实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应在脊髓灰质炎病毒型内鉴定中的应用

目的应用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(rRT-PCR)对脊髓灰质炎病毒(PV)进行型内鉴定,为进行常规rRT-PCR型内鉴定方法奠定基础。方法采用世界卫生组织(WHO)推荐的rRT-PCR方法,对WHO发放的PV株和实验室分离的PV株进行型内鉴定(ITD)和疫苗衍生PV株(VDPV)筛选。结果 ITD rRT-PCR的实验结果与毒株的VP1编码区序列测定结果完全相符,VDPV rRT-PCR的结果与VP1编码区序列测定结果大部分相符,但有2株Ⅱ型脊髓灰质炎疫苗类似株(SL)PV2-SL被错判为非疫苗类似株(NSL),假阳性率为3.03%;1株Ⅲ型SL被错判为NSL,假阳性率为1.92%。结论在新疆脊髓灰质炎实验室rRT-PCR可以应用于脊髓灰质炎病毒的常规监测及型内鉴定。     

实时荧光定量RT-PCR在脊髓灰质炎病毒型内鉴定中的应用

目的应用实时荧光定量RT-PCR(rRT-PCR)对脊髓灰质炎病毒(PV)进行型内鉴定(ITD)及基因型鉴定。方法以PV衣壳蛋白(Capsid Protein)VP1编码区基因序列为目标,设计并合成引物和Taqman探针,建立实时荧光定量RT-PCR检测体系,对WHO发放的PV株和实验室分离的PV株进行型内鉴定(ITD)和疫苗衍生PV株(VDPV)筛选。结果 10份WHO考核标本经ITD试验结果和ITD筛查后的5份苗类似株(SL)VDPV实验结果,经WHO验证完全符合;青海省脊髓灰质炎(下称脊灰)实验室2017年在健康儿童中分离获得2株PV,经ITD和VDPV,结果为SL1。毒株经国家脊灰实验室验证,与上报结果完全符合。结论 rRT-PCR方法操作简便、快速,特异敏感,适用于PV的型内鉴定及其感染的实验室诊断。     

呼吸道病毒快速检测方法的进展及对灾后救援的指导

正病毒学是一门起步较晚的学科,1898年荷兰人Beijerink证明烟草花叶病是由滤过性病原引起,奠定了病毒是一种新的微生物的基础。在此后10多年内相继发现了包括鸡瘟病毒、狂犬病病毒、脊髓灰质炎病毒和劳斯肉瘤病毒等10多种病毒。二十世纪30年代,实验动物、鸡胚和细胞培养技术的产生,成功地分离和培养了许多动物病毒,对病毒的检测方法起到巨大的推动作用。再之后的体外培养细胞已经是分离、鉴定和大量培养病毒的简便而又十分     

脊髓灰质炎的发病机理

脊髓灰质炎病毒(下称“病毒”)侵入机体到发展成麻痹型脊髓灰质炎,受病毒的毒力及宿主的免疫功能状态的制约。脊髓灰质炎病毒属于微小     

阿米巴病毒和溶组织内阿米巴的毒力

自从发现溶组织内阿米巴的病毒以来,作者考虑到这些病毒与阿米巴的毒力之间的关系,为此进行了以下的实验。作者从培养的溶组织内阿米巴虫株分离和鉴定阿米巴的病毒。阿米巴的病毒在形态上有二十面体型、纤细型及新的含有 DNA的珠状型。近来作者发展了一种测试溶组织内阿米巴在新生仓鼠肝内的毒力的简单方     

肠道病毒感染(综述)

肠道病毒属于小核糖核酸病毒科中的肠道病毒属,包括大约71个血清型,其中脊髓灰质炎病毒3个型,柯萨奇病毒A组24个型,B组6个型,埃可病毒34个型,其他肠道病毒4个型。脊髓灰质炎病毒仅引起中枢神经系统感染,其他肠道病毒所引起的病变则范围甚广。本文拟将近年来国外有关脊髓灰质炎病毒以外的肠道病毒感染的研究情况作一综述。     

特殊类型脊髓灰质炎的临床与脑脊液分析

特殊类型脊髓灰质炎的临床与脑脊液分析聊城地区人民医院（２５２０００）聊城地区卫生学校侯秀荣李伊玲陆俊仪程风英林景珠脊髓灰质炎（下称脊灰）是由脊髓灰质炎病毒引起的急性传染病。因人体免疫机能差别较大，故感染后可出现瘫痪型、无瘫痪型及亚临床型；瘫痪型根据发...     

