川芎嗪对肥大心肌细胞中钙调神经磷酸酶信号转导通路的干预作用

目的 探讨川芎嗪（tetramethylpyrazine, TMP） 抑制血管紧张肽Ⅱ（AngⅡ）诱导心肌细胞肥大的作用机制. 方法 应用细胞培养技术培养新生大鼠心肌细胞,应用AngⅡ刺激培养的心肌细胞制作肥大心肌细胞模型,采用相差显微镜测量细胞大小及测定心肌细胞3H 亮氨酸掺入作为心肌细胞肥大的指标;fura-3/AM孵育心肌细胞,利用荧光显微镜及Felix软件分析测定细胞内钙离子浓度（［Ca²⁺］i）;Western blot 检测钙调神经磷酸酶（calcineurin, CaN） 蛋白表达. 结果 与正常对照组比较,AngⅡ组心肌细胞明显肥大（P＜0.01）,3H-亮氨酸掺入量明显增加（P＜0.01）,川芎嗪＋AngⅡ组心肌细胞肥大及3H-亮氨酸掺入量明显抑制（均P＜0.01）,与氯沙坦＋AngⅡ组差异无显著性. AngⅡ组较对照组细胞内Ca2+浓度及CaN 蛋白表达明显升高（P＜0.01或P＜0.05）,川芎嗪＋AngⅡ组较AngⅡ组Ca2+浓度及CaN 蛋白表达则受到明显抑制（P＜0.01或P＜0.05）,氯沙坦＋AngⅡ组与川芎嗪＋AngⅡ组差异无显著性. 结论 川芎嗪能明显抑制心肌细胞肥大,其机制与干预Ca2+/CaN信号转导通路有关.     

MicroRNA-141通过PI3K/Akt/mTOR信号通路促进PCOS卵巢颗粒细胞增殖的机制研究

目的　研究microRNA-141（miR-141）对卵巢颗粒细胞增殖的影响,并探讨其在多囊卵巢综合征（PCOS）发生发展中的作用机制。方法　采用实时荧光定量PCR检测20例PCOS患者的卵巢组织、20例对照组的正常卵巢组织、人卵巢颗粒细胞KGN及人正常卵巢上皮细胞IOSE80中miR-141 mRNA表达水平;KGN细胞分为miR-141 minics组、LY294002+miR-141 minics组、雷帕霉素（rapamycin）+miR-141 minics组、NC组、对照组。采用MTT法和平板克隆实验检测各组细胞增殖和克隆形成能力,采用Western blot法检测各组细胞磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶（Akt）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路相关蛋白表达水平。结果　PCOS卵巢组织miR-141 mRNA表达水平显著高于正常卵巢组织,人卵巢颗粒细胞KGN miR-141 mRNA表达水平高于人正常卵巢上皮细胞IOSE80（P＜0.05）;miR-141 minics组、LY294002+miR-141 minics组及rapamycin+miR-141 minics组miR-141 mRNA表达水平均高于NC组和对照组（P＜0.05）;LY294002+miR-141 minics组及rapamycin+miR-141 minics组转染后24、48、72、96 h OD值和克隆形成率均低于miR-141 minics组,但高于NC组和对照组（P＜0.05）;LY294002+miR-141 minics组转染后p-Akt、p-mTOR蛋白表达水平低于miR-141 minics组,但高于NC组、对照组（P＜0.05）。rapamycin+miR-141 minics组转染后p-mTOR蛋白表达水平低于miR-141 minics组,高于NC组、对照组（P＜0.05）。结论　miR-141可通过激活PI3K/Akt/mTOR信号通路促进卵巢颗粒细胞的增殖。     

