新化合物OSU-03012对结肠癌细胞增殖、迁移以及凋亡的影响

摘要： 目的 在细胞水平上初步探讨新化合物OSU-03012抗结肠癌的机制。方法 分别用1、 3、 5和10 μmol/L OSU-03012化合物干预的人结肠癌细胞株HCT-116作为研究对象, 以等体积二甲基亚砜 （DMSO） 处理的HCT-116 细胞作为对照组。CCK-8法检测各组细胞干预24、 48、 72 h时的抑制率, 划痕实验和Transwell实验检测各组细胞迁移能力, 流式细胞术检测各组细胞凋亡情况, 免疫荧光、 Western blot检测各组细胞Bcl-2、 Caspase-3蛋白表达情况, Real-time PCR检测各组细胞Bcl-2、 Caspase-3 mRNA表达情况。结果 对照组、 1 μmol/L组、 3 μmol/L组、 5 μmol/L 组和10 μmol/L组的细胞抑制率、 凋亡率呈逐渐升高趋势, 而细胞迁移距离、 细胞迁移数目呈逐渐减小或降低趋势, 组间多重比较差异均有统计意义 （均P＜0.05）; 3、 5、 10 μmol/L组Bcl-2 mRNA和蛋白表达量低于对照组, 而Caspase-3 mRNA和蛋白表达量高于对照组 （均P＜0.05）。结论 新化合物OSU-03012可抑制结肠癌细胞增殖与迁移, 并促进结肠癌细胞凋亡, 且呈剂量依赖效应。     

应用MK801导致大鼠急性精神病症状、空间记忆缺陷和突触可塑性的损害

精神分裂症多数是进展性精神疾病。虽然已有认知改变在慢性精神分裂症中的研究,但单一精神病事件对记忆机制及其形成的影响还所知甚少。人服用N-甲基-D-天冬氨酸     

p-JNK在结肠癌组织中的表达及抑制JNK通路后HT-29细胞增殖和凋亡变化

目的研究p-JNK在结肠癌组织中的表达以及抑制JNK信号通路后人结肠癌HT-29细胞增殖和凋亡的变化。方法使用免疫组织化学方法检测50例结肠癌组织标本和50例正常结肠组织标本中p-JNK的表达情况并和临床资料进行比较分析;在人结肠癌细胞株HT-29中使用SP600125抑制JNK信号通路后,MTT法检测细胞增殖,TUNEL法检测凋亡。结果 p-JNK在结肠癌组织中的表达水平明显高于正常对照组织(P<0.05);并和淋巴结转移、肿瘤分化程度、肿瘤的侵犯深度相关(P<0.05);而与肿瘤部位无关。抑制JNK信号通路后,HT-29细胞中的p-JNK表达降低(P<0.05);增殖减少,凋亡增加(P<0.05)。结论在结肠癌组织中存在p-JNK的高表达,抑制JNK信号通路能降低人结肠癌细胞株HT-29细胞的增殖,并促进凋亡;JNK信号通路和结肠癌的发生发展有关。     

