釉质基质蛋白对乳牙牙髓干细胞体外增殖、分化能力的影响

目的：研究釉质基质蛋白（enamel matrix proteins,EMPs）对人脱落乳牙牙髓干细胞（stem cells from hu—man exfoliated dediduous teeth,SHED）体外增殖分化能力的影响。方法：利用酶消化法联合组织块法获得脱落乳牙牙髓干细胞,并进行形态学观察。三氯乙酸法制备EMPs,用不同浓度的EMPs对SHED进行诱导,利用四唑盐比色法（MTT）检测并分析诱导后的SHED增殖活性的变化,检测经诱导后的培养液中碱性磷酸酶（ALP）。RT—PCR检测牙本质涎磷蛋白（dentin sialophosphoprotein,DSPP）及牙本质基质蛋白1（dentin matrix protein1,DMP-1）的mRNA表达。结果：人脱落乳牙牙髓干细胞呈集落生长,并且在体外具有一定的自我增殖能力。EMPs对乳牙牙髓干细胞的增殖无明显影响,而能够显著提高ALP的活性,并呈现一定的剂量依赖性。经EMPs诱导后,细胞相对高表达DSPP、DMP-1mRNA。结论：EMPs对于SHED向成牙本质样分化具有积极作用。     

釉质基质蛋白通过miR-32对乳牙牙髓干细胞成骨与成脂分化的影响

目的:探讨釉质基质蛋白(EMPs)对乳牙牙髓干细胞(SHED)成骨和成脂作用的影响,并探讨其分子机制.方法:采用流式细胞术检测SHED表面抗原CD73、CD146、CD34和CD45的表达.通过OB成骨诱导液诱导SHED,采用茜素红染色检测其成骨分化能力.将SHED分为4组,NC组为无效序列shRNA干扰SHED,EM...     

釉基质蛋白（EMPs）对大鼠牙髓干细胞体外增殖、分化能力的影响

目的：研究釉基质蛋白（Enamel Matrix Proteins,EMPs）对大鼠牙髓干细胞（rat Dental Pulp Stem Cells,rDPSCs）体外增殖分化能力的影响。方法：酶消化培养法获得大鼠牙髓干细胞,有限稀释法分离纯化大鼠牙髓干细胞,形态学观察,计算细胞克隆形成率。乙酸法制备EMPs,用不同浓度的EMPs进行诱导,利用四唑盐比色法（MTD检测和分析诱导后细胞增殖活性的变化。检测诱导后培养液中的碱性磷酸酶（Alkaline Phosphatase,ALP）。免疫组化染色和RT-PCR方法检测牙本质涎蛋白（dentin sialoprotein,DSP）、牙本质基质蛋白1（dentin matrixprotein 1,DMP—1）和牙本质涎磷蛋白（dentin sialophosphopmtein,DSPP）的mRNA表达。结果：大鼠牙髓干细胞呈集落状生长,在体外具有一定的克隆形成能力。EMPs对大鼠牙髓干细胞的增殖有促进作用,并呈现剂量和时间依赖性。200gg／ml EMPs组可显著促进大鼠牙髓干细胞的增殖。EMPs作用组能显著提高大鼠牙髓干细胞的碱性磷酸酶活性。经细胞因子刺激后细胞表达DSP、DMP-1蛋白和DSPP mRNA。结论：EMPs在大鼠牙髓干细胞增殖和向成牙本质细胞分化方面具有积极的作用。     

人乳牙牙髓干细胞分化的研究进展

<正>人乳牙牙髓干细胞(stem cells from human exfoliated deciduous teeth,SHED)是口腔来源的干细胞,因高度增殖能力和多分化的潜能,而成为再生医学的热点。本文就其多方向分化潜能进行综述。     

牙髓干细胞分化为成牙本质细胞相关标记物的研究进展

体外诱导牙髓干细胞分化为成牙夺贡细胞，检测牙本质涎磷蛋白、碱性磷酸酶活性等相关标记物的变化，从而鉴定其分化能力，是近年来在牙髓干细胞领域中研究的热点。本文就上述标记物的研究进展进行综述。     

大鼠牙本质基质蛋白1对人牙髓细胞增殖和ALP活性的影响

目的 :探讨大鼠牙本质基质蛋白 1(DMP1)对体外培养的人牙髓细胞增殖和ALP活性的影响。方法 :利用MTT法研究牙髓细胞的细胞增殖情况 ,碱性磷酸酶检测试剂盒检测牙髓细胞内ALP活性。结果 :DMP1在细胞培养 3d和 5d时 ,5 μg/mL组可促进人牙髓细胞增殖 (P <0 .0 5 )。细胞培养 3d时 ,仅5 μg/mL组可促进人牙髓细胞ALP活性 (P <0 .0 5 ) ;培养 5d时 1μg/mL和 5 μg/mL均可促进人牙髓细胞ALP活性 (P <0 .0 5 ) ;培养 7d时促进作用进一步加强 (P <0 .0 5 )。结论 :DMP1在一定浓度下可促进牙髓细胞的增殖 ;DMP1对牙髓细胞ALP活性的促进作用呈浓度依赖性 ,高浓度DMP1可以促进人牙髓细胞ALP活性 ,随着时间的延长 ,促进ALP活性的作用也增强。     

