UPLC-MS/MS法测定儿童血浆中头孢呋辛的浓度

目的：建立UPLC-MS/MS 儿童血浆头孢呋辛浓度的检测方法。方法：采用蛋白质沉淀方法,以奥美拉唑为内标,色谱柱为Phenomenex Luna C₁₈柱（2.0 mm×50 mm,3 μm）,流动相甲醇-乙酸铵水溶液,柱温30℃,流速0.6 mL·min^-1,离子化方式（-）ESI多反应监测模式（MRM）。结果：头孢呋辛在0.05~25.00 μg·mL^-1线性良好（r=0.998 7）,定量下限为0.05 μg·mL^-1。日内、日间精密度的RSD均低于15%。结论：建立的UPLC-MS/MS法测定儿童血浆中头孢呋辛浓度的方法验证灵敏、准确、稳定,可用于药动学评价研究。     

高效液相色谱法测定人血浆中伏立康唑浓度

目的：建立一种简单高效的高效液相色谱（HPLC）法用来检测人体中伏立康唑的血药浓度，并应用于临床中伏立康唑用药监测，以促进其个体化用药。方法：色谱柱：Kromasil C₁₈（4.6 mm×150 mm，5 μm），柱温：35℃，流速：1.0 mL·min^-1，流动相：甲醇-水（60：40），检测波长：257 nm，内标：酮康唑。对该方法进行方法学验证。结果：该方法专属性良好，血浆中伏立康唑在0.1~20.0 μg·mL^-1范围内线性良好（r=0.999 6），定量下限为0.1 μg·mL^-1。高、中、低3个浓度提取回收率分别为（90.68±10.32）%、（92.82±8.26）%、（97.47±4.58）%；日内精密度RSD分别为5.87%、7.85%、4.10%；日间精密度RSD分别为5.64%、3.30%、2.74%。对某院20例（男12例，女8例）使用伏立康唑抗真菌治疗的患者运用该方法进行了监测，结果显示浓度范围在0.71~13.51 μg·mL^-1之间。结论：本方法专属性高，操作简便，结果准确，可用于临床上伏立康唑血药浓度的检测，从而促进其个体化用药的推广。     

HPLC-ELSD法快速测定生脉注射液中糖类成分含量

目的：利用高效液相色谱-蒸发光散射检测法（HPLC-ELSD）建立生脉注射液中糖类成分快速定量分析方法。方法：采用Alltech Prevail^TM Carbohydrate ES （4.6 mm×250 mm,5 μm）色谱柱,以乙腈和水为流动相梯度洗脱,流速0.8 mL·min^-1,柱温30℃,进样量20 μL,ELSD漂移管温度65℃。结果：生脉注射液中果糖、葡萄糖、蔗糖和麦芽糖成分达到基线分离,浓度在179.0~2 864 μg·mL^-1（r=0.996 8）,49~784 μg·mL^-1（r=0.998 1）,39~642 μg·mL^-1（r=0.996 8）,30~480 μg·mL^-1（r=0.999 3）范围内均呈现良好的线性关系。平均回收率（n=3）在98.34%~100.7%之间,RSD ≤ 3.8%。结论：该方法快速、准确,可用于生脉注射液中糖类成分的定量检测。     

