抗纤灵对5/6肾切除大鼠肾组织α-SMA和Ⅰ型胶原的影响

目的采用5/6肾切除方法建立慢性肾衰竭动物模型,观察抗纤灵对5/6肾切除大鼠肾组织α-SMA和Ⅰ型胶原的影响。方法将SD大鼠随机分为假手术组和造模组,造模组以5/6肾切除方法建立慢性肾衰竭动物模型,1周后按血肌酐水平将造模大鼠分为模型组、福辛普利组和抗纤灵组。福辛普利组给予3.3mg.kg-1.d-1福辛普利灌胃,抗纤灵组给予23g.kg-1.d-1抗纤灵灌胃,模型组和假手术组给予等量生理盐水灌胃,8周后采用免疫组化、实时荧光定量PCR(RT-PCR)和蛋白免疫印迹法(Westernblot)测定各组大鼠肾组织α-SMA和Ⅰ型胶原基因和蛋白的表达。结果模型组大鼠肾组织中肾小管及间质区Ⅰ型胶原及α-SMA表达较假手术组明显升高(P<0.01),抗纤灵组与模型组比较均明显下降(P<0.01);模型组大鼠表达α-SMAmRNA和Ⅰ型胶原mRNA水平较假手术组明显升高(P<0.001),抗纤灵组与模型组比较均明显下降(P<0.01或P<0.05);模型组大鼠表达α-SMA和Ⅰ型胶原蛋白水平较假手术组明显升高(P<0.001),抗纤灵组与模型组比较均显著下降(P<0.001)。结论抗纤灵可降低肾间质成纤维细胞α-SMA的表达,减少肌成纤维细胞的活化与形成,继而使细胞外基质Ⅰ型胶原生成减少,从而延缓慢性肾衰竭大鼠肾纤维化进程,保护残肾功能。     

雌激素抑制受体型酪氨酸磷酸酯酶O促进小鼠肾足细胞增殖

目的观察雌激素对肾小球足细胞增殖的影响,探讨雌激素在小儿肾病综合症发病中的作用。方法用17β-Estradiol（E2）以及其拮抗剂tamoxifen刺激小鼠肾足细胞系MPC5。采用RT-PCR方法检测酪氨酸磷酸酯酶O（PTPRO）mRNA水平的表达。ERα和ERβ过表达载体转染入E2刺激后的MPC5中,RT-PCR检测PTPRO mRNA水平的表达。Western blot检测JAK/STAT信号通路各分子的表达。MTT法检测细胞增殖。结果PTPRO的表达随E2剂量的增加而减少,随E2拮抗剂tamoxifen剂量的增加而增加（P<0.05）。当E2结合ERα时,可抑制小鼠肾足细胞中PTPRO表达（P<0.05）。而当E2结合ERβ时,可彻底阻止小鼠肾足细胞中PTPRO表达。PTPRO对JAK1蛋白表达没有影响（P>0.05）,可提高JAK2、p-JAK2（Y1007）、STAT3以及 p-STAT3（Y705）蛋白的表达（P<0.05）。E2可促进肾小球足细胞的其增殖,而PTPRO过表达可抑制E2诱导的肾小球足细胞的增殖。结论雌激素可通过结合其受体ERα或者ERβ抑制小鼠肾足细胞PTPRO表达, 使JAK/STAT信号通路失活,促进肾小球足细胞增殖。     