细胞外基质磷酸化糖蛋白在人牙髓细胞成牙本质分化中的表达

义(P<0.05).蛋白质印迹法检测显示各矿化标记的蛋白表达均较对照组上调.结论 在hDPC诱导成牙本质分化的过程中,MEPE与DSPP、DSP、BSP、Ⅰ型胶原呈现相似的表达变化趋势,提示MEPE与hDPC的成牙本质分化有关,可作为hDPC向成牙本质样细胞分化的标志.     

牙髓干细胞分化为成牙本质细胞相关标记物的研究进展

体外诱导牙髓干细胞分化为成牙本质细胞,检测牙本质涎磷蛋白、碱性磷酸酶活性等相关标记物的变化,从而鉴定其分化能力,是近年来在牙髓干细胞领域中研究的热点。本文就上述标记物的研究进展进行综述。     

富血小板血浆对人脂肪间充质干细胞增殖及成骨分化能力的影响

目的：探讨富血小板血浆（PRP）对人脂肪间充质干细胞（hADSCs）增殖、分化及成骨能力的影响。方法：脂肪组织体外分离获得hADSCs,2次离心制备PRP,氯化钙加人凝血酶激活PRP。倒置相差显微镜观察成骨诱导实验中PRP对细胞增殖、分化状况的影响,钙-钴法检测PRP作用下hADSCs矿化结节形成,碱性磷酸酶（ALP）检测PRP对细胞活性及分化能力的影响。CCK-8法检测成骨诱导组和非成骨诱导组加PRP培养后2、4、6、8、16d细胞活性变化。结果：成骨诱导实验中50%PRP30μL组细胞密集、数量最多,且有剂量依赖性;钙-钴法检测见PRP原液组细胞染色最深,且有浓度依赖性;碱性磷酸酶显色见PRP原液组细胞活性最强,染色最深。CCK-8检测显示无论有无成骨诱导,各浓度PRP均可促进细胞增殖,且有浓度依赖性。结论：适宜浓度的PRP可明显促进hADSCs增殖,并有浓度及剂量依赖性。     

富血小板血浆对珊瑚支架上骨髓基质细胞增殖和成骨分化的影响

目的：评价富血小板血浆（plateletrichplasma，PRP）对珊瑚支架上骨髓基质细胞（marrowstromalcells，MSCs）增殖和成骨分化的影响。方法：将体外培养、扩增和诱导的兔MSCs悬液与同一供体来源的PRP混合，滴加到珊瑚圆片上，再滴加牛凝血酶溶液，形成珊瑚／MSCs／PRP复合物，继续在体外培养。以珊瑚／MSCs复合物和珊瑚／PRP复合物作对照。8d和14d，通过MTT法检测MSCs增殖情况；通过组织化学方法检测培养液中碱性磷酸酶活性和骨钙素含量；通过扫描电镜观察MSCs在珊瑚支架上附着、生长和增殖情况。结果：珊瑚／MSCs／PRP组的光密度值明显大于珊瑚／MSCs组（P〈0．05）；珊瑚／MSCs／PRP组培养液中的ALP活性和OC含量明显大于珊瑚／MSCs组（P〈0．05）；扫描电镜显示：珊瑚／MSCs／PRP组，大量MSCs附着于珊瑚表面和孔洞壁，可见孔洞内有血小板和纤维网格样结构存在；珊瑚／MSCs组，珊瑚表面和孔洞壁有少量MSCs附着；珊瑚／PRP组，珊瑚表面及其孔洞内有大量的血小板和纤维网格样结构存在。结论：PRP促进了珊瑚支架上MSCs的增殖、成骨分化和粘附。     

兔骨髓基质细胞的体外成骨定向诱导培养

目的:体外分离培养兔骨髓基质细胞(bonemarrowstromalcells,BMSCs),并向成骨定向诱导培养,为骨组织工程提供适宜的种子细胞。方法:抽取新西兰白兔的骨髓,体外分离纯化得到BMSCs,并利用条件培养液将其向成骨定向诱导培养、扩增。采用倒置相差显微镜观察细胞增殖分化情况;使用碱性磷酸酶(ALP)和VonKossa染色的方法,鉴定其成骨性能;用MTT法描绘标准细胞浓度-OD值曲线。结果:BMSCs在培养皿中贴壁生长、增殖;经ALP和VonKossa染色证实其有成骨潜能;标准BMSCs细胞浓度-OD值曲线显示细胞浓度和OD值呈线性正相关。结论:可以通过在体外分离纯化骨髓并诱导培养,获得足够数量、有成骨潜能的BMSCs作为骨组织工程的种子细胞。     

