PI3K/AKT/mTOR/p70S6K通路在人舌鳞癌细胞耐药中的作用

目的:通过抑制舌鳞癌细胞中PI3K/AKT/mTOR/p70S6K信号通路的表达,检测细胞凋亡与自噬的变化,探讨舌鳞癌耐药的机制。方法:以舌鳞癌细胞Cal27与舌鳞癌耐顺铂细胞Cal27/CDDP为研究对象。分别用PI3K/AKT抑制剂LY294002、mTOR抑制剂Rapamycin、p70S6K抑制剂LY2584702作用该通路各个环节。Western blot检测通路抑制剂作用后相关蛋白的变化。Cyto-ID荧光染色检测自噬体的形成。流式细胞术检测细胞凋亡水平。结果:Western blot结果显示加入抑制剂后舌鳞癌细胞Beclin1表达分别高于对照组,LC3II与LC3I以及Bax与Bcl-2的比值均升高,该通路的p-AKT、p-mTOR、p-p70S6K等蛋白均有下降(P<0.05)。流式结果显示加入抑制剂后的舌鳞癌细胞凋亡率分别较对照组升高(P<0.05)。Cyto-ID荧光染色后结果显示加入抑制剂后的舌鳞癌细胞自噬小体的数目明显高于对照组(P<0.05)。对比两组细胞显示加入抑制剂后的Cal27细胞发生凋亡与自噬的水平高于Cal27/CDDP(P<0.05)。结论:抑制PI3K/AKT/mTOR/p70S6K信号通路可诱导舌鳞癌细胞Cal27与舌鳞癌耐顺铂细胞Cal27/CDDP发生凋亡与自噬,激活的PI3K/AKT/mTOR/p70S6K通路抑制细胞凋亡与自噬是Cal27/CDDP细胞产生顺铂耐药的原因之一。     

Survivin基因在顺铂诱导Tca8113舌鳞癌细胞凋亡中的作用

目的体外观察顺铂（DDP）诱导Tca8113舌鳞癌细胞株凋亡的作用, 同时检测在此过程中凋亡蛋白抑制因子Survivin mRNA表达和蛋白表达的变化。方法将人Tca8113舌鳞癌细胞株进行传代培养,MTT法检测顺铂不同浓度和不同时间对Tca8113舌鳞癌细胞生长的抑制作用,通过RT- PCR检测凋亡过程中Survivin基因mRNA的表达,免疫细胞化学观察Survivin基因的蛋白表达,以及流式细胞术观察顺铂诱导各组Tca8113细胞的凋亡率。结果顺铂可明显抑制Tca8113舌鳞癌细胞的增殖, 其增殖抑制率呈浓度和时间依赖性,细胞凋亡率也呈同样的趋势,最高可达34.1%。1.0 μg/mL DDP处理Tca8113舌鳞癌细胞,Survivin mRNA和蛋白表达水平随时间的增加而降低,在24h达到最低,随后又升高。结论抗凋亡蛋白Survivin在Tca8113舌鳞癌细胞高表达,顺铂可有效诱导Tca8113舌鳞癌细胞凋亡, Survivin mRNA表达在化疗早期随作用时间的延长而降低,Survivin基因的抑制在顺铂诱导的Tca8113舌鳞癌细胞的细胞凋亡中起着重要的作用。     

沉默LASP1对口腔鳞癌细胞生物学行为及3种抗肿瘤药物IC50的影响

目的:评价LASP1 对口腔鳞癌细胞增殖、转移、侵袭和周期的影响,并对3种抗肿瘤药物顺铂、阿帕替尼和多西他赛的相关作用进行分析。方法:利用The human protein atlas数据分析LASP1与头颈部肿瘤生存率、预后的关系。RT-PCR 和Western免疫印迹检测LASP1在口腔鳞癌细胞系的mRNA和蛋白表达。慢病毒构建LASP1沉默的HN30稳转细胞株,CCK-8 法检测细胞增殖,平板克隆实验检测细胞克隆形成能力,Transwell法检测细胞转移和侵袭能力,流式细胞仪检测细胞周期变化。建立裸鼠口腔鳞癌肺部转移瘤。CCK-8法分析3种药物顺铂、阿帕替尼和多西他赛在细胞中的IC₅₀变化。采用SPSS 11.0 软件包对数据进行统计学分析。结果:LASP1与头颈部肿瘤生存率、预后密切相关。LASP1促进口腔鳞癌细胞系HN30增殖、克隆形成、转移和侵袭,促进细胞周期G2/M期过渡。沉默LASP1后,裸鼠肺部转移瘤显著减少,多西他赛IC₅₀显著下调,而顺铂和阿帕替尼IC₅₀无显著变化。结论:LASP1促进口腔鳞癌细胞增殖、平板克隆、转移和侵袭,细胞周期G2/M期过渡,促进裸鼠体内肺转移瘤形成和多西他赛耐药。     