氯沙坦对血管紧张肽Ⅱ诱导的心肌细胞肥大及 c-jun mRNA表达的作用

［摘要］目的观察氯沙坦对血管紧张肽Ⅱ（AngiotensinⅡ，AngⅡ）诱导的心肌细胞肥大的作用，并研究其对心肌细胞c jun mRNA表达的影响。方法应用细胞培养技术培养新生大鼠心肌细胞，胰酶消化，差数贴壁法体外分离培养大鼠心肌细胞。分为干预组和对照组。①对照组：不加任何干预因素；②10 6mol•L-1AngⅡ＋10 5mol•L-1氯沙坦组：用AngⅡ刺激心肌细胞肥大，氯沙坦进行干预；氯沙坦进行干预30 min后，加入AngⅡ刺激心肌细胞；③10 5mol•L-1氯沙坦组；④10 6mol•L-1 AngⅡ组。 采用相差显微镜测量细胞大小，测定心肌细胞3H 亮氨酸掺入作为心肌细胞肥大的指标；用逆转录聚合酶链式反应（RT PCR）检测心肌细胞c jun mRNA的表达。结果AngⅡ作用24 h后，AngⅡ组心肌细胞直径增大，与对照组比较差异有显著性（P＜0.05）；氯沙坦抑制AngⅡ介导的心肌细胞直径增大，与AngⅡ组相比差异有显著性（P＜0.05）。AngⅡ作用24 h后，心肌细胞合成速率AngⅡ组较对照组明显增加（P＜0.01），氯沙坦对心肌细胞蛋白质合成没有影响，但能抑制AngⅡ刺激的心肌蛋白质合成速率的增加（P＜0.01）。在培养液中加入AngⅡ作用30 min后，心肌细胞c jun mRNA表达明显增加（P＜0.01），预先加入氯沙坦作用30 min，可阻断AngⅡ的作用（P＜0.01）。结论氯沙坦可以抑制AngⅡ诱导的心肌细胞肥大，其机制可能与氯沙坦抑制了心肌细胞c jun mRNA的表达有关。     

microRNA-34a对食管鳞癌细胞增殖、凋亡的影响

分析microRNA-34a（miR-34a）对人食管鳞癌（ESCC）细胞Eca109增殖、凋亡的影响。用miR-34a模拟物/抑制剂转染Eca109,实时荧光定量PCR检测Eca109细胞中miR-34a的表达;MTT法、流式细胞仪和Western blot分别检测转染miR-34a模拟物/抑制剂后对Eca109细胞增殖、凋亡的影响及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax变化。（1）转染miR-34a模拟物/抑制剂后miR-34a的表达明显增高（P＜0.01）/降低（P＜0.05）。（2）转染miR-34a模拟物组细胞的吸光度明显下降（P＜0.05）且凋亡率显著增加（P＜0.05）;而转染miR-34a抑制剂组细胞的存活率高于NC组（P＜0.05）且凋亡率明显降低（P＜0.05）。（3）miR-34a过表达能够使抗凋亡基因Bcl-2蛋白表达水平显著下降,促凋亡基因Bax的蛋白表达水平明显增加（P＜0.05）。（1）过表达miR-34a能抑制食管癌细胞的增殖,促进其凋亡。（2）抑制miR-34a能促进食管癌的增殖,抑制其凋亡。（3）miR-34a在食管癌中可能发挥着抑癌基因的作用。     

miR-34a靶向MMP2对TNF-α诱导人绒毛膜滋养层细胞 HTR-8/SVneo迁移及侵袭的影响

目的 探讨微小RNA（miR）-34a靶向基质金属蛋白酶（MMP）2对肿瘤坏死因子（TNF）-α诱导人绒毛膜滋 养层细胞 HTR-8/SVneo 迁移和侵袭的影响。方法 体外培养人绒毛膜滋养层细胞 HTR-8/SVneo,利用 0.5 μg/L TNF-α刺激细胞;将细胞分为对照组、TNF-α诱导组、NC组、miR-34a mimics组、iNC组、miR-34a inhibitor组;实时荧 光定量PCR（qPCR）检测各组细胞中miR-34a、MMP2 mRNA的表达;CCK-8法、Transwell法和划痕实验分别检测各组 细胞增殖、侵袭和迁移情况;蛋白免疫印迹法检测MMP2蛋白的表达;双荧光素酶报告实验证明miR-34a和MMP2的 靶向关系。结果 与对照组比较,TNF-α 诱导组细胞 miR-34a 表达水平、细胞增殖抑制率显著升高（P＜0.05）, MMP2 mRNA和蛋白表达水平、细胞侵袭数目、细胞迁移率显著降低（P＜0.05）;与TNF-α诱导组和NC组比较,miR- 34a mimics组细胞miR-34a表达水平、细胞增殖抑制率显著升高（P＜0.05）,MMP2 mRNA和蛋白表达水平、细胞侵袭 数目、细胞迁移率显著降低（P＜0.05）;与TNF-α诱导组和iNC组比较,miR-34a inhibitor组细胞miR-34a表达水平、 细胞增殖抑制率显著降低（P＜0.05）,MMP2 mRNA和蛋白表达水平、细胞侵袭数目、细胞迁移率显著升高（P＜0.05）; miR-34a与MMP2具有靶向关系。结论 miR-34a可能通过负调控MMP2的表达抑制TNF-α诱导的人绒毛膜滋养 层细胞HTR-8/SVneo迁移和侵袭。     

