香荆芥酚对药物性耳聋模型大鼠的治疗作用及NOX3/STAT1信号通路的影响

摘要：目的:探讨香荆芥酚对药物性耳聋模型大鼠的治疗作用及NADPH氧化酶3（NOX3）/转录活化因子1（STAT1）信号通路的影响。方法:72只Wistar大鼠随机分成4组:正常对照组、模型组、香荆芥酚低、高剂量组(1.25,2.5 mg·kg-1),每组18只。除正常对照组外,其余各组建立顺铂耳聋模型,建模成功后,香荆芥酚低、高剂量组用相应剂量药物灌胃治疗,正常对照组和模型组给予等体积0.9%氯化钠溶液,连续给药4周。给药结束后,测定大鼠听性脑干反应（ABR）阈值,电镜观察大鼠耳蜗组织改变,实时荧光定量PCR（qRT-PCR）法及蛋白免疫印迹法（WB）法测定耳蜗组织NOX3、STAT1 mRNA及蛋白表达水平。结果:模型组ABR阈值水平、耳蜗组织NOX3、STAT1 mRNA和蛋白水平显著高于正常对照组（P<0.05）;香荆芥酚低、高剂量组ABR阈值水平、耳蜗组织NOX3、STAT1 mRNA和蛋白水平显著低于模型组（P<0.05）,且香荆芥酚高剂量组ABR阈值水平、耳蜗组织NOX3、STAT1 mRNA和蛋白水平显著低于香荆芥酚低剂量组（P<0.05）。正常对照组耳蜗毛细胞结构正常;模型组耳蜗内、外毛细胞排列紊乱,与螺旋神经节细胞周围突结合出现裂隙;香荆芥酚高剂量组耳蜗内、外毛细胞排列趋于正常,与螺旋神经节细胞周围突结合处仍然有裂隙,但裂隙较小;香荆芥酚低剂量组仍然可见耳蜗内、外毛细胞排列紊乱。结论:香荆芥酚可降低药物性（顺铂）耳毒性,其机制可能与香荆芥酚抑制药物性耳聋模型大鼠耳蜗组织中NOX3、STAT1 mRNA和蛋白的表达进而抑制NOX3/STAT1炎症通路的激活有关。     

补肾填精方对D-半乳糖衰老模型大鼠脑细胞周期相关蛋白表达的影响

目的探讨抗衰老中药方剂补肾填精方对D-半乳糖衰老模型大鼠脑细胞周期相关p53、p21和p16蛋白表达的影响。方法采用D半乳糖法诱导衰老大鼠模型。随机分为正常组、模型组、天保宁组、补肾填精方（低剂量组、中剂量组、高剂量组）。免疫组化法检测各组大鼠脑海马CA1区细胞周期相关p53、p21和p16蛋白表达。结果补肾填精方能抑制海马CA1区细胞周期相关p53、p21和p16阳性蛋白的表达（P〈0．05）。结论补肾填精方可降低衰老大鼠海马CA1区p53、p21和p16蛋白表达,提示补肾填精方延缓脑细胞衰老可能与细胞周期相关蛋白表达相关。     

衰老小鼠视网膜中FOXO1的表达及山茱萸多糖的干预作用

目的:通过山茱萸多糖对D-半乳糖致衰老小鼠视网膜中FOXO1基因表达的影响,探讨其在改善视网膜衰老变化方面的作用及可能机制。方法:实验动物随机分为3组,衰老模型组:100mg.kg-1.d-1皮下注射D-半乳糖45d后,经胃给予相当于给药组药量体积的温开水连续30d;对照组:每日侧腹部皮下注射生理盐水,剂量参照衰老模型组D-半乳糖给药量,45d后经胃给予相当于给药组药量体积的温开水连续30d;山茱萸多糖给药组:衰老造模(按衰老模型组给药)成功后,按照0.4g.kg-1体质量经胃给药,连续给药30d。RT-PCR和Western blotting法测定小鼠视网膜组织FOXO1、P53mRNA与蛋白的表达,以观察山茱萸多糖对衰老模型小鼠上述指标的影响。结果:各组视网膜组织的FOXO1、P53mRNA和蛋白与对照组相比D-半乳糖致衰老模型小鼠视网膜组织中FOXO1mRNA及蛋白的表达上升,分别为0.541±0.04、0.566±0.04,P53mRNA及蛋白的表达上升,分别为0.822±0.06、0.866±0.07,给药组FOXO1、P53mRNA及蛋白的表达与D-半乳糖致衰老模型组无差异(P>0.05)。结论:随着机体的衰老变化FOXO1,P53在视网膜组织中表达增多;山茱萸多糖不能有效地影响视网膜组织中FOXO1的表达。     