二维剪切波弹性成像技术评估高血压肾病小鼠肾纤维化的应用价值

目的 探究二维剪切波弹性成像技术(2D-SWE)评估高血压肾病小鼠肾纤维化的应用价值。方法 将C57小鼠随机分为正常对照组、模型组。正常对照组10只使用微渗泵灌注生理盐水,模型组使用用微渗透泵灌注血管紧张素Ⅱ,模型组根据建模时间长短,分为高血压肾病Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组、Ⅳ组,每组各5只。测量造模前后小鼠血压变化情况;通过2D-SWE技术测定不同造模阶段小鼠的肾皮质硬度;透射电镜观察肾小球毛细血管基底膜结构;酶联免疫法检测尿素氮(urea nitrogen,BUN)、血肌酐(serum creatinine,Scr)和24 h尿蛋白定量(24 h urinary protein,24 h UP);HE染色和Masson染色检测肾组织病理损伤;Western Blot检测肾组织内α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、I型胶原蛋白(collagen-Ⅰ)、Ⅲ型胶原蛋白(collagen-Ⅲ)表达。结果 造模结束后小鼠血压明显上升;透射电镜观察到肾组织毛细血管内皮细胞损伤明显,基底膜节段性皱缩;其中高血压肾病Ⅲ组、Ⅳ组2D-SWE技术检测显示小鼠的肾皮质硬度测值显著升高;HE和Masson染色显示小鼠肾组织内肾小管损伤严重,甚至空泡变性,上皮细胞脱落,炎性细胞大量浸润,并伴随明显的纤维化;Western Blot结果显示 α-SMA、collagen-Ⅰ、collagen-Ⅲ的蛋白表达水平均升高。结论 2D-SWE技术检测的小鼠肾皮质硬度与小鼠肾纤维化程度呈正相关,2D-SWE技术对高血压肾病肾纤维化的评估具有重要的临床应用价值。     

实时剪切波弹性成像在诊断乙肝病毒肝纤维化患者中的价值

目的探讨实时剪切波弹性成像（SWE）诊断乙肝病毒（HBV）感染肝纤维化的价值及其影响因素。方法选取我院既往确诊的HBV感染肝纤维化患者137例作为纤维化组,选取同期HBV感染未出现肝纤维化的患者60例作为对照组,对比两组患者的SWE测定的肝脏弹性模量值,并根据不同的病理学纤维化程度分期进行分层分析;采用受试者工作曲线（ROC）分析SWE检测鉴别诊断肝纤维化患者的临床价值;采用Logistic回归方法分析影响SWE检测诊断肝纤维化的影响因素。结果纤维化组患者的肝脏弹性模量测定值高于对照组,差异具有统计学意义（P < 0.05）;不同病理学分期的肝纤维化患者肝脏弹性模量组间比较,差异具有统计学意义（P < 0.05）,S1~S4期肝脏弹性模量测定值逐渐增大;SWE测定肝脏纤维化值诊断肝纤维化的灵敏度为86.13%,特异度为85.00%,漏诊率为13.87%,误诊率为15.00%,ROC曲线下面积AUC值为0.889;Logistic回归模型分析显示,肝纤维化病理学分期越高、炎症分级越高与肝脏弹性模量值正确诊断肝纤维化呈正相关（P < 0.05）。结论SWE诊断HBV感染肝纤维化作为一种无创手段具有较高的灵敏度和特异度,但其诊断效能受到纤维化程度及炎症分级的影响。     

三期动态CT增强扫描联合超声支气管镜对周围型肺癌患者的诊断效能

目的  研究三期动态CT增强扫描联合超声支气管镜对周围型肺癌患者的诊断效能。方法  本研究为回顾性研究,将2018年1月~2020年1月在我院确诊的82例周围型肺癌患者设为观察组,另选取同期在我院进行健康体检的志愿者82例作为对照组。所有患者均采取三期动态CT增强扫描以及超声支气管镜检查,比较两组患者的CT值以及CT净增强值,分析单独检测以及联合检测对周围型肺癌的诊断效能。结果  观察组的CT值、强化峰值以及CT净增强值均高于对照组（P < 0.05）;Ⅲ~Ⅳ期患者的CT值、强化峰值以及CT净增强值均高于Ⅰ~Ⅱ期（P < 0.05）;不同病理分期患者的CT值、强化峰值以及CT净增强值之间的差异有统计学意义（P < 0.05）;联合诊断的特异性高于单独检测（P < 0.05）;联合诊断的曲线下面积高于单独检测（P < 0.05）。结论  采用三期动态CT增强扫描联合超声支气管镜对周围性肺癌患者具有很好的诊断效能,适宜推广应用。     