新疆喀什市健康人群及环境污水中肠道病毒检测分析

目的研究肠道病毒在健康人群及环境水体中的分布情况,为指导脊髓灰质炎疫苗衍生病毒(VDPV)事件的调查处理,以及研究水中肠道病毒对公众健康带来的风险提供依据。方法选择新疆喀什市作为监测点,在同一个月份内采集150份健康人群粪便标本及1份污水处理厂入水口水样进行肠道病毒分离和鉴定。结果 150份粪便标本中,检出肠道病毒(EV)15株,阳性率10.0%;环境污水中检出肠道病毒(EV)11株,其中脊髓灰质炎病毒(PV)2株,埃可病毒(ECHOV)9株。结论新疆喀什市健康人群及环境污水中肠道病毒广泛存在,环境污水监测能了解脊髓灰质炎疫苗衍生病毒(VDPV)流行分布范围,有效指导VDPV事件的调查处理,同时也为进一步研究污水中肠道病毒为公众健康带来的风险提供重要的背景信息。     

不同分析方法用于HBV基因分型的对比

LiPA及DNA测序均检测出63个D型病毒株、4个A型病毒株及13个A型及D型混合病毒株。基于PCR-RFLP方法正确检出了所有4个A型病毒株,但63个D型病毒株中仅正确检出56个。该7个未检出的D型病毒株被定为不确定型。通过对DNA测序结果进行比较,研究发现目标区域中的一处单核苷酸变异产生了一个新的NlaIV的限制性内切位点,从而影响到消减PCR-RFLP分析的准确性。另外,所有的A型及D型混合病毒株均被消减PCR-RFLP分析判定为A型病毒株。     

汕头地区417例疑似脊髓灰质炎病因分析

对汕头地区１９７１～ｌ９９２年临床疑似脊髓灰质炎（灰髓炎）４１７例患者粪便标本和９４例患者双份血清，进行了病毒病因检测，结果分离出病毒１９２株，检出率为４６．０％，计有灰髓炎病毒１５６株，其中Ⅰ型病毒１３８株，占灰髓炎阳性的８８．５％。柯萨奇病毒１０株，埃可病毒和腺病毒各８株，肠道７１型病毒７株，未定型病毒３株。对１１４株灰髓炎Ⅰ型病毒进行了型内抗原分析，结果表明，不同时期分离的灰髓炎Ⅰ型病毒其抗原性有明显差异。在１９８９年以前分离到的灰髓炎Ⅰ型病毒，不论是流行期还是散发病例，均以灰髓炎野毒变异株为主，而１９８９～ｌ９９２年流行的灰髓炎Ⅰ型病毒株则以野毒株Ｍａｈｏｎｅｙ株及其变异株为主要流行毒株。     

通过健康儿童粪便的检测及社区废水分析直接测定野生型脊髓灰质炎病毒的流行

哥伦比亚的卡塔赫纳是美州脊髓灰质炎流行的最后一批城市之一。1991年鉴定出三例病例后,为了检测在高危区继续寂静野生型脊髓灰质炎病毒的传播,作者采用两种方法进行调查,即对健康儿童进行粪便检测和对社区污物     

HCV实验室实验人员检测能力验证结果分析北大核心

目的通过能力验证(PT)考核,了解中国部分实验室实验人员丙型肝炎病毒(HCV)检测的能力。方法采用统一的方法、试剂、仪器,组织33家实验室利用17份样本进行PT考核,考核内容包括HCV抗体、抗原、病毒载量及基因分型实验,采用百分制对结果进行评分,并与参比实验室确定的预期结果进行比较,用SAS 9.3统计软件对得分以及结果进行分析。结果参与PT考核的33家实验室的全部抗体实验阴阳性判断正确;得分均为100分;抗原实验阴性样本中有1份结果错判为阳性,其余结果判定正确;共66份阳性样本中,有16份结果错判为阴性,错判率为24%(16/66);核酸载量实验结果均在可信区间内,得分均为100分;亚型实验结果判定全部正确,得分均为100分。结论 33家实验室的实验员HCV抗体实验、病毒载量实验、基因分型实验的检测结果与预期结果一致,而丙型肝炎病毒抗原实验结果与预期结果存在一定差异,需要重点加强。     