姜黄素通过激活ATRAP信号通路抑制血管紧张素Ⅱ诱导的心肌肥大

目的探究姜黄素抑制血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的心肌肥厚相关病理机制。方法 MTT法和乳酸脱氢酶试剂盒检测姜黄素的心肌细胞毒性;200 nmol·L~(-1) AngⅡ孵育心肌细胞24 h诱导心肌肥厚;α-actinin染色观察心肌细胞形态大小;q PCR检测心肌肥大标记物ANF、BNP、β-MHC的m RNA水平;通过Western blot检测AngⅡ受体的抑制蛋白ATRAP的表达情况。结果姜黄素对心肌细胞无明显毒性;200 nmol·L~(-1)的AngⅡ刺激心肌细胞24 h显著诱导心肌细胞肥大;ANP、BNP、β-MHC的m RNA水平显著增高;AngⅡ受体的抑制蛋白ATRAP表达明显降低;姜黄素预作用细胞1 h显著抑制AngⅡ诱导的心肌肥大,逆转AngⅡ降低的ATRAP表达。结论姜黄素抑制AngⅡ诱导的心肌肥大可能与其激活ATRAP信号通路有关。     

当归芍药散通过AMPK/mTOR通路对高糖诱导的足细胞损伤的影响

目的:探讨当归芍药散是否可以通过AMPK/mTOR信号通路激活自噬改善高糖诱导的足细胞损伤。方法:分别将足细胞分为正常对照组、模型组、当归芍药散含药血清组、自噬抑制剂组、当归芍药散含药血清加自噬抑制剂组、自噬激动剂、AMPK抑制剂、当归芍药散含药血清加AMPK抑制剂组和AMPK激动剂，并观察各组的自噬相关蛋白、细胞活性和细胞凋亡率。结果:与对照组相比，高糖组足细胞活力和Beclin-1/LC3/p-AMPK蛋白表达均降低，细胞凋亡率和p-mTOR蛋白表达均增加(P<0.01);和高糖组相比，当归芍药散含药血清组、自噬激动组、AMPK激动剂组的细胞活力和Beclin-1/LC3Ⅱ/p-AMPK蛋白表达均提高，细胞凋亡率和p-mTOR蛋白表达均降低(P<0.01);与高糖组相比，自噬抑制剂组、AMPK抑制剂组足细胞的细胞活力和Beclin-1/LC3Ⅱ/p-AMPK蛋白表达均降低，细胞凋亡率和p-mTOR蛋白表达均增加(P<0.01)。结论:当归芍药散可以通过AMPK/mTOR通路激活自噬改善高糖诱导的足细胞损伤。     

乙酰胆碱抑制自噬保护高糖诱导的H9c2细胞损伤

目的研究乙酰胆碱(ACh)对高糖诱导的心肌细胞损伤的影响及机制。方法应用高糖处理H9c2细胞72 h,建立心肌细胞损伤模型。实验分为:①对照组(control);②高糖组(HG);③HG+ACh(10-4nmol·L~(-1))组;④HG+ACh+AICAR(0. 5 nmol·L~(-1))组;⑤HG+ACh+雷帕霉素(rapamycin,Rap)组(Rap 50 nmol·L-1);⑥HG+3-MA(2 mmol·L~(-1))组。MTT及ATP含量检测,评估各组细胞活性;Western blot观察各组自噬、凋亡及AMPK/m TOR信号通路相关蛋白表达变化;透射电镜观察各组细胞自噬小体的数量变化。结果与对照组相比,HG组LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、pAMPK/AMPK比值降低(P <0. 05),p-mTOR/m TOR、Bax/Bcl-2比值升高(P <0. 05);与HG组相比,HG+3-MA组Bax/Bcl-2比值降低(P <0. 05),HG+ACh组心肌细胞活性增加(P <0. 05),LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、p-AMPK/AMPK、Bax/Bcl-2比值降低(P <0. 05),p-mTOR/m TOR比值升高(P <0. 05);与HG+ACh组相比,HG+ACh+AICAR组p-AMPK/AMPK比值升高(P <0. 05),p-mTOR/m TOR比值降低(P <0. 05),而LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值升高(P <0. 05),HG+ACh+Rap组Bax/Bcl-2比值升高(P <0. 05)。结论 ACh通过AMPK信号通路抑制自噬,保护高糖诱导的心肌细胞损伤。     

