跨膜接头蛋白CBP对皮肤鳞癌细胞A431生长增殖的负调控作用研究

背景与目的：跨膜接头蛋白(Csk-binding protein,CBP)是新发现的Src家族成员,与多种肿瘤的发生有关。该研究旨在观察CBP基因过表达对皮肤鳞癌细胞系A431增殖及细胞凋亡的影响,探讨其相关的分子机制。方法：构建CBP-增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)融合蛋白的慢病毒过表达载体,采用反转录病毒转染的方法建立CBP过表达的A431细胞株。实验分为亲本细胞组(未进行基因转染的A431细胞)、对照组(A431细胞转染仅含EGFP阴性对照病毒)和实验组(A431细胞转染CBP-EGFP病毒)。在激光共聚焦显微镜下观察细胞转染率,验证转染成功与否;CCK-8法检测CBP过表达对A431细胞增殖能力的影响,并采用流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测对细胞凋亡的影响;实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)和蛋白［质］印迹法(Western blot)检测Lck、Csk和Fyn三种上游信号转导分子分别在mRNA和蛋白中的表达水平变化。结果：建立了稳定过表达CBP的A431细胞株;CCK-8法结果提示,CBP过表达明显抑制细胞生长,第2~6天的组间差异有统计学意义(P<0.05);FCM检测显示,实验组细胞凋亡率显著增加,与亲本细胞组及对照组相比差异有统计学意义(P<0.001);RTFQ-PCR结果显示,实验组A431细胞Lck mRNA的相对表达水平显著下调(P<0.001),实验组细胞Csk和Fyn mRNA的表达分别约为亲本细胞组的1.6倍和3.8倍,表达显著上调(P<0.001);Western blot结果表明,实验组Lck蛋白的相对表达水平明显下降(P<0.001),实验组细胞Csk和Fyn蛋白与亲本细胞组和对照组相比表达明显增加(P<0.001)。结论：CBP过表达可抑制皮肤鳞癌细胞增殖,诱导细胞凋亡及坏死。CBP通过调节上游信号转导通路中的蛋白酪氨酸激酶Lck、Csk和Fyn来调控细胞的增殖活性。     

特异性下调CXCR4表达对食管鳞癌细胞迁移侵袭能力的影响

目的:探讨特异性下调CXCR4分子的表达对食管鳞癌细胞系TE-1迁移侵袭能力的影响。方法:根据CXCR4基因序列,设计合成CXCR4特异性小干扰RNA,采用siRNA技术下调CXCR4的表达,转染48h后,RT-PCR和Western blot检测各组细胞CXCR4在mRNA水平和蛋白质水平表达,通过Traswell小室实验检测细胞系迁移侵袭能力的差异。结果:小干扰RNA下调CXCR4表达后,Western blot和RT-PCR证实TE-1细胞中CXCR4表达明显下调,Traswell小室实验证实,下调CXCR4表达后,TE-1细胞的体外迁移侵袭潜能显著降低。结论:小干扰RNA下调CXCR4基因后,降低了食管鳞癌细胞TE-1的迁移侵袭能力,CXCR4表达水平与食管鳞癌的迁移侵袭能力呈正相关,抑制CXCR4表达能够使食管鳞癌细胞迁移侵袭能力明显降低。     

RACK1对食管鳞癌细胞侵袭转移能力的抑制作用

目的:探讨RACK1表达水平与食管鳞状细胞癌不同转移潜能细胞侵袭转移能力的关系.方法:Transwell实验检测食管鳞癌EC9706-H、EC9706-L和EC109-H、EC109-L细胞的转移潜能;利用RT-PCR和Western blot方法,检测食管鳞癌高低转移细胞系EC9706-H、EC9706-L和EC109-H、EC109-L中RACK1的mRNA和蛋白表达水平.利用慢病毒转染技术上调RACK1低表达细胞中RACK1的表达后,采用Transwell实验检测其侵袭和迁移能力的变化.结果:EC9706-H细胞和EC109-H细胞的体外侵袭和迁移能力显著高于EC9706-L和EC109-L细胞系.RT-PCR和Western blot实验结果显示,RACK1在EC9706-H细胞和EC109-H细胞中呈低表达;而在EC9706-L细胞和EC109-L细胞中呈高表达.通过慢病毒转染技术上调EC9706-H和EC109-H细胞系中RACK1的表达,二者的侵袭转移能力明显降低.结论:RACK1表达水平与食管鳞癌细胞的侵袭转移能力负相关,过表达RACK1能够抑制食管鳞癌细胞的侵袭转移能力.这提示,RACK1在食管鳞癌的侵袭转移中发挥重要作用,有可能成为其诊断、治疗及预后评估的新靶点.     

