现为“杓型”曲线。C3阴性组患者病理组织改变M1、E1、S1、T1-2和C1-2的比例显著少于C3阳性组,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 补体C3阴性的发生率与IgA肾病Lee氏分级呈现为“杓型”曲线;补体C3阴性IgAN患者病理改变较轻或病变慢性化,活动性病变少见。     

系膜区IgG沉积对IgA肾病临床及病理影响

目的 探讨IgA肾病患者伴系膜区IgG沉积与单纯IgA沉积间临床及病理之间的关系.方法 收集自2009年11月～2016年2月于南方医科大学第三附属医院肾活检诊断为IgA肾病患者122例.所有肾活检样本均行光镜、免疫荧光和电镜检查.根据患者免疫荧光结果系膜区有无IgG沉积,将IgA肾病患者分为单纯IgA沉积组(n=63)与IgA-IgG沉积组(n=59).对所有患者进行Lee分级及牛津分级.对比两组临床及病理差异.结果 lgA肾病伴IgG沉积组临床血肌酐、24小时尿蛋白、血尿酸、甘油三酯水平均高于单纯IgA沉积组(P＜0.05);eGFR低于单纯IgA沉积组(P＜0.00l);病理中有更多的患者处于Lee氏分级IV-V级、肾小管萎缩或/和间质纤维化评分及MEST评分≥3比例多(P＜0.05).结论 IgA肾病系膜区伴IgG沉积患者临床及病理较重,应加强对IgA肾病系膜区伴IgG沉积的认识,延缓IgA肾病的进展.     

广西籍汉族、壮族IgA肾病的临床及病理研究

目的:研究广西籍IgA肾病(IgAN)临床病理表现及汉族和壮族IgAN的特点.方法:对57例IgAN患者的临床表现、实验室及组织学检查进行分析,并分别比较汉族组和壮族组的情况.结果:①广西籍IgAN临床表现以无症状性尿检异常最常见(43.9%),其次为慢性肾炎(35.1%)和肾病综合征(19.3%).IgAN的病理改变主要表现为Ⅲ级,蛋白尿＜1 g/L的患者和中等量以上蛋白尿的患者病理表现不同,前者68.8%的患者表现为Ⅰ、Ⅱ级,后者64.3%的患者表现为Ⅳ、Ⅴ级.非肾病范围蛋白尿组的新月体形成多于肾病范围蛋白尿组(P＜0.01).②壮族IgAN 临床表现多为慢性肾炎,而汉族IgAN临床表现多为无症状性尿检异常,两组间病理表现比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论:①广西籍IgAN临床表现最常见为无症状性尿检异常,病理改变主要表现为Ⅲ级,临床和病理有一定的联系.②汉族和壮族IgAN患者之间的临床和病理表现差别不大.     

IgA肾病足细胞损伤中的血管内皮生长因子表达及临床意义

目的 研讨血管内皮生长因子(VEGF)在IgA肾病患者足细胞损伤中的作用及其与IgA肾病临床与病理表现之间的关系.方法 41例经肾穿刺活检明确诊断的IgA肾病患者,采用免疫组织化学技术观察肾组织中足细胞表面特异性标记物WT1及VEGF的分布,并结合临床及肾脏病理进行分析.结果 IgA肾病患者足细胞病变与肾小球内VEGF的表达呈正相关性(r=0.575,P＜0.05),随着病变加重,硬化肾小球增加,肾小球内足细胞数目及VEGF的表达均减少(P＜0.05),肾小球中的WT1表达与尿蛋白无明显相关性,但与血清肌酐、肾小球硬化呈正相关性(r=0.776,P＜0.01,r=0.658,P＜0.01).Ⅰ～Ⅲ级病变组肾小球内VEGF的表达与尿蛋白定量呈正相关(r=0.558,P＜0.05),但在Ⅳ～Ⅴ级病变组无相关性;肾小球内VEGF的表达与血压、血清肌酐无显著相关性,但与系膜细胞增殖程度呈正相关(r=0.714,P＜0.01),与肾小球硬化呈负相关(r=-0.669,P＜0.01).结论 IgA肾病足细胞损伤中的血管内皮生长因子异常表达在其疾病进展(促进蛋白尿形成及肾小球硬化等)中起重要作用.     

