甘珀酸抑制eATP-P2X7R-NLRP3信号通路减轻慢性胰腺炎纤维化的实验研究

摘要：目的　探讨细胞外ATP（eATP）-P2X7R-NLRP3信号通路在慢性胰腺炎（CP）胰腺纤维化中的作用以及ATP抑制剂甘珀酸（CBX）对CP的治疗作用。方法　将6周龄雄性C57BL/6小鼠随机均分为5组：正常组,模型组,CBX低、中、高剂量组（分别为25、50、100 mg/kg）。造模结束后,CBX各剂量组小鼠分别腹腔注射相应剂量的药物。末次给药24 h后将小鼠脱颈处死。HE染色评估胰腺组织病理学改变;ATP化学发光法测定小鼠胰腺组织eATP水平;免疫荧光染色检测P2X7R、NLRP3、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1（Caspase-1）蛋白表达;实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（qPCR）检测P2X7R、NLRP3、Caspase-1、缝隙连接蛋白（PAN-1）mRNA的表达。结果　HE染色,光镜下可见正常组小鼠胰腺细胞分布紧密,排列规则,无纤维化及炎症细胞浸润。模型组细胞间隙增宽、腺泡萎缩、炎症细胞浸润且有大量胶原纤维生成,组织学评分较正常组显著升高（P＜0.01）;与模型组相比,CBX中、高剂量组炎症细胞浸润及胶原纤维生成均减少,组织学评分降低。模型组小鼠造模后eATP水平较正常组显著升高（P＜0.01）,CBX中、高剂量组给药2周后,胰腺组织eATP水平均低于模型组。免疫荧光染色法和qPCR检测均显示,与正常组相比,模型组P2X7R、NLRP3、Caspase-1蛋白和mRNA表达升高（P＜0.01）;与模型组相比,CBX中、高剂量组表达均下调（P＜0.05）。此外,qPCR检测结果还显示,模型组小鼠PAN-1 mRNA表达较正常组显著上调;与模型组相比,CBX中、高剂量组表达均下调（P＜0.01）。结论　CP病程中eATP水平显著增加并激活P2X7R,促进NLRP3炎性体组装,加重胰腺纤维化,CBX可下调P2X7R、NLRP3、Caspase-1,减轻胰腺炎症损伤及纤维化,从而发挥治疗作用。     

P2X7R/NLRP3信号通路在酒精性肝损伤中的作用

目的探讨嘌呤P2X7R及其介导的NLRP3炎性体信号通路在酒精诱导的肝损伤中的作用。方法采用NIAAA法建立小鼠急性酒精性肝损伤模型,将30只♂C57BL/6小鼠随机分为3组(n=10):对照组、模型组、P2X7特异性阻断剂A438079干预组,最后1周,分组进行以下处理,对照组和模型组:给予等剂量的生理盐水腹腔注射(每只约0.2 mL),每日1次;A438079组:根据小鼠体质量,腹腔注射200μmol·kg~(-1)的A438079(按7 g·L~(-1)配制A438079,每只约0.2mL),每日1次。最后1天清晨给予单次31.5%酒精溶液灌胃,剂量为10 mL·kg~(-1)。9 h后小鼠眼眶取血,测定谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、胆固醇(TCHO)、甘油三酯(TG)。HE染色观察肝脏病理变化;免疫组化方法检测肝组织中P2X7R的表达;Western blot法检测肝组织中的P2X7、NLRP3、ASC、IL-1β、IL-18水平。结果与对照组相比,模型组ALT、AST、TG、TCHO含量明显增强,且肝组织损伤明显;与模型组相比,A438079组ALT、AST、TG、TCHO含量明显降低。与对照组相比,模型组P2X7、NLRP3、ASC、IL-1β、IL-18的表达明显升高;与模型组相比,A438079组P2X7、NLRP3、ASC、IL-1β、IL-18的表达水平明显降低。结论酒精诱导的肝损伤可能与P2X7R-NLRP3信号通路有关。     

