甘草酸单铵保护利福平致大鼠肝损伤的机制初探

目的: 本文基于肝细胞膜转运体多药耐药相关蛋白2(multidrug resistance protein 2, Mrp2)和Na⁺-牛磺酸钠共转运体(sodium taurocholate cotransporting polypeptide, Ntcp),初步探究甘草酸单铵(monoammonium glycyrrhizinate,MAG)对利福平(rifampicin,RIF)致大鼠肝损伤的保护作用及机制。方法: Wistar雄性大鼠随机分为3组:对照组(control组):灌胃等容量的生理盐水;RIF肝损伤组(RIF组):灌胃RIF 60 mg·kg^-1·d^-1;MAG治疗组(MAG+RIF组):灌胃MAG 45 mg·kg^-1·d^-1 3 h后灌胃RIF 60 mg·kg^-1·d^-1。给药第7,14,21天时,各组分别随机取5只大鼠分离血清测定生化指标;取肝组织做病理切片,观察肝脏组织病理学变化并进行肝组织学活动指数(HAI)评分;采用 Western blotting法检测肝组织Mrp2和Ntcp蛋白表达量。结果: 与对照组相比,RIF组给药7,14,21 d时,其部分血清生化指标呈明显上升趋势,肝脏病理学HAI分值显著增加(P<0.01);MAG+RIF组血清生化指标与对照组之间无显著差异,与RIF组相比其HAI评分显著降低(P<0.05)。给药7,14,21 d时,RIF组较对照组Mrp2的表达均显著升高(P<0.05),而MAG+RIF组Mrp2的表达均显著低于RIF组(P<0.05)。给药期间,各组Ntcp的表达均无显著差异(P>0.05)。结论: 利福平肝损伤机制可能与其上调Mrp2有关,MAG可保护利福平诱导的肝损伤,且其保肝作用可能与其下调Mrp2有关。     

姜黄素对雷公藤甲素肝损伤的保护作用

目的：探讨姜黄素对雷公藤甲素诱导小鼠慢性肝损伤的保护作用。方法：小鼠32只随机均分4组,每组8只。对照组：每天灌胃生理盐水;姜黄素组：每天灌胃姜黄素100 mg·kg-1;雷公藤甲素模型组：每天灌胃雷公藤甲素400μg·kg-1;姜黄素+雷公藤甲素组：每天灌胃雷公藤甲素400μg·kg-1+姜黄素100 mg·kg-1。每天给药1次,连续28 d。检测血清中丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）、总胆红素（TBIL）、碱性磷酸酶（ALP）和乳酸脱氢酶（LDH）;测定肝组织中超氧化合物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、谷胱甘肽（GSH）、谷胱甘肽-S-转移酶（GST）和尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶1（UGT1）含量。 HE染色观察肝脏病理改变。结果：与雷公藤甲素组相比,联合组的小鼠ALT和ALP有显著的下降（P<0.05）,AST和LDH没有显著性改变,TBIL有明显升高。姜黄素能升高肝组织中GST、GSH、SOD和UGT1含量（P<0.05）,降低肝组织中MDA的含量。病理检查结果也显示联合姜黄素给药改善了雷公藤甲素引起的病理改变。结论：姜黄素能增强雷公藤甲素慢性中毒小鼠体内的抗氧化能力,对小鼠雷公藤甲素慢性肝损伤具有一定的保护作用。     