中药自拟方肾络通治疗以蛋白尿为主的IgA肾病临床研究

目的 探讨肾络通治疗以蛋白尿为主的IgA肾病的临床疗效.方法 将120例以蛋白尿为主的IgA肾病患者随机分为治疗组、对照组.在基础治疗基础上,治疗组予肾络通方,对照组予洛丁新,均治疗12个月,观察治疗前后两组疗效和中医症候积分、肾小球滤过率(GFR)、血肌酐(Scr)、24 h尿蛋白定量、血浆清蛋白(ALB)等指标的变化情况.结果 两组疗效比较差异有统计学意义(P＜0.01),治疗后两组中医症状积分比较差异有统计学意义(P＜0.01).治疗组治疗后24 h尿蛋白定量降低、ALB升高,与治疗前比较差异有统计学意义(P＜0.05);与对照组比较24 h尿蛋白定量、ALB差异亦均有统计学意义(P＜0.05).结论 肾络通具有改善患者症状、降低蛋白尿、保护肾功能的作用.     

中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白与IgA肾病早期诊断及病理分级的关系

目的探讨IgA肾病患者血清及尿液中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白(NGAL)与IgA肾病早期诊断及病理分级的关系。方法选择IgA肾病患者89例,根据Lee氏分级LeeⅠ～Ⅱ级42例(A组),LeeⅢ～Ⅴ级47例(B组);对照组33例。应用ELISA法检测3组受检者的血清及尿液中的NGAL水平并比较不同病理分级患者在系膜增殖、新月体、肾小球硬化方面的差异,分析血清及尿液的NGAL水平与系膜增殖评分的相关关系。结果 IgA肾病患者血清及尿液的NGAL水平均较对照组升高(P<0.05);Lee氏Ⅰ～Ⅱ级患者的系膜增殖程度、肾小球硬化程度、新月体数目与Lee氏Ⅲ～Ⅴ级患者比较差异均有统计学意义(P<0.05);血清及尿液的NGAL水平均与系膜增殖积分呈正相关(血清NGAL:r=0.543,P=0.016;尿液NGAL:r=0.761,P=0.007)。结论 NGAL可能在IgA肾病的病理生理学方面起重要作用,尿液NGAL可能成为判断IgA肾病患者早期肾损伤及预后的有效指标。     

自噬体及凋亡小体对新生小鼠支气管肺发育不良调控作用

目的探究自噬体及凋亡小体对新生小鼠支气管肺发育不良（bronchopulmonary dysplasia,BPD）调控作用。 方法新生SD小鼠36只随机分为对照组、模型组、干预组,每组12只,对照组置于空气中,模型组、干预组置于封闭氧箱中（氧浓度维持在60%）以制备BPD模型,干预组小鼠从造模开始给予自噬抑制剂（氯喹）20 mg/kg腹腔注射,1次/d,连续21 d。22 d时观察各组小鼠一般情况,采用HE染色观察各组小鼠肺组织病理变化,透射电镜下观察各组小鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞超微结构,采用Western Blot检测肺组织中自噬相关蛋白［P62、微管相关蛋白轻链3B（microtubule associated protein light chain 3B,LC3B）］及凋亡相关蛋白［Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（Caspase-3）］表达水平。 结果干预组小鼠精神状态、毛发生长、饮食情况、呼吸情况、体重等较模型组明显好转,未出现死亡小鼠。干预组小鼠肺组织病理改变较模型组明显改善,肺泡Ⅱ型上皮细胞胞浆中自噬体及凋亡小体数量较模型组明显减少。模型组小鼠肺组织中LC3B、P62、Bax、caspase-3水平显著高于对照组（P＜0.05）;干预组小鼠肺组织中LC3B、P62、Bax、caspase-3水平显著低于模型组（P＜0.05）;干预组小鼠肺组织中LC3B、P62、Bax、caspase-3水平显著高于对照组（P＜0.05）。 结论新生小鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞自噬过度活化后自噬体增多,促进肺泡Ⅱ型上皮细胞大量凋亡,凋亡小体增加,从而导致BPD发生,这可为BPD预防和治疗提供理论支持。     

RSV诱导哮喘小鼠树突细胞自噬机制及五虎汤的干预作用

目的 研究PI3K/Akt/mTOR信号通路对呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)诱导哮喘小鼠树突细胞(den-dritic cells,DC)自噬的调控机制及五虎汤的干预作用.方法 用RSV滴鼻联合雾化鸡卵清蛋白(ovalbumin,OVA)激发的方法制备哮喘小鼠模型,造模...     

