CD44+/CD24+表型的宫颈癌Siha细胞对顺铂的耐药及机制研究

背景与目的：肿瘤干细胞的存在是肿瘤细胞抗拒化疗的原因之一。该研究探讨CD44⁺/CD24⁺宫颈癌Siha细胞对顺铂的耐药性及相关机制。方法：体外培养Siha细胞,流式荧光激活细胞分选仪分选CD44⁺/CD24⁺Siha细胞,噻唑蓝(thiazolyl blue,MTT)法检测不同浓度顺铂对细胞的体外抑制情况,采用流式细胞仪检测10 μg/mL顺铂作用于CD44⁺/CD24⁺ Siha细胞24、48和72 h时的细胞凋亡率,实时定量聚合酶链式反应(quantitutive real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)和蛋白［质］印迹法(Western blot)检测CD44⁺/CD24⁺ Siha细胞中Oct-4、ABCG2、Bcl-2的表达,同时设立亲代Siha细胞作为对照。结果：不同浓度顺铂(0.1、1、5、10、15和20 μg/mL)对CD44⁺/CD24⁺ Siha细胞的增殖抑制作用较亲代Siha细胞小［(88.4±1.5)% vs (92.9±1.5)%,(79.9±1.0)% vs (84.7±1.1)%,(69. 8±0.8)% vs (75.1±2.9)%,(59.0±0.7)% vs (65.8±2.7)%,(49.6±0.9)% vs(52.1±0.5)%,(45.1±0.7)% vs (48.8±1.0)%,P<0.05］;与亲代细胞相比,当10 μg/mL顺铂作用于CD44⁺/CD24⁺Siha细胞时,发现在24、48和72 h时的细胞凋亡率均较小［(3.05±0.16)% vs (5.17±0.27)%,(17.94±2.02)%vs (32.60±4.28)%和(40.14±3.01)% vs (56.62±5.32)%,P<0.05］。qRT-PCR和Western blot实验均显示CD44⁺/CD24⁺ Siha细胞高表达Oct-4、ABCG2和Bcl-2,与亲代Siha细胞比较差异有统计学意义(P=0.015)。结论：CD44⁺/CD24⁺ Siha细胞可以抵抗顺铂诱导的细胞凋亡,具有化疗抵抗性,并且高表达肿瘤干细胞表面标志物如Oct-4和ABCG2,该结果在宫颈癌肿瘤干细胞的有效分选以及肿瘤靶向治疗方面有深远意义。     

CD44与宫颈癌

 引言透明质酸 (hyaluronicacid ,HA)受体CD4 4是一类重要的黏附分子 ,与肿瘤转移的关系十分复杂 ,本文通过探讨CD4 4在肿瘤转移中所起的作用及CD4 4与宫颈癌的相关研究 ,认为CD4 4可作为宫颈癌早期诊断及预后评估的生物学指针。1　CD4 4的主要结构CD4 4是分布广泛的单链膜表面糖蛋白 ,可赋予肿瘤细胞很强的侵袭及迁移行为。其基因位于人类第 11号染色体短臂上 ,分为 :(1)CD4 4标准体(CD4 4s)体 ,成熟CD4 4s胞内C 端结构域可通过锚蛋白或ERM复合体 (ezrin/radixin/moesincomplex)与细胞骨架相连。 (2 )CD4 4拼接变异体 (CD4 4v)。CD4 4v在胞膜外靠近跨膜结构域处插入了V编码肽段 ,提供了与配体的结合位点。正常组织以表达CD4 4s为主 ,肿瘤组织CD4 4s表达可增高 ,并可丰富表达CD4 4v。Screaton认为CD4 4膜外成分的变异与细胞黏附及导向作用有关 ,胞内分子尾部与活化T淋巴细胞的潜在作用有关 ,胞内分子长度可调节蛋白激酶A/C的位置 ,影响细胞信号传递。2　CD4 4与肿瘤的研究2 .1...     

CD44+/CD24-细胞在乳腺癌组织中比例与乳腺癌远处转移关系

目的:旨在探讨CD44+/CD 24-细胞在乳腺癌组织中的比例与乳腺癌远处转移之间关系。方法:随机选取2003年1 月至2004年10月于天津医科大学肿瘤医院确诊的乳腺癌患者60例,并将其分为30例转移组及30例非转移组（对照组）。 免疫组织化学双重染色技术检测60例患者石蜡切片中CD44+/CD 24-细胞在乳腺癌组织中所占比例,分析其与远处转移之间关系。结果:转移组与对照组中CD44+/CD 24-细胞在乳腺癌组织中所占比例具有显著性差异（χ2= 11.334 ,P < 0.05）。 骨转移中CD44+/CD24-细胞在乳腺癌组织中比例有显著性差异（χ2= 9.250 ,P = 0.01）。 CD44+/CD 24-细胞在乳腺癌组织中5 年无瘤生存期比例有显著性差异（χ2= 8.058,P = 0.005）。结论:CD44+/CD 24-细胞在乳腺癌组织中所占比例与乳腺癌远处转移密切相关,特别是骨转移。      