红花多糖对人结肠癌 LoVo 细胞增殖、凋亡、侵袭作用机制研究

目的 红花多糖对人结肠癌 LoVo 细胞增殖、凋亡、侵袭作用机制研究。方法 体外培养人结肠癌 LoVo 细胞,在不同浓度(0.5、1.0、1.5 g·L-1)的红花多糖处理后,分别在干预24、48、72 h后采用 MTT 比色法测定红花多糖对LoVo细胞的增殖抑制作用,利用倒置显微镜观察细胞的形态,采用PI单标流式细胞仪测定细胞周期分布,Annexin V-FITC /PI 双标法检测细胞凋亡率;采用RT-PCR检测Bax、Bcl-2、Caspase-3 mRNA表达水平及检测Caspase-3活性,Western-blot检测Bax、Bcl-2、Caspase-3蛋白表达情况;应用Transwell细胞侵袭试验检测红花多糖对结肠癌LoVo细胞侵袭能力的影响。结果 MTT 检测显示红花多糖能显著抑制人结肠癌 LoVo 细胞的生长、増殖,呈现浓度和时间效应关系;倒置显微镜显示红花多糖能使结肠癌LoVo 细胞出现典型凋亡特征;流式细胞仪分析结果提示红花多糖具有调节人结肠癌LoVo细胞周期的功能。RT-PCR实验和Western-blot实验结果显示随着红花多糖浓度增加可促进LoVo细胞中Bax、Caspase-3 mRNA表达,并抑制 Bcl-2 mRNA表达。Transwell侵袭实验示随着红花多糖浓度增加,LoVo 细胞侵袭能力降低。结论 红花多糖能显著促进人结肠癌 LoVo 细胞凋亡,可使结肠癌LoVo 细胞增殖受到抑制,侵袭能力减弱,调节细胞周期,红花多糖的抗肿瘤的生物学效应可能与Bax、Bcl-2、Caspase-3 的信号通路有关。     

橙皮苷对抑郁症大鼠海马神经细胞凋亡、GR及NR2B的影响

摘要：目的:探讨橙皮苷对抑郁症大鼠海马神经细胞凋亡、糖皮质激素受体（GR）及N-甲基-D-天冬氨酸受体2B（NR2B）的影响。方法:将36只SD大鼠随机分为6组:正常对照组、模型组、阳性对照组(氟西汀,10 mg·kg-1)和橙皮苷低、中、高剂量组(40,80,160 mg·kg-1),每组6只。除正常对照组外,其余各组构建抑郁症大鼠模型,并灌胃给予相应药物,1次/d,连续28d。采用旷场（open field）实验、糖水偏好实验和强迫游泳实验观察大鼠的行为学变化,ELISA法检测海马组织中GR和NR2B含量,TUNEL法检测海马神经细胞凋亡,Western Blotting法检测海马组织中B淋巴细胞瘤-2基因相关X蛋白质（Bax）和B淋巴细胞瘤-2基因（Bcl-2）蛋白的表达。结果:与正常对照组比较,模型组大鼠自由活动次数明显减少,糖水偏好百分比降低,强迫游泳时间明显延长,海马组织中GR含量和Bcl-2蛋白表达水平明显降低,而NR2B含量和Bax蛋白表达水平明显升高,海马区凋亡阳性细胞数明显增多（P<0.05）;与模型组比较,阳性对照组和橙皮苷中、高剂量组大鼠自由活动次数明显增加,强迫游泳时间明显缩短,海马组织中GR含量和Bcl-2蛋白表达水平明显升高,NR2B含量和Bax蛋白表达水平明显降低,海马区凋亡阳性细胞数明显减少（P<0.05）,且阳性对照组和低、中、高剂量橙皮苷组大鼠的糖水偏好百分比明显升高（P<0.05）。结论:橙皮苷可通过减少神经细胞凋亡和调控GR、NR2B表达发挥抗抑郁的作用。     

MK-801对四次甲基二砜四胺诱发难治性癫痫的抑制作用

四次甲基二砜四胺(TET)，是国内近年发生的投毒案件中应用最多、危害最大的剧毒杀鼠剂，也是国家公安部、卫生部重点关注的化学恐怖剂，反复发作难治性癫痫（RE）是TET中毒致残及致死主要原因。本文在建立TET所致RE实验动物模型基础上，借助药理学、电生理学、病理学等相关研究手段，系统评价比较了N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体拮抗剂MK-801对TET所致RE的治疗效果；在此基础上，从mRNA及蛋白水平，观察了MK-801对NMDA主要受体亚型NR2A及NR2B表达的影响。结果发现MK-801 3和5 mg·kg^-1均可有效抑制RE及由此引发脑损伤，显著提升24 h存活率，其作用明显优于作用于γ-氨基丁酸(GABA)系统药物[CD2]地西泮(DZP)。进一步研究发现，MK-801可显著下调皮质NMDA受体2A, 2B mRNA及蛋白表达但DZP无类似作用。本研究结果初步证实, MK-801对毒鼠强诱发RE具有确切的治疗效果，其良好抗惊厥及神经保护作用可能与其对NMDA受体亚单位的下调作用密切相关。     