大黄衍生物B对白介素-6诱导宫颈癌Hela生物学行为的影响

目的探讨大黄衍生物B通过AMPK/mTOR通路对白介素-6(IL-6)诱导的子宫癌细胞凋亡、迁移及侵袭的影响。方法将宫颈癌Hela细胞分为对照组、IL-6组、高剂量组、中剂量组和低剂量组。IL-6组添加25 ng/ml IL-6,低剂量组添加25 ng/ml IL-6+40μmol/L大黄衍生物B,中剂量组添加25 ng/ml IL-6+80μmol/L大黄衍生物B,高剂量组添加25 ng/ml IL-6+120μmol/L大黄衍生物B。MTT试剂检测宫颈癌细胞增殖,流式细胞仪检测宫颈癌细胞凋亡,细胞划痕测定宫颈癌细胞迁移能力,Transwell小室测定宫颈癌细胞侵袭能力,RT-PCR检测各组细胞中AMPK、mTOR、TSC1和TSC2 mRNA表达,Western blot检测各组细胞AMPK、mTOR、p-AMPK、p-mTOR、TSC1和TSC2表达。结果各剂量组宫颈癌细胞增殖抑制率和凋亡率明显低于IL-6组(P0.01)。各剂量组宫颈癌细胞细胞划痕愈合率和穿膜细胞数明显低于IL-6组(P0.01)。各剂量组宫颈癌细胞AMPK、TSC1和TSC2 mRNA表达明显高于IL-6组(P0.01),mTOR mRNA表达明显低于IL-6组(P0.01)。各剂量组宫颈癌细胞AMPK、p-AMPK、TSC1和TSC2蛋白表达明显高于IL-6组(P0.01),mTOR和p-mTOR蛋白表达明显低于IL-6组(P0.01)。结论大黄衍生物B通过上调AMPK和下调mTOR通路能够明显抑制白介素-6诱导宫颈癌Hela增殖、迁移及侵袭。     

有氧运动对自发性高血压大鼠心肌纤维化的影响及机制

摘要：目的 观察长期有氧运动对自发性高血压大鼠（SHR）心肌纤维化的影响,并探讨调控胶原代谢的信号分 子——转化生长因子-β（1 TGF-β1）、结缔组织生长因子（CTGF）、基质金属蛋白酶2（MMP-2）和组织金属蛋白酶抑制 物-2（TIMP-2）在其中的作用机制。方法 30只雄性SHR随机分为安静对照（SHR-RC）组和有氧运动（SHR-AT） 组,同时将15只Wistar-Kyoto大鼠作为正常血压对照（NC）组。NC组和SHR-RC组动物在鼠笼安静饲养,SHR-AT组 进行24周跑台训练。实验结束后利用无创血压仪测定尾动脉血压,超声心动术检测心脏结构与功能,Masson染色获 取心脏胶原容积分数（CVF）,实时荧光定量 PCR 检测心钠素（ANP）、脑钠素（BNP）和 β-肌球蛋白重链（β-MHC） mRNA表达量,Western blotting检测TGF-β1、CTGF、MMP-2［包括总MMP-2（72 ku）和活化型MMP-2（64 ku）］、TIMP- 2和α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）蛋白表达量。结果 与NC组比较,SHR-RC组大鼠心腔扩张同时室壁变薄,心脏 CVF 增加,心功能下降,ANP、BNP 和 β-MHC mRNA 以及 TGF-β1、CTGF、TIMP-2 和 α-SMA 蛋白表达量上调（P＜ 0.05）,活化型MMP-2蛋白表达量以及活化型MMP-2/TIMP-2比值下降（P＜0.05）;与SHR-RC组比较,SHR-AT组心 脏扩张减轻,心脏CVF下降,心功能增强,ANP、BNP和β-MHC mRNA以及α-SMA蛋白表达量下调,活化型MMP-2 蛋白表达量以及活化型 MMP-2/TIMP-2 比值增加（P＜0.05）,而 TGF-β1、CTGF 和 TIMP-2 蛋白表达量无明显变化 （P＞0.05）。结论 长期规律有氧运动能够改善SHR心肌纤维化,并延缓心脏重塑和心力衰竭进程,其机制与胶原 降解增加（但对胶原合成无影响）以及抑制成纤维细胞向成肌纤维细胞分化有关     