活性磷脂抗皮肤老化的实验研究

目的探讨活性磷脂延缓小鼠皮肤老化的作用及其机理。方法小鼠每日颈背部皮下注射D-半乳糖(1 000 mg/kg)造成小鼠老化模型,同时灌胃活性磷脂42 d后,去背部皮肤,用分光光度法测定小鼠皮肤中胶原蛋白的含量。结果活性磷脂使D-半乳糖所致的小鼠皮肤老化模型中各剂量组胶原蛋白含量均显著增加。结论活性磷脂可提高皮肤中胶原蛋白含量,提示活性磷脂具有延缓皮肤老化的作用。     

EGCG对D-半乳糖诱导的阿尔茨海默病小鼠的抗凋亡作用

目的研究(-)表没食子儿茶素没食子酸酯对D-半乳糖诱导的阿尔茨海默病小鼠的抗凋亡作用。方法给小鼠每日按150mg·kg-1皮下注射D-半乳糖一次,连续注射6周,以制备阿尔茨海默病小鼠模型,造模2周后,给EGCG低剂量和高剂量治疗组小鼠每日分别按2mg·kg-1和6mg·kg-1灌胃给予EGCG一次,连续给药4周。通过HE染色、TUNEL染色、免疫组化和Western blot印迹分析等方法观察EGCG对D-半乳糖诱导的阿尔茨海默病小鼠脑内神经元凋亡情况及海马区促凋亡蛋白caspase-3的活性及表达。结果给小鼠连续皮下注射D-半乳糖明显的增加了神经元细胞凋亡指数(P<0.01),并提高了小鼠海马区caspase-3的活性及表达(P<0.05);EGCG(2mg·kg-1和6mg·kg-1)明显的降低了D-半乳糖诱导的阿尔茨海默病小鼠神经元细胞的凋亡指数(P<0.01),并降低了小鼠海马区caspase-3的活性及表达(P<0.05)。结论EGCG通过抑制D-半乳糖诱导的阿尔茨海默病小鼠海马区caspase-3的活性及表达,发挥有效的抗凋亡作用。     

GRP78/BiP在强噪声诱导下豚鼠耳蜗螺旋神经节细胞损伤过程中的动态观察

目的 观察分子伴侣葡萄糖调节蛋白78 (GRP78/BiP)在豚鼠强噪声暴露后不同时期的耳蜗螺旋神经节细胞中的表达情况,探讨GRP78/BiP在强噪声暴露后豚鼠耳蜗螺旋神经节细胞损伤中的作用.方法 选用健康雄性白色豚鼠25只,随机分为5组,将实验组动物暴露于120 dB SPL、4 kHz窄带噪声环境4h.分别对健康对照组及噪声刺激后3h、ld、4d、14d组豚鼠处死前测试听性脑干反应(auditory brainstem response,ABR).用免疫组化及Western Blot方法检测GRP78/BiP的表达及在耳蜗螺旋神经节细胞的分布情况.结果 实验组耳蜗螺旋神经节细胞的GRP78/BiP蛋白明显高于健康对照组(P＜0.01),且在3h、1d、4d、14d均维持在比较高的水平.结论 强噪声暴露后GRP78/BiP的表达可引导蛋白质正确折叠,降低细胞损伤,是听觉系统的一种自身防御机制.     