不同复温速度对亚低温治疗新生儿缺氧缺血性脑病的影响

目的探讨不同复温速度对亚低温治疗新生儿缺氧缺血性脑病（HIE）的影响。方法研究对象为36例亚低温治疗的HIE患儿,随机分为Ⅰ组（n=12,复温速度0.2 ℃/h）、Ⅱ组（n=12,复温速度0.3 ℃/h）及Ⅲ组（n=12,复温速度0.4 ℃/h）。治疗过程中动态监测心率、血压、脉氧饱和度,每日测定血糖、血象、肝肾功能、血钾,并于完成治疗后7、14、28 d根据NBNA评分评定短期疗效,生后3个月及6个月行Bayley婴儿发育量表评估中期疗效。结果（1）复温达标时Ⅲ组血糖明显高于Ⅰ组及Ⅱ组,差异有统计学意义（P<0.05）;Ⅲ组复温达标时血糖高于复温前,差异有统计学意义（P<0.05）;（2）平均动脉压波动：Ⅲ组平均动脉压波动大于Ⅰ组和Ⅱ组,差异有统计学意义（P<0.05）;（3）NBNA评分：生后7、14、28 dⅠ组及Ⅱ组NBNA评分明显高于Ⅲ组,差异有统计学意义（P<0.05）;（4）生后3 月及6 月Ⅰ组神经发育指数、心理运动发育指数均高于Ⅱ组及Ⅲ组,差异有统计学意义（P<0.05）。结论亚低温治疗时较慢的复温速度可维持更稳定平均动脉压及血糖水平,有利于改善脑灌注及代谢,起到保护神经功能并改善HIE预后,复温速度过快可能会增加血压波动及高血糖等不良反应的发生。      

曲尼司特对环孢素A慢性肾毒性大鼠肾脏TGF-β1、Ang Ⅱ及col Ⅲ的影响

目的:探讨曲尼司特(tranilast,TNL)对环孢素A(CsA)慢性肾毒性大鼠血清及肾脏血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)及肾脏转化生长因子-β1(TGF-β1)、Ⅲ型胶原(ColⅢ)的影响。方法:雄性SD大鼠24只,随机分成正常对照组、模型组、TNL治疗组、安博维治疗组。采用低盐饮食加CsA 20 mg/(kg.d)灌胃的方法建立CsA慢性肾毒性肾脏模型。观察TNL对大鼠肾脏病理及肾组织Ang Ⅱ、TGF-β1、ColⅢ的影响。结果:TNL能下调CsA慢性肾毒性大鼠血清及肾组织中AngⅡ的水平及肾组织TGF-β1、ColⅢ在肾脏的表达。结论:TNL可能通过抑制AngⅡ、TGFβ1及ColⅢ的表达而发挥其抗纤维化作用。     

抗菌药物治疗前后ⅢA型慢性前列腺炎患者TPSA的浓度变化

目的探讨抗菌药物治疗前后ⅢA型慢性前列腺炎（CP）患者总前列腺特异抗原（TPSA）的浓度变化,及其在慢性前列腺炎发生、发展及疗效评价中的意义。方法对68例不同类型ⅢA CP及38例非CP病例进行TPSA检测。对ⅢACP患者治疗前后均用电化学发光方法检测直肠指检前的TPSA浓度,分析各组TPSA的表达水平及组间差异。结果6例失随访,49例慢性前列腺炎治疗有效者,治疗后血清TPSA浓度较治疗前下降（P>0.05）,而13例治疗无效者,血清TPSA浓度较治疗前无明显下降(P>0.05）。结论ⅢA型慢性前列腺炎治疗前血清TPSA浓度升高,经抗菌药物治疗后随着炎症的消失,TPSA浓度可逐渐恢复正常,PSA浓度可作为ⅢA型慢性前列腺炎疗效评价的指标之一。      