不同剂量丁苯酞对UUO 小鼠肾组织Nrf-2 表达的影响

摘要： 目的 探讨不同剂量丁苯酞 （NBP） 对单侧输尿管梗阻 （UUO） 小鼠肾间质纤维化的作用, 并探讨核转录因子-E2 相关因子 2 （Nrf-2） 表达水平与肾间质纤维化的关联性。方法 清洁级 CD-1 雄性小鼠 72 只随机均分为低剂量丁苯酞 （NBPL） 组、 高剂量丁苯酞 （NBPH） 组、 假手术 （Sham） 组和模型 （UUO） 组。除 Sham 组外, 均制作 UUO 模型, NBPL、 NBPH 组自术后第 1 天始分别给予 NBP 150 mg/ （kg·d）、 220 mg/ （kg·d） 灌胃。Sham 及 UUO 组亦自术后第 1 天始均给予等量生理盐水灌胃, 每天每公斤体质量入量恒定, 直至处死。各组分别于术后第 3、 7、 14 天处死 6 只小鼠, 取梗阻侧肾组织做免疫组化染色检测Ⅰ型胶原蛋白的表达, Western Blot 检测 7 d 和 14 d 时 Nrf-2、 Ⅰ型胶原蛋白的表达。结果 免疫组化结果显示, UUO 组Ⅰ型胶原蛋白的 IOD 值随时间延长呈增高趋势, Sham 组、 NBPL 组和 NBPH 组呈降低趋势 （P<0.05）。UUO 组、 NBPL 组和 NBPH 组各时点 IOD 值均较 Sham 组增高, NBPL、 NBPH 组较 UUO 组降低, 且 NBPH 组低于 NBPL 组 （P<0.05）。Western Blot 结果显示, 7 d 和 14 d 时, UUO 组、 NBPL 组和 NBPH 组 Nrf-2、 Ⅰ型胶原蛋白 IOD 值均较 Sham 组增高; NBPL、 NBPH 组 Nrf-2 蛋白 IOD 值较 UUO 组升高, 而Ⅰ型胶原蛋白降低; NBPL 组 Nrf-2 的 IOD 值低于 NBPH 组, 而Ⅰ型胶原蛋白高于 NBPH 组 （均 P<0.05）。结论 NBP 对 UUO 小鼠肾间质纤维化有一定的改善作用, 作用机制可能与上调肾组织 Nrf-2的表达, 下调Ⅰ型胶原蛋白的表达有关。     

达格列净对1型糖尿病小鼠心肌损伤的影响及机制研究

目的：探讨达格列净对1型糖尿病小鼠心肌损伤的影响及机制研究。方法：正常C57BL/6J雄性小鼠随机分为正常对照组（Control）、糖尿病心肌病组（DCM）和达格列净组（DAPA）。应用链脲佐菌素（STZ）诱导并给予维持饲料联合构建糖尿病模型。DAPA组给予10 mg·kg-1·d-1的达格列净灌胃，Control组与DCM组给予等体积0.9%氯化钠溶液灌胃。干预8周后，应用超声机来检测各组心功能；乳酸脱氢酶（LDH）检测心肌损伤；HE染色观察心脏形态；Masson、天狼星红染色观察心脏纤维化程度；TUNEL检测心肌凋亡；免疫组化检测NLRP3、Caspase-1、GSDMD、Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ、α-SMA、Fibronectin胶原表达情况；qPCR法检测Caspase-1、GSDMD、α-SMA、Fibronectin的mRNA基因表达含量；Western blot法检测心肌焦亡及纤维化相关蛋白NLRP3、Caspase-1、GSDMD、Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ、α-SMA、Fibronectin、IL-18蛋白表达水平。结果：与Contr...     

