机械损伤对小鼠切牙成釉器细胞Notch表达的影响

目的:研究机械损伤后小鼠切牙成釉器细胞中Notch信号的表达及变化。方法:通过磨除小鼠下颌切牙牙冠的1/2部分建立小鼠下颌切牙的机械损伤模型,并将其随机分为损伤后3、5、7 d组,同时以不做切牙磨除处理的小鼠作为正常对照;用免疫组织化学染色方法观察各组成釉器细胞中Notch1、Notch2的表达变化情况。结果:对照组中,Notch1、Notch2仅在中间层和星网状层细胞中微弱表达;损伤后3 d组,Notch1、Notch2在成釉细胞和中间层细胞均呈密集的阳性表达,在星网状层细胞有散在阳性表达;损伤后5 d组,Notch1、Notch2在成釉细胞、中间层、星网状层细胞仍呈明显的阳性表达;损伤后7 d组,Notch1、Notch2在各层细胞中的表达均较损伤后3、5 d组有所减弱。结论:机械损伤可激活小鼠切牙成釉器细胞中Notch信号的表达,从而参与调控切牙的损伤修复。     

Notch信号通路在牙髓和牙周细胞矿化及组织损伤修复中的调控作用研究

目的 探讨Notch信号通路在人牙髓细胞(dental pulp cells, DPCs)和牙周韧带细胞(periodontal ligament cells, PDLCs)向成牙本质/成骨样细胞分化及组织损伤修复中的调控作用.方法 酶消化法分离培养DPCs和PDLCs,实时荧光定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测Notch信号通路相关基因Notch1、Notch2、DLL1和DLL3 mRNA在DPCs和PDLCs矿化诱导过程中表达水平变化;建立大鼠牙髓和牙周联合损伤动物模型,观察4周后牙髓牙本质复合体及牙周附着装置修复情况,免疫组织荧光染色检测Notch1在牙髓和牙周联合损伤修复动物体内模型的表达和分布.结果 DPCs和PDLCs经矿化诱导,Notch1、Notch2、DLL1 mRNA表达均上调,与对照组间的差异有统计学意义(P<0.05);DLL3 mRNA表达上调,与对照组间差异无统计学意义(P>0.05).免疫荧光示Notch1蛋白在损伤处的新生牙髓及牙周韧带组织细胞浆强表达,而在正常牙髓及牙周韧带组织基本无表达.结论 在DPCs和PDLCs诱导成牙本质/成骨分化的过程中,Notch1、Notch2、DLL1呈现相似的表达变化趋势上调,Notch1信号在牙髓及牙周损伤修复的新生组织明显激活,提示Notch信号通路参与DPCs和PDLCs成牙本质/成骨分化,且在牙髓牙本质复合体和牙周附着装置的损伤修复中起重要的调控作用.     

成牙本质细胞表达相关蛋白作用的研究进展

成牙本质细胞分泌的蛋白质、基质、生长因子等在牙齿发育和牙髓损伤修复中都起着重要的调节作用。牙本质基质蛋白(DMP1)、牙本质涎蛋白(DSP)、牙本质磷蛋白(DPP)、巢蛋白、clock蛋白、骨黏附蛋白聚糖(OSAD)等在牙本质形成、矿化及牙本质修复等过程中发挥着各自的作用。此外,其中某些蛋白对常染色体隐性低血磷性佝偻病、非矿化组织疾病发病机制的研究具有重要意义。本文就成牙本质细胞表达相关蛋白在牙发育及损伤修复中的作用机制做一综述。     

Notch信号与细胞凋亡及其在口腔医学的研究进展

Notch信号通路参与机体多种细胞的凋亡调控,有证据表明在牙齿发育、牙齿损伤与修复、以及口腔肿瘤中均有Notch信号参与并可能与细胞凋亡调控相关。本文就Notch信号对细胞凋亡调控及其在口腔医学领域的研究进展作一综述。     

不同龋深状态下人成牙本质细胞的凋亡及Bcl-2,Bax的表达

目的探讨龋病进展中人成牙本质细胞的凋亡情况及可能机制。方法选择即刻拔除的第三磨牙80颗,正常牙、浅龋、中龋和深龋各20颗。HE染色、TUNEL染色和免疫组化染色后观察龋损部位下方成牙本质细胞的凋亡情况及Bcl-2、Bax的表达。结果①中龋以后,成牙本质细胞数量明显减少,凋亡指数随龋病的进展而逐步升高。②正常牙组和浅龋组Bcl-2及Bax的表达水平均较低,中龋组和深龋组两蛋白表达水平均显著升高,但Bax的升高幅度更显著,Bcl-2/Bax蛋白比值降低。结论随着龋损的进展,成牙本质细胞凋亡增多,Bcl-2/Bax蛋白比值变化是调控其凋亡的重要机制。     