慢病毒介导的PRL-3 shRNA对结肠癌细胞增殖、侵袭、凋亡的影响

目的 观察慢病毒介导的 shRNA 沉默肝再生磷酸酶-3（PRL-3）基因对结肠癌 SW480 细胞增殖、侵袭、凋亡的影响。方法 实验分组为空白对照组、阴性对照组、转染组。将携带 PRL-3 shRNA 的慢病毒载体转染结肠癌SW480 细胞,建立稳定沉默 PRL-3 的细胞株,real-time PCR 检测转染后 PRL-3 mRNA 的相对表达水平。采用 MTT法、平板克隆形成实验检测转染后细胞增殖能力;采用 Transwell 侵袭实验、侵袭小室法检测转染后细胞迁移及侵袭能力;采用流式细胞术检测转染后细胞凋亡率变化。结果 稳定沉默 PRL-3 的细胞株构建成功,转染组 PRL-3mRNA 的相对表达水平低于空白对照组、阴性对照组（P＜0.05）,空白对照组、阴性对照组比较差异无统计学意义。PRL-3 shRNA 转染 SW480 细胞 72 h 后,转染组与空白对照组、阴性对照组比较,细胞增殖能力受到抑制,转染 120 h时最明显（P＜0.05）。转染组克隆形成能力较空白对照组、阴性对照组下降（P＜0.05）。转染组与空白对照组、阴性对照组比较,细胞迁移、侵袭能力下降,凋亡率增加（P＜0.05）。结论 结肠癌 SW480 细胞转染 PRL-3 shRNA 可减少 PRL-3 的表达,有效抑制 SW480 细胞增殖,促进其凋亡,PRL-3 可能成为治疗结肠癌的靶基因。     

木香内酯对结肠癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨木香内酯（micheliolide,MCL）对结肠癌细胞增殖和凋亡的作用及潜在机制。方法 通过腹腔注射致癌剂氧化偶氮甲烷（azoxymethane,AOM）和饮用致炎剂葡聚糖硫酸钠（dextran sodium sulfate,DSS）构建AOM/DSS小鼠结肠癌模型,分别给予尾静脉注射2.5 mg·kg^-1顺铂、MCL 0,10,20,50 mg·kg^-1,连续30 d记录小鼠存活率。取肿瘤组织,称肿瘤质量。免疫组化检验小鼠肿瘤组织Ki67和胱天蛋白酶3（caspase-3）蛋白表达水平,Western blotting检测小鼠肿瘤组织PTEN蛋白表达量;结肠癌细胞系SW620分别用含10 µmol·L^-1顺铂、MCL 0,2.5,5,10 µmol·L^-1培养基培养,或转染siPTEN后在MCL 0和10 µmol·L^-1培养基培养。BrdU细胞增殖试验检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blotting检测细胞增殖抗原（Ki67、PCNA）、细胞凋亡相关蛋白（cleaved caspase-3、Bcl-2、Bax）及PTEN蛋白表达量。结果 与模型组相比,MCL增加小鼠生存率,减轻肿瘤质量,增加抑瘤率,上调PTEN蛋白表达,减少Ki67阳性细胞,增加caspase-3阳性细胞（P<0.05或P<0.01）;与对照组相比,MCL降低结肠癌细胞BrdU阳性细胞百分比,下调Ki67和PCNA的表达量,增加细胞凋亡率,下调Bcl-2的表达量,上调Bax、cleaved caspase-3和PTEN的表达（P<0.05或P<0.01）;抑制PTEN表达能逆转MCL对SW620细胞增殖和凋亡的作用（P<0.01）。结论 MCL抑制结直肠癌细胞增殖并诱导细胞凋亡,这与上调PTEN表达有关。     