人舌鳞癌细胞SOCS1基因沉默对细胞增殖和化疗药物敏感性的影响

目的:在人舌鳞癌细胞中观察细胞因子信号转导抑制因子1(SOCS1)沉默对细胞增殖及化疗药物敏感性的影响,探讨SOCS1作为舌鳞癌治疗靶点的研究。方法:western blot、PCR及定量PCR验证SOCS1干扰序列沉默人舌鳞癌细胞系CAL27中SOCS1的表达; MTT法检测舌鳞癌细胞对化疗药物敏感性的变化;细胞计数的方法观察细胞的增殖速度;采用流式细胞术的方法检测细胞周期的变化。结果:将SOCS1干扰序列转染CAL27细胞后,SOCS1 mRNA及蛋白表达水平均明显下降。沉默SOCS1表达后,化疗药物卡铂和紫杉醇对CAL27细胞的半数抑制浓度(IC₅₀)均显著降低(P<0.01);转染72 h后CAL27细胞数量较对照组显著减少(P<0.05);SOCS1表达抑制后CAL27细胞G0/G1期细胞比例明显升高,而S期和G2/M期细胞比例明显减小,与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:SOCS1表达抑制后,人舌鳞癌细胞株CAL27的增殖能力下降,并且对化疗药物的敏感性增强。     

IGF2BP1在口腔鳞癌细胞耐药中的作用及机制探讨

目的: 探讨IGF2BP1在口腔鳞癌细胞顺铂耐药中的作用和机制。方法: 运用小剂量间歇诱导法诱导顺铂敏感的口腔鳞癌细胞HN30,建立顺铂耐药口腔鳞癌细胞系HN30/DDP。通过蛋白免疫印迹方法检测亲本株与耐药株的IGF2BP1表达差异;利用siRNA和慢病毒过表达载体分析IGF2BP1基因表达水平降低或升高对癌细胞顺铂耐药的影响;应用MTT法检测IGF2BP1基因降低或升高后口腔鳞癌细胞对顺铂的IC₅₀。采用SPSS 17.0软件包对数据进行统计学分析。结果: 成功建立顺铂耐药的口腔鳞癌细胞系HN30/DDP,耐药细胞株较亲本株的耐药性明显提高。敲低HN30/DDP中的 IGF2BP1 表达水平,细胞耐药性降低;反之,亲本株细胞过表达 IGF2BP1后,细胞耐药性提高。Akt 信号通路活化是介导 IGF2BP1 促进口腔鳞癌细胞顺铂耐药的关键因素。结论: IGF2BP1 与口腔鳞癌的顺铂耐药密切相关。IGF2BP1 可通过激活下游 Akt 信号通路,促进口腔鳞癌细胞耐药。     

bFGF与米贝拉地尔对人牙周膜成纤维细胞增殖的调节

目的:研究成纤维细胞生长因子(bFGF,以下用B代表)与米贝拉地尔(Mibefradil,以下用M代表)这两种药物对人牙周膜成纤维细胞(HPLFs)增殖的调节作用。方法:B分10.0、20.0、30.0 μg/L 3种浓度(分别为B1、B2、B3),M分2.5、5.0、10.0 μmol/L 3种浓度(分别为M1、M2、M3),再按加药时间分为1 d组、2 d组和3 d组,用WST法检测两种药物单独使用和按先后不同顺序联合使用后HPLFs的增殖率。结果:两种药物单独使用可分别起到促进和阻滞细胞增殖的效果,但是B作用时间过长细胞表现为增殖受阻滞。其中,B3作用1 d组细胞增殖率最高(P<0.05),M2作用1 d组细胞增殖率最低(P<0.05)。M仅对加用B3的细胞有明显阻滞作用,与单独使用B3的细胞增殖率有显著性差异(P<0.05)。另外,只有B1不能改变细胞加用M后增殖受阻滞的现象。所有联合用药后的细胞增殖率均与正常细胞增殖率无统计学差异。结论:bFGF与Mibefradil单独使用有各自的最佳作用浓度和作用时间。除过度增殖状态外,HPLFs增殖状态很难受到阻滞,并且处于增殖受阻滞状态的细胞很容易恢复增殖状态,以维持HPLFs不断处于增殖平衡状态。     