虫草益肾颗粒对5/6肾切除大鼠残肾组织α-平滑肌肌动蛋白表达的影响

目的观察虫草益肾颗粒对5/6肾切除大鼠残肾组织α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)与I型胶原表达的影响,探讨虫草益肾颗粒抗肾脏纤维化的作用机制。方法取雄性Wistar大鼠90只,采用改良的5/6肾切除法制作肾脏纤维化模型,将大鼠随机分为假手术组、模型组、百令胶囊对照组、虫草益肾颗粒低、高剂量组。低、高剂量组分别给予虫草益肾颗粒275mg.kg-1.d-1与550mg.kg-1.d-1灌胃,对照组给予百令胶囊315mg.kg-1.d-1灌胃,其余两组给予等量的蒸馏水灌胃,均为1次/d。实验期间检测大鼠24h尿蛋白定量的变化。连续给药12周后处死大鼠,观察肾脏组织形态学的变化,用半定量方法计算肾小球硬化指数与肾小管损伤指数。用免疫组织化学方法检测残肾组织α-SMA与I型胶原的表达。结果虫草益肾颗粒能减少5/6肾切除大鼠尿蛋白的排出(P<0.05,P<0.01),减轻肾小球硬化与肾小管损伤程度(P<0.05,P<0.01),下调残肾组织α-SMA与I型胶原的表达(P<0.05,P<0.01)。结论虫草益肾颗粒可能通过减少5/6肾切除大鼠尿蛋白的排出,抑制肾组织α-SMA与I型胶原的表达,从而抑制参与肾脏纤维化的细胞增殖与转分化,起到延缓肾脏纤维化进展的作用。     

阴道镜宫颈活检联合 LEEP 术对宫颈癌前病变的诊断评价

目的评价阴道镜下宫颈活检联合宫颈环形电切术（LEEP术）对宫颈癌前病变的诊断准确性方法从2012年7月~2014年7月,收集到我院妇科门诊就诊行阴道镜检查及LEEP术治疗的87例患者。比较阴道镜下宫颈组织活检与LEEP术后组织病理结果。结果阴道镜下宫颈组织活检与LEEP术后组织病理总符合率为74.71%。以LEEP术后组织病理结果为标准,阴道镜诊断CINⅠ符合率为57.14%,诊断CINⅡ符合率为73.68%,诊断CINⅢ符合率为89.26%。其中,诊断CINⅢ的准确率高于CINⅠ（P<0.05）及CINⅡ（P<0.05）。CINⅡ与CINⅠ的差异无统计学意义（P<0.05）。结论阴道镜下宫颈组织活检有漏诊癌前病变及宫颈癌的风险。阴道镜联合LEEP术可实现宫颈癌前病变及宫颈癌的正确诊断。     

糖尿病肾病中肾小管上皮细胞-肌成纤维细胞转分化的意义

目的:通过糖尿病肾病(DN)患者肾脏标本及DN大鼠模型,探讨肾小管上皮细胞-肌成纤维细胞转分化(EMT)在DN中的意义。方法:肾穿刺活检取DN患者肾脏组织,通过Western blot检测E-cadherin及α-SMA蛋白的表达,免疫组化观察E-cadherin及α-SMA的表达,Real time-PCR检测ColⅠRNA基因的表达,并检测空腹血糖、血清肌酐及24h尿蛋白水平。注射链脲佐菌素建立大鼠DN模型,分别于建模后1、2、4、8、12及24周处死动物并取肾脏组织,并用上述同样方法检测相关指标。结果:DN患者中E-cadherin表达下降,α-SMA及ColⅠ mRNA表达上调。DN组大鼠肾组织α-SMA蛋白及ColⅠ mRNA水平明显高于正常对照组(P<0.05),E-cadherin蛋白表达显著低于正常对照组(P<0.05);相关分析结果提示,DN组大鼠α-SMA、ColⅠ的变化趋势与血糖、24h尿道白及肌酐的变化呈正相关;E-cadherin蛋白表达与上述生化指标的变化呈负相关。结论:EMT能够导致DN患者肾功能的下降,在DN进展中起重要作用。     