下调细胞分裂周期蛋白45基因表达对宫颈鳞癌细胞发展的影响

目的 探究下调细胞分裂周期蛋白45(Cdc45)基因表达对宫颈鳞癌细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响。方法 免疫组化法检测70例宫颈鳞癌患者和35例子宫脱垂患者的正常宫颈组织中Cdc45蛋白的表达,分析Cdc45蛋白表达与患者临床病理参数的关系。利用细胞转染技术下调宫颈鳞癌Hela细胞中Cdc45基因表达,采用CCK-8法、划痕实验及Transwell细胞侵袭实验分别检测下调Cdc45基因表达对Hela细胞增殖、迁移及侵袭能力的变化。结果 宫颈鳞癌组织中Cdc45蛋白高表达率高于正常宫颈组织(χ²=7.620,P=0.006),且低分化宫颈鳞癌组织中Cdc45蛋白高表达率高于高中分化宫颈鳞癌组织(χ²=7.565,P=0.005)。与对照组比较,Cdc45-SiRNA-1组Hela细胞增殖受到抑制,迁移、侵袭能力下降(t=4.093,P=0.003;t=4.684,P=0.009;t=6.847,P=0.002)。结论 Cdc45在宫颈鳞癌组织中表达高于正常宫颈组织,其可能作为致癌基因促进宫颈鳞癌细胞的增殖、迁移及侵袭。     

沉默GLUT-1表达对食管鳞癌细胞株TE-13增殖和迁移的影响

目的：研究沉默葡萄糖转运蛋白-1（glucose transporter protein-1,GLUT-1）的表达对食管鳞癌TE-13细胞增殖、周期及迁移的影响及可能的作用机制。方法采用慢病毒感染的方法将特异性针对GLUT-1基因的GLUT-1-shRNA转入TE-13细胞,建立稳定干扰GLUT-1表达的TE-13细胞株,分成GLUT-1-shRNA组和阴性对照组进行对比研究。采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测GLUT-1-shRNA对TE-13细胞GLUT-1 mRNA及其蛋白表达的影响。CCK-8法、FCM法和Transwell小室迁移实验分别检测沉默GLUT-1表达后对TE-13细胞增殖、细胞周期和迁移的影响;同时采用蛋白质印迹法检测细胞迁移以及乏氧相关蛋白的表达情况。结果采用慢病毒将GLUT-1-shRNA转入TE-13细胞后,可明显下调GLUT-1蛋白（t=6.713,P<0.01）和mRNA的表达水平（t=4.181,P<0.05）。与阴性对照组相比,GLUT-1干扰后细胞的增殖至72 h（t=3.097,P<0.05）和96 h（t=3.497,P<0.05）明显被抑制,同时细胞的迁移能力可见下降,但是细胞周期至24 h未见影响;基质金属蛋白酶的MMP-9（t=6.895,P<0.01）和缺氧诱导因子HIF-1α（t=13.74,P<0.001）的表达明显下调,但是MMP-2的表达没有变化（t=2.582,P>0.05）。结论沉默GLUT-1的表达可抑制食管磷癌细胞株TE-13细胞的增殖和迁移,并明显下调细胞内MMP-9和HIF-1α蛋白的表达,为寻找靶向治疗食管癌新靶点提供了初步的实验基础。     

缺氧对胃癌细胞 BMPR -1A 表达及其侵袭和迁移能力的影响

目的：检测胃癌细胞中BMPR-1A在常氧和缺氧条件下的表达;探讨两种不同条件下BMPR-1A的不同表达对胃癌细胞侵袭和迁移的影响.方法：常氧条件下（氧气浓度20%）常规培养胃癌细胞SGC7901和MKN28;缺氧条件下（氧气浓度1%）用二氧化碳/氧气/氮气三气培养箱培养胃癌细胞SGC7901和MKN28 24小时.分别用蛋白质免疫印迹（Western blot）和实时定量聚合酶链反应（RT-PCR）的方法在蛋白水平和mRNA水平测定BMPR-1A的表达,以明确BMPR-1A在常氧与缺氧两种不同条件下的差异性表达;同时以Transwell实验检测在常氧和缺氧条件下由于BMPR-1A的差异性表达对胃癌细胞SGC7901和MKN28侵袭和迁移的影响.结果：缺氧条件下刺激胃癌细胞24h后,无论是在蛋白水平还是mRNA水平,BMPR-1A表达明显下降;Transwell实验结果也显示胃癌细胞接受缺氧刺激后其侵袭和迁移能力显著增强.结论：缺氧有增加胃癌细胞侵袭和迁移的能力,该作用机制可能与缺氧导致BMPR-1A的表达下降有关.     