高良姜素对非小细胞肺癌A549细胞SIRT1/mTOR通路及放射敏感性的影响

摘要：目的:探讨高良姜素对非小细胞肺癌（NSCLC）A549细胞沉默信息调节因子1（SIRT1）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）通路及放射敏感性的影响。方法:体外培养NSCLC A549细胞,细胞计数试剂盒（CCK-8）法检测不同浓度(10,20,40,60,80,100μmol·L-1)高良姜素处理的A549细胞的增殖抑制率;将A549细胞经不同剂量（0,1,2,4,6,8 Gy）放射处理,并设置各剂量与35μmol·L-1高良姜素联用组,克隆形成实验观察高良姜素的放射增敏作用;将A549细胞分为高良姜素+放射线组(35μmol·L-1+6 Gy)、高良姜素组(35μmol·L-1)、放射线组（6 Gy）及对照组,流式细胞术检测细胞凋亡率;蛋白免疫印迹法检测增殖蛋白细胞周期蛋白D1（CyclinD1）、细胞增殖核抗原（Ki67）、凋亡蛋白半胱氨酸蛋白酶（Caspase）-3、Caspase-9及STRT1/mTOR通路蛋白SIRT1、腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）、磷酸化AMPK（p-AMPK）、磷酸化mTOR（p-mTOR）、mTOR的表达。结果:与对照组比较,随着高良姜素浓度的增加,A549细胞增殖抑制率逐渐增加（P<0.05）;与各剂量射线单独处理的A549细胞相比,35μmol·L-1高良姜素+各剂量射线处理的A549细胞存活分数降低（P<0.05）,辐射增敏比（SER）=1.522;与对照组比较,高良姜素组、放射线组、高良姜素+放射线组A549细胞凋亡率、Caspase-3、Caspase-9、p-AMPK/AMPK蛋白表达显著升高,CyclinD1、Ki67、SIRT1、p-mTOR/mTOR蛋白表达显著降低（P<0.05）;与高良姜素组、放射线组比较,高良姜素+放射线组A549细胞凋亡率、Caspase-3、Caspase-9、p-AMPK/AMPK蛋白表达显著升高,高良姜素+放射线组CyclinD1、Ki67、SIRT1、p-mTOR/mTOR蛋白表达显著降低（P<0.05）。结论:高良姜素可能通过调控SIRT1/mTOR通路影响A549细胞的增殖凋亡及放射敏感性,可能是治疗NSCLC的潜在药物。     

病理状态对心肌细胞及心脏成纤维细胞β3-肾上腺素受体表达的影响

目的 观察与心力衰竭相关的不同病理因素刺激下,Sprague-Dawley（SD）乳鼠心肌细胞和心脏成纤维细胞中 β3-肾上腺素受体（β3-AR）表达变化的差异。方法 分离培养 SD乳鼠心肌细胞和心脏成纤维细胞并行免疫荧光鉴定,分别给予血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）及去甲肾上腺素（NE）进行刺激,采用实时荧光定量PCR（qPCR）检测心肌细胞肥大相关基因［心钠肽（ANP）、脑钠肽（BNP）、β-肌球蛋白重链（β-MHC）］、心脏成纤维细胞纤维化相关基因［Ⅰ型胶原蛋白（COL-Ⅰ）、Ⅲ型胶原蛋白（COL-Ⅲ）］及2种细胞中β3-AR的mRNA表达。结果 免疫荧光鉴定显示,分离培养的心肌细胞和心脏成纤维细胞均状态良好。AngⅡ和 NE分别刺激 2种细胞 48 h后,心肌细胞中 ANP、BNP、β-MHC和 β3-AR的表达较对照组明显增加;心脏成纤维细胞中 COL-Ⅰ、COL-Ⅲ表达较对照组明显增加,但 β3-AR的表达没有明显变化。结论 参与心力衰竭发生发展的病理因素 AngⅡ和 NE主要引起心肌细胞的 β3-AR表达增加,而不是心脏成纤维细胞。     

G蛋白信号调节因子6对心肌细胞肥大的作用及机制研究

目的探讨G蛋白信号调节因子6(RGS6)对心肌细胞肥大的调控作用及机制。方法用AdRGS6和AdshRGS6慢病毒分别感染心肌细胞使RGS6表达上下调,AngⅡ构建肥大模型。测定各组细胞面积和ANP、BNP的表达,检测活性氧(ROS)和丝裂原活化蛋白激酶(ERK1/2、p38、JNK1/2)的表达。明确改变的信号通路后,用ROS抑制剂(DPI)开展逆转实验。结果 (1)与AdG FP/AngⅡ组相比,AdRGS6/AngⅡ组细胞面积、ANP和BNP明显增加,信号通路中ROS和磷酸化(p)-JNK1/2表达增加。(2)与AdshRNA/AngⅡ相比,AdshRGS6/AngⅡ组细胞面积、ANP和BNP明显降低,信号通路中ROS和p-JNK1/2表达下降。(3)逆转实验:与AdRGS6/AngⅡ组相比,DPI干预的AdRGS6/AngⅡ组心肌细胞面积明显降低,p-JNK1/2蛋白表达降低。结论 RGS6通过激活ROS/JNK1/2通路促进心肌细胞肥大。     

