大鼠舌黏膜癌变过程中E-cad、CD44s的表达

目的:探索蛋白E-cad、CD44s在大鼠舌黏膜癌变过程中的表达变化。方法:屏障环境下4NQO饮水法诱导SD大鼠舌黏膜癌变,采用免疫组化法检测82例大鼠舌黏膜标本组织中E-cad、CD44s的表达情况。结果:在大鼠舌黏膜癌变过程中,E-cad表达下降、CD44s表达上升,E-cad、CD44s的表达差异有统计学意义(P<0.05)。相关性分析表明E-cad与CD44s表达呈负相关,相关性有统计学意义(r_s=-0.675,P<0.001)。结论:E-cad和CD44s在舌鳞癌的发生、发展中起了一定的作用, 联合检测E-cad和CD44s的表达可能为临床早期诊断提供新的方法。     

实验性大鼠舌癌p16CDKN2A外显子1甲基化状态研究

目的 :检测实验性大鼠舌癌发生发展过程中 p16CDKN2A基因exon 1的甲基化状态 ,探讨关键基因甲基化在口腔鳞癌发生发展中的作用。方法 :0 .0 2 g/L 4 硝基亚氧喹啉 (4NQO)饮水饲养清洁级SD大鼠 3 0只 ,分别于第 13、16、2 4周切取其正常组织、中重度异常增生组织及鳞癌组织 ;应用甲基化特异性PCR检测上述组织中p16CDKN2A基因exon 1的甲基化状态。结果 :所有实验标本均扩增出 12 3bp的非甲基化产物 ,但未检测出甲基化产物。结论 :应用 4NQO成功建立实验性SD大鼠舌癌模型 ;抑癌基因 p16CDKN2Aexon 1在该实验性大鼠舌癌模型中未发生甲基化现象     

大鼠舌白斑癌变过程中线粒体琥珀酸脱氢酶活性变化的研究

目的:探讨大鼠口腔癌变过程中线粒体琥珀酸脱氢酶(Succinate dehydrogenase,SDH)的活性变化及其生物学意义.方法:2×10-5 4-硝基喹啉-1-氧化物(4NQO)饮水喂养Wistar大鼠9~32周建立大鼠舌癌变模型,提取30例大鼠舌癌变过程不同病理阶段的舌背组织线粒体,酶标仪检测SDH酶活性的变化.结果:在大鼠舌白斑癌变过程中,线粒体SDH活性呈逐渐下降趋势,其中,重度异常增生、鳞癌组织中SDH酶活性显著低于正常黏膜(P<0.05). SDH的基因表达及酶活性变化趋势较为一致. 结论:SDH酶活性和mRNA表达水平的下降与口腔癌发生发展相关,三羧酸循环在口腔黏膜癌变过程可能起到重要作用.     

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提要：发展一种新的方法用来提高口腔癌的诊断和治疗效果,建立能够模拟人类口腔鳞癌自然发生的动物模型是必需的,应用4-硝基喹啉-1-氧化物（4-nitroquinoline-1-oxide, 4NQO）诱导SD大鼠舌黏膜鳞癌是一种可靠的方法。水溶性喹啉衍生物4NQO可以形成DNA加成物,引起碱基的改变（G→A）或丢失突变。但4NQO要发挥这种诱变剂作用,需要在4NQO还原酶作用下将4NQO转化成4-羟氨基喹啉-1-氧化物及4-乙酰基喹啉-1-氧化物（4-AAQO）,4-AAQO能够以共价键的方式结合到核酸上并破坏染色体的结构,进一步影响抑癌基因和癌基因表达。动物舌根黏膜该酶含量较高,所以可以靶向性在舌根形成癌。饮水中很低剂量的4NQO便可特异性在舌根形成癌,其形成过程和形态学变化都和人的口腔鳞癌发生过程十分相似,该模型是研究口腔癌发生和癌变机制的理想模型。     