何首乌有效成分二苯乙烯苷对少半乳糖致脑老化小鼠脑组织神经营养因子表达的影响

目的：观察何首乌有效成分二苯乙烯苷（2，3，5，4’-四羟基-二苯乙烯-β-葡萄糖苷TSG）对D-半乳糖致脑老化小鼠海马组织神经营养因子的影响，方法：1）实验分组：将三月龄Balb／c雌性小鼠随机分为正常对照组、模型组（D-半乳糖注射组）、D-半乳糖＋TSG大剂量组（0．3g／kg／d）、中剂量组（0．1g／kg／d）、小剂量组（0．03g／kg／d）；除正常对照组注射等量的生理盐水外，其余各组用D-半乳糖（生理盐水溶解后），每日颈后皮下注射50mg／kg，连续60天，建立脑老化小鼠模型。同时各组分别灌胃给药（除正常对照及模型组给予溶剂外）其余各组给予TSG每日一次，连续60d后，断头取脑分离皮层海马迅速液氮冷冻，-70℃保存。2）样品处理：将各组小鼠的海马组织匀浆离心取上清，Follin法测定蛋白浓度，调整蛋白浓度一致后并加上样缓冲液，煮沸5分钟。     

水杨酸钠对顺铂所致耳毒性的保护作用

目的探讨水杨酸钠（SS）是否对顺铂（CDDP）所致的豚鼠耳毒性具有保护作用。方法将48只豚鼠随机分为4组：A组（对照组）、B组（SS组）、C组（CDDP组）、D组（SS＋CDDP组）,每组12只。对每组豚鼠右耳测用药前、后听性脑干反应（ABR）阈值;每组随机取6只耳蜗,通过免疫组化测定各组耳蜗螺旋神经节细胞（SGC）中Caspase-3的表达情况。结果 A组与B组用药后ABR阈值、SGC的Caspase-3表达量比较差异均无显著统计学意义（P〉0.05）;C、D组用药后ABR阈值、SGC的Caspase-3表达量明显高于A、B组（P〈0.05）;D组用药后ABR阈值、SGC的Caspase-3表达量明显低于C组（P〈0.05）。结论水杨酸钠对顺铂所致的耳毒性具有一定的保护作用。     

Ferrostatin-1通过抑制铁死亡延缓D-gal诱导的心肌细胞衰老的研究

目的 探讨D-半乳糖（D-gal）诱导的心肌细胞衰老是否存在铁死亡及铁死亡抑制剂Ferrostatin-1(Fer-1)能否延缓心肌细胞衰老。方法 通过不同水平（0、5、10、20、40、80、100 g/L）D-gal诱导H9C2心肌细胞损伤从而制备心脏衰老模型,采用MTT法检测细胞活力,确定后续实验采用的D-gal质量浓度。将细胞分为Control组、D-gal组和Fer-1组。MTT法检测细胞活力;DCFH-DA法检测细胞内活性氧（ROS）水平;微板法检测细胞内还原型谷胱甘肽（GSH）含量;硫代巴比妥酸法检测细胞内丙二醛（MDA）含量;Western blot检测溶质载体家族7成员11(SLC7A11)、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPx4)、P53蛋白表达水平;微量法检测细胞内β-半乳糖苷酶（β-GAL）活性。结果 MTT法结果显示,细胞活力随D-gal质量浓度升高而降低（P<0.05）,后续实验采用D-gal质量浓度为20 g/L。与D-gal组相比,Fer-1组细胞活力增加（P<0.05）;与Control组相比,D-gal组中ROS、MDA含量、P53蛋白表达水平、...     

iNOS在缺氧缺血新生大鼠耳蜗损伤中作用的实验研究

目的 探讨缺氧缺血(HI)耳蜗组织的损伤方式及诱导型一氧化氮合酶(iNOS)在其中的作用。方法 选择体重9～20g的健康新生7日龄Wistar大鼠30只，随机分为正常对照组、假手术组和HI 30min组、HI 6h组、HI 24h组、HI 48h组，共计6组。各实验组分别于模型制成完毕30min、6h、24h、48h后取脑干、耳蜗组织，做脑组织和耳蜗标本HE染色病理检查，测定耳蜗组织iNOS免疫组化。结果 各缺氧缺血实验组，内、外毛细胞明显变形，iNOS在耳蜗组织的表达明显增强，其中在HI 24h组的表达最强。结论 缺氧缺血可以引起新生7日龄Wistar大鼠耳蜗内、外毛细胞及血管纹等组织病理损伤。耳蜗组织在正常情况下，血管纹，毛细胞及螺旋神经节细胞均有iN0S弱阳性表达，在缺氧缺血实验组，随着缺氧缺血时间的延长，iNOS阳性表达增强.     