化疗对三阴性乳腺癌CD44+CD24-/low细胞亚群的影响

目的:观察化疗对三阴性乳腺癌CD44+CD24-/low细胞亚群的影响。方法:用0.2、1、5倍药物血浆峰浓度(peak plasma concentration,PPC)的紫杉醇、多西紫杉醇、氟尿嘧啶、表柔比星、长春瑞滨和吉西他滨分别作用人三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞24、48和72h后,MTT法检测细胞生长情况;FCM法检测1倍PPC的各药物作用48h以及细胞复苏后CD44+CD24-/low细胞含量的变化;另外,FCM法检测10例转移性三阴性乳腺癌患者在化疗前后,外周血中CD44+CD24-/low细胞的含量变化。结果:6种药物均可抑制MDA-MB-231细胞增殖。1倍PPC的各药作用后,CD44+CD24-/low细胞含量未明显升高,以氟尿嘧啶组含量降低最为明显(P<0.05)。转移性三阴性乳腺癌患者在化疗后,外周血中CD44+CD24-/low细胞含量降低(P<0.05)。结论:化疗药物紫杉醇、多西紫杉醇、氟尿嘧啶和表柔比星可降低MDA-MB-231细胞株中CD44+CD24-/low细胞亚群的含量。化疗可使转移性三阴性乳腺癌患者外周血中CD44+CD24-/low细胞含量降低。     

CD44~+/CD24~-、CD44~-/CD24~+在乳腺良恶性病变中的分布特点和临床病理意义

[目的]探讨CD44+/CD24-细胞、CD44-/CD24+细胞在乳腺癌发生不同阶段中(乳腺良性增生、乳腺不典型增生、乳腺原位癌、乳腺癌)分布规律,及其与乳腺癌临床病理因素之间的关系。[方法]采用免疫组化双染色方法检测45例正常乳腺组织、41例良性增生乳腺组织、39例不典型增生乳腺组织、51例乳腺原位癌组织、121例乳腺癌组织中CD44、CD24的表达情况,分析CD44+/CD24-细胞、CD44-/CD24+细胞在乳腺癌发生不同阶段中的数量和分布特点。[结果]CD44+/CD24-细胞存在于20.0%(9/45)的正常乳腺组织中,在29.3%(12/41)的乳腺良性增生组织、35.9%(14/39)的乳腺不典型增生组织、43.1%(22/51)的乳腺原位癌组织、52.9%(64/121)的浸润性乳腺癌组织中检测到CD44+/CD24-细胞,随着病变的进展,CD44+/CD24-细胞的数量也增加,差异具有显著统计学意义。此外,在33.3%(15/45)的正常乳腺组织中有CD44-/CD24+表达,43.9%(18/41)的乳腺良性增生组织、46.2%(18/39)的乳腺不典型增生组织、68.6%(35/51)的乳腺原位癌组织、86.0%(104/121)的浸润性乳腺癌组织检测到CD44-/CD24+细胞,且阳性细胞百分率随病变程度升高。在浸润性乳腺癌组织中CD44+/CD24-的表达与肿瘤有无淋巴结转移相关(P<0.05),但与病人年龄、月经状态、肿瘤的组织学类型、病理分级、肿瘤大小、ER、PR及Her-2的表达无显著相关(P>0.05),CD44-/CD24+的表达率与乳腺癌患者的各项临床病理特征均无统计学意义(P>0.05)。[结论]CD44+/CD24-、CD44-/CD24+细胞在乳腺增生和癌变过程中可能起重要作用。     

乳腺浸润性微乳头状癌中CD44^＋／CD24^-／low和CD24^＋表型细胞的研究

目的研究乳腺浸润性微乳头状癌（invasive micropapillary carcinoma,IMPC）的干细胞表型,从干细胞和上皮间质转化（epithelial—mesenchymal transition,EMT）角度探讨IMPC高侵袭、高转移恶性生物学行为的原因。方法选取术前未经放化疗治疗患者的IMPC82例和乳腺非特殊型浸润性导管癌（invasive ductal carcinoma not otherwise specified,IDC—NOS）80例石蜡包埋组织标本切片,通过免疫组织化学双染技术检测两组肿瘤组织中CD44^＋／CD24^-/low（CD24^-）和CD24^＋的表达、定位和分布情况,并分析其与各临床病理学特征之间的关系。定量资料采用Student’s t检验,定性资料采用Mann-Whitney U检验、Kruskal—Waliis检验、x^2检验或校正x^2检验。两组之间相关性采用Spearman＇s秩相关分析。结果（1）IMPC组肿瘤细胞的CD44^＋／CD24^-/low阳性表达率（48．8％,40／82例）,明显高于IDC—NOS组（31．3％,25／80例）（x^2=5．180,P=0．023）。（2）53．7％（44／82例）的IMPC微细间质组织内见单个散在的CD44^＋／CD24^-/low肿瘤细胞,且该细胞免疫组织化学染色Vimentin及α—SMA阳性,E—Cadherin阴性。IDC—NOS间质内罕见CD44^＋／CD24^-/low肿瘤细胞。（3）IMPC微乳头结构中CD44^＋／CD24^-/low与间质内的CD44^＋／CD24^-/low阳性表达细胞呈明显正相关（r=0．516,P〈0．001）,并且IMPC微乳头结构及间质中CD44^＋／CD24^-/low阳性表达在有无淋巴管侵犯和有无淋巴结外软组织浸润方面的差异均有统计学意义（P〈0．050）,即有淋巴管侵犯及淋巴结外软组织浸润者CD44^＋／CD24^-/low阳性表达率较高。（4）IMPC组中CD24^＋细胞阳性表达率79．3％（65／82例）,明显高于IDC-NOS组（60．0％,48／80例）（x^2=7．126,P=0．008）,且IMPC中淋巴结转移阳性组CD24的表达高于阴性组,差异有统计学意义（x^2=8．834,P=0．003）。结论IMPC肿瘤细胞中干细胞     

