细胞角蛋白19和间隙连接蛋白43在4-亚基硝氧喹啉诱发大鼠舌黏膜癌变过程中表达的研究

目的 研究4-亚基硝氧喹啉（4NQO）诱发大鼠口腔黏膜癌变过程中细胞角蛋白19（CK19）和间隙连接蛋白43（Cx43）的表达,探讨口腔黏膜癌变过程中CK19与Cx43的相关性。方法 利用4NQO诱导SD大鼠的口腔黏膜癌变,运用免疫组织化学的方法检测CK19、Cx43在口腔黏膜癌变过程中各阶段的动态变化。结果 在大鼠正常舌黏膜组织中,CK19阳性染色的细胞散在分布于黏膜基底层;随着大鼠舌黏膜上皮异常增生程度的增加,CK19表达于黏膜基底上层;在口腔鳞状细胞癌（OSCC）组织中,CK19阳性染色细胞分布在黏膜各层。CK19在正常舌黏膜、轻度上皮异常增生、中度上皮异常增生、重度上皮异常增生、OSCC组织中阳性表达率分别为30.00%、50.00%、58.33%、80.00%、91.67%,差异有统计学意义（P<0.05）。在正常舌黏膜中Cx43蛋白主要表达于大鼠舌黏膜上皮细胞的细胞膜上,上皮的基底层、棘层和颗粒层呈阳性染色。随着大鼠舌黏膜上皮异常增生程度的增加,Cx43的表达明显下降。Cx43在正常舌黏膜、轻度上皮异常增生、中度上皮异常增生、重度上皮异常增生、OSCC组织中阳性表达率分别为100.00%、85.71%、66.67%、40.00%、33.33%,差异有统计学意义（P<0.05）。结论 在大鼠舌黏膜癌变过程中,CK19蛋白表达水平随病变程度加重显著升高,提示CK19与口腔上皮细胞的癌变有关;Cx43蛋白表达水平随病变程度加重显著下降,Cx43表达下降是口腔黏膜癌变的早期事件。CK19与Cx43蛋白表达呈负相关,CK19和Cx43的联合检测对OSCC的早期诊断有重要的作用,有利于提高OSCC早期诊断的灵敏度和特异性。     

共济失调毛细血管扩张综合征突变基因与口腔黏膜癌变的相关研究

目的研究共济失调毛细血管扩张综合征突变基因（ATM）在口腔黏膜癌变过程中的作用。方法选取上皮单纯增生,轻、中、重度上皮异常增生,口腔黏膜鳞状细胞癌及正常口腔黏膜标本共61例,采用免疫组织化学SP法和聚合酶链反应方法,观察口腔黏膜癌变过程中ATM蛋白表达与基因杂合性缺失情况以及其与临床病理特征的关系。结果上皮异常增生组平均染色强度高于正常对照组,差别有统计学意义（P<0.05）。在口腔鳞癌中,22例（68.8%）ATM蛋白表达正常或升高,10例（31.3%）ATM蛋白表达降低或缺失;经统计学分析,ATM蛋白表达正常或升高组与ATM蛋白表达降低或缺失组两组分别在病理分级与淋巴结转移两方面的差异有统计学意义（P<0.05）;PCR结果表明,上皮异常增生中未发现异常改变,而口腔鳞状细胞癌中,3例（9.38%）发生杂合性缺失,2例（6.25%）发生微卫星不稳定,发生杂合性缺失的3例病例ATM蛋白表达均缺失。结论ATM在上皮异常增生中表达升高可能有利于消除基因组不稳定,阻止癌变发生;而ATM基因失活可能是促使口腔鳞癌恶性演进的基因改变之一。     

RB1CC1在人和小鼠口腔癌发生发展中表达的比较研究

目的:比较视网膜母细胞瘤RB1-诱导卷曲蛋白1(RB1CC1)在人和小鼠正常口腔黏膜、上皮异常增生组织及口腔鳞状细胞癌中的表达,并探讨其在口腔癌发生发展过程中的作用。方法:采用免疫组化和RT-PCR检测人及小鼠在正常口腔黏膜、上皮异常增生、高分化鳞癌原发灶组织中RB1CC1蛋白及基因的表达情况。结果:RB1CC1蛋白在人上皮异常增生组、高分化鳞癌组的阳性表达高于正常组(P<0.05);RB1CC1蛋白在鼠正常组、异常增生组、高分化鳞癌组阳性表达逐渐增加,差异均有统计学意义(P<0.05)。人RB1CC1 mRNA的表达量在异常增生组与高分化鳞癌组无明显差异,正常口腔黏膜组均高于异常增生组与高分化鳞癌组(P＜0.05);小鼠RB1CC1 mRNA的表达量在正常口腔黏膜组与异常增生组、高分化鳞癌组差别无统计学意义。结论:RB1CC1表达在人和小鼠相似, RB1CC1可能参与了口腔鳞癌的早期癌变过程。     