小鼠螺旋神经节发育过程中胰岛素样生长因子-1表达的变化

目的观察胰岛素样生长因子-1(IGF-1)在小鼠螺旋神经节发育过程中的表达和分布特点,探讨其生物学特性及意义。方法制作耳蜗组织切片,采用多重荧光免疫组织化学染色方法,激光共聚焦显微镜观察小鼠出生后12 d的IGF-1在耳蜗螺旋神经节的分布和定位。应用Western blot及Real-time PCR法检测新生小鼠螺旋神经节在出生后不同时期IGF-1蛋白及IGF-1 mRNA的表达水平。结果 IGF-1在小鼠耳蜗发育期中在螺旋神经节均有表达,表达在整个细胞体上。小鼠耳蜗螺旋神经节的IGF-1蛋白及IGF-1 mRNA表达水平随着出生年龄增加而逐渐减少。结论 IGF-1在小鼠耳蜗发育期中在耳蜗螺旋神经节均有表达。表达量随着出生年龄增加而逐渐减少。推测其可能通过旁分泌和自分泌方式在局部发挥其功能,在内耳细胞增殖中可能起重要信号转导作用。     

APP17肽对D-半乳糖老化小鼠海马神经元IRS和PI3K表达的影响

目的通过对胰岛素受体底物-1(IRS-1)、胰岛素受体底物-2(IRS-2)、磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)在海马表达的观察,研究APP17肽对D-半乳糖老化小鼠海马神经元信号转导途径上游步骤的影响。方法小鼠随机分为3组,每组22只:正常对照组(C组)、D-半乳糖模型组(D组)、APP17肽治疗组(D+P组)。D、D+P2组每日皮下注射半乳糖100mg·kg-1。D+P组每周一、二、五皮下给药APP17肽0·35μg/只。4个月后,小鼠灌注固定,行脑冰冻切片,用PI3K、IRS-1、IRS-2抗体进行免疫组化染色。Westernblot应用IRS-1抗体染色。结果免疫组织化学染色方法检测海马神经元胰岛素受体底物-1、胰岛素受体底物-2、PI3K的表达,结果显示3种抗体C组深染的阳性细胞排列整齐,染色深,突起深染,可见2~3级分支,细胞计数与D组差异有显著性;D组海马阳性反应细胞着色浅,少有突起,细胞数目少,分别为正常对照的67·5%、63·68%和48·6%。APP17肽治疗组(D+P组)染色结果与C组相似,阳性细胞数目接近C组,与半乳糖老化组比较差异均有显著性,P<0·05,但阳性细胞突起少于C组,排列亦不如C组整齐。Westernblot结果亦显示D组海马表达IRS-1减少,应用17肽后IRS-1表达上调,但不如C组数值高。结论D-半乳糖老化小鼠海马神经元IRS-1、IRS-2、PI3K的表达明显下降;APP17肽能上调D-半乳糖老化小鼠海马IRS-1、IRS-2和PI3K的表达。     