Mechanism of thalidomide to enhance cytotoxicity of temozolomide in U251-MG glioma cells in vitro

Background Glioma is the most common primary brain tumor with poor prognosis. Temozolomide has been used with thalidomide to treat gliomas. We investigated the synergistic mechanism of these two drugs in vitro. Methods Human malignant glioma cells U251-MG were cultured and assigned to four groups with different treatments for 3 days： temozolomide group （100 μmol/L）, thalidomide group （100 μg/L）, temozolomide （100 μmol/L） plus thalidomide group （100 μg/L） and control group. MTT assay was applied to evaluate the cell viability. Cell cycle was analyzed by flow cytometry. The ultra-structural features of autophagosomes were observed with electron microscope. Acridine orange and monodansylcadaverine were adopted to label autophagosomes and flow cytometry was applied for quantification of autophagosomes. The expression of autophagy-associated protein was detected by Western blotting. Results Proliferation of tumor cell was obviously suppressed by temozolomide with thalidomide treatment than by either drug used alone （P=0.000 for each day）. The combination treatment induced cell cycle arrest at G0/G1 phase. Typical autophagic ultra-structural character was found after the combined treatment. Thalidomide promoted the autophagy induced by temozolomide. The autophagy-associated proteins - microtubule associated protein 1 light chain 3 （MAP1LC3） and Beclinl were more significantly up-regulated by the combined treatment than temozolomide used alone （MAP1LC3, P=0.000; Beclinl, P=0.004）. The expression level of phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten （PTEN）, which promoted autophagy by suppressing PI3K/Akt/mTOR signaling pathway, was elevated by thalidomide （thalidomide group： P=0.000; combined group： P=0.002）. Conclusions Thalidomide enhances the cytotoxicity of temozolomide by promoting the autophagy induced by temozolomide. Contributing to the up-regulation of PTEN by thalidomide, the expression of autophagy associated protein-MAP1LC3 and Beclinl was enhanced, which leads to a reinforced autophagy in the combined treatment of temozolomide and thalidomide in vitro.     

人肝细胞癌中miR-23a和XIAP的表达及意义

目的 探讨miR-23a和X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)在人肝细胞癌(HCC)中的表达、相互关系及临床病理意义.方法 建立组织微阵列,采用原位分子杂交方法分别检测150例人HCC和136例相对应的癌旁组织中miR-23a的变化;利用免疫组化两步法检测XIAP蛋白和Ki-67蛋白的表达水平.结果 HCC组织和癌旁组织中miR-23a的高表达率分别为48.7%(73/150)和77.2%(105/136),两者差异有统计学意义(P=0.001),XIAP蛋白在HCC和癌旁组织中的高表达率分别为25.3%(38/150)和22.1%(30/136),两者差异无统计学意义;miR-23a高表达率在患者中男性高于女性(P=0.037)、HBsAg阳性高于HBsAg阴性患者(P=0.022)、大肝癌高于小肝癌(P=0.021)、Ⅰ~Ⅱ期高于Ⅲ~Ⅳ期(P=0.002);而XIAP蛋白高表达在患者中小肝癌高于大肝癌(P=0.001)、Ⅰ~Ⅱ期高于Ⅲ~Ⅳ期(P=0.009).此外两者均与患者年龄、是否合并肝硬化、组织学分级无关.经Pearson相关检验,miR-23a和XIAP蛋白在HCC中的表达呈显著负相关性(rs=-0.308,P<0.01).结论 miR-23a和XIAP可能参与HCC的发生与发展.     