转化生长因子β1对肾小管上皮细胞转分化和细胞外基质成分的调节与阿魏酸钠的干预效果

背景：细胞外基质在肾间质的积聚是肾小管间质纤维化的主要特征。肾小管上皮细胞-肌成纤维细胞转分化在肾间质纤维化发病机制中起了重要作用。目的：从细胞水平观察阿魏酸钠对转化生长因子β1诱导的大鼠肾小管上皮细胞-肌成纤维细胞转分化及细胞外基质主要成分Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原和纤维粘连蛋白的影响。设计：以细胞为观察对象，随机对照实验：单位：四川大学华西医院肾脏科、材料：大鼠肾小管上皮细胞株NRK52E来源于American Type Culture Collection（ATCC），由澳大利亚Monash医学中心肾内科实验室提供，本实验所用细胞株为第36代。阿魏酸钠为白色晶体，可溶于水，纯度〉98．0％，由成都亨达药业有限公司提供，实验时终浓度分别125，250，500μmol／L。兔抗大鼠α平滑肌肌动蛋白多克隆抗体为武汉博士德产品；ELISA试剂盒为上海森雄公司产品；人重组转化生长因子β1为R＆D公司产品：DNA Engine Opdcon^TM实时荧光定量聚合酶链反应仪为MJ Research产品。方法：将体外培养的细胞株NRK52E分为5组；空白对照组：仅加入含血清的DMEM培养基；转化生长因子β1刺激组；培养液中加入终质量浓度为5ng/L的转化生长因子β1；阿魏酸钠低、中、高浓度组：培养液中加入终质量浓度为5ng／L转化生长因子β1和125，250，500μmol／L的阿魏酸钠。主要观察指标：应用相差显微镜、实时荧光定量聚合酶链反应、酶联免疫吸附法观察阿魏酸钠对转化生长因子β1诱导的NRK52E细胞转分化的作用及对细胞外基质主要成分胶原Ⅰ胶原Ⅲ和纤维粘连蛋白的影响。结果：①NRK52E细胞形态：与空白对照组相比，转化生长因子β1刺激组细胞在培养3d后，细胞株NRK52E从原有典型的铺路石样上皮细胞形态转变为长梭形类似成纤维细胞的形态。阿魏酸钠3个浓度组细胞受转化生长因子β1的刺激而出现的形态学改变得到不同程度的改善，并呈剂量依赖性。②α-平滑肌肌动蛋白mRNA表达：转化生长因子β1 5ng／L诱导6h后α-平滑肌肌动蛋白mRNA较空白对照组上升，在72h达高峰；经过不同剂量阿魏酸钠干预72h后α-平滑肌肌动蛋白mRNA显著下调并呈剂量依赖性（P〈0．05）。③细胞外基质变化；经转化生长因子β1 5ng／L诱导72h后，细胞培养上清中Ⅰ型胶原，Ⅲ型胶原和纤维粘连蛋白含量明显增加（P〈0．05）。经过不同剂量的阿魏酸钠干预后，不同程度地抑制了转化生长因子β1促Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原和纤维粘连蛋白增多的作用，并呈剂量依赖性（P〈0．05）。结论：转化生长因β1可以诱导大鼠肾小管上皮细胞-肌成纤维细胞转分化，刺激细胞外基质成分Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原和纤维粘连蛋白的升高。阿魏酸钠可剂量依赖性地抑制转化生长因子β1所导致的肾小管上皮细胞-肌成纤维细胞转分化作用。     

钠钾泵Scr复合体通过调控自噬影响幼年哮喘大鼠气道重塑的机制研究

目的 制备哮喘幼年大鼠模型,观察钠钾泵Scr复合体对哮喘幼年大鼠炎性因子及自噬的影响,探讨钠钾泵Scr复合体调控自噬改善幼年哮喘大鼠气道炎症、气道重塑的机制.方法 幼年SD大鼠100只随机分为空白对照组、模型组及钠钾泵Scr复合体低、中、高剂量组各20只.模型组及钠钾泵Scr复合体低、中、高剂量组制备哮喘模型.造模成功...     