亚精胺促进线粒体自噬缓解急性胰腺炎的分子机制研究

目的 探讨亚精胺促进线粒体自噬缓解急性胰腺炎的疗效及作用机制。方法 将C57BL/6J小鼠随机分为对照组、模型组、亚精胺组、亚精胺＋环孢菌素A组，每组5只。通过每小时向小鼠腹膜内注射1次50 μg/kg的蛙皮素构建急性胰腺炎模型。对照组按照同模型组的处理方式注射等体积无菌生理盐水；亚精胺组腹膜内注射100 mmol的亚精胺；亚精胺＋环孢菌素A组在给予亚精胺治疗的同时，腹膜内注射10 mg/kg的环孢菌素A。苏木精–伊红（HE）染色评估小鼠胰腺组织损伤程度。TUNEL染色评估胰腺腺泡细胞凋亡情况。ELISA法测定小鼠血清炎症因子白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤细胞坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-1β（IL-1β）、C反应蛋白（CRP）的水平。免疫组织化学染色（IHC）评估髓过氧化物酶（MPO）水平。JC-1染料测定胰腺组织提取的总线粒体的线粒体膜电势水平。Western blotting法测定胰腺组织细胞质基质型LC3（LC-3Ⅰ）、微管相关蛋白1轻链3Ⅱ（LC-3Ⅱ）、泛素结合蛋白（p62）、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3（NLRP3）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶（Caspase-1）、cleaved-Caspase-1、IL-1β、PTEN诱导假定激酶1（PINK1）、磷酸化Parkin（p-Parkin）和Parkin的表达水平。结果 与模型组相比，亚精胺组胰腺组织几乎不存在中性粒细胞的大量浸润，腺泡细胞肿胀程度明显减弱，基本无腺泡细胞坏死；TUNEL染色阳性细胞数和MPO IHC阳性染色细胞数明显降低；小鼠血清IL-6、TNF-α、IL-1β、CRP的水平明显降低；胰腺组织LC-3Ⅰ/Ⅱ、NLRP3、IL-1β、cleaved-Caspase-1、PINK1和p-Parkin的表达水平明显降低，p62的表达水平明显增强；胰腺组织总线粒体膜电势水平明显增强（P＜0.05）。与亚精胺组相比，亚精胺＋环孢菌素A组完全逆转了亚精胺的治疗效果。结论 亚精胺可以促进线粒体自噬缓解急性胰腺炎。     

基于细胞焦亡探讨补阳还五汤配方颗粒对病毒性心肌炎小鼠心肌纤维化的抑制作用

目的:探讨补阳还五汤对病毒性心肌炎(VMC)小鼠心肌纤维化抑制作用与细胞焦亡的关系。方法:将雄性BALB/c小鼠随机分为对照组、模型组,以及补阳还五汤低、高剂量组(6,36 g·kg^-1·d^-1),每组9只。除对照组外,其余各组小鼠均单次腹腔注射柯萨奇B3病毒复制VMC模型。造模成功后,对照组和模型组小鼠均灌胃等容生理盐水,各给药组小鼠均灌胃相应药液,每日1次,连续28 d,于实验过程中观察各组小鼠的一般情况。以病毒接种当日为第0天,分别于第7、14、28天检测其心脏质量与体质量比值(HW/BW);采用苦味酸天狼猩红染色法观察其心肌组织中Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的分布情况,并计算Ⅰ型/Ⅲ型胶原蛋白比值;Tunel染色检测心肌细胞凋亡率,并计算凋亡指数;于第30天时,采用Western blot法检测其心肌组织中NLRP3、Caspase-1蛋白的相对表达量。结果:与对照组比较,模型组小鼠出现烦躁、拱背、对刺激反应减轻、体质量减轻甚至精神萎靡等现象;HW/BW、Ⅰ/Ⅲ型胶原蛋白比值(第7~28天各时间点)、心肌细胞凋亡指数,以及心肌组织中NLRP3、Caspase-1的相对表达量均显著升高(P＜0.05);与模型组比较,各给药组小鼠上述症状具有不同程度改善,其HW/BW(第7天除外)、Ⅰ/Ⅲ型胶原蛋白比值(第7天除外)、心肌细胞凋亡指数(补阳还五汤低剂量组第7天除外),以及NLRP3、Caspase-1的相对表达量的相对表达量均显著降低(P＜0.05)。结论:补阳还五汤通过抑制心肌胶原蛋白增生,调节Ⅰ/Ⅲ型胶原蛋白比值,抑制NLRP3、Caspase-1的表达,发挥对VMC心肌纤维化的抑制作用。     