催产素对甲基苯丙胺引起的小鼠前额叶皮层和海马内N-甲基-D-天冬氨酸受体亚型1蛋白表达变化的影响

目的研究脑室注射催产素对甲基苯丙胺引起的小鼠前额叶皮层和海马内谷氨酸N-甲基-D-天冬氨酸受体亚型1(NMDAR1)蛋白表达变化的影响,为探讨催产素拮抗甲基苯丙胺精神依赖作用的中枢机制提供实验依据。方法分别取经急性和慢性甲基苯丙胺处理的小鼠的前额叶皮层和海马,采用Western Blot分析方法检测催产素对NMDAR1蛋白表达的影响。结果催产素可以显著拮抗急性给予甲基苯丙胺及复吸甲基苯丙胺引起的小鼠前额叶皮层NMDAR1蛋白表达的增高;可以显著抑制甲基苯丙胺戒断时引起的小鼠前额叶皮层NMDAR1蛋白表达的降低;急性及慢性甲基苯丙胺处理对小鼠海马内NMDAR1蛋白表达没有显著性影响。结论用甲基苯丙胺处理对小鼠前额叶皮层部位NMDAR1蛋白表达的影响较大;催产素可以拮抗甲基苯丙胺引起的前额叶皮层部位NMDAR1蛋白表达的变化。     

TRAP1对结直肠癌细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨肿瘤坏死因子受体相关蛋白1(TRAP1)在结直肠癌中的表达情况及对结直肠癌细胞增殖和凋亡的影响。方法通过Oncomine数据库分析TRAP1在结直肠癌组织和正常肠黏膜组织中的表达,Western blot检测TRAP1在结直肠癌组织及其配对癌旁黏膜组织、LOVO、HT29、HCT116、RKO、SW480、NCM460细胞中的表达及干扰TRAP1对细胞周期相关蛋白、凋亡相关蛋白及PI3K/AKT通路的影响,CCK-8检测TRAP1对结直肠癌细胞增殖的影响,平板克隆实验检测TRAP1对结直肠癌细胞克隆形成能力的影响,流式细胞术检测TRAP1对细胞周期及凋亡的影响。结果生物信息学分析显示TRAP1在结直肠癌中的表达高于正常肠黏膜组织,Western blot结果显示TRAP1在结直肠癌组织和细胞中蛋白表达水平均高于正常组织和细胞(P<0.05),干扰TRAP1的表达可以显著抑制SW480细胞的增殖及克隆形成能力(P<0.05),并且将细胞阻滞在G0/G1期,增加细胞凋亡(P<0.01),细胞周期相关蛋白CyclinD1表达降低,凋亡相关蛋白Cleaved-Casp...     

多纳非尼抑制胆管癌TFK-1细胞增殖、迁移和侵袭及促进凋亡的机制研究

目的 研究多纳非尼抑制人胆管癌TFK-1细胞增殖、迁移和侵袭及促进凋亡的机制。方法 将人胆管癌TFK-1细胞分为对照组（加入等量的二甲基亚砜处理）,2、5、10μmol/L多纳非尼组。CCK-8法检测细胞增殖抑制率;平板克隆实验检测细胞增殖情况;流式细胞术检测细胞凋亡;Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力;蛋白质免疫印迹法检测通路蛋白Wnt、β-catenin、细胞周期蛋白-D1(Cyclin D1)、抗凋亡蛋白Bcl-2、促凋亡蛋白Bax的表达;免疫荧光实验检测β-catenin进入细胞核的变化。结果 随着多纳非尼浓度增加,TFK-1细胞增殖抑制率、凋亡率升高,平板克隆形成数、细胞迁移和侵袭数量逐渐减少,Wnt、β-catenin、Cyclin D1、Bcl-2表达均逐渐下降,Bax表达逐渐增高（P<0.05）;免疫荧光显示,与对照组比较,2μmol/L多纳非尼组能够抑制β-catenin进入细胞核（P<0.05）。结论多纳非尼可以抑制人胆管癌TFK-1细胞增殖、迁移和侵袭,其机制可能与抑制Wnt/β-catenin通路活化及促进细胞凋亡相关。     