植物药金边瑞香对小鼠肠道Peyer''''s结的影响

目的:采用环磷酰胺所致小鼠肠道黏膜相关淋巴组织损伤模型,观察植物药金边瑞香浸膏对小鼠肠道Peyer’s结的影响。方法:实验于2005-01/2005-08在赣南医学院分析实验室完成。44只昆明种小鼠随机分为正常组、金边瑞香组、金边瑞香 环磷酰胺组及环磷酰胺组4组,每组11只,给予正常组小鼠生理盐水灌胃,每天1次,每次0.02mL/g,连续7d;环磷酰胺组小鼠第7天1次腹腔注射100mg/kg环磷酰胺,其他同正常组;金边瑞香组用金边瑞香浸膏(浓度400g/L,由江西省中医药研究院提供,含生药量5g/mL,临用时用蒸馏水稀释至所需浓度,批号:050310)灌胃,每天1次,每次0.02mL/g,连续7d;金边瑞香 环磷酰胺组,方法同金边瑞香组和环磷酰胺组。第8天麻醉下脱颈椎处死全部动物,立即小心取出全小肠,肉眼观察其形态并计数小肠Peyer’s结的数量、随后用生理盐水冲洗肠腔,用针头小心取出Peyer’s结按常规方法制备细胞悬液后计数细胞。观察正常组、金边瑞香组、金边瑞香 环磷酰胺组及环磷酰胺组4组小鼠Peyer’s结,计数Peyer’s结细胞总数,比较Peyer’s结的数量及细胞数。结果:①正常组、金边瑞香组、金边瑞香 环磷酰胺组Peyer’s结的数目及结内细胞总数明显高于环磷酰胺组[(5.818±1.991),(7.273±1.678),(6.364±1.690),(3.818±0.874);(4.223±1.197)×109L-1,(6.658±3.758)×109L-1,(6.884±1.807)×109L-1,(1.451±1.024)×109L-1,F=14.28,9.044,P<0.05～0.001]。②金边瑞香 环磷酰胺组、金边瑞香组及正常组之间两两比较Peyer’s结的数目及结内细胞总数差别无统计学意义(P>0.05)。结论:金边瑞香可对抗环磷酰胺诱导的小鼠肠道Peyer’s结的损伤,提示金边瑞香可能对肠道黏膜免疫具有改善作用。     

内皮抑素通过Notch1/血小板源生长因子信号通路对小鼠肺纤维化的抑制作用

目的研究内皮抑素通过Notch1/血小板源生长因子（Notch1/PDGF）信号通路对小鼠肺纤维化的抑制作用。 方法将30只小鼠分为对照组、模型组和内皮抑素组,每组各10只。模型组和内皮抑素组小鼠给予气管内注射博莱霉素（5 mg/kg）以建立肺纤维化模型,对照组小鼠仅注射等量等渗NaCl溶液;内皮抑素组小鼠每天腹腔注射内皮抑素（2.3 mg/kg）,对照组和模型组小鼠每天腹腔注射等量等渗NaCl溶液,所有小鼠均持续注射21 d。21 d后处死所有小鼠,取左肺组织行病理学染色;取右肺组织,应用Western-blotting法检测Collagen I,Notch1/PDGF信号通路相关蛋白转化生长因子β1（TGF-β1）、Hes1、Hey1、PDGF-B、PDGF受体β（PDGFR-β）及周细胞相关蛋白Desmin、神经元-胶质细胞抗原2（NG2）及α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达水平。 结果光镜下,可见对照组小鼠肺泡结构完整,未见异常胶原蛋白;模型组小鼠肺泡结构被破坏,有大量胶原蛋白沉积;内皮抑素组小鼠可见肺组织结构相对完整,而胶原蛋白明显减少。3组小鼠间Collagen I、TGF-β1、Hes1、Hey1、PDGF-B、PDGFR-β、Desmin、NG2及α-SMA蛋白表达水平的比较,差异均有统计学意义（F = 12.068、30.603、29.757、35.451、16.059、16.420、24.512、19.084、28.102,P均<0.001）。进一步两两比较发现,内皮抑素组小鼠的Collagen I、TGF-β1、Hes1、Hey1、PDGF-B、PDGFR-β及α-SMA蛋白表达水平均显著低于模型组小鼠,Desmin及NG2蛋白表达水平均显著高于模型组小鼠（P均<0.05）;而内皮抑素组与对照组小鼠间Collagen I、TGF-β1、Hes1、Hey1、PDGF-B、PDGFR-β、Desmin、NG2及α-SMA蛋白表达水平的比较,差异均无统计学意义（P均>0.05）。 结论内皮抑素可通过Notch1/PDGF信号通路抑制周细胞向肌成纤维细胞转化,从而影响小鼠肺纤维化。     