替尼泊苷诱导Tca8113细胞凋亡及细胞周期阻滞的实验观察

目的：检测替尼泊苷(teniposide,VM-26)的体外抗肿瘤增殖效果并探索其作用机制。方法：以不同浓度的VM-26体外作用Tca8113细胞,应用MTT方法、流式细胞仪、透射电镜和荧光染色等分别检测细胞的生长抑制率、凋亡率及细胞周期分布。使用SAS6．12软件进行单因素方差分析。结果：VM-26和CDDP对Tca8113细胞的半数抑制浓度分别为0．35μg／ml和1．1μg／ml。透射电镜观察细胞形态发生典型的凋亡表现,5.0μg/ml和0．15μg／ml的VM-26作用72h,细胞凋亡率分别为81．01％和17．38％,而细胞周期则分别被阻滞在S期和G2／M期。结论：VM-26可以显著诱导口腔鳞癌细胞凋亡并抑制细胞生长,不同剂量的VM-26对口腔鳞癌细胞周期阻滞的阶段不同。     

血竭素高氯酸盐对舌鳞癌细胞Tca-8113增殖及凋亡的影响

目的:研究血竭素高氯酸盐(Dracorhodin perchlorate,DP)对舌鳞癌细胞Tca-8113增殖和凋亡的影响并初步探讨其相关机制。方法:以舌鳞癌细胞Tca-8113为研究对象,采用CCK-8、流式细胞术分析及Western Blot等方法检测不同浓度DP对Tca-8113细胞的增殖、凋亡及核因子E2-相关因子2(nuclear factor E2-related factor 2,Nrf2)、血红素氧合酶 1(heme oxygenase 1,HO-1)蛋白表达的变化。采用SPSS17.0统计软件对实验结果进行分析。结果:CCK-8检测表明,与空白对照组相比,DP可以显著抑制细胞增殖,且对细胞的增殖抑制作用有时间-剂量依赖性(P<0.05)。流式细胞术及Western Blot检测结果显示DP可以促进细胞凋亡(P<0.05),并提高Nrf2、HO-1在Tca-8113细胞中的表达。结论:DP能抑制舌鳞癌细胞Tca-8113增殖并诱导其发生凋亡,其作用可能与Nrf2/HO-1信号通路激活有关;可能成为抗口腔癌药物。     

羟基喜树碱对人咽鳞癌细胞系FaDu增殖、迁移、凋亡及周期的影响

目的探讨羟基喜树碱对人咽鳞癌细胞系FaDu增殖、迁移、凋亡及周期的影响。方法培养人咽鳞癌细胞系FaDu,采用MTT实验、Transwell细胞迁移实验和流式细胞仪检测不同浓度的羟基喜树碱对FaDu细胞增殖、迁移、凋亡及周期的影响。结果 MTT实验、Transwell侵袭实验结果表明一定浓度羟基喜树碱可以抑制Fadu细胞的增殖和迁移能力,流式细胞仪检测结果显示80μg/L羟基喜树碱可以将FaDu细胞阻滞在S期并促进其凋亡。结论羟基喜树碱可以抑制FaDu细胞的增殖和迁移能力并诱导其凋亡,且羟基喜树碱对FaDu的凋亡诱导作用与其对FaDu细胞周期的影响有关。     