登革2型病毒包膜蛋白在毕赤酵母中的表达和病毒样颗粒的组装

目的在组成型的毕赤酵母系统中表达登革2型病毒包膜蛋白E和前膜蛋白prM,并研究病毒样颗粒在酵母细胞中的组装特性。方法以登革2型病毒ZS01/01株mRNA为模板,扩增编码prM/E蛋白的基因。将目的基因克隆至表达载体pGAPZaA的多克隆位点,并转化毕赤酵母GS115。经Zeocin抗生素筛选和PCR鉴定后获得酵母菌重组克隆,并进行表达和鉴定。结果成功克隆登革2型病毒prM/E基因,SDS-PAGE和Western blot检测表明包膜蛋白E在组成型的毕赤酵母系统中得到高水平表达;利用透射电镜在重组酵母胞浆内检测到30-50 nm的登革2型的病毒样颗粒,并发现类似登革病毒感染的双层膜结构;免疫电镜结果证实重组病毒样颗粒可以与抗登革2型病毒血清反应,具有免疫反应性。结论成功的建立了组成型表达登革2型病毒样颗粒的毕赤酵母系统,为登革病毒样颗粒疫苗的制备奠定了基础。     

TaqMan MGB探针实时聚合酶链反应检测登革病毒

目的建立一种敏感、特异、重复性好的登革病毒(DengueVirus,DV)鉴定方法。方法根据DV3’端非编码区基因保守序列,设计一套特异性引物和TaqManMGB探针。利用1998~2004年收集的26份登革热病人临床血清标本,15例乙脑病人血清,DV4个血清型标准毒株及23株1978~1997年DV地方流行株和相关西尼罗病毒、日本脑炎病毒、麻疹病毒、基孔肯亚病毒等毒株,同时用克隆了1型DV基因组3’端非编码区序列片段的质粒DNA作为阳性对照,检测所建立方法的特异性、敏感性。结果所建立方法的最低检测限约为每反应5个基因拷贝。用该方法检测4个血清型DV标准毒株、23株DV地方流行株和26例分离到DV的阳性血清标本,检出率为100%;用该方法检测15例乙脑病人血清、10例麻疹病人血清和西尼罗病毒、日本脑炎病毒、麻疹病毒、基孔肯亚病毒,结果均为阴性。结论新建的TaqManMGB探针检测DV方法是实验室早期诊断登革热较理想的方法。     

肠道病毒脑膜脑炎

肠道病毒脑膜脑炎山东省卫生防疫站（２５００１４）黄宝童埃可病毒、柯萨奇病毒、脊髓灰质炎病毒和肠道病毒（６８型、６９型、７０型、７１型）统称为肠道病毒。目前，由肠道病毒引起的病毒性脑膜脑炎日渐增多，肠道病毒脑膜脑炎在世界各地均有流行和散发。本病临床表现...     

HCV实验室实验人员检测能力验证结果分析

目的通过能力验证(PT)考核,了解中国部分实验室实验人员丙型肝炎病毒(HCV)检测的能力。方法采用统一的方法、试剂、仪器,组织33家实验室利用17份样本进行PT考核,考核内容包括HCV抗体、抗原、病毒载量及基因分型实验,采用百分制对结果进行评分,并与参比实验室确定的预期结果进行比较,用SAS 9.3统计软件对得分以及结果进行分析。结果参与PT考核的33家实验室的全部抗体实验阴阳性判断正确;得分均为100分;抗原实验阴性样本中有1份结果错判为阳性,其余结果判定正确;共66份阳性样本中,有16份结果错判为阴性,错判率为24%(16/66);核酸载量实验结果均在可信区间内,得分均为100分;亚型实验结果判定全部正确,得分均为100分。结论 33家实验室的实验员HCV抗体实验、病毒载量实验、基因分型实验的检测结果与预期结果一致,而丙型肝炎病毒抗原实验结果与预期结果存在一定差异,需要重点加强。     