干扰HMGB1基因表达对食管鳞癌细胞侵袭迁移及放射敏感性的影响

目的：探讨干扰HMGB1基因对X线照射后食管鳞癌细胞增殖活性、存活能力及侵袭、迁移能力的影响及其机制。方法：构建含有HMGB1 shRNA的慢病毒载体并转染人食管鳞癌EC9706细胞（HMGB1 shRNA组）,并以转染阴性序列的细胞为对照组,两组均设置X射线照射和未照射2个亚组。采用Western blot法评估HMGB1基因的干扰效果;MTS法和集落形成实验分别检测食管鳞癌EC9706细胞的增殖活性和存活能力;划痕实验和Transwell小室实验分别检测干扰HMGB1基因对EC9706细胞迁移和侵袭能力的影响;流式细胞术和Western blot分别检测照射后各组的细胞凋亡率及上皮间质转化（EMT）相关蛋白的表达。结果：与阴性对照组比较,Western blot结果显示干扰HMGB1基因明显降低了HMGB1蛋白的表达（P < 0.01）,MTS法检测结果显示X射线照射后干扰HMGB1显著抑制了食管鳞癌细胞的增殖水平（P < 0.05）,集落形成实验结果显示HMGB1 shRNA组细胞的放射敏感性明显增加（P < 0.01）。划痕实验结果显示,X射线照射后HMGB1 shRNA组细胞24 h的划痕愈合率为（20.78±4.38）%,低于阴性对照组的（39.02±3.25）%（P < 0.01）。Transwell实验结果显示X射线照射后HMGB1 shRNA组细胞在3.5 h的迁移细胞数为（67.00±16.56）个,低于阴性对照组的（194.00±19.74）个（P < 0.01）。流式细胞术结果显示,X射线照射后阴性对照组细胞凋亡率为（13.64±1.24）%,HMGB1shRNA组细胞凋亡率为（20.67±1.38）%;与阴性对照组比较,X射线照射后HMGB1 shRNA组细胞E-cadherin表达显著增加,而Ncadherin、Vimentin、MMP-2、MMP-9的表达明显降低（均为P < 0.01）。结论：干扰食管鳞癌细胞中HMGB1基因的表达后经X射线照射,降低了肿瘤细胞的增殖、侵袭、迁移水平和存活能力,诱导了细胞凋亡,增加了放射敏感性,并调控EMT相关蛋白的表达。     

和厚朴酚对人皮肤鳞癌细胞A431增殖凋亡作用及可能的机制分析

目的:研究和厚朴酚（Honokial,HNK）对人皮肤鳞癌细胞A431增殖凋亡作用及可能的机制分析。方法:采用CCK8实验方法检测和厚朴酚对A431细胞增殖的影响;Western blot定量分析和厚朴酚对Bcl-2和Bad蛋白表达的影响;Western blot定分析和厚朴酚对A431细胞中p53蛋白表达的影响;利用p53过表达腺病毒,并联合应用药物,通过CCK8和Western blot方法分析和厚朴酚对细胞增殖和凋亡的影响。结果:和厚朴酚以浓度和时间依赖性地抑制A431细胞增殖,并诱导其凋亡,上升Bad蛋白水平,下调Bcl-2蛋白水平;和厚朴酚可上调A431细胞中p53蛋白表达水平;加入p53过表达腺病毒可增强和厚朴酚的作用,抑制细胞增殖,促进细胞凋亡。结论:和厚朴酚能够抑制人皮肤鳞癌细胞A431的增殖并诱导凋亡,其机制可能与p53信号通路有关。     

敲低远端上游元件结合蛋白1的表达对胰腺癌细胞侵袭迁移能力的影响

目的:研究敲低远端上游元件结合蛋白1(FUBP1)的表达对胰腺癌细胞增殖和侵袭迁移能力的影响.方法:细胞转染干扰序列siFUBP1降低胰腺癌细胞PaTu8988中FUBP1的表达,FUBP1-nc作为阴性对照.CCK-8实验检测细胞增殖能力,细胞划痕实验和Transwell实验检测细胞侵袭迁移能力.结果:敲低胰腺癌细胞...     