芪蓝颗粒对大鼠舌黏膜癌变中Bcl-2及P53表达的影响

目的观察芪蓝颗粒对4-硝基喹啉-1-氧化物（4NQO）诱导的大鼠舌癌变的抑制及对Bcl-2蛋白、P53蛋白表达的影响。方法SD大鼠150只,随机分为癌变模型组,低、中、高剂量芪蓝颗粒干预组以及正常对照组,以4NQO饮水喂养诱导大鼠舌黏膜癌变,同时给予芪蓝颗粒干预癌变过程,取9、18、27、36周舌标本进行组织病理学观察,采用Polymer法检测大鼠舌组织中Bcl-2蛋白及P53蛋白的表达。结果芪蓝颗粒干预的各组大鼠的癌变率均低于癌变模型组（P〈0.05）。芪蓝颗粒干预各组及正常对照组中Bcl-2蛋白、P53蛋白的阳性表达明显低于癌变模型组（P〈0.01）。结论芪蓝颗粒可抑制口腔粘膜癌变,对细胞凋亡相关的Bcl-2蛋白和P53蛋白的调控可能是其抑癌机制之一。     

4NQO诱导大鼠舌黏膜癌变过程中HSF1的表达及意义

目的：探讨热休克因子1（ HSF1）在4?硝基喹啉?1?氧化物（4NQO）饮水法诱导大鼠舌黏膜癌变过程中的表达及意义。方法：80只Wistar大鼠随机分两组,实验组用0．001％～0．004％4NQO递增性喂养大鼠8～28周,对照组则用普通自来水喂养,分别于8、16、20、24、28周处死大鼠,通过大体标本、HE染色观察大鼠舌部组织学改变,同时采用免疫组化染色方法观察HSF1在大鼠舌癌变全过程的表达情况。结果：随4NQO作用时间延长和浓度递增,大鼠舌背后部黏膜相继出现颗粒状、白色斑块、疣状突起、菜花状新生物和溃疡状改变。诱导后8、16、20、24、28周,舌癌的发生率分别为0、20．0％、50．0％、66．7％、100％。HSF1在对照组大鼠舌背黏膜上皮中不表达或者微弱表达,而在实验组大鼠随着舌黏膜异常增生程度的增加,HSF1表达明显增强;在原位癌中,HSF1弥漫分布于整个癌巢中;在舌黏膜浸润癌中HSF1在癌上皮中表达有所降低,而在癌基质成纤维细胞中HSF1表达增强。结论：4NQO饮水法可诱导大鼠舌黏膜发生癌变,成功建立大鼠舌癌模型,同时HSF1在大鼠舌癌发生、发展过程中发挥重要作用。     

E-钙黏素mRNA在大鼠舌黏膜癌变过程中的表达研究

目的:研究上皮型黏附分子E-钙粘素mRNA在大鼠舌黏膜癌变过程中的表达及其意义。方法:采用4NQO饮水法诱导大鼠舌鳞状细胞癌发生,实时荧光定量PCR技术检测组织标本中E-钙粘素mRNA的表达情况。结果:在大鼠舌鳞状细胞癌发生过程中E-钙粘素mRNA表达降低;上皮单纯增生组、轻度上皮异常增生组、中度和重度上皮异常增生组、鳞状细胞癌组4组标本中E-钙粘素 mRNA的表达量分别是上皮正常组标本中的0.453541倍、0.207062倍、0.190954倍、0.180987倍,且鳞状细胞癌组与上皮正常组间的差异具有统计学意义。结论:在大鼠舌黏膜癌变过程中E-钙粘素mRNA表达随着病理分级的增加呈逐渐降低的趋势。E-钙粘素mRNA表达变化是大鼠舌黏膜癌变过程中的早期事件。     

大鼠舌鳞状细胞癌外周血淋巴细胞亚群的变化及其与肿瘤的关系

本研究通过建立舌鳞癌SD大鼠动物模型,采用双色荧光抗体标记流式细胞术检测外周血淋巴细胞亚群,探讨舌鳞癌SD大鼠的免疫功能状况及其与病变进展的关系,以期为临床上舌鳞癌患者的免疫治疗提供理论依据。一、材料与方法1.舌鳞癌动物模型的建立与分组:150天龄雌性SD大鼠100只随机分为4NQO诱导实验组80只(0.002%4NQO溶液避光饮水喂养)和无肿瘤对照组20只(普通自来水喂养)。36周末,对存活的81只大鼠在麻醉状态下检查口腔并自股静脉采集外周静脉血1.0ml,根据舌根病灶的大小分为4组:舌根黏膜正常组20只,舌根黏膜粗糙组24只,舌根肿块直径<5mm组…     