Garcinol对人口腔鳞癌细胞的抑制作用研究

目的 观察Garcinol对人口腔鳞癌细胞系SCC15增殖、细胞周期、凋亡和克隆形成能力的作用.方法 培养人口腔鳞癌细胞系SCC15,采用不同浓度的Garcinol处理细胞后,通过MTT法检测对细胞增殖的影响,PI单染色法流式细胞仪检测对细胞周期的影响,Annexin V-FITC/PI双染色法流式细胞仪检测对细胞凋亡的影响,克隆形成实验检测对细胞克隆形成能力的影响.结果 Garcinol能显著抑制SCC15细胞增殖(P＜0.01),并呈浓度和时间依赖性.Garcinol能抑制SCC15细胞周期由G1期向S期转变(P＜0.01),并呈浓度依赖性.Garcinol还能够诱导SCC15细胞凋亡(P＜0.01),并呈浓度依赖性.同时,Garcinol能抑制SCC15细胞的克隆形成能力(P＜0.01),并呈浓度依赖性.结论 Garcinol作为一种化学预防制剂,对人口腔鳞癌细胞SCC15具有显著的抑制作用,其机制主要包括抑制SCC15细胞增殖、细胞周期和克隆形成能力,并诱导细胞凋亡.     

可利霉素对口腔鳞癌细胞生物学活性的影响

目的: 体外评价可利霉素对口腔鳞状细胞癌的抗肿瘤活性。方法: 梯度浓度可利霉素分别处理口腔鳞状细胞癌细胞（HN6/HB96细胞系）,采用CCK-8试剂盒检测细胞增殖,绘制生长曲线;采用划痕实验分析细胞迁移能力;采用平板克隆形成实验分析细胞克隆形成能力;采用流式细胞术分析细胞周期和细胞凋亡。采用 SPSS 18.0 软件包对数据进行统计学分析。结果: 可利霉素浓度依赖性抑制HN6/HB96的体外增殖,随着药物浓度增加,细胞迁移和克隆形成能力显著下降（P<0.05）;可利霉素使处理过的口腔鳞状细胞癌细胞G1期比例显著升高,S期和G2/M期比例显著下降,细胞周期阻滞于G1期（P<0.001）。可利霉素诱导口腔鳞状细胞癌细胞凋亡,随着药物浓度增加,细胞凋亡率显著上升（P<0.01）。结论: 可利霉素体外抑制口腔鳞状细胞癌细胞的生物学活性,为可利霉素用于口腔鳞状细胞癌的治疗提供了实验依据。     

不同培养条件对CD133+原代口腔鳞癌细胞干性维持的影响

目的: 通过将CD133^+/-细胞从原代口腔鳞癌细胞中分离纯化,探索不同培养条件对CD133⁺原代口腔鳞癌细胞的干性维持及生物学特性的影响。方法: 应用CCK-8法检测CD133^+/-细胞亚群体外增殖能力以及对顺铂抵抗耐受能力,利用Transwell法检测顺铂对CD133^+/-细胞亚群侵袭能力的影响。以无血清培养法（含或不含白血病抑制因子LIF）和含血清培养法分别培养CD133⁺细胞亚群,流式细胞仪分析CD133⁺细胞的比例变化。在动物实验模型中验证CD133⁺和CD133^-细胞致瘤能力的差异,最后将移植瘤取出,行H-E染色和免疫组织化学染色。采用SPSS 25.0软件包对数据进行统计学分析。结果: 与CD133^-细胞亚群相比,CD133⁺细胞具备较强的体外增殖能力（P<0.05）和顺铂化疗耐受能力（P<0.001）。顺铂对CD133^-细胞亚群侵袭能力的影响更强（P<0.01）。无血清培养法更能维持CD133的比例（P<0.05）,无血清培养基是否添加LIF对CD133的比例维持无显著差异（P>0.05）。在裸鼠体内成瘤实验中,CD133⁺细胞亚群以较少的数量级表现出较强的致瘤能力（P<0.05）。结论: 无血清培养法可较好地维持原代口腔鳞癌细胞干细胞特性,添加LIF对原代口腔鳞癌细胞的干性维持无显著影响。     

Toll-like receptor 7 agonist, imiquimod, inhibits oral squamous carcinoma cells through apoptosis and necrosis