退银汤对银屑病样小鼠模型NE、trappin-2、P-cad表达水平的影响

目的：观察退银汤对咪喹莫特诱导的银屑病样小鼠模型中皮损组织和血清中性粒细胞蛋白酶（NE）、trappin-2、胎盘型钙黏蛋白（P-cad）等蛋白表达水平的干预作用,探讨退银汤治疗银屑病的作用机制。方法：使用5%咪喹莫特乳膏外涂小鼠背部脱毛区,制备银屑病样小鼠模型;72只小鼠随机分为正常对照组,模型对照组,退银汤低、中、高剂量组,消银颗粒组,每组12只,按照既定实验药量给各用药组灌胃给药,qd,连续14 d,正常对照组和模型对照组给予等容量的生理盐水;采用双抗体酶联免疫吸附法检测模型小鼠皮损组织及血清中NE、trappin-2、P-cad的含量。结果：模型组小鼠皮损组织及血清中NE、trappin-2、P-cad的含量均明显高于正常对照组（P<0.01）;退银汤各剂量组能明显降低模型小鼠NE、trappin-2、P-cad的表达水平,与模型对照组比较均有显著性差异（P<0.05,P<0.01）;退银汤中、大剂量组降低更为明显,与小剂量组比较均有显著性差异（P<0.05,P<0.01）,并呈现良好的量效依赖关系;退银汤大剂量组皮损组织中的上述蛋白水平已接近正常对照组（P>0.05）。结论：退银汤能显著降低咪喹莫特诱导的银屑病样小鼠模型NE、trappin-2、P-cad等蛋白的表达水平,通过降低上述蛋白的表达水平来发挥调节免疫应答功能,可能是退银汤治疗银屑病的作用机理之一。     

异型南五味子醇提物对D-半乳糖胺/脂多糖致小鼠急性肝损伤的保护作用

目的：研究异型南五味子对D-半乳糖胺/脂多糖诱导小鼠肝损伤的保护作用。方法：ICR小鼠按体质量随机分为 6组,即正常组、模型组、联苯双酯（200 mg·kg^-1）组,异型南五味子醇提物低、中、高剂量（200、400、800 mg·kg^-1）组。每天给药一次,连续给药14 d,末次给药1 h后,除正常组外其余各组用600 mg·kg^-1 D-半乳糖胺和40 μg·kg^-1脂多糖腹腔注射以复制小鼠急性肝损伤模型,末次给药12 h后,摘眼球取血,取材。用生化法测定血清中ALT、AST水平,用酶联免疫法测定各组小鼠肝匀浆中SOD、MDA、MPO及GPx-2含量,测定血清及肝组织中 TNF-α、IL-6、IL-10炎性因子表达水平,并于光镜下检查肝组织病理变化。结果：与模型组比较,异型南五味子200、400、800 mg·kg^-1剂量均能显著降低血清中ALT、AST水平（P<0.05或P<0.01）,明显降低肝匀浆中MDA、MPO含量,显著升高SOD、GPx-2水平（P<0.05或P<0.01）,并能降低肝脏及血清中TNF-α、IL-6含量,升高IL-10的表达水平（P<0.05或P<0.01）。病理观察显示异型南五味子组能明显减轻肝脏灶性坏死、水肿,减少肝脏炎性细胞浸润。结论：异型南五味子对腹腔注射600 mg·kg^-1D-半乳糖胺和40 μg·kg^-1脂多糖诱导的小鼠急性肝损伤具有较好的保护作用。     

TAK-242通过调控JAK2/STAT3通路抑制小鼠心肌缺血再灌注损伤炎症反应

目的：探讨Toll样受体4拮抗剂TAK-242抑制小鼠心肌缺血/再灌注损伤（ischemia/reperfusion,I/R）炎症反应的分子机制。方法：选用48只雄性C57BL/6小鼠随机分为4组：假手术组（sham）、模型组（I_30min /R_24h）、给药组[I/R+TAK-242（3 mg·kg^-1）]、干预组[I/R+TAK-242+AG490（15 mg·kg^-1）]。再灌注24 h后心脏超声检测小鼠心功能,氯化三苯基四氮唑（TTC）染色法测定心肌梗死面积,HE染色观察心肌病理改变,WB检测心肌JAK2/STAT3磷酸化水平,ELISA检测血清IL-6、TNF-α、IL-10和高迁移率族蛋白B1（HMGB1）浓度。结果：与sham组比较,I/R组小鼠左心室收缩期直径（LVIDs）延长（P<0.01）,左心室射血分数（LVEF）和左心室短轴缩短分数（LVFS）显著降低（P<0.001或P<0.01）,心梗面积明显增加并出现心肌炎性浸润,心肌p-JAK2/p-STAT3表达明显升高（P<0.01或P<0.05）,血清IL-6、IL-10、TNF-α和HMGB1水平显著升高（P<0.001或P<0.01）。与I/R组比较,TAK-242给药组小鼠LVIDs缩短（P<0.05）,LVEF和LVFS显著升高（P<0.01或P<0.05）,心梗面积缩小（P<0.01）,心肌炎症浸润减轻,心肌p-JAK2/p-STAT3表达降低（P<0.01或P<0.05）,血清IL-6和TNF-α水平明显下降（P<0.001或P<0.01）,而IL-10和HMGB1浓度进一步升高（P<0.01）。与TAK-242给药组比较,AG490干预可显著加强TAK-242治疗作用,包括心肌收缩功能增强,心梗面积缩小及炎性浸润程度减轻,心肌p-JAK2/p-STAT3表达降低（P<0.05）,血清IL-6、TNF-α浓度下降而IL-10、HMGB1浓度升高（P<0.01或P<0.05）。结论： Toll样受体4拮抗剂TAK-242抑制小鼠I/R炎症反应与JAK2/STAT3信号通路失活有关。     