背根神经节嘌呤受体亚型P2X3R介导小鼠术后急—慢痛转化北大核心CSCD

目的探讨不同部位不同嘌呤受体亚型在小鼠切口术后痛转化中的作用差异。方法足底切口恢复后注射PGE_(2)构建术后痛转化模型。第一部分:C57BL/6小鼠随机分为对照(Con)组、假敏化(sHP)组、敏化(HP)组,检测机械痛阈、自发痛评分和焦虑样行为;Western blot检测患侧L 3-5背根神经节(DRG)和脊髓背角(SCDH)中P2X3R和P2X7R蛋白表达变化。第二部分:C57BL/6小鼠随机分为Con组、HP+生理盐水组、HP+P2X3R拮抗剂组或HP+P2X7R拮抗剂组,观察拮抗不同亚型嘌呤受体对小鼠机械痛阈的影响。结果与正常小鼠相比,切口痛小鼠注射PGE_(2)后机械痛阈明显下降,自发痛评分明显增加(P<0.05),未表现出焦虑样行为(P>0.05),且P2X3R蛋白在DRG中表达明显增多(P<0.05),在SCDH中未检出,而P2X7R蛋白在DRG和SCDH各组中表达均无差异(P>0.05)。拮抗P2X3R能阻断术后痛转化的产生,而拮抗P2X7R无明显影响。结论切口痛小鼠经PGE_(2)诱导可出现急慢性痛的转化,不伴发焦虑样情绪,DRG中P2X3R可能是参与术后痛转化的关键受体之一。     

黄柏酮对单侧输尿管梗阻模型小鼠肾间质纤维化及铁死亡的影响

目的 研究黄柏酮对单侧输尿管梗阻（UUO）模型小鼠肾间质纤维化的改善作用，并基于核转录因子红系2相关因子2(Nrf2)/谷胱甘肽过氧化物酶4(GPx4)信号通路介导的铁死亡探讨其作用机制。方法 将30只小鼠随机分为假手术组、模型组、厄贝沙坦组（阳性对照，20 mg/kg）和黄柏酮低、高剂量组（10、40 mg/kg），每组6只。除假手术组外，其余各组小鼠均通过结扎单侧输尿管建立UUO模型。术后，给药组小鼠腹腔注射相应药物，假手术组、模型组小鼠腹腔注射等体积生理盐水，每天1次，连续7 d。检测小鼠血清中肌酐（Cr）、血尿素氮（BUN）水平，丙二醛（MDA）含量，总超氧化物歧化酶（T-SOD）活力和肾脏组织中Fe2+浓度；苏木精-伊红（HE）染色和Masson染色观察小鼠肾脏组织形态和纤维化情况；免疫组化法检测小鼠肾脏组织中纤连蛋白（Fn）、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、GPx4、Nrf2的表达，Western blot法和实时定量聚合酶链反应（RT-qPCR）检测小鼠肾脏组织中Fn、α-SMA、Nrf2、GPx4、溶质载体家族7成员11(SLC7A11)蛋白及m RNA的表达水平。结...     

右美托咪定对痛觉过敏大鼠脊髓 PKCγ、 CaMKⅡα及pCaMKⅡα表达的影响

摘要： 目的 探讨右美托咪定对切口痛-瑞芬太尼痛觉过敏大鼠脊髓蛋白激酶 C （PKC） γ、 钙/钙调素依赖性蛋白激酶 （CaMK） Ⅱα及 pCaMKⅡα表达的影响。方法 雄性 SD 大鼠 40 只, 体质量 240~260 g, 2~3 月龄, 随机数字表法分为 5 组 （n=8）： 空白对照组 （C 组）、 瑞芬太尼+切口痛组 （R+I 组）、 右美托咪定+瑞芬太尼+切口痛组 （D+R+I 组）、 右美托咪定+瑞芬太尼+切口痛+佛波醇酯+二甲基亚砜组 （D+R+I+P+DMSO 组）、 右美托咪定+瑞芬太尼+切口痛+二甲基亚砜组（D+R+I+DMSO 组）。采用足底切口的方法制备切口痛模型。瑞芬太尼以 1.2 μg·kg-1·min-1的速度经尾静脉输注 90 min; 右美托咪定以 50 μg/kg 的剂量于术前 30 min 皮下注射; 佛波醇酯及二甲基亚砜均为鞘内注射 10μL。分别于输注前 24 h（T0）、 输注后 2、 6、 24 和 48 h（T1~4）时测定热刺激缩足潜伏期（PWL）和机械刺激缩足阈值（PWT）。最后 1 次行为学测试后处死大鼠, 取脊髓 L4~6节段。采用 Western blot 法测定脊髓背角 PKCγ、 CaMKⅡα及pCaMKⅡα的表达。结果 除 T0外, 与 C 组比较, 其余各组 PWL 缩短、 PWT 降低, PKCγ、 CaMKⅡα及 pCaMKⅡα表达上调。与 R+I 组比较, D+R+I 组、 D+R+I+DMSO 组 PWL 延长、 PWT 升高, PKCγ、 CaMKⅡα及 pCaMKⅡα表达下调。与 D+R+I 组比较, D+R+I+P+DMSO 组 PWL 缩短、 PWT 降低, PKCγ、 CaMKⅡα及 pCaMKⅡα表达上调。与 D+R+I+P+DMSO 组比较, D+R+I+DMSO 组 PWL 延长、 PWT 升高, PKCγ、 CaMKⅡα及 pCaMKⅡα表达下调。结论 右美托咪定可以减少切口痛-瑞芬太尼痛觉过敏大鼠脊髓 PKCγ、 CaMKⅡα及 pCaMKⅡα的表达。     