口腔黏膜癌变过程中Slit蛋白的表达及其与血管生成的关系

目的:研究Slit蛋白在口腔黏膜癌变过程中的表达及其与肿瘤血管形成的关系。方法:采用免疫组织化学Envision法检测40例人口腔鳞状细胞癌、18例上皮单纯增生、20例上皮异常增生、20例原位癌及19例正常口腔黏膜标本Slit、VEGF的表达和MVD。结果:口腔鳞癌组中有34例Slit表达阳性,与正常黏膜组及癌前病变组相比有显著性差异(P<0.01),而19例正常口腔黏膜仅有1例表达为弱阳性,与原位癌组及上皮异常增生组之间有显著性差异(P<0.01,P<0.05)。VEGF的表达趋势与Slit蛋白一致,Slit蛋白和VEGF表达均与MVD呈显著正相关(P<0.01)结论:口腔鳞癌癌变过程中Slit蛋白阳性表达与其恶性程度呈正相关,Slit在口腔鳞癌中有促血管形成的作用,并可能对口腔鳞癌的发展过程起重要作用。     

口腔黏膜癌变过程中Fas与FasL表达的相互关系

目的　初步探讨Fas和Fas L蛋白在口腔黏膜癌前损害发生发展过程中的作用及变化规律。方法　分别选出正常口腔黏膜、上皮单纯增生、上皮轻度异常增生、上皮中度异常增生、上皮重度异常增生与原位癌、鳞状细胞癌标本,共64例,采用免疫组织化学染色技术---酶标链亲和素生物素法(LsAB)染色并进行光镜下观察。结果　多数口腔鳞癌显示Fas表达的下调和Fas L表达的上调,同样的结果见于口腔癌前损害黏膜组织。结论　Fas 和Fas L的表达参与了口腔癌变过程,且可能是癌细胞逃避宿主免疫攻击的机制。Fas/Fas L系统有望成为判定口腔癌前损害预后的生物标志。     

核转录因子-κB在金地鼠颊囊癌变过程中的表达研究

目的　探讨核转录因子-κB家族成员的重要亚基p65及其抑制蛋白IκBα在金地鼠颊囊鳞癌发生过程中的 表达及意义。方法　建立金地鼠颊囊癌变的动物模型,采用Western blot法检测金地鼠正常颊黏膜、上皮单纯增生 黏膜、上皮异常增生黏膜和鳞癌组织所提取的核蛋白中p65的表达差异;采用SABC免疫组织化学法检测在金地鼠 颊黏膜正常上皮、上皮单纯增生、上皮异常增生、鳞状细胞癌中IκBα的表达变化。结果　正常黏膜和上皮单纯增生 黏膜中,p65表达很弱,但普遍存在IκBα的表达,该表达多局限于黏膜基底层和棘层底部细胞的胞浆中。随着上皮 异常增生的出现,p65表达增强,与正常黏膜和单纯增生黏膜相比有统计学意义(P<0.01),而IκBα表达则显著下 降(P<0.05)。鳞癌组织中p65的表达显著高于正常黏膜和异常增生黏膜(P<0.01),IκBα的表达显著升高,明显 高于上皮异常增生黏膜(P<0.01),甚至超过正常水平(P<0.01)。结论　p65在金地鼠颊囊鳞癌发生、发展过程中 被激活。p65和IκBα在金地鼠颊囊癌变过程中的表达异常,上皮异常增生阶段p65的表达上调而IκBα的表达下调, 可能是口腔黏膜上皮癌变过程中的早期事件,可作为口腔早期癌变监测的生物学指标。     