缓激肽B2受体在缬沙坦抑制心肌细胞肥大中的作用研究

目的探讨缓激肽(BK)B2受体在缬沙坦(valsartan)抑制血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的新生大鼠心肌细胞肥大中的作用及可能机制.方法经差速贴壁法获得新生大鼠心肌细胞,随机分为对照组、AngⅡ组、缬沙坦组、AngⅡ+缬沙坦组、Hoe-140组和AngⅡ+缬沙坦+Hoe-140组.采用流式细胞仪技术检测细胞大小和蛋白含量,硝酸还原酶法测定上清液中NO含量,放射免疫法测定细胞内cGMP水平.结果与对照组相比,10-7 mol·L-1 AngⅡ显著增加心肌细胞大小和蛋白含量,降低心肌细胞NO生成(P＜0.01),10-5 mol·L-1缬沙坦显著降低AngⅡ诱导的心肌细胞肥大和蛋白合成增加(P＜0.01),促进心肌细胞NO(P<0.05)和cGMP生成(P＜0.01),BK B2受体阻断剂Hoe-140可部分阻断缬沙坦的上述作用.结论BK B2受体部分介导了缬沙坦抑制心肌细胞肥大的效应,该作用与NO、cGMP生成有关.     

PTEN/mTOR通路在高糖诱导的人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/SVneo凋亡中的作用机制探讨 #br#

目的 探讨高糖诱导人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/SVneo凋亡的相关机制。方法 体外培养人绒毛膜滋 养层细胞HTR-8/SVneo,分为空白对照组、高糖组、NC组（阴性对照组）、第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同 源物基因（PTEN）-siRNA 组（抑制 PTEN 表达组）及哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）通路抑制剂（GDC-0349）组。 四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测HTR-8/SVneo细胞增殖能力;流式细胞仪检测细胞凋亡情况;蛋白免疫印迹法检测凋 亡相关蛋白及PTEN/mTOR通路相关蛋白表达情况。结果 与空白对照组比较,高糖组HTR-8/SVneo细胞增殖抑制 率、凋亡率及Bcl-2相关X蛋白（Bax）、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（cleaved caspase-3）、PTEN蛋白表 达水平均显著升高（P＜0.05）,B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）、磷酸化磷脂酰肌醇-3激酶（p-PI3K）/PI3K、磷酸化蛋白激酶B （p-AKT）/AKT、磷酸化 mTOR（p-mTOR）/mTOR 蛋白表达水平显著降低（P＜0.05）;与高糖组、NC 组比较,PTENsiRNA组HTR-8/SVneo细胞增殖抑制率、凋亡率及Bax、cleaved caspase-3、PTEN蛋白表达水平均显著降低,Bcl-2、pPI3K/PI3K、p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR 蛋白表达水平显著升高（P＜0.05）;与 PTEN-siRNA 组比较,GDC-0349 组 HTR-8/SVneo细胞增殖抑制率、凋亡率及Bax、cleaved caspase-3蛋白表达水平均显著升高,Bcl-2、p-PI3K/PI3K、pAKT/AKT、p-mTOR/mTOR 蛋白表达水平显著降低（P＜0.05）。结论 高糖可抑制人绒毛膜滋养层细胞 HTR-8/ SVneo增殖能力,诱导其凋亡,可能是通过上调PTEN表达、抑制PI3K/AKT/mTOR通路活化实现的。     