J Oral Pathol Med (2012) 41 : 540–546 Background: Toll‐like receptor (TLR) agonists have anticancer effect by inducing apoptosis or activating immune cells. In this study, we investigated whether imiquimod, TLR7 agonist, inhibits the proliferation of oral cancer cells. Methods: Toll‐like receptor 7 expression and IL‐6/8 production by imiquimod were examined using RT‐PCR and Enzyme‐linked immunosorbent assay, respectively. Cell viability was examined by MTT assay. To examine apoptotic cell death, Annexin V/PI staining for flow cytometry and Western blot analysis were performed. Necrotic cell death was determined by leakage of lactate dehydrogenase (LDH), HMGB1, and PI staining in imiquimod‐treated oral squamous cell carcinoma (OSCC) cells. Results: Toll‐like receptor7 mRNA was expressed in OSCC cells. Imiquimod induced IL‐6 and IL‐8 production in OSCC cells, suggesting the functional expression of TLR7. Imiquimod inhibited cells proliferation in a dose‐dependent manner. The ratio of annexin V‐positive cells and cleaved caspase‐3/7 was increased by imiquimod treatment in OSCC cells, suggesting that imiquimod‐induced cell death in OSCC cells may be owing to apoptosis. In addition, LDH secretion and PI staining were detected in OSCC cells treated with imiquimod, showing that imiquimod also induced necrotic cell death in the OSCC cells. Conclusions: Imiquimod inhibited effectively the growth of OSCC cells by inducing apoptosis and necrosis.     

SREBP2对口腔鳞癌细胞增殖和迁移的影响及其调控机制

目的:探讨胆固醇调节元件结合蛋白2(SREBP2)在口腔鳞癌(OSCC)中的调控机制,通过敲低和过表达SREBP2,分析其对口腔鳞癌细胞CAL27增殖、迁移、侵袭的影响及作用机制.方法:采用实时定量反转录PCR(qRT-PCR)检测SREBP2在OSCC中的表达量.构建siRNA和过表达质粒并转染CAL27细胞,通过细...     

磷酸二酯酶4D在口腔鳞状细胞癌发生发展过程中的作用研究

目的:探讨磷酸二酯酶4D(PDE4D)在口腔鳞状细胞癌(OSCC)发生发展过程中的作用。方法:收集53例OSCC患者标本和5种OSCC细胞株,55例正常健康标本及2种正常口腔上皮细胞作为对照,利用qRT-PCR检测其中PDE4D mRNA表达水平;分别利用CCK-8,细胞划痕实验,流式细胞术和Western blot等技术检测PDE4D抑制剂Rolipram对SSC25细胞增殖、迁移、凋亡的影响。结果:OSCC患者组织中PDE4D mRNA相对水平显著高于正常对照组;OSCC细胞株中PDE4D mRNA相对水平显著高于正常细胞组,差异有显著统计学意义(P<0.01);且分化程度越高,PDE4D mRNA相对水平越高(P<0.05);Rolipram显著抑制SSC25细胞的增殖能力和迁移能力,促进细胞凋亡(P<0.05)。结论:PDE4D在OSCC发生发展过程中起关键调控作用。     

RNA干扰XBP1基因表达对口腔鳞状细胞癌生物学特性的影响研究

目的:检测口腔鳞状细胞癌组织中X盒结合蛋白1(XBP1)的表达及观察抑制其表达后对人口腔鳞状细胞癌Tca8113增殖凋亡的影响,并探讨其机制。方法:RT-PCR检测42例口腔鳞状细胞癌及癌旁组织中XBP1基因的mRNA表达;NC-siRNA和XBP1-siRNA转染至Tca8113细胞内,不经任何处理的细胞作为空白对照组,48 h后,CCK8实验、流式细胞仪分别检测XBP1基因转染对细胞增殖、凋亡的影响;Western blot检测Cleaved caspase3、β-catenin、Cyclin D1蛋白表达的变化。结果:口腔鳞状细胞癌中XBP1基因的mRNA表达显著高于癌旁组织(P<0.01);转染XBP1-siRNA能够显著降低XBP1的蛋白表达,降低细胞的存活率,促进细胞的凋亡,上调Cleaved caspase3蛋白表达,下调β-catenin、Cyclin D1蛋白表达(P<0.01)。结论:RNA干扰沉默XBP1基因表达可通过抑制Wnt/β-catenin信号通路降低Tca8113增殖及诱导细胞凋亡。     