Carbaryl‐induced ototoxicity in rat postnatal cochlear organotypic cultures

Carbaryl, a widely used carbamate‐based insecticide, is a potent anticholinesterase known to induce delayed neurotoxicity following chronic exposure. However, its potential toxic effects on the cochlea, the sensory organ for hearing that contains cholinergic efferent neurons and acetylcholine receptors on the hair cells (HC) and spiral ganglion neurons has heretofore not been evaluated. To assess ototoxic potential of carbaryl, cochlear organotypic cultures from postnatal day 3 rats were treated with doses of carbaryl ranging from 50 to 500 μM for 48 h up to 96 h. Carbaryl damaged both the sensory HC and spiral ganglion neurons in a dose‐ and duration‐dependent manner. HC and neuronal damage was observed at carbaryl concentrations as low as 50 μM after 96‐h treatment and 100 μM after 48‐h treatment. Hair cell was greatest in the high frequency basal region of the cochlea and progressively decreased towards the apex consistent with the majority of ototoxic drugs. In contrast, damage to the spiral ganglion neurons was of similar magnitude in the basal and apical regions of the cochlea. Carbaryl damage was characterized by soma shrinkage, nuclear condensation and fragmentation, and blebbing, morphological features of programmed cell death. Carbaryl upregulated the expression of executioner caspase‐3 in HC and spiral ganglion neurons indicating that cellular damage occurred primarily by caspase‐mediated apoptosis. These results suggest that chronic exposure to carbaryl and other carbamate anticholinesterases may be ototoxic. © 2016 Wiley Periodicals, Inc. Environ Toxicol 32: 956–969, 2017.     

黄芩苷对D-半乳糖致亚急性衰老小鼠生理机能的影响

目的：研究黄芩苷对D-半乳糖致亚急性衰老小鼠生理机能的影响。方法：实验小鼠随机均分为7组,分别为对照组、模型组、香菇多糖（200mg/kg）组,黄芩苷低、中、高（50、100、200mg/kg）3个剂量组及黄芩苷（100mg/kg）＋香菇多糖（100mg/kg）组。在灌胃给予上述药物24d后,对实验小鼠的学习记忆能力进行测试,同时测定小鼠体内超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、过氧化氢酶（CAT）等酶的活性,及丙二醛（MDA）的含量。结果：高、中剂量的黄芩苷能提高衰老小鼠的学习记忆能力（P〈0.05）,能在一定程度上提高组织或血浆中SOD、GSH-Px的活性,升高血浆中CAT的活性,并降低MDA的含量,但较香菇多糖组效果略差,而黄芩苷＋香菇多糖组效果最佳（P〈0.05））。结论：黄芩苷可延缓D-半乳糖致亚急性衰老小鼠的衰老进程,其作用机制可能与其调节氧化代谢酶系统有关,可作为抗氧化衰老辅助药物。     

Cochlear pathology induced by styrene

Hair cells, spiral fibers and spiral ganglion cells (SGCs) coming from cochleae of styrene-treated Long-Evans rats were counted in order to assess the extent and location of the cochlear injury after the solvent inhalation. If the hair cells, and more specifically the outer hair cells (OHCs), were undoubtedly the first targets of inhaled styrene, the histological results of the present study would seem to indicate that neurons of the spiral ganglion were also injured with increasing styrene doses. The degenerative process of SGCs and spiral fibers within the osseous lamina was predominant in the middle and mid-basal turn. The electrophysiological data, obtained by recording near-field potentials from the inferior colliculus, reflected the damages of the SGCs and fibers but were not consistent with the histopathological data of the organ of Corti. Because of the weak correlation between the styrene-induced injury at the level of the organ of Corti and that induced at the level of the spiral ganglion, it is likely that two different intoxication routes exist within the cochlea. Such an assumption is discussed in the present paper.     

Rac1 和 WAVE2 蛋白在高脂饮食 C57BL/6J 幼鼠肾小球中的表达及意义

目的 探讨 Rac1 和 WAVE2 蛋白在高脂饮食诱导的 C57BL/6J 幼鼠肾小球中的表达及意义。 方法 32 只 3 周龄雄性 C57BL/6J 幼鼠随机分为正常饮食组和高脂饮食组, 每组 16 只。 分别给予标准饲料（脂肪含量 10%）与高脂饲料（脂肪含量 60%）喂养 4 周。 HE 染色和 PAS 染色观察小鼠肾脏的病理形态学改变;应用免疫组织化学技术及蛋白免疫印迹技术检测 Rac1 和 WAVE2 蛋白的表达。 结果 与正常饮食组相比, 高脂饮食喂养的 C57BL/6J 幼鼠出现了肾小球系膜基质轻度增生以及渗出等病理改变。 同时高脂饮食组小鼠肾小球 Rac1 和 WAVE2 蛋白的表达明显增强。 结论 Rac1 和 WAVE2 蛋白可能共同参与了高脂饮食诱导的 C57BL/6J 幼鼠肾小球的损伤。     