全反式维甲酸对高糖诱导肾小管上皮细胞增殖及凋亡的影响

摘要： 目的 探讨全反式维甲酸 （ATRA） 对高糖诱导人 HK-2 细胞增殖及凋亡的影响, 以期延缓糖尿病肾病（DN）。方法 体外培养 HK-2 细胞, 随机分为 6 组： 空白组 （未加任何刺激物）、 高糖组 （加 D-葡萄糖 30 mmol/L）、 高渗组 （加入甘露醇 24.5 mmol/L）、 低浓度 ATRA 组 （加入 ATRA 1×10-7 mol/L+D-葡萄糖 30 mmol/L）、 中浓度 ATRA 组（加入 ATRA 1×10-6 mol/L+D-葡萄糖 30 mmol/L）、 高浓度 ATRA 组 （加入 ATRA 1×10-5 mol/L+D-葡萄糖 30 mmol/L）。各组细胞培养 48 h。MTT 法检测各组细胞增殖情况, 流式细胞术检测各组细胞凋亡情况。结果 空白组与高渗组细胞光密度 （OD） 值和凋亡率差异无统计学意义。高糖组较空白组、 高渗组细胞增殖减少, 凋亡率增加; 低浓度、 中浓度、 高浓度 ATRA 组细胞增殖均较高糖组增加, 且低、 中及高浓度 ATRA 组依次增加, 凋亡率较高糖组减少, 且低、 中及高浓度 ATRA 组依次减少 （均 P＜0.05）。结论 ATRA 可促进高糖诱导的 HK-2 细胞增殖, 抑制其凋亡, 并与 ATRA 浓度可能具有一定的依赖性。     

芍药苷对人上皮性卵巢癌HO8910细胞增殖、凋亡及迁移的影响及其机制研究

目的 观察芍药苷（Paeoniflorin,PF）对人上皮性卵巢癌HO8910细胞增殖、凋亡及迁移能力的影响,并探讨其可能的作用机制。方法 培养人上皮性卵巢癌HO8910细胞,随机分为对照组、芍药苷低剂量组、芍药苷中剂量组、芍药苷高剂量组。芍药苷低、中、高剂量组分别在加入0.5、1与2 mg·mL^-1芍药苷的DMEM培养液中培养48 h。采用四甲基偶氮唑蓝法（MTT）检测HO8910细胞增殖抑制率;TUNEL染色法检测细胞凋亡率;细胞划痕实验检测HO8910细胞迁移率;免疫蛋白印迹技术（Western blot）分析核因子-κB（NF-κB) p56、Bcl-2、caspase-3蛋白的表达。结果 与对照组相比,芍药苷对HO8910细胞增殖、迁移率有明显的抑制作用并促进其凋亡（P<0.05）,这种作用呈现剂量依赖性;芍药苷处理组细胞内caspase-3表达水平较对照组明显升高（P<0.05）,Bcl-2、核因子-κB p56表达水平较对照组明显降低（P<0.05）,且呈现剂量依赖性（P<0.05）。结论 芍药苷可明显抑制HO8910细胞的增殖,诱导其凋亡;其机制部分可能与阻断核因子-κB通路有关。     

四丁基丙二胺对人MG63骨髓瘤细胞增殖、凋亡和迁移能力的影响

目的分析新多胺类似物四丁基丙二胺(tetrabutylpropanediamine,TBP)对人骨髓瘤MG63细胞生长的影响及其机制。方法 MTT法用于分析细胞增殖,流式细胞分析用于细胞周期和凋亡细胞鉴定,琼脂糖凝胶电泳用于分析DNA片段化,Western blot用于分析细胞凋亡相关蛋白的表达水平,Transwell技术用于分析细胞的迁移能力。结果TBP明显抑制MG63细胞的增殖和迁移能力,抑制效应呈时间和剂量依赖性。流式细胞分析发现,TBP干扰细胞周期,导致G1和G2期细胞比例升高,但S期细胞比例明显下降,同时凋亡细胞数量大幅增加。TBP处理后,细胞染色体DNA出现凋亡细胞典型的DNA片段化现象,细胞质中促凋亡蛋白Bax和细胞色素C含量明显升高。结论 TBP具有抑制人骨髓瘤MG63细胞增殖的药理活性,其机制与抑制细胞周期和诱导细胞凋亡有关,提示TBP具有用于临床骨髓瘤治疗的潜在价值。     