微乳液相色谱法测定大鼠血浆中罗布麻甲素的浓度及其药动学研究

目的：建立测定大鼠血浆中罗布麻甲素的微乳液相色谱方法,并将其用于大鼠体内药动学的研究。方法：用微乳液相色谱法分别测定给药后不同时间点大鼠的血药浓度,并对其药动学参数进行研究。色谱条件为：色谱柱为Zorbax SB-C₁₈（150 mm×4.6 mm,5 μm）柱;流速0.8 mL·min^-1;检测波长360 nm;柱温30℃。采用经过优化后的微乳体系为流动相,其组成为：2.0% Genapol X-080-2.8%正丁醇-1.8%乙酸乙酯-0.4%三乙胺-93.0%水溶液（pH调至5.0）。结果：大鼠静脉注射罗布麻甲素后,其药动学模型符合二室模型。分布和消除相半衰期分别为7.3 min和28.7 min。药时曲线下面积AUC（μg·min^-1·mL^-1）为804.37。表观分布容积V_d（μg·mL^-1）为0.325。平均驻留时间MRT（min）为25.8。大鼠血浆中罗布麻甲素在0.1~10 μg·mL^-1内线性均良好（r=0.998 6）,最低定量浓度（S/N=10）为0.1 μg·mL^-1,日内和日间RSD均小于4.9%,平均加样回收率在96.3%~98.8%之间,RSD均小于5.1%。结论：本法快速、简便、准确、重现性好,可用于罗布麻甲素血药浓度测定及药动学研究。     

高效液相色谱法检测人血浆中替加环素的浓度

目的：建立一种有效、灵敏、准确的可用于检测人血浆中替加环素浓度的方法。方法：色谱柱：Diamonsil C₁₈（250 mm×4.6 mm,5 μm）,流动相：乙腈-0.1%甲酸（4：96）,进行梯度洗脱,流速：1 mL·min^-1,紫外检测波长：246 nm,内标：雷尼替丁,柱温：40℃,进样量：20 μL。结果：替加环素峰与杂质峰及其他药物峰分离良好,不受血浆内源性物质干扰。血浆标准曲线下替加环素峰面积与内标峰面积的比值与血浆中两者浓度比值在0.028~5.600 μg·mL^-1内呈线性关系,回归方程Y=0.994 316X+0.007 455 29,r²>0.999 98,最低定量限为0.028 μg·mL^-1。替加环素和内标保留时间分别为13 min和15 min。日内和日间RSD小于10%,加样回收率均在95%以上,符合检测要求。结论：此方法具有较高可行性,准确度高,适用于血浆中替加环素浓度检测。     

高效液相色谱-荧光检测法测定盐酸帕罗西汀在小鼠血浆和脑组织中的蛋白结合率

目的:建立生物样品中盐酸帕罗西汀浓度的高效液相色谱-荧光检测方法,测定盐酸帕罗西汀在小鼠血浆和脑组织中的蛋白结合率。方法:以盐酸普萘洛尔为内标,血浆和脑组织匀浆样品采用醋酸乙酯萃取,采用高效液相色谱-荧光检测方法,其中色谱柱为Eurospher 100-5 C₁₈柱(250 mm×4 mm, 5 μm);流动相为乙腈-0.5%三乙胺水溶液=35:65(磷酸调pH值至3.5);柱温:40℃;流速:1 mL·min^-1;检测波长:激发波长295 nm,发射波长350 nm,进样量:20 μL。蛋白结合率的测定采用平衡透析法。结果:血浆和脑匀浆液中盐酸帕罗西汀在0.05~10 μg·mL^-1范围内线性关系良好,血浆与脑匀浆液基质提取回收率均>75%;日内、日间精密度均<10%。磷酸盐缓冲液盐酸帕罗西汀在0.005~0.5 μg·mL^-1内线性良好,定量下限为0.005 μg·mL^-1,且日内、日间精密度均符合要求。当血浆和脑匀浆液中盐酸帕罗西汀质量浓度为1.0,3.0,6.0 μg·mL^-1时,血浆蛋白结合率分别为(96.14±0.38)%,(96.07±0.88)%,(97.25±0.23)%;脑组织蛋白结合率分别为(99.84±0.031)%,(99.83±0.021)%,(99.80±0.041)%。结论:本研究建立的分析方法快速、简单、灵敏、准确,可用于生物样品中盐酸帕罗西汀含量的测定。小鼠血浆和脑组织中盐酸帕罗西汀蛋白结合率高,只有极少的药物以游离形式存在而发挥作用。     