荆芥挥发油抗内毒素中毒小鼠NLRP3炎症小体通路的机制研究

目的以NLRP3炎症小体通路为切入点,探究荆芥挥发油抗炎效应的分子机制。方法荆芥挥发油低、高剂量(0.226、0.452 g·kg~(-1))连续灌胃给药5 d,末次给药后30 min,小鼠腹腔注射LPS (0.015 g·kg~(-1),10 mL·kg~(-1))构建内毒素中毒小鼠模型,造模后12 h取材,测定相关指标。Griess法测定肺组织NO含量;qPCR法检测肺组织中NLRP3、ASC、caspase-1、IL-1β、iNOS、p65 mRNA的表达;免疫组化法检测肺组织中P2X7R、Cathepsin B的表达;Western blot法测定肺组织中NLRP3、caspase-1(p20)、pro-IL-1β、COP1蛋白表达。结果 0.226 g·kg~(-1)荆芥挥发油明显降低模型小鼠肺组织Cathepsin B、NLRP3蛋白表达;0.452 g·kg~(-1)荆芥挥发油明显降低模型小鼠肺组织中NO水平,明显下调小鼠肺组织中NLRP3、iNOS、p65、IL-1βmRNA的表达及P2X7R蛋白表达;荆芥挥发油(0.226、0.452 g·kg~(-1))均能明显下调caspase-1(p20)蛋白水平,升高COP1蛋白水平。结论荆芥挥发油对内毒素中毒小鼠的保护作用与其抗炎效应密切相关,抗炎机制与抑制NLRP3炎症小体的激活有关。     

The P2X7 receptor mediates NLRP3-dependent IL-1β secretion and promotes phagocytosis in the macrophage response to Treponema pallidum

It is unclear whether P2X7 receptor (P2X7R) mediates NOD-like receptor family protein 3 (NLRP3)-dependent IL-1β secretion and spirochete phagocytosis in syphilis. This study was conducted to investigate the role of P2X7R in modifying NLRP3-dependent IL-1β secretion and regulating phagocytosis by Treponema pallidum (T. pallidum)-induced macrophages. Macrophages derived from a human acute monocytic leukemia cell line were cultured with T. pallidum. The activation of P2X7R in T. pallidum-treated macrophages occurred in a dose- and time-dependent manner. The P2X7R silencing group showed significantly decreased NLRP3 mRNA and protein levels (vs. the Tp group, P < 0.001). Similar results were observed for IL-1β secretion using ELISA (vs. the Tp group, P < 0.001). Furthermore, P2X7R siRNA transfection significantly decreased the percentage of spirochete-positive macrophages (29.73% vs. 70.83%, P < 0.001) and spirochete internalization (mean fluorescence intensity (MFI), 9.20 vs. 19.39, P < 0.001). This finding revealed that P2X7R played a role in the induction of NLRP3-dependent IL-1β secretion by T. pallidum-induced macrophages. Furthermore, we found that P2X7R plays an important role in IL-1β secretion and in the promotion of T. pallidum phagocytosis by macrophages. These results may not only contribute to our understanding of the immune mechanism that is active during T. pallidum infection but may also lay the groundwork for strategies to combat syphilis.     