黄独素B致小鼠肝损伤过程中对肝外排型转运体Mrp2表达的影响

目的：探究黄独素B引起小鼠肝损伤过程中肝转运体Mrp2的变化情况。方法：雄性ICR小鼠分为试验组和对照组,每组8只。试验组以50mg·kg^-1的剂量灌胃给药黄独素B 14d后,摘眼球取血分离血清测定肝功生化指标、称量肝脏重量计算肝重指数、制作肝脏病理切片,最后采用免疫印迹方法测定肝脏转运体Mrp2的表达变化情况。结果：黄独素B给药组小鼠肝重指数及肝功生化指标如谷丙转氨酶、碱性磷酸酶、总胆汁酸、总胆红素和直接胆红素等均比空白对照组升高,差异具有统计学意义。同时,与空白对照组相比,给药组肝外排型转运体Mrp2表达明显降低,差异具有统计学意义。结论：黄独素B口服能够引起小鼠肝脏外排型转运体Mrp2表达的下降,阻碍胆红素、胆汁酸及毒性物质外排而造成其在体内及肝内的蓄积,该变化可能是黄独素B引起药源性肝损伤的机制之一。     

甘草酸单铵对异烟肼致大鼠肝损伤的保护作用及其机制

目的:考察甘草酸单铵(MAG)对异烟肼(INH)诱导的大鼠肝损伤的保护作用及其对肝脏转运体Na⁺-牛磺胆酸共转运多肽(Na⁺-taurocholate cotransporting polypeptide,NTCP)及多药耐药相关蛋白2(multidrug resistance protein 2,Mrp2)的调节作用。方法:Wistar雄性大鼠45只,随机分为9组,即对照组,异烟肼肝损伤组(INH组),甘草酸单铵治疗组(MAG组),以上每组又各分为干预7,14,21 d组。INH组大鼠灌胃INH 60 mg·kg^-1·d^-1;MAG组大鼠灌胃MAG 45 mg·kg^-1·d^-1 3 h后灌胃INH。干预结束后,处死大鼠,通过血清生化指标、肝脏病理及Ntcp、Mrp2蛋白表达对各组大鼠进行评价对比。结果:血清生化指标与肝脏病理结果显示,INH诱导的大鼠肝损伤具有时间依赖性,而MAG对INH诱导的大鼠肝损伤具有保护作用,且存在时间依赖性;与INH组相比,MAG干预21 d对肝脏转运体Ntcp及Mrp2表达具有明显下调作用(P<0.05)。结论:MAG对INH诱导的肝损伤的保护作用可能与下调肝细胞膜转运体Ntcp与Mrp2的表达有关。     