高效液相色谱法同时测定四逆散中6种抗抑郁成分含量

目的：建立高效液相色谱法同时测定四逆散中6种抗抑郁成分：柴胡皂苷A、芍药苷、橙皮苷、柚皮苷、新橙皮苷和甘草苷含量的方法。方法：采用高效液相色谱法,色谱柱为Agilent Zorbax C₁₈色谱柱（4.6 mm×150 mm,5 μm）,流动相为水（A）-乙腈（B）,梯度洗脱,流速为1.0 mL·min^-1,柱温为30℃,检测波长为203 nm,进样量为20 μL。结果：柴胡皂苷A、芍药苷、橙皮苷、柚皮苷、新橙皮苷和甘草苷的线性范围分别为2.12～33.86 μg·mL^-1（r²=1.000 0）、5.91～94.60 μg·mL^-1（r²=0.999 9）、2.12～33.86 μg·mL^-1（r²=0.999 9）、7.26～116.2 μg·mL^-1（r²=1.000 0）、13.5～216.0 μg·mL^-1（r²=0.999 9）、2.02-32.33 μg·mL^-1（r²=0.999 9）。精密度、重复性和稳定性试验RSD均符合要求。柴胡皂苷A、芍药苷、橙皮苷、柚皮苷、新橙皮苷和甘草苷的加样回收率分别为102.77%、101.49%、101.18%、101.26%、99.06%。结论：本法灵敏简便、准确度高,适用于同时测定四逆散中6种抗抑郁成分柴胡皂苷A、芍药苷、橙皮苷、柚皮苷、新橙皮苷和甘草苷的含量,可用于四逆散的质量控制。     

高效液相色谱法测定人血清中替考拉宁浓度的不确定度评定

目的：评定高效液相色谱（HPLC）法测定人血清中替考拉宁浓度的不确定度。方法：HPLC法测定人血清中替考拉宁浓度，分析评定测定精密性、天平称量、工作液制备、血清样品制备、液相色谱仪、提取回收率、标准曲线拟合、对照品纯度、样品均匀性以及温度等因素对结果的影响，计算各因素的相对标准不确定度，最终计算合成标准不确定度和扩展不确定度。结果：当置信概率为95%时，人血清中低（6 μg·mL^-1）、中（20 μg·mL^-1）、高（50 μg·mL^-1）浓度替考拉宁的扩展不确定度分别为U（L）=0.63 μg·mL^-1，U（M）=1.87 μg·mL^-1，U（H）=5.08 μg·mL^-1，其测量结果可分别表示为（6.18±0.63）、（20.74±1.87）、（50.09±5.08）μg·mL^-1。结论：HPLC法测定人血清中替考拉宁浓度的不确定度主要由标准曲线拟合、样品提取过程（特别是低、高浓度）引入。     

HPLC结合截尾技术测定美罗培南血药浓度及其技术评估

目的：采用HPLC结合截尾技术建立美罗培南血浆浓度测定方法,并对该技术的评价指标进行初步评估。方法：HPLC结合截尾技术由色谱柱Aston RG C₁₈（4.6 mm×250 mm,5 μm,ANAX,中国）和捕获柱Aston SP3（4.6 mm×20 mm,5 μm,ANAX,中国）组成,样品经乙腈介导的净化技术处理后,经在线柱切换分离体系进行分析,外标法计算浓度,柱温：45℃,检测波长：298 nm;通过耐久性、耐受性、适应性、计量溯源性、时效性和分析成本等指标进行评估。结果：美罗培南浓度在0.48~81.78 μg·mL^-1（r=0.999 9）范围内时与峰面积呈良好的线性关系,方法学回收率为（96.34±4.67）%,日内、日间精密度RSD小于8.0%;本技术具有良好的耐久性、耐受性、适应性,计量可溯源性,高时效性和分析成本低的特点。结论：HPLC结合截尾技术稳定可靠、抗干扰能力强、误差可溯源、检测耗时少、运行成本低,能够满足临床患者美罗培南血药浓度监测的长期需求。     