体外探究脱落酸对肺腺癌细胞系Spc-A1自噬的影响

目的观察脱落酸(ABA)作用于肺腺癌细胞株Spc-A1引起自噬方面的变化,研究ABA对Spc-A1细胞自噬的影响。方法以人肺腺癌细胞系Spc-A1为研究对象,ABA给药浓度分别为0.8、20、100μmol/L,采用MTT法检测ABA作用后Spc-A1细胞的活力;激光共聚焦显微镜观察ABA作用于Spc-A1细胞后自噬现象;提取培养细胞mRNA及蛋白质,分别采用荧光实时定量PCR、蛋白印迹法检测自噬相关基因Beclin-1及LC3-Ⅱ的表达。结果 ABA作用后,肺腺癌细胞Spc-A1活力随着ABA浓度的增高而下降,各处理组之间差异具有统计学意义(P<0.001);ABA可诱导Spc-A1细胞自噬,自噬现象随药物浓度增高而增加;ABA处理后Bec-lin-1及LC3-Ⅱ的mRNA表达量随着ABA浓度的增加而增高,各处理组表达量差异具有统计学意义(P<0.05);蛋白表达结果显示ABA 100μmol/L处理组与对照组Beclin-1表达量差异具有显著性(P=0.04);ABA 100μmol/L处理组与对照组LC3-Ⅱ表达量差异具有显著性(P=0.005),ABA 0.8μmol/L组与ABA 100μmol/L组之间LC3-Ⅱ表达量差异具有显著性(P=0.039),余处理组表达量两两之间未见显著性差异。结论 ABA可通过调节自噬信号转导通路中相关基因的表达诱导肺腺癌细胞Spc-A1自噬,随着自噬的增加,可能抑制肿瘤的生长。     

舒尼替尼通过抑制 Akt／mTOR 信号通路诱导肾癌细胞自噬

目的：研究舒尼替尼引起的肾癌细胞出现细胞自噬的机制。方法：以肾癌细胞系ACHN细胞为细胞模型,利用3-(4,5-二甲基)-5-(3-羧甲基苯环)-2-(4-硫基苯)-2H 四唑盐复合物［3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2H-tetrazolium,innersalt,MTS］检测法观察舒尼替尼对ACHN 细胞活性的影响;应用RNA干扰技术敲降自噬相关蛋白Beclin1和微管相关蛋白1轻链3融合蛋白（microtubule associated protein 1 light chain 3 fusion protein, LC3）检测自噬与舒尼替尼引起的细胞凋亡。使用电子显微镜和荧光显微镜观察在舒尼替尼作用下自噬体的形成;蛋白质免疫印迹检测舒尼替尼对LC3-Ⅱ的积累,自噬相关信号通路蛋白激酶B(protein kinase B, PKB/Akt)、哺乳动物雷帕霉素受体( mammalian target of rapamycin, mTOR) 及聚腺苷二磷酸核糖聚合酶( poly ADP-ribose polymerase,PARP) 切割的变化和过量表达,以及敲降Akt检测诱导自噬的变化。结果: 舒尼替尼能显著抑制ACHN的细胞活性,这种作用具有时间和浓度依赖性;敲降自噬相关蛋白Beclin1和LC3减少自噬可改变舒尼替尼引起PARP的切割;透射和荧光显微镜观察结果表明,舒尼替尼引起细胞自噬体明显增加;蛋白质免疫印迹结果显示舒尼替尼增加自噬同时减少了Akt/mTOR的磷酸化。过量表达持续活化的Akt抑制了该化合物引起的自噬,而敲降Akt可促进自噬发生。mTOR抑制剂雷帕霉素能上调舒尼替尼引起的自噬并促进细胞活性的丢失。结论：舒尼替尼通过抑制Akt/mTOR信号通路促进肾癌细胞ACHN的自噬,其诱导的自噬与凋亡有关。     

舒洛地特调控miR-27a介导自噬调控糖尿病肾病足细胞损伤机制研究

目的分析舒洛地特调控微小RNA-27a(miR-27a)介导自噬调控糖尿病肾病足细胞损伤的机制。方法选取45只中15只大鼠作为正常组不做任何处理,其余大鼠建立糖尿病肾病大鼠模型,随机分为模型组、舒洛地特组各15只。舒洛地特组大鼠给予舒洛地特肌内注射,正常组和模型组给予等体积生理盐水肌内注射。观察各组大鼠病理组织学变化,血糖、血脂和肾功能指标、足细胞自噬体情况、凋亡率,足细胞特异性蛋白Nephrin、Desmin、GPR124及miR-27a、AMPK-mTOR信号通路蛋白表达量。结果舒洛地特组血糖、血脂和肾功能指标、足细胞凋亡率、Desmin、miR-27a、AMPK-mTOR信号通路蛋白表达量均低于模型组,差异有统计学意义(P0.05)。舒洛地特组足细胞自噬体数量、Nephrin、GPR124蛋白表达量均高于模型组,差异有统计学意义(P0.05)。结论舒洛地特可通过下调miR-27a介导AMPK、mTOR、Bax蛋白表达量降低,进而抑制AMPK-mTOR信号通路,促进糖尿病肾病足细胞自噬、抑制糖尿病肾病足细胞凋亡、减轻糖尿病肾病足细胞损伤。     