高浓度葡萄糖诱导大鼠腹膜间皮细胞上皮-间叶转化

目的探讨高浓度葡萄糖对大鼠腹膜间皮细胞上皮-间叶转化(EMT)的影响,建立大鼠腹膜间皮细胞EMT模型。方法体外培养的大鼠腹膜间皮细胞经含60、120 mmol/L葡萄糖的M199培养基分别培养48、72 h;以正常M199培养基和含120 mmol/L甘露醇的M199培养基为对照。采用相差显微镜观察细胞形态学改变,应用实时定量PCR法检测间皮细胞E-cad-herin、α-SMA、Collagen I mRNA的表达;应用Western印迹法检测E-cadherin、α-SMA蛋白的表达。结果高浓度葡萄糖(60、120 mmol/L)刺激后,大鼠腹膜间皮细胞由典型的上皮细胞形态逐渐变为梭形及不规则形,类似肌成纤维细胞;大鼠腹膜间皮细胞α-SMA、Collagen I mRNA和α-SMA蛋白表达水平显著增加(P0.05);大鼠腹膜间皮细胞E-cadherin mRNA和E-cad-herin蛋白表达水平显著下降(P0.05)。结论高浓度葡萄糖能上调α-SMA、Collagen I表达和下调E-cadherin表达,高浓度葡萄糖诱导大鼠腹膜间皮细胞EMT。     

骨形成蛋白-7对晚期糖基化终产物诱导大鼠腹膜间皮细胞上皮-间叶转化的影响

目的探讨骨形成蛋白-7(BMP-7)对晚期糖基化终产物诱导大鼠腹膜间皮细胞上皮-间叶转化(EMT)的影响。方法晚期糖基化终产物诱导发生上皮-间叶转化的体外培养大鼠腹膜间皮细胞,分别经含5 ng/mL及80 mmol/L晚期糖基化终产物的M199培养基和含10 ng/mL BMP-7及80 mmol/L晚期糖基化终产物的M199培养基培养48 h,以含80 mmol/L晚期糖基化终产物的M199培养基为对照,应用实时定量PCR法检测间皮细胞E-cadherin、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原(Collagen I)、转化生长因子β1(TGF-β1)、血管内皮生长因子(VEGF)mRNA的表达;应用Western印迹法检测E-cadherin、α-SMA蛋白的表达;应用ELISA法检测间皮细胞TGF-β1、VEGF蛋白表达水平。结果 BMP-7作用后,上皮-间叶转化的大鼠腹膜间皮细胞E-cadherin mRNA和E-cadherin蛋白表达水平显著增加(P<0.05)。BMP-7作用后,上皮-间叶转化的大鼠腹膜间皮α-SMA、Collagen I、TGF-β1、VEGFmRNA和α-SMA、TGF-β、VEGF蛋白表达水平显著下降(P<0.05)。结论 BMP-7能上调上皮-间叶转化的大鼠腹膜间皮细胞E-cadherin表达和下调α-SMA、Collagen I、TGF-β、VEGF表达,BMP-7能逆转晚期糖基化终产物诱导大鼠腹膜间皮细胞EMT。     