Inhibition of P2X7R modulates ECM deposition in HSCs and crosstalk with macrophages in liver fibrosis

OBJECTIVE Modulation of immune response and reduction of extracellular matrix(ECM)deposition are both essential in the therapy of liver fibrosis.Regulating P2 X7 R might be a potential therapeutic strategy to treat liver fibrosis, we investigated whether the blockade of P2 X7 R could reverse liver fibrosis and how P2 X7 R is involved in fibrogenesis during hepatic stellate cells(HSCs) and macrophages crosstalk. METHODS In vivo,liver fibrosis model was established by thioacetamide(TAA) intraperitoneal administration in male C57 BL/6 mice. In vitro, LX-2 cells were treated with TGF-β and LPS/ATP respectively. Supernatant from LPS/ATP stimulated THP-1 macrophages were supplemented to LX-2 cells to mimic cellular crosstalk between HSCs and macrophages. RESULTS Blockade of P2 X7 R with its selective antagonist A438079, not only decreased liver injury and ECM deposition but also ameliorated inflammation by inhibiting NLRP3 inflammasome, NF-κB activation and IL-1β production in TAA-induced liver fibrosis. And the recruitment of macrophages, monocytes and granulocytes were also inhibited. In TGF-β-stimulated LX-2 cells,ECM deposition was reduced by the inhibiting of P2 X7 RTLR4-NLRP3 axis. Protein synthesis and cleavage of IL-1β and its m RNA level was dramatically increased by LPS 4 h combined with ATP 30 min than those in HSC treated with LPS or ATP alone. Additionally, LX-2 cells primed with LPS/ATP greatly increased m RNA and protein expression of caspase-1, NLRP3 and P2 x7 R, as well as liver fibrosis markers, α-SMA and typeⅠcollagen.These events were remarkably suppressed by A438079 pretreatment. si RNA against P2 x7 R reduced protein expression of NLRP3 and α-SMA, and suppressed deposition and secretion of type Ⅰ collagen induced by LPS/ATP. Ectopic overexpression of P2 X7 R reduced the threshold of ECM deposition in HSCs induced by TGF-β.Inhibiting upstream receptors of NLRP3 inflammasome,P2 X7 receptor-selective antagonist(A438079), TLR4 inhibitor(CLI-095) reduced the fibrotic markers in both models of TGF-β and LPS/ATP-activated HSCs. The cultured medium of the THP-1 macrophages by LPS/ATP aggravated ECM deposition in LX-2 cells. The decreased IL-1β by the pharmacological inhibitors of P2 X7 R,caspase-1 and TLR4 treated to THP-1 macrophages attenuates ECM deposition in LX-2 cells. CONCLUSION Both ECM producing in HSCs and inflammatory cytokines secreting from macrophages were regulated by P2 X7 R, suggesting a therapeutic utility of P2 x7 R blockade in liver fibrosis treatment.     

不同途径移植骨髓间充质干细胞对慢性肾病大鼠肾脏纤维化的影响

目的观察不同途径移植骨髓间充质干细胞(BMSCs)对慢性肾病(CKD)大鼠的治疗效果及寡聚化结构域样受体蛋白(NLRP)3炎症小体对肾间质纤维化的影响。方法雄性SD大鼠50只,其中2只用于体外分离培养BMSCs;36只大鼠CKD造模(左肾切除+多次尾静脉注射阿霉素)成功后随机分为模型(CKD)组、肾动脉移植BMSCs(A-M)组、尾静脉移植BMSCs(V-M)组;另设假手术(SHAM)组,每组12只,尾静脉输注等量生理盐水。移植BMSCs后第7、14天检测血肌酐、尿素氮、24 h尿蛋白水平;HE染色、Masson三色染色观察肾脏病理结构改变及纤维化情况,免疫组化染色观察核苷酸结合NLRP3、凋亡相关微粒蛋白(ASC)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase)-1表达情况。结果与SHAM组相比,CKD组、A-M组、V-M组7 d、14 d血肌酐、尿素氮、24 h尿蛋白均显著升高(P<0.05)。BMSCs移植7 d、14 d后,A-M组、V-M组与CKD组比较血肌酐、尿素氮、24 h尿蛋白降低,且A-M组低于V-M组(P<0.05)。HE染色、Masson染色结果示,A-M组...     

氨磺必利通过TLR/NLR通路对慢性应激抑郁大鼠的改善作用研究

目的 观察氨磺必利对抑郁症大鼠行为的影响,并探究其对大鼠海马组织Toll样受体(TLR)/NOD样受体(NLR)通路相关蛋白表达的影响.方法 将SD大鼠随机分为对照组、模型组及低、中、高剂量(0.3、1.2、4.8 g/kg)氨磺必利组,每组10只,除对照组外,其他各组大鼠给予8周慢性温和不可预知应激(CUMS)刺激制...     