基于MAPK信号通路研究4-羟基苯并恶唑-2-酮抗肝纤维化的作用机制

目的： 探讨4-羟基苯并恶唑-2-酮（HBOA）对四氯化碳（CCl₄）诱导的大鼠肝纤维化的保护作用。方法： 采用CCl₄橄榄油溶液灌胃建立大鼠肝纤维化模型。第8周确定建模成功后,将雄性SD大鼠随机分成正常对照组,模型对照组,秋水仙碱阳性药组,HBOA高、中、低药物组。从第9周起,相应药物干预4周后,测定血清中总蛋白（TP）,白蛋白（Alb）的含量以及肝组织中羟脯氨酸（Hyp）的含量;免疫组织法检测肝组织中α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）蛋白含量的表达;Westerns blot法检测肝组织中MAPK,P-MAPK,P38的蛋白含量的表达。结果： 与模型组相比,HBOA可降低肝纤维化大鼠血清TP、Alb水平（P<0.01）以及肝组织中Hyp水平（P<0.01）,HBOA高中低剂量组显著降低大鼠肝组织中的α-SMA蛋白的表达（P<0.01）,并显著下调MAPK,P-MAPK,P38的蛋白表达水平（P<0.01）。结论： HBOA对CCl₄诱导的肝纤维化大鼠有一定的改善作用,通过抑制MAPK的信号通路,显著减轻了CCl₄诱导的纤维化。     

柿寄生提取物对对乙酰氨基酚诱导小鼠肝损伤的保护作用及作用机制

目的：研究柿寄生提取物对对乙酰氨基酚（APAP）诱导小鼠肝损伤的保护作用及作用机制。方法：将60只健康雄性昆明种小鼠随机分成正常组、模型组、联苯双酯阳性组（150 mg·kg^-1）、柿寄生提取物低、中、高剂量组（11.67，23.34，46.67 mg·kg^-1），灌胃给药8 d后，除正常组外其他各组腹腔注射265 mg·kg^-1对乙酰氨基酚，建立急性肝损伤模型，眼球取血后常规检测血清谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）活性水平、肝匀浆生化指标和肝脏病理。结果：与模型组相比，柿寄生提取物中剂量能明显降低AST、ALT活性水平，降低肿瘤坏死因子-α、白细胞介素-6、白细胞介素-1β表达水平（P<0.05），降低丙二醛活力水平（P<0.05），显著提高超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶活性、提高微量还原型谷胱甘肽的水平（P<0.05），改善肝组织病理学变化。结论：柿寄生萃取物能明显减轻APAP所致的肝损伤，其机制与降低炎症因子水平，提高机体抗氧化能力，降低氧化应激有关。     

侧柏炭黄酮类成分群对干酵母致血热复合出血模型大鼠的止血作用研究

目的：观察侧柏炭黄酮类成分群对干酵母致血热复合出血模型大鼠的止血作用。方法：对照组和模型组灌胃CMC-Na,以云南白药为阳性药,阳性组、剔除前组、剔除后组、成分群低剂量组和成分群高剂量组分别灌胃相应的治疗药物,连续给药8 d,于第7天复制出血热复合出血模型,以活化部分凝血活酶时间（APTT）、血浆凝血酶时间（TT）、凝血酶原时间（PT）、纤维蛋白原的量（FIB）、血小板计数（PLT）、血小板分布宽度（PDW）、平均血小板体积（MPV）、ADP诱导的血小板聚集率、血栓素（TXB₂）、6-酮前列腺素（6-keto-PGF_1α）、红细胞计数（RBC）、红细胞压积（HCT）、血红蛋白（HGB）的量、全血黏度、环氧合酶2（COX-2）等评价指标为导向,考察侧柏炭乙酸乙酯部位成分群的止血作用。结果：与对照组比较,模型组大鼠APTT,TT显著延长（P<0.01,P<0.05）,PT显著缩短（P<0.05）,FIB的量明显增加（P<0.01）;PLT,PDW,MPV显著增加（P<0.01,P<0.05）,ADP诱导的血小板聚集率显著降低（P<0.05）,6-keto-PGF_1α显著降低（P<0.01）,TXB₂显著升高（P<0.01）;各切变率下全血黏度明显增加（P<0.01）,RBC,PLT和HGB明显升高（P<0.01）,C0X-2的表达量显著升高（P<0.01）。黄酮类成分群可明显缩短APTT,TT（P<0.01,P<0.05）,明显降低FIB的量（P<0.05）;明显降低PDW和PLT（P<0.01,P<0.05）,显著提高ADP诱导的血小板聚集率（P<0.05）,6-keto-PGF_1α显著升高（P<0.01,P<0.05）,TXB₂显著降低（P<0.01）;明显降低模型大鼠RBC、HCT、HGB及全血低切黏度（P<0.01,P<0.05）,C0X-2的表达量显著降低（P<0.01）,改善肺组织病理性出血现象。剔除后组对模型大鼠各环节的作用较弱。结论：侧柏炭黄酮类成分群主要通过改善内源性凝血功能及促进血小板聚集功能、降低全血低切黏度等发挥其凉血止血作用,是侧柏炭止血有效部位。     