金地鼠颊囊癌变过程中IκBα蛋白表达的研究

目的 :探讨核转录因子的抑制蛋白IκBα在金地鼠颊囊鳞癌发生过程中的表达及意义。方法 :建立金地鼠颊囊癌变的动物模型。采用SABC免疫组织化学方法 ,检测在地鼠颊囊黏膜正常上皮 (n =2 2 ) ,上皮单纯增生 (n =2 0 ) ,上皮异常增生 (n =35 ) ,鳞状细胞癌 (n =2 3)中IκBα的表达变化。结果 :各阶段均有IκBα的表达 ,但表达强度不同 ,呈现一种动态变化过程。在正常颊囊黏膜组织和上皮单纯增生组织中IκBα局限表达于基底层和棘层底部细胞的胞浆中。随着上皮异常增生的出现及异常增生程度的加重 ,IκBα表达显著下降 ,较正常组和单纯增生组有显著性差异 (P <0 .0 5 )。一旦鳞癌生成后 ,IκBα表达上调 ,明显高于上皮异常增生组 (P <0 .0 1) ,甚至超过癌变前正常水平 (P <0 .0 1)。结论 :IκBα在金地鼠颊囊癌变过程中的表达异常 ,尤其是在上皮异常增生阶段的表达水平下调 ,可能是口腔黏膜上皮癌变过程中的一个早期事件 ,且可将其作为口腔癌变监测的生物学指标之一     

金地鼠颊囊癌变过程中p65蛋白的表达研究

目的探讨核转录因子-κB家族成员中的一个重要亚基p6 5在DMBA诱导的金地鼠颊囊鳞状细胞癌发生过程中的表达及意义。方法建立金地鼠颊囊癌变的动物模型。采用Westernblot法检测12组配对金地鼠正常颊粘膜、上皮单纯增生、上皮异常增生和鳞状细胞癌组织所提取的核蛋白中p6 5的表达差异。结果在正常颊粘膜和上皮单纯增生组织中未见明显的p6 5表达,且两者相比无显著性差异(P >0 .0 5 )。随着上皮异常增生的出现,p6 5表达增强,较正常组和单纯增生组均有显著性差异(P <0 .0 1)。在鳞状细胞癌组织中,p6 5的表达进一步增强,与正常组和异常增生组相比均有显著性差异(P <0 .0 1)。结论p6 5在金地鼠颊囊鳞状细胞癌发生、发展过程中被激活。P6 5在金地鼠颊囊癌变过程中的表达异常,尤其是在上皮异常增生阶段的表达水平上调,可能是口腔粘膜上皮癌变过程中的一个早期事件。     

生存素、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3在口腔癌前病变及口腔癌中的表达

目的 探讨生存素(survivin)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)在口腔癌发生中的作用,以期为口腔癌的监测和治疗提供参考.方法 选取首都医科大学口腔医学院病理科存档石蜡标本45例,其中口腔白斑伴上皮轻-中度异常增生16例,口腔白斑伴上皮重度异常增生12例,口腔高-中分化鳞状细胞癌17例;正常口腔黏膜组织10例.采用免疫组化SP法对生存素、caspase-3的表达进行检测;脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的原位缺口末端标记法对细胞凋亡指数进行检测.结果 生存素表达在正常黏膜、白斑伴上皮轻-中度异常增生、白斑伴上皮重度异常增生及口腔癌中逐渐增加,阳性细胞率分别为(1.05±1.21)%、(6.06 ±4.87)%、(12.49 ±8.41)%和(21.89±10.45)%;caspase-3的表达在3个病例组中逐渐下降,正常对照、白斑伴上皮轻-中度异常增生、白斑伴上皮重度异常增生及口腔鳞状细胞癌组阳性细胞率分别为(12.37 ±5.48)%、(19.51 ±13.15)%、(9.76±7.83)%和(6.08 ±6.91)%;正常对照、白斑伴轻-中度异常增生、白斑伴重度异常增生及口腔鳞状细胞癌组凋亡指数分别为(0.89 ±0.46)%、(1.29 ±0.63)%、(0.65 ±0.40)%和(0.21 ±0.12)%,前3组与口腔鳞状细胞癌组相比差异有统计学意义(P<0.05).结论 生存素在口腔癌的发生过程中起重要作用,随着生存素表达的增加,caspase-3和凋亡指数呈下降趋势;生存索可能通过抑制caspase-3的表达,从而抑制细胞的凋亡,促进口腔癌的发生.     

实时荧光定量RT-PCR检测舌癌E-cadherin mRNA的表达

目的:了解E-cadherin在舌癌中的表达及其临床意义.方法:采用实时定量PCR检测29例舌鳞癌患者的癌组织和正常组织中E-cadherin mRNA,分析E-cadherin基因表达与临床病理参数的相关性.结果:舌癌组织中E-cadherin mRNA表达水平2.23±1.16(E-cadherin/β-actin),低于正常组织组8.59±2.71,两组间差异有统计学意义(P＜0.01),E-cadherin mRNA水平与临床病理参数之间无相关性(P＞0.05).结论:E-cadherin的表达下降是舌癌发生过程中的重要事件,实时定量PCR检测E-cadherinmRNA的表达对舌癌早期诊断有重要参考价值.     