P2X7受体介导异丙酚对缺氧海马突触前膜谷氨酸Ca~(2+)依赖性释放的抑制作用

目的观察嘌呤P2X7受体激动剂和拮抗剂以及异丙酚对大鼠缺氧海马突触前膜谷氨酸释放的影响及P2X7受体是否介导异丙酚的作用。方法选用SD♂大鼠,制备突触体,置入无糖并充以95%N2/5%CO2的人工脑脊液(aCSF)中进行缺氧实验。向无糖aCSF中加入P2X7受体特异性拮抗剂BBG(终浓度1μmol·L-1)或P2X7受体特异性激动剂BZATP(终浓度100μmol·L-1)。于缺氧前、缺氧20min及40min时测定孵育液中谷氨酸浓度,谷氨酸Ca2+非依赖性释放试验中将Ca2+、DHK(谷氨酸转运体抑制剂)从aCSF中去除。观察异丙酚对谷氨酸Ca2+依赖性释放的影响时,分别向无糖aCSF中加入1～100μmol·L-1的异丙酚,然后进行缺氧40min,测定孵育液中谷氨酸浓度并计算异丙酚的半效抑制浓度(IC50)。观察P2X7受体在异丙酚抑制效应中的作用时,施加异丙酚(2倍IC50水平)、异丙酚和BBG(终浓度1μmol·L-1)或异丙酚和BZATP(终浓度100μmol·L-1)。缺氧40min后测定孵育液中谷氨酸浓度。结果缺氧不同时点海马突触体谷氨酸Ca2+依赖性释放增加(P<0.01),BBG可完全抑制谷氨酸释放(P<0.01),BZATP则进一步使谷氨酸释放增加(P<0.01)。谷氨酸Ca2+非依赖性释放在缺氧各时点无变化。异丙酚可浓度依赖性的抑制谷氨酸Ca2+依赖性释放,IC50为(27.4±5.2)μmol·L-1。55μmol·L-1(2倍IC50)异丙酚与BBG或与BZATP共同作用下的谷氨酸Ca2+依赖性释放水平与单独应用异丙酚比较差异无显著性(P>0.05)。结论缺氧状态下,P2X7受体介导海马突触前膜谷氨酸Ca2+依赖性释放,异丙酚通过抑制P2X7受体而呈浓度依赖性的抑制谷氨酸Ca2+依赖性释放。     

甘草酸对大鼠胰腺纤维化的干预作用及其机制

目的　观察甘草酸对大鼠实验性胰腺纤维化的干预作用及其可能机制。方法　♂SD大鼠 ,应用胆胰管内注射2 %三硝基苯磺酸 (TNBS)诱导胰腺纤维化 ,甘草酸干预组(n =10 )在制模后 3d尾静脉注射甘草酸 ,剂量为 8mg·kg- 1体重 ,每天 1次 ,持续 4wk ,同时设立对照组 (n =8)。 4wk后处死动物抽取血液 ,分别采用酶动力法和放射免疫法检测血清淀粉酶和透明质酸 ;部分胰腺组织常规石蜡包埋切片 ,HE染色评定炎症反应的程度 ,改良V G染色观察胶原纤维 ,硫堇染色观察肥大细胞 ,TGF β1、α SMA和Ⅰ型胶原采用免疫组织化学染色 ;部分胰腺组织冻存于液氮 ,用于Westernblot检测α SMA的表达。结果　甘草酸干预组血清淀粉酶和透明质酸与对照组相比未见明显的差异 ;肥大细胞的数量和慢性脱颗粒较对照组明显减少 ;α SMA蛋白的表达明显较对照组下调 ;腺泡细胞炎症反应和纤维化程度较对照组明显减轻 ;胶原纤维染色显示 ,干预组小叶内明显减少 ;免疫组化染色显示TGF β1和Ⅰ型胶原表达较对照组下调。结论　甘草酸可能通过抑制肥大细胞的聚集活化和保护腺泡细胞膜的稳定 ,减少腺泡细胞的破坏 ,抑制胰腺星状细胞的活化增殖达到控制纤维化的发生