Acetaminophen-induced hepatotoxicity in rats is correlated with the accumulation of bile acids: an underlying mechanism

In the present study, we aimed to investigate the underlying mechanism of acetaminophen (APAP)-induced hepatotoxicityby measuring the expression levels of liver transporters and concentrations of bile acids (BAs) in rat plasma and liver. SD rats (42)were randomly assigned into six groups, including 6-h control group, APAP 6-h group, 12-h control group, APAP 12-h group, 24-h control group and APAP 24-h group. The estimation study of BAs in plasma and liver was performed on LC-MS/MS.The levels of bile salt export pump (Bsep), multidrug resistant protein 2 (Mrp2), multidrug resistant protein 4 (Mrp4), Na⁺/taurocholate cotransporting polypeptide (Ntcp) and organic anion transporting polypeptide 2 (Oatp2) in the liver were analyzed by Western blotting analysis. Compared with the corresponding control groups, no difference was found in the BA levels and the expressions of BA transporters in the plasma and liver after 6 h of APAP administration. While BA levels were significantly decreased in the plasma and increased in the liver after 12 h of APAP administration (P<0.05); and the expressions of Bsep and Mrp2 were significantly reduced (P<0.05). After 24 h of APAP administration, BA levels were both greatly increased in the plasma and liver (P<0.05); and the expressions of Mrp4 and Oatp2 were significantly decreased (P<0.05). In response to over-dose APAP, Bsep, Mrp2, Mrp4 and Oatp2 levels were reduced at different time points, causing the accumulation of BAs, and such accumulation may ultimately lead to the severe liver injury, which could be an underlying mechanism of the APAP-induced hepatotoxicity.     

川芎嗪对小鼠颅脑损伤后大脑组织细胞凋亡相关因子的影响

目的:研究川芎嗪对小鼠颅脑损伤(CI)后的细胞凋亡通路中相关蛋白及其mRNA的影响,揭示川芎嗪治疗颅脑损伤的可能作用机制。方法:将50只昆明种小鼠,随机分成假手术组、模型组、川芎嗪治疗组(40,80,160 mg·kg^-1)五组,采用改良的Feeney自由落体损伤装置建立小鼠CI模型。造模3 d后开始灌胃治疗,每日1次,其他各组给予等量生理盐水,连续用药20 d;蛋白免疫印迹和RT-PCR技术分别检测小鼠大脑组织中凋亡相关蛋白及其mRNA(Bax、Bcl-2、Caspase-9和Caspase-3)的表达量。结果:与假手术组相比,模型组小鼠大脑的凋亡蛋白Bax、Caspase-3和Caspase-9及其mRNA表达增加,差异极显著(P<0.01,P<0.01,P<0.01),抗凋亡蛋白Bcl-2及其mRNA表达差异无统计学意义(P>0.05);与模型组相比,治疗组大脑凋亡蛋白Bax、Caspase-3和Caspase-9及其mRNA表达降低,差异极显著(P<0.01,P<0.01,P<0.01),抗凋亡蛋白Bcl-2及其mRNA表达增加,差异极显著(P<0.01)。结论:川芎嗪可能通过上调Bcl-2蛋白及其mRNA的表达,抑制Bax、Caspase-3和Caspase-9蛋白及其mRNA的表达,减少大脑组织细胞凋亡,保护大脑组织。     