成牙本质细胞的基本特征及其研究进展

成牙本质细胞作为牙髓细胞的主要成分，具有在牙发育期间和成熟牙内生成牙本质的功能。目前的研究多基于牙髓细胞的二维体外培养，随着对牙髓组织研究的不断深入，牙髓细胞体外三维立体模型的建立将是未来研究的热点。作者回顾了近年来对成牙本质细胞的研究情况，主要阐述了成牙本质细胞的形态、超微结构、功能、蛋白表达的特征及其研究进展和今后的研究方向。     

人成牙本质细胞的分离和鉴定

目的:分离并鉴定完整的成熟人成牙本质细胞。方法:收集人健康恒牙,采用胶原酶和蛋白酶联合消化法分离出成牙本质细胞,并对分离出的细胞进行细胞形态学和免疫组织化学鉴定。结果:实验分离出的细胞为柱状或立方状,有较长的细胞突起,具有典型的成牙本质细胞形态,免疫组化染色显示细胞表达Ⅰ型胶原、DMP1和DSP蛋白。结论:本研究分离得到了完整的成熟人成牙本质细胞,为后期研究成牙本质细胞的分化、功能及特点奠定基础。     

成牙本质细胞中上游刺激因子1对骨桥素表达调控的研究

目的检测成牙本质细胞中上游刺激因子1（upstream stimulatory factor 1，USF1）对骨桥素表达的影响。方法培养成牙本质细胞MDPC-23，稳定转染PCMV-USF1和酸性-USF（A-USF）质粒，提取总RNA，半定量反转录聚合酶链反应检测骨桥素的表达水平，并对结果进行统计学分析。结果筛选出稳定转染USF1和A-USF的抗性克隆，USF1、A-USF转染组和对照组骨桥素相对灰度比值分别为：60．33％±4．51％、229．33％±7．09％、110．00％±15．62％，转染组与对照组差异有统计学意义（P〈0．01）。结论USF1可调控成牙本质细胞骨桥素mRNA转录，该作用被A-USF部分阻断。     

成牙本质细胞中上游刺激因子1的表达、细胞内定位及转位研究

目的检测成牙本质细胞中上游刺激因子1（upstream stimulatory factor-1，USF1）蛋白的表达及细胞内定位，并探讨其能否发生核转位。方法培养成牙本质细胞MDPC-23，一组作为对照组不给刺激，另一组作为实验组经不同浓度尼古丁硫酸盐（25、50、75及100mg／L）刺激1h后分别制备细胞爬片，用抗USF1抗体，常规SABC法检测，以Hela细胞为阳性对照。结果对照组（？）成牙本质细胞质中有较强的黄褐色颗粒，但100mg／L尼古丁作用组胞核中有较强的黄褐色着色，胞质着色减弱，其他刺激组仅表现为胞质黄褐色，而阳性对照Hela细胞核中有较强的黄褐色着色。结论体外培养的成牙本质细胞中有USF1蛋白表达，定位于细胞质、在尼古丁的刺激下可发生核转位。     