AT1-R-JAK／STAT 信号通路对肥大心肌细胞表达内脂素的调节

目的：观察心肌细胞肥大过程中应用不同的信号通道阻断剂阻断AngⅡ作用后内脂素的表达情况,研究内脂素水平变化的意义。方法采用SD乳鼠（出生2～3 d）,利用差速贴壁法提取原代心肌细胞并进行培养,48 h后改为无血清的培养基继续培养,24 h后分组。分别应用不同的信号通道阻断剂阻断AngⅡ的干预作用。应用RT-PCR、Western-Blot技术检测心肌细胞中内脂素表达情况,应用Western-Blot技术检测心肌细胞脑氨钠素（ BNP）表达情况。结果心肌细胞活力（光密度值）和BNP表达水平在AngⅡ浓度为10－8、10－7、10－6 mol／L时逐渐升高,AngⅡ浓度为10－6 mol／L时达峰值,而AngⅡ浓度升高为10－5 mol／L时心肌细胞活力下降,BNP表达水平下降。内脂素和内脂素mRNA水平,在AngⅡ浓度为10－8、10－7、10－6 mol／L时呈逐渐升高趋势, AngⅡ浓度为10－5 mol／L时达峰值。在AngⅡ浓度为10－6 mo1／L时,心肌细胞活力、内脂素mRNA表达和内脂素蛋白表达与对照组比较,差异均有统计学意义（ P ＜0．05）。心肌细胞MTT产物（ OD值）、内脂素mRNA和蛋白表达、BNP蛋白表达水平,随时间延长而增加。PD123319预干预组和AngⅡ干预组内脂素mRNA和蛋白表达水平明显高于对照组和替米沙坦预干预组（P＜0．05）。AngⅡ组内脂素mRNA和蛋白表达水平与对照组、AG490＋AngⅡ组、SP600125＋AngⅡ组和U0126＋AngⅡ组比较,差异有统计学意义（ P ＜0．05）,AG490＋AngⅡ组、SP600125＋AngⅡ组和U0126＋AngⅡ组明显高于对照组（P＜0．05）。结论在AngⅡ诱导的心肌细胞肥大中内脂素表达的增加,由AT1-R-JAK／STAT信号通路所介导。     

miR-199a在妊娠糖尿病中的表达及参与胰岛素抵抗的作用机制研究

目的　探究微小RNA（miR）-199a在妊娠糖尿病（GDM）中的表达及调控沉默信息调节因子1（SIRT1）/叉头盒转录因子O1（FOXO1）通路参与胰岛素抵抗（IR）的机制。方法　GDM孕妇56例为GDM组,正常孕妇60例为正常孕妇组,实时荧光定量PCR（qPCR）检测2组胎盘中miR-199a水平;计算胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）;Pearson相关分析miR-199a与HOMA-IR的相关性。体外培养人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/SVneo并建立IR模型。miR-199a功能验证：细胞依处理方式不同分为模型组、miRNA inhibitor NC组、miR-199a inhibitor组、miRNA mimic NC组、miR-199a mimic组;qPCR检测各组细胞中miR-199a表达情况,蒽酮法检测细胞内葡萄糖吸收量,试剂盒检测超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）水平,Western blot检测SIRT1、FOXO1、乙酰化（Ac）-FOXO1蛋白水平,双荧光素酶报告基因实验鉴定miR-199a与SIRT1的靶向关系。结果　与正常孕妇组比较,GDM组胎盘中miR-199a、HOMA-IR水平升高（P＜0.05）;GDM组miR-199a水平与HOMA-IR呈正相关（P＜0.05）。棕榈酸、胰岛素共同作用细胞24 h成功建立IR模型。与模型组和miRNA inhibitor NC组比较,miR-199a inhibitor组miR-199a、MDA水平降低,葡萄糖吸收量、SOD水平、SIRT1蛋白水平升高（P＜0.05）。与模型组和miRNA mimic NC组比较,miR-199a mimic组miR-199a和Ac-FOXO1蛋白表达升高、MDA水平升高,葡萄糖吸收量、SIRT1蛋白水平降低（P＜0.05）。Tarbase数据库分析显示,miR-199a与SIRT1存在互补的结合位点,并经双荧光素酶实验证实。结论　GDM患者胎盘中miR-199a高表达,升高的miR-199a可通过靶向下调SIRT1而促进FOXO1乙酰化,导致IR。     

治疗性浅低温(34℃)对大鼠缺血再灌注心肌细胞mTOR表达及凋亡的影响

目的 观察治疗性浅低温(34℃)对大鼠缺血再灌注(I/R)心肌细胞mTOR表达及细胞凋亡的影响.方法 将体外培养的大鼠心肌细胞随机分为3组:常温组(H/R组)、治疗性浅低温34℃组(MTH组)、雷帕霉素+治疗性浅低温组(RP+MTH组).分别采用缺氧/复氧实验模拟心肌细胞I/R损伤.H/R组:37℃缺氧30min,再复氧120min.MTH组:37℃缺氧30min,再34℃复氧120min.MTH+RP组:37℃缺氧30min,再34℃复氧120min,同时于复氧初始时加入雷帕霉素0.1mmol/L.通过蛋白免疫印迹(Western Blot)方法检测p-mTOR、t-mTOR、Bcl-2与Bax的表达;流式细胞仪检测心肌细胞凋亡率.结果 I/R损伤后,与H/R组、MTH+RP组比较,MTH组p-mTOR表达明显增加、Bcl-2表达明显增加、Bax表达明显降低、心肌细胞凋亡指数显著降低,差异有统计学意义(P<0.05).与H/R组比较,MTH+RP组p-mTOR表达、Bcl-2与Bax表达、心肌细胞凋亡指数均无明显差异,差异无统计学意义(P>0.05).结论 治疗性浅低温(34℃)处理I/R心肌细胞能增加心肌细胞p-mTOR和Bcl-2的表达,降低Bax的表达,显著降低心肌细胞凋亡率.雷帕霉素能削弱或抵消治疗性浅低温的心肌保护作用,其机制可能与雷帕霉素抑制mTOR的激活有关.     