川芎嗪联用环孢素A抗皮肤移植排斥反应的作用机制研究

目的：探讨川芎嗪（TMPZ）联用亚剂量环孢素A（CsA）对同种异体小鼠皮肤移植的抗排斥反应作用。方法：将BALB/c小鼠作为供体,C57BL/6小鼠作为受体,行背-背皮肤移植术。随机分为模型组、TMPZ组（50 mg·kg^-1）、CsA组（10 mg·kg^-1）、TMPZ+亚剂量CsA组（TMPZ 50 mg·kg^-1+CsA 5 mg·kg^-1）、假手术组,腹腔注射给药10 d。观察受体鼠移植皮片的存活情况,酶联免疫吸附法（ELISA）检测血浆中白介素-2（IL-2）、IL-4、IL-10、γ-干扰素（IFN-γ）含量,流式细胞术分析脾脏CD4⁺、CD25⁺T淋巴细胞亚群的比例。结果：各给药组小鼠移植皮片的存活天数均有不同程度的延长,与模型组相比差异均有显著性（P<0.01）。TMPZ+CsA组的移植皮片存活天数比TMPZ组或CsA组均有显著延长（P<0.05或P<0.01）;与模型组相比,TMPZ+CsA组以及TMPZ单用组均可明显减少血浆Th1类细胞因子（IL-2、IFN-γ）的表达（P<0.01）,明显增高Th2类细胞因子（IL-4、IL-10）的表达（P<0.01）。与模型组相比,各给药组均可明显增高脾脏CD4⁺ CD25⁺T淋巴细胞的比例（P<0.05或P<0.01）。结论：TMPZ具有抑制同种异体小鼠皮肤移植排斥反应的效果,与CsA联合应用可能具有协同作用,其作用机制可能与影响Th1/Th2细胞因子、刺激CD4⁺、CD25⁺T淋巴细胞的表达等有关。     

长期服用生大黄、熟大黄对大鼠肝肾功能影响的比较

目的:观察生、熟大黄对SD大鼠肝、肾功能的作用,明确生、熟大黄的毒性作用差异。方法:生、熟大黄总提物10 g·kg^-1给予大鼠灌胃95 d,相当于临床用量的100倍,观察对大鼠行为活动、肝肾功能、电解质影响,并对大鼠脏器进行系统观察和组织病理学检查。结果:与正常对照组比较,生大黄组、熟大黄组的BUN、Cys-c、Crea、β2-MG显著性升高、Na⁺显著降低(P<0.01);与生大黄组相比,熟大黄组的BUN、Cys-c、Crea、β2-MG均显著性下降、Na⁺显著升高(P<0.01~0.05);生大黄组大鼠肾脏有色素沉积、肿胀变性,熟大黄组大鼠色素沉积。结论:长期服用生、熟大黄对大鼠的肾功能有一定的损伤,熟大黄可减轻生大黄的肾损伤作用。     

达格列净联合胰岛素治疗特定2型糖尿病住院患者的疗效与安全性分析

目的：探讨达格列净联合胰岛素治疗超重/肥胖、胰岛功能受损且血糖控制不佳的2型糖尿病住院患者的疗效与安全性。方法：对2017年7月1日－2018年6月30日收治于我院的55例2型糖尿病患者进行回顾性分析,根据用药方案分为对照组30例及达格列净组25例。对照组给予包括口服降糖药及胰岛素在内的降糖基础治疗,达格列净组给予降糖基础治疗+达格列净,观察至出院（约10 d）,比较2组间及治疗前后的疗效及安全性差异。结果：与对照组相比,达格列净组的胰岛素用量和达标时间显著降低（P<0.01）;住院第2、5天的空腹血糖和餐后2 h血糖显著降低（P<0.01）,住院第10天的体质指数（BMI）也显著降低（P<0.01）,降低程度与初始BMI呈正相关趋势。治疗期间2组患者均未发生严重不良反应,对照组发生轻微低血糖1例,达格列净组发生乏力1例,出院1个月后随访发现女性患者发生生殖系统感染2例和泌尿系统感染1例。结论：在降糖方案中加入达格列净用于超重/肥胖、胰岛功能受损且血糖控制不佳的2型糖尿病住院患者,能够快速起效降低血糖、缩短达标时间,显著降低BMI和胰岛素用量,女性患者需要密切监测有无生殖泌尿系感染的不良反应。