ZEB1过表达对乳腺浸润性导管癌细胞增殖与转移潜能影响

目的乳腺浸润性导管癌(breast invasive carcinoma,BRCA)在乳腺癌中最常见,比导管原位癌恶性程度更高,预后和治疗效果不乐观。本研究通过检测BRCA细胞中E盒锌指结合蛋白(zinc finger E-box binding homeobox 1,ZEB1)的表达,分析其过表达对人BRCA细胞体外增殖、迁移和侵袭能力的影响,探讨其与BRCA发生发展的关系。方法通过蛋白质印迹法检测BRCA细胞中ZEB1蛋白水平的表达情况,另构建过表达ZEB1BRCA细胞并通过蛋白质印迹法确认其过表达水平。采用细胞计数盒8(cell counting kit 8,CCK8)法和Transwell实验分别检测过表达ZEB1对BRCA细胞增殖、迁移和侵袭的影响。结果蛋白质印迹法结果显示,ZEB1在BRCA细胞HCC38和BT474中的表达分别为0.28±0.02和0.22±0.01,低于正常乳腺上皮细胞(0.90±0.06),差异有统计学意义,t值分别为23.56和18.33,均P<0.001。CCK8实验结果显示,HCC38细胞ZEB1过表达组和Vector组经2因素分析结果显示F组别=6.610,P组别=0.042;F时间=9.236,P时间=0.963;F组别×时间=26.287,P组别×时间<0.001。这表明处理药物的主效应差异有统计学意义,而且药物与时间存在协同作用。ZEB1过表达组在第4天和第5天时的细胞增殖活性低于Vector组,且差异有统计学意义(t4d=4.370,P4d=0.001;t5d=5.627,P5d=0.001);BT474细胞ZEB1过表达组和Vector组经2因素分析结果显示F组别=6.737,P组别=0.039;F时间=14.619,P时间=0.921;F组别×时间=267.723,P组别×时间<0.001。这表明处理药物的主效应差异有统计学意义,而且药物与时间存在协同作用。BT474细胞ZEB1过表达组在第4天和第5天时,细胞增殖活性低于Vector组,差异有统计学意义(t4d=3.682,P4d=0.001;t5d=6.819,P5d<0.001)。Transwell迁移和侵袭实验发现,在HCC38细胞中过表达ZEB1,细胞迁移数目为41±7.94,少于Vector组82.33±7.09,t=4.28,P=0.003;在BT474细胞中过表达ZEB1,细胞迁移数目为44.33±6.11,也少于对应的Vector组89.33±5.69,t=5.51,P=0.006;过表达ZEB1的HCC38细胞,细胞侵袭数目为22.33±4.04,少于对照66.33±8.74,t=2.41,P=0.001;过表达ZEB1的BT474细胞,细胞侵袭数目为21.33±2.52,少于Vector组62.67±6.66,t=3.07,P=0.004。结论ZEB1在BRCA细胞中低表达,过表达ZEB1抑制BRCA细胞的增殖、迁移和侵袭能力。     

食管鳞癌中LncRNA DLEU1的表达及对食管鳞癌细胞增殖和迁移的影响

目的 研究长链非编码RNA淋巴细胞白血病缺失基因1(DLEU1)在食管鳞状细胞癌(ESCC)组织中的表达,及其对肿瘤细胞增殖和迁移的影响.方法 收集58例手术切除的ESCC及其相应癌旁组织,RT-qPCR检测ESCC组织和细胞中DLEU1的表达水平.Log rank Test法分析ESCC组织中DLEU1的表达与患者临...     