Prx1调控PINK1/Parkin介导的线粒体自噬在实验性口腔黏膜癌变中的作用

目的 检测口腔黏膜癌变过程中线粒体自噬相关蛋白PINK1、Parkin表达变化及抗氧化蛋白Prx1对其调控作用,探讨Prx1在口腔黏膜癌变中的作用机制.方法 利用4NQO化学诱导Prx1+/+和Prx1+/-小鼠舌黏膜癌变模型,采用免疫组织化学染色及Q-PCR方法 ,检测PINK1、Parkin在小鼠舌正常黏膜、白斑、...     

Alterations of p16/MTS1 gene in oral squamous cell carcinomas from Taiwanese

To determine the alterations of the p16/MTS1 gene in oral squamous cell carcinoma (OSCC), we examined in Taiwanese patients the mutation, deletion and methylation of p16/MTS1 in primary OSCCs associated mostly with betel quid (BQ)/tobacco use. Among 110 tumors undergoing mutational analyses, seven (6%) showed mutations in exon 2 or the intron 1/exon 2 splice site. All but one mutation disrupted the encoded proteins. Base transitions represented the vast majority (6/7) of the mutations identified in BQ/tobacco consuming subjects. It was noted that 15/56 (27%) tumors examined by restriction fragment methylation analysis revealed a significant level of methylation in different loci of exon 1 as compared with the respective non-cancerous tissue. Mutation of p16/MTS1 was exclusively identified in carcinomas of buccal mucosa, whereas methylation of the p16/MTS1 promoter region occurred preferentially in carcinomas of the tongue (54%) rather than at other sites (22%). Homozygous deletion was not found in 56 paired samples examined, nor was hemizygous deletion indicated in 12 informative cases. The results indicated aberrant methylation and mutation as the molecular abnormality of p16/MTS1 in the OSCC from Taiwanese.     

5-Aza对CDH1启动子甲基化及舌鳞状细胞癌细胞迁移能力的影响

目的探讨甲基化抑制剂5-氮杂胞苷（5-Aza）对CDH1启动子甲基化状态及舌鳞状细胞癌（TSCC）细胞侵袭迁移的影响。 方法5-Aza处理TSCC细胞株UM1和UM2,倒置相差显微镜下观察处理前后细胞形态及排列情况;划痕试验和Transwell试验检测处理前后细胞迁移和侵袭能力;Western blot法和免疫荧光检测E-cadherin表达;甲基化特异PCR（MSP）检测处理前后UM1、UM2细胞E-cadherin编码基因CDH1的甲基化状态。细胞相对侵袭率的比较采用χ²检验,P<0.05为差异有统计学意义。 结果UM1细胞呈小圆形、多边形或梭形,细胞排列松散,未见明显的细胞间的紧密连接;UM2细胞则表现为多边形,细胞与细胞之间紧密接触,呈典型的"铺路石"样排列。UM1细胞E-cadherin表达较UM2低,细胞划痕经过48 h后完全铺满,而UM2细胞划痕48 h后不足75%。加入去甲基化药物5-Aza后,UM1细胞形态稍不规则,以多边、多角形细胞为主,且出现类似UM2细胞的铺路石样排列的细胞团,可见细胞间的紧密连接,细胞划痕经过48 h后仍不足70%,细胞相对侵袭率为加药前的102% (χ²= 0.651,P>0.05),E-cadherin表达上调。MSP结果显示,UM1细胞的E-cadherin编码基因CDH1的呈现过甲基化,去甲基化药物5-Aza作用后其甲基化程度降低。 结论5-Aza可诱导E-cadherin编码基因CDH1去甲基化,导致E-cadherin上调抑制其迁移能力。     