反相高效液相色谱法同时测定芪香胶囊中红景天苷、芍药苷及毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量

目的：建立高效液相色谱法同时测定芪香胶囊（黄芪、红景天、赤芍、红花）中红景天苷、芍药苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷3种活性成分的含量。方法：采用Phenomenex Luna色谱柱（250 mm×4.6 mm,5 μm）,以乙腈（A）和水（B）为流动相,梯度洗脱[0~11 min,A-B（10：90）,11~40 min,A-B（18：82）,40~45 min,A-B（10：90）],流速1.0 mL·min^-1,柱温为35℃,检测波长：230 nm。结果：红景天苷在55.07~192.8 μg·mL^-1、芍药苷在65.45~229.1 μg·mL^-1、毛蕊异黄酮葡萄糖苷在10.74~64.44 μg·mL^-1 范围内均呈良好线性关系;相关系数分别为0.999 8,0.999 7,0.999 8;红景天苷、芍药苷和毛蕊异黄酮葡萄糖苷的回收率分别为99.90%,100.88%,100.06%,样品溶液在24 h内稳定,含量分别为1.422 2,3.183 3,0.250 0 mg·g^-1。结论：该方法经验证,可为芪香胶囊多指标质量评价及控制提供科学依据。     

高效液相色谱法同时测定蒙药阿那日-4散中3种成分的含量

目的：建立蒙药阿那日-4散（石榴、肉桂皮、白豆蔻、荜茇）中有效成分没食子酸、桂皮醛和胡椒碱的含量测定方法。方法：采用反相高效液相色谱法以Promosil C₁₈（4.6 mm×250 nm,5μm）为色谱柱;以乙腈-1%冰乙酸水溶液为流动相,梯度洗脱;流速为1.0 mL·min^-1;柱温为30℃;检测波长为290 nm。结果：没食子酸在0.08~0.4μg·mL^-1（r=0.9998）、桂皮醛在0.56~2.81μg·mL^-1（r=0.9996）、胡椒碱在0.52~2.59μg·mL^-1（r=0.9997）范围内与峰面积呈良好的线性关系;其平均回收率（n=6）分别为99.5%（RSD=2.3%）、99.3%（RSD=2.8%）和98.5%（RSD=2.2%）;6批样品中上述3种成分平均含量范围分别为0.198~0.241,2.44~2.61,1.41~1.54μg·g^-1。结论：所建立方法操作简便、稳定可靠、专属性强、准确度及重复性较好,为蒙药阿那日-4散质量检测提供依据。     

波长切换高效液相色谱法同时测定青翘抗毒颗粒中7个成分的含量

目的：建立高效液相色谱法同时测定青翘抗毒颗粒中绿原酸、马钱苷、连翘苷、葛根素、（R,S）-告依春、射干苷、咖啡酸的含量。方法：采用岛津InertSustain C₁₈柱（250 mm×4.6 mm,5 μm）,以甲醇-0.3%磷酸水溶液为流动相进行梯度洗脱;流速为1.0 mL·min^-1;进样量为5 μL;检测波长为240 nm（0~25 min,检测（R,S）-告依春）、327 nm（25~39 min,检测绿原酸和咖啡酸）、240 nm（39~45 min,检测葛根素和马钱苷）、265 nm（45~53 nm,检测射干苷）、228 nm（53~65 min,检测连翘苷）;柱温为30℃。结果：绿原酸、马钱苷、连翘苷、葛根素、射干苷、咖啡酸、（R,S）-告依春7个成分的进样质量浓度分别在4.56~228 μg·mL^-1（R²=0.999 9）、4.04~202 μg·mL^-1（R²=0.999 8）、8.10~405 μg·mL^-1（R²=0.999 9）、8.06~161 μg·mL^-1（R²=0.999 9）、2.10~105 μg·mL^-1（R²=0.999 9）、3.46~173 μg·mL^-1（R²=0.999 9）、4.58~229 μg·mL^-1（R²=0.999 9）与峰面积呈良好的线性关系;各组分分离度良好;加样回收率（n=6）分别为99.35%（RSD为2.6%）、100.76%（RSD为1.5%）、100.34%（RSD为0.9%）、100.63%（RSD为1.5%）、100.31%（RSD为1.7%）、100.70%（RSD为1.6%）、99.03%（RSD为1.7%）。结论：本研究建立的含量测定方法符合方法学验证要求,可用于青翘抗毒颗粒7个指标性成分的同时测定。     