潮汕地区中枢神经系统疾病肠道病毒感染调查

目的对潮汕地区1972年-2003年间临床诊断为中枢神经系统(CNS)疾病的1 605例患者进行肠道病毒(EV)感染调查.方法采集临床诊断为CNS疾病的患者脑脊髓液、血液、咽拭子或粪便标本共l 605份.用Hep-2细胞对标本进行病毒培养;用免疫血清微量中和试验对分离出的毒株进行鉴定;采集患者的双份血清进行中和抗体检测.结果从l 605例CNS疾病患者(包括疑似脊髓灰质炎、脑炎、格林-巴利综合征、脊髓压迫症、脑血管意外、颅内积水或占位和多发性硬化)的各种标本中共检测出4种25个型EV病原541例,EV病毒总检出率为33.7%,患者EV感染型别分布及检出率构成比分别为:脊髓灰质炎病毒(Polio)260例(0.480 6);柯萨奇病毒(Cox)169例(0.3124);埃可病毒(ECHO)57例(0.105 4);新型EV 55例(0.101 6).结论潮汕地区CNS疾病中存在EV感染.不同年份EV的检出率不尽相同,1972年-1979年、1980年-1989年、1990年-1994年这三个时间段里EV检出率以Polio最高;1995年-2003年EV检出率则以Cox最高.随着脊髓灰质炎疫苗的普及接种,1995年后未再发现Po-lio.     

新疆出血热病毒分类地位的血清学鉴定

1983年通过病毒形态学的鉴定,证明了新疆出血热病毒是布尼安病毒科(Bunyaviridae)的成员。本次通过血清学方法与布尼安病毒属的西姆波组SMB-48株和内罗病毒属的刚果病毒K2/61株的免疫腹水进行比较。采用补体结合试验、反向被动血凝抑制试验和双抗体夹心抑制ELISA试验进行鉴定的结果,发现新疆出血热病毒与布尼安病毒属的代表毒株SMB-48株没有血清学联系,而与内罗病毒属的刚果病毒有显著的抗原关系。从而证明新疆出血热病毒与布尼安病毒属无关。其抗原性与内罗病毒属克里米亚-刚果出血热病毒一致。     

腹泻对口服脊髓灰质炎接种的影响

本研究目地是了解腹泻对口服三联脊髓灰质炎疫苗(OPV)血清转化的影响。6岁～16周的婴幼儿分别于试验开始。第4周和第8周接受了单剂OPV,并设了一年龄相关的对照组。在试验起始,第2剂之前和经3剂之后采了血清标本,通过微中和法测定了抗体滴度。结果为:第一次接种后,腹泻者对脊髓灰质炎病毒2型和3型的血清反应低于对照组。分别为26和34％(P<0.002)。第3次接种后,腹泻者与对     

动物狂犬病病毒街毒株的细胞分离鉴定

目的N2A细胞和BHK-21细胞用于我国动物狂犬病流行街毒株的分离培养。方法狂犬病发病动物脑组织悬液首先脑内接种乳鼠,再采取Nonclon Delta Tube内置盖玻片法从鼠脑中进行病毒分离培养,脑组织悬液接种细胞后96h,利用直接荧光抗体实验检测盖玻片上的病毒感染细胞,判定病毒是否在细胞上增殖;通过测定不同毒株细胞培养上清中的病毒滴度对病毒进行鉴定。结果22份狂犬病病犬、猪和牛的脑组织接种乳鼠后均获得了鼠脑分离毒,将鼠脑毒接种N2A细胞分离获得了22株病毒,接种BHK-21细胞却只分离获得20株病毒。不同病毒株第三代细胞培养上清中的病毒滴度从10-1TCID50/100μL到10-3.6TCID50/100μL。结论N2A细胞对狂犬病病毒街毒株的敏感性高于BHK-21细胞,且不同的病毒株对细胞的适应能力不同。实验分离获得的病毒细胞适应株丰富了我国狂犬病病毒毒种资源,为进一步研究不同病毒分离株的抗原性差异奠定基础。