低氧环境下Notch信号通路对人牙髓干细胞成牙本质向分化的影响

目的探讨低氧环境下通过低氧诱导因子-1α（HIF-1α）调控Notch信号通路对人牙髓干细胞（HDPSC）成牙本质向分化能力的影响。 方法组织块酶消化法培养HDPSC,给予氯化钴（CoCl₂）诱导的化学性低氧环境,Western blot检测HIF-1α蛋白表达,茜素红染色检测细胞矿化结节形成能力,反转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测Notch下游靶基因Hes1与成牙本质相关基因的表达;进一步加入Notch信号通路特异性阻断剂γ分泌酶抑制剂（GSI）,观察以上指标的变化。报告基因方法检测HIF-1α对Notch信号通路的调控作用。采用R version 3.5.3软件进行统计分析,计量资料进行正态检验,多组间比较采用单因素方差分析（方差齐）或Kruskal-Wallis H检验（方差不齐）,两两比较采用LSD-t检验（方差齐）或Mann-Whitney U检验（方差不齐）。 结果（1）CoCl₂诱导的低氧条件下HDPSC中的HIF-1α蛋白水平上调,Notch下游靶基因Hes1 mRNA相对表达量为1.46 ± 0.12,相比常氧组（1.06 ± 0.09）显著增高（t = -4.64,P = 0.012）;GSI处理阻断Notch信号通路后,低氧条件下HDPSC中HIF-1α蛋白水平下调,Hes1 mRNA相对表达量降低至0.82 ± 0.14,与处理前相比差异有统计学意义（t = 5.98,P = 0.004）;常氧条件下GSI处理后的HDPSC中HIF-1α蛋白水平也明显下调,Hes1 mRNA相对表达量（0.30 ± 0.09）相比处理前也显著降低（t = 10.08,P = 0.001）;（2）矿化诱导后的茜素红染色结果显示：低氧处理后,HDPSC细胞成牙本质分化能力下降;GSI处理后,成牙本质向分化能力增强。成骨/牙本质相关基因mRNA表达水平检测结果显示：低氧处理后,BSP、OCN和DSPP的mRNA相对表达量分别为0.53 ± 0.14、0.43 ± 0.20、0.48 ± 0.11,相比常氧组（1.21 ± 0.12、1.08 ± 0.19、1.03 ± 0.13）显著降低（t_BSP = 6.30,P_BSP = 0.003;t_OCN = 4.07,P_OCN = 0.015;t_DSPP = 5.67,P_DSPP = 0.005）;GSI处理后,低氧条件下BSP、OCN和DSPP mRNA相对表达量分别为0.99 ± 0.13、1.09 ± 0.13、0.95 ± 0.16,与处理前相比显著增高（t_BSP = -4.17,P_BSP = 0.014;t_OCN = -4.83,P_OCN = 0.012;t_DSPP = -4.30,P_DSPP = 0.017）,常氧条件下BSP、OCN和DSPP mRNA相对表达量分别为1.73 ± 0.20、1.55 ± 0.08、1.52 ± 0.14,与处理前相比显著增高（t_BSP = -3.84,P_BSP = 0.027;t_OCN = -3.99,P_OCN = 0.035;t_DSPP = -4.43,P_DSPP = 0.011）。（3）荧光素酶报告基因结果显示,HIF-1α可调控NICD启动子,使双荧光素酶相对表达活性为5.37 ± 0.12,与对照组（2.09 ± 0.15）相比显著增强（t = -28.92,P<0.001）,提示HIF-1α可能使Notch信号通路激活。 结论低氧引起HDPSC中HIF-1α升高并可能通过激活Notch信号通路抑制其成牙本质向分化能力。     

T-2毒素对大鼠切牙成釉细胞凋亡的影响

目的:研究不同剂量T-2毒素对大鼠切牙成釉细胞凋亡的影响.方法:选择30只大鼠,随机分为3组,对照组、实验组1(100ng/gBW·d-1),实验组2(200ng/gBW·d-1).4周后处死大鼠,利用原位细胞凋亡检测技术(TUNEL)观察T-2毒素作用下大鼠切牙成釉细胞的凋亡现象.结果:T-2毒素染毒组成釉细胞凋亡率...     

Notch_2-Delta在体外人牙髓细胞分化中的表达及调控

目的　探讨Notch信号在体外牙髓细胞向成牙本质样细胞分化过程中的作用。方法　人牙髓细胞体外连续培养,采用免疫组化染色及Western blot方法对该过程中人牙髓细胞Notch2-Delta的表达及rhBMP-2对Delta 表达的影响进行定性及半定量研究。结果　体外牙髓细胞增殖、分化过程中有Notch2-Delta的表达,随细胞增殖、分化状态的不同,二者表达的部位及表达强度发生变化,外源性rhBMP-2在牙髓细胞结节形成后期可上调Delta的表达。结论　Notch信号途径参与了体外牙髓细胞向成牙本质样细胞分化过程,其介导的细胞间相互作用可能是控制牙髓细胞对信号分子反应性的机制。     

Notch信号通路在颞下颌骨关节炎中的表达

目的 研究Notch信号通路相关分子在颞下颌骨关节炎(temporomandibular joint arthritis,TMJOA)中的表达情况,探索该通路在TMJOA发生发展中的作用及机制.方法 将72只昆明小鼠随机分为实验组、假手术组及正常组.实验组小鼠手术摘除右侧颞下颌关节盘,假手术组除不摘关节盘外其余操作同实验组,正常组不作处理.所有小鼠左侧颞下颌关节盘不作处理.术后1周、2周、4周每组处死8只小鼠,进行组织化学染色,根据骨关节炎的病理诊断标准评估TMJOA模型是否建立成功,选取成功的TMJOA软骨进行免疫组化染色检测Notch1(NICD1)、Jagged1、Hes1、Hes5的表达情况,并采用半定量方法评分.结果 实验组髁突Notch1(NICD1)、Jagged1、Hes5术后表达量明显增加,且与TMJOA进展呈正相关;Hes1表达明显降低,第4周时有所增加.结论 TMJOA模型中,Notch通路相关分子表达发生了明显变化,表明该通路在TMJOA发生发展中起着重要作用.     