HMGB1 在食管鳞癌中的表达及其意义*

目的：初步探讨食管鳞癌中高迁移率蛋白B1（HMGB 1）的表达及其与淋巴结转移和患者预后的关系。方法：收集72例有完整临床及随访资料的胸段食管鳞癌石蜡标本,采用免疫组织化学染色和统计学的方法,观察HMGB 1 和VEGF-C、VEGF-D 、LYVE-1 在食管鳞癌组织中的表达,并分析HMGB 1 与VEGF-C、VEGF-D 、微淋巴管密度（MLD）、淋巴结转移及各种临床病理参数和患者预后之间的关系。结果：HMGB 1 在食管鳞癌组织中呈高表达,阳性率达69.44% ,而在正常组织中很少表达,并且有淋巴结转移的表达率为81.82% ,无淋巴结转移的表达率为58.97% ,有显著性差异（P<0.05）。 另外,HMGB 1 的表达与食管鳞癌的分期、VEGF-C、VEGF-D 的表达、MLD及患者的预后密切相关（P<0.05或P<0.01）;同时,VEGF-C、VEGF-D 的表达也与食管鳞癌的淋巴结转移、MLD密切相关（P<0.05或P<0.01）。 结论：在食管鳞癌中,HMGB 1 的大量表达可能是通过调控VEGF-C、VEGF-D 的表达来促进新生淋巴管生成,从而促进其淋巴结转移并影响患者的预后。因此,HMGB 1 有可能作为反映食管癌预后的重要生物学指标及抗食管癌淋巴管生成的重要靶点。     

Transmembrane Protein 166 Expression in Esophageal Squamous Cell Carcinoma in Xinjiang,China

Objective: Transmembrane protein 166 (TMEM166) expression in esophageal squamous cell carcinoma(ESCC) and remote normal esophageal tissues was examined to assess any role in tumour biology. Methods:TMEM166 mRNA expression in 36 cases with ESCC (36 tumour samples, 36 remote normal esophageal tissuesamples) was detected by RT-PCR. TMEM166 protein expression was analysed in paraffin-embedded tissuesamples from the same cases by immunohistochemistry. Results: Semi-quantitative analysis showed TMEM166mRNA expression in ESCCs to be significantly lower than in remote normal esophageal tissues (0.759±0.713 vs.2.622±1.690, P=0.014). TMEM166 protein expression was also significantly reduced (69.4% vs. 94.4%, P<0.01).Conclusion: TMEM166 mRNA and protein expression demonstrated significant reduction in ESCCs comparedwith remote esophageal tissues, albeit with no correlation with tumour size, differentiation, stage, and lymphnode metastasis, suggesting a role in regulating autophagic and apoptotic processes in the ESCC.     

NOB1在宫颈鳞癌中的表达及其临床意义

[目的]探讨NOB1在宫颈鳞癌组织中的表达及其与临床病理因素和预后的关系。[方法 ]采用免疫组织化学SP法检测157例宫颈鳞癌、54例宫颈上皮内瘤样病变（CIN）及42例宫颈正常组织中NOB1的表达。[结果 ]宫颈正常组织、CIN组织和宫颈鳞癌组织NOB1的表达阳性率分别为5.0%、29.6%和73.8%,差异有统计学意义（P〈0.001）。NOB1在宫颈癌中的表达与肿瘤分化程度及是否淋巴结转移有关（P〈0.05）;而与患者年龄、肿瘤直径、临床病理分期及浸润深度无明显相关（P〉0.05）。NOB1阳性表达患者的5年累积生存率较阴性表达者低（P〈0.01）。[结论]NOB1的表达与宫颈鳞癌的临床病理因素及预后有一定关系,其高表达可能在宫颈癌发生、发展中起重要作用,并很可能成为潜在的治疗靶点及预测宫颈癌预后的有价值的分子标志物。     

CRIPTO-1在官颈鳞癌组织中的表达及临床意义

目的探讨CRIPTO-1在宫颈鳞癌组织中的表达及临床意义。方法采用免疫组化和原位杂交法检测90例宫颈鳞癌、30例宫颈上皮内瘤变及30例正常宫颈黏膜组织中CRIPTO．1蛋白及mRNA的表达情况,并分析其表达与宫颈鳞癌临床病理特征的关系。结果CRIPTO-1蛋白在宫颈鳞癌组织中的阳性表达率（65．6％）高于宫颈上皮内瘤变组织（60．0％）及正常宫颈黏膜组织（10．0％）,差异有统计学意义（r=28．571,P〈0．001）。CRIPTO-1蛋白过表达与癌的浸润深度、淋巴结转移及TNM分期均关系密切（,分别为10．676、9．718及11．227;P均〈0．05）。CRIPTO-1mRNA在宫颈鳞癌组织中的阳性表达率（45．6％）高于宫颈上皮内瘤变组织（23．3％）及正常宫颈黏膜组织（10．0％）,差异有统计学意义（χ2=14．577,P=0．001）。CRIPTO．1mRNA过表达与癌的浸润深度、淋巴结转移及TNM分期均关系密切（χ2分别为13．741、4．720及30．170;P均〈0．05）。CRIPTO-1蛋白及mRNA的表达呈正相关关系（r=0．287,P=0．006）。结论CRIP—TO-1的过表达可能与宫颈鳞癌的发生、发展有关,并对判断宫颈鳞癌患者的生物学行为有-定意义。     