大鼠舌鳞癌诱变过程中MMP-3、TIMP-1的表达变化及相关性研究

目的:研究基质金属蛋白酶-3(MMP-3)、基质金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)在大鼠舌鳞癌诱变过程中转录水平表达变化及两者之间的相关性。方法:60只SD大鼠随机分为3组,每组20只,正常对照组,给予正常饮食;另2组每天喂养0.002%4-硝基喹啉-1-氧化物(4NQO),于16周和24周处死;16周组可见上皮异常增生,而24周组已经为舌鳞癌,分别选取8个标本作检测。各组利用定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测MMP-3、TIMP-1在不同病变时期舌组织中转录水平的表达变化。结果:MMP-3及TIMP-1的mRNA于正常对照组相对表达量较少,上皮异常增生组相对表达量较正常组显著增加,舌鳞癌组的相对表达量最高。MMP-3与TIMP-1的mRNA表达之间成显著相关性。结论:MMP-3与TIMP-1随癌变的发生表达显著上调,两者间平衡失调可导致舌鳞癌的发生及发展。     

The expression of RAR beta mRNA in rat tongue carcinogenesis]

OBJECTIVE: To elucidate the relationship between the expression of nuclear retinoic acid receptor beta (RAR beta) mRNA in oral carcinogenesis and squamous cell aberrant differentiation. METHODS: A total of 69 rat tongue carcinogenesis specimens induced by 4-nitroquinoline-1-oxide (4NQO) were detected for RAR beta mRNA by in situ hybridization. RESULTS: With the progress of tongue carcinogenesis and epithelium cell disdifferentiation, the expression of RAR beta mRNA was down-regulated. The positive rate of RAR beta mRNA in normal, hyperplasia, mild-moderate dysplasia, severe dysplasia, in situ carcinoma and squamous cell carcinoma was 100.0%, 87.5%, 75.0%, 72.2%, 45.5% and 18.8%, respectively. CONCLUSIONS: The down-regulation of RAR beta mRNA may be associated with the epithelium cell aberrant differentiation and may be an important molecular mechanism of oral carcinogenesis.     

大鼠舌鳞癌诱变过程中基质金属蛋白酶13表达变化的研究

目的探讨基质金属蛋白酶13（matrix metalloproteinases 13,MMP-13）在大鼠舌鳞癌诱变过程中转录水平表达变化及其临床意义。方法 50只SD大鼠随机抽取10只作为正常对照组,给予正常饮食。另40只每天喂养0.002%4-硝基喹啉-1-氧化物,于16周时处死20只,选取处于上皮异常增生的8个标本为上皮异常增生组;24周时处死另外20只,选取发生舌鳞癌的8个标本为鳞癌组。各组利用定量逆转录聚合酶链反应检测MMP-13在不同病变时期舌组织中转录水平的表达变化。结果大鼠诱癌16周时重度上皮异常增生发生率为75.0%（15/20）,大鼠诱癌24周时舌鳞癌发生率为94.8%（18/19）。转录水平的检测显示MMP-13上皮异常增生组的表达较正常组上调,但差异无统计学意义（t=-1.759,P=0.129）;舌鳞癌组与正常组（t=-6.579,P=0.001）和上皮异常增生组（t=-6.376,P=0.001）比较MMP-13的表达均有统计学意义的上调。结论 MMP-13随癌变的发生表达显著,可能在舌鳞癌的发生过程中起着重要作用。     

Homeobox C5 expression is associated with the progression of 4-nitroquinoline 1-oxide-induced rat tongue carcinogenesis

J Oral Pathol Med (2012) 41 : 470–476 Background: Aberrant expression of homeobox genes (HOX), normally required for the differentiation of a particular tissue, has been reported in several types of cancer, but poorly addressed in oral squamous cell carcinoma (OSCC). The present study investigated the expression of HOXC5 in OSCC and identified molecular biomarker whose expression is associated with the multistep oral carcinogenesis. Methods: The expression of HOXC5, proliferation cell nuclear antigen (PCNA), and Bcl‐2 was examined by RT‐PCR and Western blot analysis and confirmed by immunohistochemistry and transferase‐mediated dUTP nick end‐labeling (TUNEL) assay in a 4‐nitroquinoline 1‐oxide (4NQO)‐induced rat tongue carcinogenesis model. Results: Homeobox genes C5 was overexpressed in SCC tissues, but not in normal tissues by RT‐PCR and Western blot analysis. Along with the progress of multistep carcinogenesis, the levels of HOXC5 expression of mRNA and protein significantly increased during the dysplasia (moderate to severe dysplasia) when compared with normal and hyperplasia. The levels of PCNA and Bcl‐2 were sequentially increased from hyperplasia to dysplasia and SCC. By immunohistochemistry, HOXC5 expression was significantly increased in dysplasia, whereas PCNA expression was gradually increased during tongue carcinogenesis. TUNEL‐positive cells were increased until dysplasia, but reduced in SCC. Conclusions: These results indicate that overexpression of HOXC5 is correlated with oral carcinogenesis and strongly contributed to the development of OSCC. HOXC5 may be a useful biomarker and has an emerging therapeutic target of OSCC.     