Wnt通路对胰岛素样生长因子-1抑制小鼠毛细胞凋亡的作用

目的探讨胰岛素样生长因子-1(IGF-1)抑制小鼠毛细胞凋亡作用的调控机制。方法体外培养新生小鼠耳蜗基底膜。在分别含有正常对照培养液(A组)、0.5 mmol/L庆大霉素(GM)(B组)、0.5 mmol/L GM+1 ng/mL IGF(C组)、0.5 mmol/L GM+1 ng/mL IGF+5μg/mL wif(D组)、0.5 mmol/L GM+1 ng/mL IGF+10μg/mLwif(E组)、0.5 mmol/L GM+1 ng/mL IGF+15μg/mL wif(F组)的成分中培养24 h后收集细胞及固定。应用TUNEL法观察各组耳蜗毛细胞的凋亡情况。应用Western blot及Real-time PCR法观察Caspase-3的表达情况。结果 B组耳蜗毛细胞经刺激后,细胞凋亡数量及Caspase-3 mRNA和蛋白表达较A组明显上升(P<0.01),C组耳蜗毛细胞经IGF刺激后,细胞凋亡数量及Caspase-3mRNA和蛋白表达较B组明显下降(P<0.01),应用Wnt阻断剂(wif)后D、E及F组细胞凋亡数量及Caspase-3 mRNA和蛋白表达较C组升高,其中F组升高显著(P<0.01)。结论 IGF可能通过激活Wnt通路抑制毛细胞凋亡。     

Trimethyltin disrupts auditory function and cochlear morphology in pigmented rats

Trimethyltin (TMT) produces auditory deficits, presumably of cochlear origin, in rats. The present study identified pathological changes in the cochlea following treatment with TMT and correlated them with auditory threshold changes. Thresholds were determined by reflex-modulation audiometry, before and after treatment with TMT or with saline vehicle. Animals were then perfused and their cochleas embedded for examination as block-surface preparations or radial sections. In the first week following treatment, all TMT-treated rats showed threshold shifts of 40 to 60 dB at 40 kHz, and smaller threshold shifts (10-25 dB) at 2.5 and 10 kHz. At 3 weeks they showed threshold shifts similar to those identified one week following treatment, but with some recovery at 10 kHz. At 10 weeks, one animal showed complete recovery and three showed recovery of function at 10 but not at 40 kHz. TMT-treated animals showed losses of outer hair cells (OHC) in the basal turn of the cochlea as early as 48 hours following exposure. Comparable OHC pathology was seen at 9 days, along with some losses of inner hair cells. More extensive pathology occurred at longer survival times including the loss of type 1 spiral ganglion cells. The loss of auditory sensitivity at high frequencies was closely related to the loss of outer hair cells in the basal turn of the cochlea.     

氯化铝和D-半乳糖对β淀粉样蛋白表达的影响及其机制

目的：探讨β淀粉样蛋白在小鼠D-半乳糖和氯化铝中毒模型中的变化及其机制。方法：使用D-半乳糖联合氯化铝制作阿尔茨海默病小鼠模型,于用药后0、45、60、75、90d取海马。取海马前用水迷宫实验分析小鼠的记忆和学习能力,对所取海马用改良的Bielschowsky氏银染来观察其病理改变。用Western杂交确定β淀粉样蛋白和BACE1蛋白的改变。结果：氯化铝和D-半乳糖处理的小鼠在水迷宫测试中逃避潜伏期明显延长;Bielschowsky氏银染发现海马细胞层次出现紊乱,但未发现典型的＂老年斑＂及＂神经元纤维缠结＂;β淀粉样蛋白及BACE1的蛋白水平显著升高。结论：D-半乳糖及氯化铝可导致游离态的β淀粉样蛋白的生成增加,但并不能形成特征性的阿尔茨海默病样病理改变。