2型糖尿病合并不同程度蛋白尿患者的血清对足细胞自噬的影响

目的:探讨2型糖尿病(T2DM)合并不同程度蛋白尿患者的血清对足细胞自噬的影响。方法:选取40例T2DM患者,根据尿白蛋白与尿肌酐比值(UACR)分为正常白蛋白尿组(15例)、微量白蛋白尿组(14例)和大量白蛋白尿组(11例),同时选取14例正常体检者为对照组,比较4组空腹血糖(FBG)、糖化血红蛋白(Hb A1c)、收缩压、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、ACR等临床指标。分别用各组受试者的血清处理小鼠足细胞48 h后,观察电镜下足细胞自噬形态、自噬蛋白LC3及凋亡蛋白Cleaved-caspase 3水平的变化。结果:与对照组比较,T2DM各组ACR、FBG、Hb A1c、LDL-C、收缩压明显升高,HDL-C明显降低(P<0.01);T2DM各组ACR比较差异有统计学意义(P<0.01)。与对照组比较,T2DM各组自噬数目下降,LC3-Ⅱ表达量降低,Cleaved-caspase 3表达量增加;与正常白蛋白尿组比较,微量白蛋白尿组和大量白蛋白尿组LC3-Ⅱ表达量下降(P<0.05),Cleaved-caspase 3表达量增加(P<0.01);LC3-Ⅱ表达量水平与T2DM患者蛋白尿增加呈负相关(P<0.05)。结论:T2DM合并不同程度蛋白尿患者的血清能降低足细胞自噬,提示患者血清中含有相关因子调控自噬,进而损伤足细胞,促进蛋白尿产生。     

沉默ATG5及ATG7可抑制顺铂介导的耐顺铂睾丸癌细胞的自噬和增殖

Objective To observe the changes in autophagy of cisplatin-resistant I-10 testicular cancer cells (I-10/DDP cells) in response to cisplatin treatment and the effect of silencing ATG5 and ATG7 on autophagy and proliferation of cisplatin-treated cells. Methods I- 10/DDP cells treated with 15 μmol/L cisplatin for 12 h were examined for expressions of LC3 and p62 by Western blotting and for autophagy level through transmission electron microscopy and mCherry-GFP-LC3B. I-10/DDP cells were transfected with short hairpin RNAs shRNA-ATG5 or shRNA-ATG7 via Lipfectamine2000, the empty vector (NC group), or Lipfectamine2000 alone (blank control group), and the cellular expressions of ATG5 and ATG7 were detected with Western blotting. The transfected cells were treated with 15 μmol/L cisplatin for 12 h, after that the expressions of LC3 and p62 were detected with Western blotting. Transmission electron microscopy and mCherry-GFP-LC3B were used to detect autophagy level in the cells. MTT assay and colony-forming assay were performed to assess the cell survival fraction and colony formation ability of the treated cells, respectively. Results After cisplatin treatmert, the expression level of LC3 II increased significantly (P<0.001), the expression level of p62 decreased (P<0.05), and the number of autophagosomes increased in I-10/DDP cells. The cells transfected with shRNA-ATG5 or shRNA-ATG7 showed significantly decreased expressions of ATG5 or ATG7 (P=0.005 or P<0.001). Cisplatin treatment of the transfected cells obviously reduced the cellular expression of LC3 II (P< 0.001), increased the expression of p62 (P<0.001), and decreased the number of autophagosomes, cell survival fraction and colony formation ability of the cells (P<0.001). Conclusion Silencing ATG5 and ATG7 inhibits cisplatin-mediated autophagy and enhances the inhibitory effect of cisplatin on inhibiting cell proliferation.