Notch1、Notch3在唾液腺导管癌中的表达及意义

目的:探讨Notch1、Notch3在唾液腺导管癌的表达及意义。方法:收集2005年6月—2011年6月于中国医科大学附属口腔医院就诊的21例唾液腺导管癌患者,以免疫组化方法检测Notch1、Notch3在唾液腺导管癌中的表达,以20例腮腺多形性腺瘤和20例瘤旁正常腮腺组织作为对照。应用SPSS 13.0软件包对数据进行χ2检验。结果:Notch1、Notch3在唾液腺导管癌组织中的表达显著高于腮腺多形性腺瘤组织和正常腮腺组织,在腮腺多形性腺瘤组织中的表达显著高于正常腮腺组织,两两比较有显著差异(P<0.05)。2种蛋白的表达水平与唾液腺导管癌患者的年龄、性别、肿瘤原发部位、面神经症状、肿瘤临床分期与淋巴结是否转移之间无明显联系。结论:Notch1、Notch3可能与唾液腺导管癌的致病机制有关。     

Notch信号对骨免疫的调控及其在牙周炎发生中的可能作用

破骨细胞是进行性骨吸收的主要功能细胞,其与T细胞、B细胞间的相互影响在生理性骨改建中发挥重要作用。免疫细胞活性异常和破骨细胞过度活跃是引发病理性骨改建(如发生在牙周炎中的牙槽骨吸收)的病理基础。Notch信号是一类种系发生高度保守的跨膜蛋白,不仅参与调控T细胞和B细胞的分化和功能,而且对骨改建中的主要功能细胞-破骨细胞的分化有重要的调控作用。因此,深入探讨Notch信号在骨免疫中的作用机制,可为牙周炎的临床治疗提供新的思路和依据。本文就Notch信号对骨免疫的调控机制及其在牙周炎发生中的可能作用作一综述。     

PHEX蛋白在小鼠成牙本质细胞分化过程中的定量表达

目的:探讨PHEX在小鼠成牙本质细胞分化过程中的定量表达及其可能的生物学作用.方法:制备小鼠牙胚发育各阶段标本,免疫组织化学方法检测PHEX蛋白在小鼠磨牙牙胚发育各时期成牙本质细胞中的表达情况.对成牙本质细胞中的阳性信号进行定量,并进行统计分析.结果:PHEX蛋白主要表达于分化成熟的成牙本质细胞.在时间上,牙胚帽状期(E16)中未分化的牙乳头细胞无明显表达,钟状期(E18)靠近基底膜处的牙乳头细胞有弱阳性表达,硬组织形成期(P5)可见到成熟的成牙本质细胞中有强烈表达;在硬组织形成期(P5)的空间分布上,颈环处未分化的牙乳头细胞中无明显表达,而未来牙尖处分化成熟的成牙本质细胞则有强烈表达.结论:PHEX蛋白表达具有特定的时间-空间分布特征,PHEX参与了小鼠成牙本质细胞的分化过程,可能在牙本质矿化过程发挥重要的作用.     

Notch�ź�ͨ·����­���Ĥ�ڳɹ��о���չ

膜内成骨是骨骼形成的重要方式,其受多条信号通路的调控,Notch信号通路是其中重要的一条。异常的Notch信号通路影响骨骼的形成。深入探讨Notch信号通路在膜内成骨中的作用机制,有利于揭示临床多种骨骼畸形,尤其是颅颌面骨发育异常的发生机制,提供新的治疗靶标。本文概述Notch信号通路对膜内成骨过程的调控。     

Notch信号与牙胚发育和牙齿损伤修复

Noteh信号通路在进化上高度保守,它可以通过局部细胞间相互作用传导信号,调控细胞的增殖、分化、凋亡等多种生命过程,最终决定多细胞动物发育过程中多种细胞的命运.本文就Notch信号途径在牙胚发育以及牙髓、牙周损伤修复方面的作用作一.