高浓度葡萄糖诱导大鼠腹膜间皮细胞上皮-间叶转化

目的探讨高浓度葡萄糖对大鼠腹膜间皮细胞上皮-间叶转化（EMT）的影响,建立大鼠腹膜间皮细胞EMT模型。方法体外培养的大鼠腹膜间皮细胞经含60、120 mmol/L葡萄糖的M199培养基分别培养48、72 h;以正常M199培养基和含120 mmol/L甘露醇的M199培养基为对照。采用相差显微镜观察细胞形态学改变,应用实时定量PCR法检测间皮细胞E-cad-herin、α-SMA、Collagen I mRNA的表达;应用Western印迹法检测E-cadherin、α-SMA蛋白的表达。结果高浓度葡萄糖（60、120 mmol/L）刺激后,大鼠腹膜间皮细胞由典型的上皮细胞形态逐渐变为梭形及不规则形,类似肌成纤维细胞;大鼠腹膜间皮细胞α-SMA、Collagen I mRNA和α-SMA蛋白表达水平显著增加（P〈0.05）;大鼠腹膜间皮细胞E-cadherin mRNA和E-cad-herin蛋白表达水平显著下降（P〈0.05）。结论高浓度葡萄糖能上调α-SMA、Collagen I表达和下调E-cadherin表达,高浓度葡萄糖诱导大鼠腹膜间皮细胞EMT。     

microRNA-192在晚期糖基化终产物诱导人腹膜间皮细胞上皮-间叶转化中的作用

目的探讨microRNA-192(miR-192)对晚期糖基化终产物(AGEs)诱导人腹膜间皮细胞上皮-间叶转化(EMT)的调控作用。方法人腹膜间皮细胞、转染miR-192抑制物后人腹膜间皮细胞和转染miR-192抑制物阴性对照的人腹膜间皮细胞在含AGEs的培养基培养72 h,以M199培养基和含80 m M BSA的M199培养基为对照,然后运用实时荧光定量PCR法检测miR-192和mRNA的表达情况,运用蛋白质印迹法检测蛋白的表达情况。结果在AGEs刺激后,人腹膜间皮细胞miR-192、胶原蛋白I(Collagen I)mRNA、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)mRNA和蛋白表达水平显著上升(P0.05),而E-钙黏蛋白(E-cadherin)mRNA和蛋白表达水平显著下降(P0.05)。与转染miR-192抑制物阴性对照的人腹膜间皮细胞相比,转染miR-192抑制物的人腹膜间皮细胞miR-192、Collagen I mRNA、α-SMAmRNA和蛋白表达水平显著下降(P0.05),而E-cadherin mRNA和蛋白表达水平显著上升(P0.05)。结论 AGEs可能通过上调miR-192表达诱导人腹膜间皮细胞EMT。miR-192抑物可能通过下调miR-192表达阻止AGEs诱导人腹膜间皮细胞EMT。miR-192在AGEs诱导人腹膜间皮细胞EMT中起重要调控作用。     

电针刺激三阴交穴对压力性尿失禁大鼠脊髓NMDA受体及α2受体表达的影响

目的观察电针刺激三阴交穴对压力性尿失禁(SUI)大鼠控尿能力及脊髓N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体、α2肾上腺素能受体表达的影响。方法采用随机数字表法将48只成年雌性SD大鼠分为3组,其中假手术组大鼠阴道内置入未注水球囊尿管,模型组大鼠行阴道内球囊扩张制作SUI模型,电针组大鼠待阴道内球囊扩张建模成功后,对其三阴交穴给予电针刺激。经1周干预后,3组大鼠均进行尿流动力学检查及腹压漏尿点压(LPP)测定,并同步进行尿道外括约肌肌电描记。另外本研究还分别采用PCR及Western blot方法比较各组大鼠脊髓L₆-S₁节段NMDA受体及α2受体表达变化。结果3组大鼠各项尿流动力学指标组间差异均无统计学意义(P>0.05)。与假手术组比较,模型组大鼠腹压LPP、尿道外括约肌肌电频率及振幅均显著降低(P<0.05)。与模型组比较,电针组大鼠腹压LPP显著提高(P<0.05),尿道外括约肌肌电频率及振幅均显著增加(P<0.05)。与模型组比较,电针组大鼠L₆-S₁脊髓节段NMDA、α₂受体mRNA及蛋白表达均明显上调(P<0.05)。结论阴道球囊扩张是制作SUI大鼠模型的有效方法;电针刺激三阴交穴在改善SUI模型大鼠控尿能力同时,还不会影响大鼠正常排尿功能,其治疗机制可能与上调脊髓中NMDA及α2受体水平、增强尿道外括约肌活性有关。