HPLC-DAD波长切换法同时测定化扁汤中10种有效成分的含量

目的：采用高效液相色谱-二极管阵列检测（HPLC-DAD）波长切换法建立同时测定化扁汤中新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C、黄芩苷、连翘苷和牛蒡苷10种有效成分的定量分析方法。方法：采用SHIMADZU Insertsustain C₁₈色谱柱（250 mm×4.6 mm,5 μm）,以流动相乙腈-0.2%磷酸溶液梯度洗脱,DAD检测器,检测波长为327 nm（0~37 min,检测新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C）、278 nm（37~41.3 min,检测黄芩苷）、228 nm（41.3~50 min,检测连翘苷和牛蒡苷）,流速1.0 mL·min^-1,柱温为35℃。结果：各成分均能有效检出且分离度良好;新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C、黄芩苷、连翘苷、牛蒡苷10种成分的进样浓度分别在4.512~1.444×10² μg·mL^-1（r=0.999 9）、14.162~4.532×10² μg·mL^-1（r=1.000 0）、2.538~0.812×10² μg·mL^-1（r=0.999 9）、3.275~1.048×10² μg·mL^-1（r=0.999 9）、2.638~0.844×10² μg·mL^-1（r=0.999 9）、5.912~1.892×10² μg·mL^-1（r=0.999 9）、8.162~2.612×10² μg·mL^-1（r=0.999 9）、30.288~9.692×10² μg·mL^-1（r=0.999 9）、3.288~1.052×10² μg·mL^-1（r=0.999 9）、5.812~1.860×10² μg·mL^-1（r=0.999 9）与峰面积呈良好的线性关系;加样回收率（n=6）分别为99.1%（RSD=1.1%）、99.6%（RSD=0.9%）、100.2%（RSD=1.5%）、99.8%（RSD=1.6%）、99.5%（RSD=1.4%）、100.3%（RSD=1.0%）、100.0%（RSD=2.0%）、99.7%（RSD=1.5%）、99.6%（RSD=1.5%）、99.7%（RSD=1.9%）。结论：利用HPLC-DAD波长切换法可同时测定化扁汤中10种有效成分的含量,该法简便可靠,重现性好,为化扁汤的质量控制与评价提供科学依据。     

液-质联用法测定人血浆中卢非酰胺的浓度及其在药动学研究中的应用

目的:建立高效液相色谱-质谱联用(HPLC-MS/MS)测定人血浆中卢非酰胺浓度的方法。方法:40名健康受试者随机分成4组,分别单剂量口服给药卢非酰胺片200,400,800,1200 mg。血浆样品经乙腈沉淀蛋白提取分离,色谱柱为Ultimate^® AQ-C₁₈(100 mm×2.1 mm,5 μm,Welch Material Inc.);流动相为乙腈-5 mmol·L^-1乙酸胺水溶液(含0.1%甲酸)=32:68;流速为0.30 mL·min^-1;内标为埃索美拉唑。采用电喷雾离子源,以多反应监测(MRM)方式进行正离子检测。结果:卢非酰胺的血浆浓度在40~5000 ng·mL^-1范围内线性良好,定量下限为40 ng·mL^-1,日内精密度(RSD)均≤8.20%,日间精密度(RSD)均≤6.35%,提取回收率为91.94%~96.48%。卢非酰胺呈非线性药动学特征,单剂量空腹口服给药卢非酰胺片200,400,800,1200 mg后,C_max分别为1803.50±528.06, 2485.00±562.71, 3710.00±965.50和4158.00±1181.91 μg·L^-1。AUC_0-t分别为34522.13±9525.00, 56138.53±18021.98, 88848.53±23348.14和107058.03±34420.08 μg·h·L^-1。结论:该法操作简单,灵敏,准确,重复性好,适用于卢非酰胺片临床药动学研究。从药动学研究可知,卢非酰胺在中国健康受试者中呈非线性药动学特征。     