4NQO饮水诱发大鼠舌癌模型的建立

目的 建立与人口腔环境相近的大鼠舌癌模型。方法 ０．００２％４－硝基喹啉－１－氧化物（４ＮＱＯ）饮水喂养ＳＤ大鼠９￣３２周,肉眼及组织学观察癌变全过程。结果 随致癌剂作用延长,大鼠舌背后部粘膜相继出现白色斑块、溃疡、糜烂、乳头状增生等改变。９周后８０．０％大鼠舌背粘膜表现为单纯性上皮增生,２０．０％为轻中度异常增生;１３周后６６．６％为轻中度异常增生,３３．３％为重度异常增生;１６周后５５．５％为     

肿瘤-睾丸抗原NY-ESO-1在舌鳞状细胞癌中的表达及意义

目的：检测NY-ESO-1蛋白在舌鳞癌（tongue squamous cell carcinoma,TSCC）中的表达情况,分析其与肿瘤临床病理参数的关系,并探讨其作为TSCC免疫治疗靶标的可能性。方法：采用免疫组织化学EnVision法检测53例TSCC标本及10例正常舌黏膜中NY-ESO-1蛋白的表达,SPSS统计软件分析所得数据。结果：53例TSCC标本中13例NY-ESO-l阳性表达（24.5%）,定位于细胞浆,而10例正常舌黏膜无表达。NY-ESO-1蛋白的表达与肿瘤大小及临床病理分级有关（P〈0.05）,但与肿瘤浸润深度及有无淋巴结转移无关。结论：NY-ESO-1蛋白在中高分化TSCC组织中的表达较高,可以进一步研究其作为TSCC免疫治疗靶点的可行性。     

唾液腺恶性多形性腺瘤中CDH1基因启动子甲基化与E-cadherin表达的相关性分析

目的: 分析唾液腺恶性多形性腺瘤（malignant pleomorphic adenoma,MPA）中CDH1启动子甲基化程度与E-cadherin表达的相关性,评估CDH1启动子甲基化在E-cadherin沉默中的作用,并探讨其与MPA临床病理指标之间的相关性,对患者预后的潜在评估价值。 方法: 采用免疫组织化学法、BSP法分别检测37例MPA临床标本中E-cadherin的表达及CDH1启动子甲基化程度,进行相关性分析。收集患者资料,进行临床随访,分析CDH1甲基化与患者临床病理指标及生存率之间的相关性。采用SPSS 16.0软件包进行统计学分析。 结果: CDH1高甲基化与E-cadherin沉默表达呈显著正相关。CDH1甲基化程度与患者性别、肿瘤分化类型、组织学分级、淋巴结转移及TNM分期显著相关。CDH1高甲基化者生存率差,淋巴结转移为MPA患者预后的独立预测因子。 结论: CDH1基因高甲基化是MPA中E-cadherin沉默表达的重要调控机制之一,CDH1甲基化有望作为评估MPA患者临床预后的预测因子之一。     

Prx1敲除对4NQO诱导的小鼠舌癌前病变细胞增殖及转录因子Ets1表达的影响

目的 检测核增殖抗原Ki67和转录因子Ets1在4-硝基喹啉-1-氧化物(4NQO)诱导的Prx1+/+和Prx1+/-小鼠舌癌前病变模型中的表达,探讨Prx1敲除对小鼠舌癌前病变细胞增殖及转录因子Ets1表达的影响.方法 实验分为Prx1+/+阴性对照组、Prx1+/+4NQO组、Prx1+/-阴性对照组、Prx1+/-4NQO组.在实验过程中对照组小鼠给与蒸馏水,实验组小鼠给与4NQO饮用水,第16周末处死小鼠,取舌组织,用于HE染色及Ki67和Ets1免疫组织化学染色.结果 在4NQO的诱导下,成功构建鼠舌癌前病变模型.组织学检查发现在第16周末,实验组小鼠舌黏膜上皮表现为单纯增生或不同程度的异常增生.免疫组化结果显示,与对照组正常舌黏膜相比,Ki67、Ets1在Prx1+/+ 4NQO组舌癌前病变中表达明显增高(P<0.01).Prx1敲除导致Prx1+/-4NQO组舌黏膜上皮中Ki67、Ets1表达明显降低(P<0.01).结论 Prx1对细胞增殖有促进作用,可能通过调控转录因子Ets1在口腔癌前病变发生发展中发挥重要作用.