四氢姜黄素对压力负荷引起的小鼠心肌肥厚的保护作用

目的 探究四氢姜黄素（THC）能否减轻压力负荷引起的成年小鼠病理性心肌肥厚。方法 24只C57BL/6小鼠随机分为4组：假手术（Sham）组、THC组、主动脉弓缩窄（TAC）组及TAC+THC组,每组6只。通过TAC术建立小鼠心肌肥厚模型,Sham组和THC组不结扎主动脉弓。TAC术后每日通过饮水摄入THC（120 mg/kg）。TAC术后4周检测小鼠心脏功能,分离心脏和肺脏计算心脏/体质量比和肺脏/体质量比,HE 染色计算心肌细胞平均横截面积,Masson 染色观察心脏组织胶原沉积程度,Western blotting 检测 α-肌球蛋白重链（α-MHC）、β-肌球蛋白重链（β- MHC）蛋白表达,实时定量PCR（real-time PCR）检测心房钠尿肽（ANP）mRNA表达情况。结果 TAC术后4周,小鼠发生病理性心肌肥厚,表现为心脏/体质量比、肺脏/体质量比、心肌细胞平均横截面积、心脏组织胶原沉积、β-MHC和ANP表达较Sham组小鼠明显增高,而左室射血分数（LVEF）、左室短轴缩短率（LVFS）和α-MHC表达较Sham组小鼠明显降低。与TAC组相比,THC处理可以明显缓解TAC引起的病理性心肌肥厚,改善心脏功能,提高α-MHC表达,降低心脏/体质量比、肺脏/体质量比、心肌细胞平均横截面积、心脏组织胶原沉积、β-MHC和ANP表达（均P＜ 0.05）。结论 THC能够有效减轻压力负荷引起的病理性心肌肥厚。     

LINC01123通过miR-449a调控HGF/c-MET通路参与宫颈癌发生发展的分子机制

摘要：目的　探讨长链非编码RNA（lncRNA）LINC01123对宫颈癌（CC）细胞增殖、迁移及侵袭的影响及可能的作用机制。方法　在GEPIA数据库分析CC组织中差异表达的lncRNA;体外培养人CC细胞系SiHa、HeLa、CaSki和人正常子宫颈上皮细胞HcerEpic,实时荧光定量PCR（qPCR）检测细胞中LINC01123、microRNA-449a（miR-449a）的表达水平。取对数生长期的CaSki细胞,分成对照组（NC）组、pcDNA3.1-NC组、LINC01123过表达组、si-NC组、LINC01123沉默组、LINC01123沉默+inhibitor-NC组、LINC01123沉默+miR-449a抑制剂组,转染48 h后,收集各组细胞用qPCR法检测转染效果;CCK-8法检测细胞增殖活性;流式细胞术分析细胞凋亡;划痕实验和Transwell小室实验检测细胞迁移、侵袭能力;Western blot检测细胞中肝细胞生长因子（HGF）/细胞间质上皮转化因子（c-MET）通路相关蛋白的表达;双荧光素酶报告基因验证LINC01123与miR-449a的靶向关系。结果　LINC01123在CC组织和细胞中的表达升高,而miR-449a在人CC细胞中呈低表达（P＜0.05）。与NC组比较,LINC01123沉默组LINC01123表达、细胞增殖活性、迁移和侵袭能力、HGF表达和磷酸化c-MET（p-c-MET）/c-MET比值降低,miR-449a表达、细胞凋亡率升高（P＜0.05）;下调miR-449a的表达可明显减弱LINC01123沉默对CaSki细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用（P＜0.05）。双荧光素酶检测结果显示,miR-449a是LINC01123的靶基因。结论　沉默LINC01123可通过上调miR-449a表达,抑制HGF/c-MET信号通路的激活,从而抑制CC细胞的生长和转移。