高效液相色谱法测定川续断中熊果酸、齐墩果酸、马钱苷和川续断皂苷Ⅵ的含量

目的:利用高效液相色谱法(HPLC)建立川续断中熊果酸、齐墩果酸、马钱苷和川续断皂苷Ⅵ4种指标成分的含量测定方法。方法:(1)测定熊果酸、齐墩果酸色谱条件为:色谱柱:Agilent ZORBAX SB-C₁₈(4.6 mm×250 mm,5 μm);流动相:甲醇-0.2%醋酸铵水溶液(86:14);流速:0.9 ml·min^-1;柱温:25 ℃;检测波长:210 nm。(2)测定马钱苷、川续断皂苷Ⅵ色谱条件为:色谱柱:Agilent ZORBAX SB-C₁₈(4.6 mm×250 mm,5 μm);流动相:0~8 min乙腈-水(15:85),8~10 min乙腈-水(25:75),10~28 min乙腈-水(30:70);流速:0.8 ml·min^-1;柱温:25 ℃;分别在240 nm、210 nm的波长条件下检测马钱苷和川续断皂苷Ⅵ。结果:(1)熊果酸在5.20~520 μg·ml^-1范围内线性关系良好,r=0.999 7;平均回收率为96.4%,RSD为0.96%;齐墩果酸在5.64~564 μg·ml^-1范围内线性关系良好,r=0.999 8;平均回收率为97.7%,RSD为1.66%。(2)马钱苷在6.04~604 μg·ml^-1范围内线性关系良好,r=0.999 9;平均回收率为99.4%, RSD为1.35%,川续断皂苷Ⅵ 6.28~628 μg·ml^-1范围内线性关系良好,r=1.000;平均回收率为97.7%,RSD为0.90%。结论:该方法简单、准确可行,结果稳定可靠,可为川续断的质量控制提供科学依据。     

高效液相色谱法同时测定人血清中茶碱及其代谢物1,3-二甲基尿酸浓度

目的：建立一种同时测定人血清样品中茶碱及其代谢物1,3-二甲基尿酸血药浓度的HPLC方法。方法：血清样品经乙腈沉淀除去蛋白,选择对乙酰氨基酚为内标,真空浓缩、复溶后采用HPLC分析。色谱柱为：Agilent ZORBAX SB-C₁₈柱（150 mm×4.6 mm,5 μm）,流动相为乙腈∶0.3%甲酸溶液（5∶95）,检测波长为280 nm,流速为1 mL·min^-1,进样量为20 μL。结果：茶碱、1,3-二甲基尿酸的血清浓度线性范围分别为0.50~40.00 μg·mL^-1和0.10~12.80 μg·mL^-1,两者的线性关系均良好（R分别为0.998 8和0.999 7）,最低定量下限分别为0.50,0.10 μg·mL^-1。茶碱和1,3-二甲基尿酸低、中、高质量浓度的提取回收率分别为80.22%,87.25%,89.23%和87.03%,80.01%,87.95%,二者批内和批间RSD均小于15%。结论：该方法简便、准确,特异性和灵敏度能够满足临床测定人血清中茶碱及其代谢物1,3-二甲基尿酸浓度的要求,适用于评价和研究人体内茶碱的药动学影响,指导临床用药。