甲氨喋呤对血管平滑肌细胞增殖、迁移和凋亡的影响

目的　观察甲氨喋呤 (MTX)对体外培养的血管平滑肌细胞增殖、迁移和凋亡的影响。方法　体外培养兔胸主动脉血管平滑肌细胞 ,在培养基中加入不同浓度的MTX ,采用细胞计数及检测细胞周期的方法观察MTX对细胞增殖的影响 ,采用细胞刮片的方法观察MTX对细胞迁移的作用 ,采用检测DNA片断化的方法观察细胞凋亡现象。结果　①MTX在 2 5～ 10 0nmol·L-1的浓度范围内呈剂量依赖性地抑制VSMC增殖。② 2 5nmol·L-1及 5 0nmol·L-1MTX显著增加细胞周期中S期细胞的百分含量 ,减低G2 /M期细胞的百分含量 (P <0 0 5 ) ,10 0nmol·L-1MTX显著增加了G0 /G1期细胞的百分含量 (P <0 0 1)。③加入MTX的VSMC对血清刺激的迁移受到抑制。④ 10 0nmol·L-1及 2 0 0nmol·L-1的MTX作用于VSMC后 ,流式细胞仪检测亚二倍体的细胞数高于对照组 (P <0 0 1) ;DNA凝胶电泳可以见到梯形条带 ;TUNEL染色阳性细胞的百分数高于对照组 ,具有统计学差异 (P <0 0 1)。结论　甲氨喋呤能够抑制体外培养的血管平滑肌细胞增殖和迁移 ,并促进细胞凋亡。     

去氧鬼臼毒素抑制肺癌 NCI-H358 细胞增殖和 体外迁移的研究

摘要： 目的 探讨去氧鬼臼毒素对人肺癌 NCI-H358 细胞增殖和体外迁移的影响, 并初步探讨其作用机制。方 法 应用 CCK-8 法、 流式细胞术、 细胞划痕实验和 DCFH-D 法分别检测去氧鬼臼毒素对 NCI-H358 细胞增殖、 周期 分布、 凋亡、 体外迁移能力和细胞内活性氧（ROS）的影响, 并通过 Western blot 检测去氧鬼臼毒素对细胞周期蛋白 （Cyclin） B1、 细胞分裂周期蛋白 25 同源蛋白 （Cdc25c）、 细胞周期蛋白依赖性激酶 （CDK） 1、 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶 （Caspase） -3、 p53 肿瘤蛋白、 B 淋巴细胞瘤 （Bcl） -2 和基质金属蛋白酶 （MMP） 9 的表达水平, 以及细胞外信号调节激 酶（ERK） 1/2、 p38 分裂原激活蛋白激酶（MAPK）和 c-Jun 氨基末端激酶（JNK）的磷酸化水平的影响。结果 去氧鬼 臼毒素能明显抑制肺癌 NCI-H358 细胞的生长, 流式细胞结果显示其能诱导细胞停滞在 G2/M 和 S 期, 诱导细胞凋 亡和细胞 ROS 产生, 同时细胞体外迁移能力也明显下调。Western blot 结果显示, 去氧鬼臼毒素能使 Cyclin B1、 Cdc25c、 CDK1、 Bcl-2 和 MMP9 的蛋白表达明显下调, 而 Caspase-3 和 p53 的表达明显上调, 且 ERK1/2、 p38MAPK 和 JNK 的磷酸化水平明显受到抑制。结论 去氧鬼臼毒素可抑制肺癌 NCI-H358 细胞的增殖和体外迁移, 是一种潜在 的抗肿瘤药物