线粒体功能与口腔鳞状细胞癌关系的研究进展

口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)是头颈部常见的恶性肿瘤,近来发病率呈逐年上升的趋势。线粒体是真核细胞中参与多种细胞行为的动态细胞器,线粒体功能障碍与肿瘤发展关系密切,作为决定癌细胞死亡的开关,靶向线粒体已成为OSCC治疗的重点。本文对线粒体与肿瘤发生发展、OSCC治疗以及顺铂耐药性OSCC的关系进行综述。目前研究发现:线粒体功能障碍促进细胞癌变,癌细胞的线粒体形态及功能均发生显著改变;线粒体裂变的增加提高癌细胞的侵袭性,线粒体自噬功能失调可诱导癌细胞凋亡;新型药物的出现以及定向药物递送系统纳米技术的发展开拓了靶向线粒体治疗OSCC的新方法,降低了全身用药的副作用;OSCC的顺铂耐药性通过线粒体途径产生,明确线粒体功能及线粒体DNA的突变机制,为靶向线粒体治疗顺铂耐药性OSCC提供新思路。     

circ_0005379通过调控miR-17-5p/酰基辅酶A氧化酶1轴抑制口腔鳞状细胞癌的发展进程

探讨circ_0005379对口腔鳞状细胞癌（OSCC）细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响及作用机制。     

环状RNA hsa_circ_0002203对口腔鳞状细胞癌 细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡能力的影响

目的 探讨环状RNA hsa_circ_0002203对口腔鳞状细胞癌（OSCC）细胞系恶性生物学行为的影响。方法 纳入OSCC患者40例,使用实时荧光聚合酶链反应检测环状RNA hsa_circ_0002203在OSCC组织、癌旁组织、OSCC细胞系和人口腔黏膜角质形成细胞（HOK）中的表达水平。慢病毒感染SCC15和CAL27细胞,实时荧光聚合酶链反应检测环状RNA hsa_circ_0002203的表达,细胞计数（CCK-8）实验检测细胞增殖能力,划痕实验和Transwell迁移及侵袭实验检测细胞迁移侵袭能力,流式细胞凋亡实验检测细胞凋亡水平,蛋白质印迹法检测细胞增殖凋亡侵袭相关蛋白的表达。通过裸鼠成瘤实验观察hsa_circ_0002203对SCC15细胞体外成瘤能力的影响。结果 环状RNA hsa_ circ_0002203在OSCC组织的表达低于癌旁组织（P<0.01）,在OSCC细胞系中的表达低于人类角质形成细胞（P< 0.001）。慢病毒感染SCC15和CAL27细胞后hsa_circ_0002203的表达增加;SCC15和CAL27细胞的增殖、迁移和侵袭能力下降,凋亡水平增加;裸鼠肿瘤体积、质量减小,生长速度降低。结论 环状RNA hsa_circ_ 0002203在口腔鳞状细胞癌中的低表达可以增强肿瘤细胞的增殖、迁移和侵袭能力,抑制肿瘤细胞凋亡。     

口腔鳞状细胞癌中NCAPD2的表达水平及生物学功能

目的 探讨非SMC凝集素Ⅰ复合亚基D2(NCAPD2)在口腔鳞状细胞癌(OSCC)中的表达及生物学功能。方法 首先应用数据库分析NCAPD2在头颈部鳞状细胞癌(head and neck squamous cell carcinoma, HNSCC)中的表达,然后采用免疫组化法在OSCC标本中进行验证。应用高内涵筛选(high-content screening, HCS)、流式细胞仪及蛋白质印迹法(Western Blot)检测OSCC细胞的增殖、凋亡及凋亡相关蛋白的表达。结果 NCAPD2在HNSCC中高表达,且与HNSCC临床分期、病理分级和淋巴结转移有关。免疫组化显示OSCC组织中的NCAPD2表达显著高于健康口腔组织(P<0.001),且NCAPD2表达与OSCC病理分级之间存在显著相关性。敲减NCAPD2能够抑制OSCC细胞的增殖促进凋亡。此外,BCL-2,p21表达下调,BAX,p53表达上调。结论 NCAPD2有望成为OSCC治疗的一个靶点。