iNOSmRNA在正常舌组织、舌白斑、舌鳞癌中的表达及意义

目的　探讨一氧化氮 (NO)在舌鳞癌发生中的作用。方法　原位杂交法检测体内合成NO的关键酶诱导型一氧化氮合酶 (induciblenitricoxidesynthase ,iNOS)mRNA在 1 0例舌正常组织、1 4例舌白斑、68例舌鳞癌中的表达。结果　iNOSmRNA在舌正常组织 ,舌白斑、舌鳞癌中的表达阳性率分别为 2 0 0 %、57 1 %、72 1 % ,各组别间差异均有显著性 (P <0 0 5)。结论　由iNOS诱导产生的NO可能在舌癌的发生中起着重要的作用     

小分子锌指蛋白1在4-硝基喹啉-N-氧化物诱导SD大鼠颊黏膜癌变中的表达研究

目的 研究口腔黏膜癌变中小分子锌指蛋白1（LMO1）在基因转录和蛋白水平的表达变化。方法 取本课题组前期4-硝基喹啉-N-氧化物（4NQO）饮水法构建鳞癌动物模型的49例样本进行苏木精-伊红（HE）染色,依据上皮异常增生程度确定实验组病理分级并确定实验分组;免疫组织化学染色定性确定LMO1的表达部位;实时荧光定量聚合酶链式反应（RT-qPCR）和Western blot检测5组样本中LMO1 mRNA和蛋白的表达。结果 HE染色确定对照组7例,轻度组6例,中度组11例,重度组9例,OSCC组16例。免疫组织化学染色检测可见,LMO1主要表达于细胞质,对照组、轻度组、中度组、重度组和OSCC组的阳性表达率分别为14.3%、33.3%、81.8%、88.9%、93.8%。RT-qPCR检测可见,对照组LMO1 mRNA的表达量最低,OSCC组最高,对照组与轻度组间mRNA表达差异无统计学意义（P>0.05）,其余各组组间两两比较,mRNA的表达差异均有统计学意义（P<0.05）。Western blot检测可见,随着上皮异常增生程度的加重,LMO1的蛋白表达量逐渐上升,在OSCC组中表达最高。结论 口腔黏膜癌变进程中,LMO1 mRNA和蛋白异常表达,且mRNA和蛋白表达量随上皮异常增生程度的加重而增加。     

大鼠舌癌变过程中生存素、Bcl-2和p53蛋白的表达

目的 探讨生存素(survivin)蛋白在大鼠舌癌变过程中的表达及其与Bcl-2、p53蛋白表达的相关性.方法 0.002%4-硝基喹啉-1-氧化物(4一nitro-quinoline 1-oxide,4NQO)饮水喂养SD大鼠9～36周建立大鼠舌癌变模型,用免疫组化二步法检测60例大鼠舌癌变过程中生存素、Bcl-2及p53蛋白的表达.结果 36例止常组织中生存素蛋白表达仅1例,而11例异常增生组织中其表达为6例,11例口腔癌组织中其表达为10例.生存素蛋白在正常舌黏膜、异常增生黏膜及舌癌中的阳性表达差异有统计学意义(P<0.001),异常增生及口腔癌组织中生存素蛋白表达显著高于正常黏膜中的表达(P<0.01).在17例生存素蛋白表达阳性的大鼠舌组织中,Bcl-2蛋白阳性表达12例,p53蛋白阳性表达8例;生存素蛋白表达与Bcl-2、053蛋白表达呈正相关(P<0.01).结论 生存素蛋白的表达增高和口腔鳞状上皮的异常增生、癌变有关,提示生存素可能参与了口腔癌的发生、发展;生存素、Bcl-2及p53蛋白的表达可能在口腔癌的发生、发展中起协调作用.