食管鳞癌中ICAM-1蛋白的表达及意义

目的 研究细胞间粘附分子-1(ICAM-1)在食管鳞癌组织中的表达及意义.方法 采用免疫组织化学S-P法检测49例食管鳞癌组织及38例正常食管黏膜组织中ICAM-1蛋白的表达.结果 食管鳞癌组织中ICAM-1蛋白表达率为46.9%(23/49),显著高于其在正常食管黏膜组织中的表达0.0%(0/38);ICAM-1蛋白表达率在有淋巴结转移组明显高于无淋巴结转移组;其表达率随癌组织浸润深度的加深而增加;在不同分化程度的癌组织中其阳性率也有一定差异,Ⅰ级与Ⅱ、Ⅲ级之间差异有统计学意义(P＜0.05).结论 ICAM-1在食管鳞癌的发生发展中起重要作用,与肿瘤的浸润转移密切相关.     

The Expression of Invasive Behavior of Differentiated Squamous Carcinoma Cell Line Evaluated by an in vitro Invasion Model

In order to elucidate the factors contributory to the expression of invasiveness of oral squamous cell carcinoma, we conducted biochemical and morphological comparisons of well differentiated squamous carcinoma cell line OSC-19 (oral squamous cell carcinoma) and undifferentiated carcinoma cell line KB, both cultured on 3T3 cell-embedded collagen gel ( in vitro invasion model). OSC-19 cells invaded 3T3 cell-embedded collagen gel, while KB cells and OSC-19 cells on 3T3 cell-free gel matrix were less invasive. Cultured OSC-19 cells were characterized by lower proliferating activity, lower secretion of laminin and higher secretion of fibronectin than those of KB cells. Although the basement membrane with deposition of laminin and type IV collagen was formed, it was discontinuous at the invasion front. Gelatin zymography and western blotting showed matrix metalloproteinases (MMP), i.e., 72 kDa gelatinase (MMP-2) and 92 kDa gelatinase (MMP-9). Gelatinolytic activity was assayed, and was higher in OSC-19 cells than in KB cells or OSC-19 cells of the 3T3 cell-free model. By immuno-histochemical analysis, MMP-2-positive cells were found scattered in both cell lines without any preferential localization, and the positivity for MMP-9 was localized in the invasion front of OSC-19 cells. These results strongly suggest that the invasiveness of squamous cell carcinoma is well correlated with cell-matrix adhesion by fibronectin and with focal elaboration of metalloproteinases, especially MMP-9, which play a major role in degrading the extracellular matrix components.     

Mismatch Repair Protein Expression and Microsatellite Instability in Cutaneous Squamous Cell Carcinoma

There exist relatively sparse and conflicting data on high-level microsatellite instability (MSI-H) and deficient mismatch repair (dMMR) in cutaneous malignancies. We aimed to determine the expression profiles of MMR proteins (MSH2, MSH6, MLH1, and PMS2) in different progression stages of cutaneous squamous cell carcinoma (cSCC, 102 patients in total) by immunohistochemistry, and search for MSI-H in patients with low-level MMR or dMMR using multiplex-PCR. Low-level MMR protein expression was observed in five patients: One patient with primary cSCC < 2 mm thickness and low-level MLH1, three patients with primary cSCC > 6 mm (including one with low-level MSH2, as well as MSH6 expression, and two with low-level PMS2), and one patient with a cSCC metastasis showing low-level MSH2 as well as MSH6. Intergroup protein expression analysis revealed that MLH1 and MSH2 expression in actinic keratosis was significantly decreased when compared to Bowen’s disease, cSCC < 2 mm, cSCC > 6 mm, and cSCC metastasis. In cases with low-level MMR, we performed MSI-H tests revealing three cases with MSI-H and one with low-level MSI-L. We found low-level MMR expression in a small subset of patients with invasive or metastatic cSCC. Hence, loss of MMR expression may be associated with tumour progression in a small subgroup of patients with non-melanoma skin cancer.