Effect of Age and Extrinsic Microenvironment on the Proliferation and Osteogenic Differentiation of Rat Dental Pulp Stem Cells In Vitro

IntroductionIt is suggested that dental pulp stem cells (DPSCs) possess pluripotent differentiation and self-renewal capacity and play a crucial role in maintaining dental pulp homeostasis. However, little is known about the age-related changes of DPSCs, and whether aging and its microenvironment are associated with DPSCs remains a question. In this study, age-related changes in proliferation and osteogenic differentiation ability of rat DPSCs were assessed.MethodsTo examine the influence of microenvironment factors on different ages of DPSCs, we exposed adult rat DPSCs to juvenile rat dental pulp cell–conditioned medium (DPC-CM), and juvenile DPSCs were exposed to adult DPC-CM. Morphologic appearance, colony-forming assay, cell cycle analysis, 3-(4,5-dimethyl-thyazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium, gene expression, and mineralization assay after osteogenic induction of DPSCs were evaluated.ResultsDPSCs isolated from the juvenile donors displayed increased proliferation and decreased osteogenic differentiation ability compared with the adult DPSCs. Interestingly, adult DPSCs induced by juvenile DPC-CM demonstrated enhanced proliferation but decreased osteogenic differentiation ability, whereas DPSCs from juvenile donors induced by adult DPC-CM showed decreased proliferation but enhanced osteogenic differentiation ability.ConclusionsOur data suggest that age-related changes of DPSCs should be taken into account when DPSCs are intended to be used for investigations and application. Furthermore, the activity of DPSCs can be modulated by the extrinsic microenvironment.     

内皮素促人牙周膜成纤维细胞生长作用的体外研究

目的:探讨不同浓度内皮素-1(ET-1)对人牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament fibroblastcells,HPLFs)增殖和分化的影响,为进一步探讨正畸牙齿移动的生物学机制奠定基础。方法:采用HPLFs体外培养技术和四唑盐(MTT)显色分光光度法及生化检测法观察ET-1对人牙周膜成纤维细胞增殖和分化的影响。结果:与对照组相比,10-8mol/L组ET-1对HPLFs具有显著的促增殖作用(P<0.01),10-6mol/L组ET-1对HPLFs的增殖具有明显的抑制作用(P<0.01)。ET-1对HPLFs的分化没有影响。结论:ET-1为促HPLFs生长因子,但是对细胞分化不产生影响,可能在正畸过程中牙周组织的改建中发挥作用。     

经典Wnt信号通路在牙周膜细胞成骨分化过程中的调控

目的: 探讨经典Wnt/β-catenin信号通路对牙周膜混合细胞群成骨分化过程中的调控作用。方法: 体外组织块结合酶消化法培养牙周膜混合细胞群,通过RT-PCR、real-time PCR证实经典Wnt信号通路在牙周膜细胞中的表达,并运用细胞免疫荧光分析检测了β-catenin的表达位置及表达量;通过不同浓度的Licl激活牙周膜细胞中经典Wnt信号通路,并进行相应的诱导培养。培养14 d后,茜素红染色观察矿化结节形成情况,碱性磷酸酶活性检测ALP活性;通过CCK-8检测Licl刺激24 h、48 h、72 h后经典Wnt信号通路对牙周膜细胞增殖的影响。以单因素重复测量方差分析比较差异。结果: 经典Wnt/β-catenin信号通路在牙周膜混合细胞群中明显表达,可以通过Licl激活该信号通路,使β-catenin在细胞中累积引起下游变化;与对照组相比较,经典Wnt/β-catenin信号通路的激活引起牙周膜细胞矿化过程中矿化结节的减少,显著降低了ALP活性(P<0.01);经典Wnt通路对牙周膜混合细胞群增殖表现为显著的抑制作用(P<0.01)。结论: 经典Wnt/β-catenin信号通路抑制了牙周膜混合细胞群的矿化成骨过程,并抑制该细胞群的增殖。     

氟化钠缓释片对成骨细胞的存活和增殖能力的影响

用ＭＴＴ法和＾３Ｈ－ＴｄＲ法测定氟化钠缓焉对成骨细胞的存活和增能力的影响。结果氟化钠缓释片有促进成骨细胞生长活性。     

牙骨质附着蛋白对牙囊细胞增殖的影响

目的:了解牙骨质附着蛋白对牙囊细胞增殖的作用。方法:分别采用MTT比色法和酶动力学方法观察牛牙骨质附着蛋白对体外培养人牙囊细胞增殖及其碱性磷酸酶活性影响。结果:牙骨质附着蛋白对牙囊细胞的增殖无显著影响,但高浓度的牙骨质附着蛋白可增强牙囊细胞碱性磷酸酶活性。结论:牙骨质附着蛋白对牙囊细胞的增殖无促进作用。