脂多糖刺激前后树突状细胞CD44、CD24基因的表达

目的:检测脂多糖作用于树突状细胞前后CD44、CD24基因的表达情况。方法:从外周血分离单个核细胞,加入rhGM-CSF及rhIL-4,培养的第6天,实验组加入脂多糖刺激24 h而对照组不加,于刺激后不同时间点分别提取细胞总RNA,行real time PCR检测。结果:单个核细胞经GM-CSF及IL-4诱导6d后分化成为树突状细胞,表达较低水平的CD44及CD24。脂多糖刺激后树突状细胞的CD44及CD24表达均较对照组增高,CD44增高更明显。结论:树突状细胞受脂多糖刺激后CD44及CD24表达显著增高,这有利于DC-T细胞簇的形成及抗原的递呈,从而导致DC免疫功能的增强。     

脂多糖刺激前后树突状细胞CD44、CD24基因的表达

目的：检测脂多糖作用于树突状细胞前后CD44、CD24基因的表达情况。方法：从外周血分离单个核细胞,加入rhGM-CSF及rhIL-4,培养的第6天,实验组加入脂多糖刺激24 h而对照组不加,于刺激后不同时间点分别提取细胞总RNA,行real time PCR检测。结果：单个核细胞经GM-CSF及IL-4诱导6d后分化成为树突状细胞,表达较低水平的CD44及CD24。脂多糖刺激后树突状细胞的CD44及CD24表达均较对照组增高,CD44增高更明显。结论：树突状细胞受脂多糖刺激后CD44及CD24表达显著增高,这有利于DC-T细胞簇的形成及抗原的递呈,从而导致DC免疫功能的增强。     

CD44＋ CD24-/low与ALDH1＋在乳腺癌组织中的表达及其意义

乳腺癌是妇女常见的恶性肿瘤。近年的研究发现在恶性肿瘤中存在一种亚群细胞,其恶性程度高于一般的肿瘤细胞。如果分离得到乳腺癌干细胞,就可以通过其表面特异的标志物或异常表达的标志物,检测体内是否残留有肿瘤干细胞,同时把乳腺癌干细胞作为靶细胞,建立乳腺癌干细胞模型,为乳腺癌研究奠定细胞学基础,进而指导手术、     

Clinical relevance of stem cell surface markers CD133, CD24, and CD44 in colorectal cancer

Colon cancer stem cells (CSC) identified by cell surface markers CD133, CD24, and CD44, have been shown to be involved with tumor formation, chemotherapy resistance, and the progression of metastatic disease. Using an in silico translational approach, we hypothesize that a combination of these CSC markers has prognostic value in a large cohort of patients with colorectal cancer. Clinicopathologic and RNA expression data from a total of 594 colorectal cancer (CRC) patients from TCGA were analyzed. The expression of CD133, CD24, and CD44 was individually defined as “high” or “low” based on the median expression. Disease specific survival (DSS) and overall survival (OS) were not associated with tumors that are CD133-high or CD44-high alone. Patients with CD24-high tumors have significantly better DSS (P<0.001) and OS (P = 0.043). CD24-high, CD44-high and CD133-high tumors were associated with significantly greater EGFR, KRAS and Ki67 expression (all P<0.001). CD133, CD24 and CD44-high tumors were independently enriched for conventional stemness-related signaling pathways such as Wnt/β-catenin and Hedgehog signaling pathways. There was no survival difference linked to CD133-high/CD44-low patients, but CD44-high/CD24-low patients have worse DSS (P = 0.005) compared with CD44-low/CD24-high patients. CD133-high/CD24-low tumors show significant negative enrichment of MYC targets, E2F targets, G2M checkpoint and mitotic spindle gene sets, suggesting less cell proliferation in these tumors. Patients with CD133-high/CD24-low tumors have worse DSS (P = 0.004) and OS (P = 0.044), and are more likely to have early and late recurrences. In conclusion, we demonstrated that CD133-high/CD24-low tumors may predict colorectal cancer prognosis.     

The Role of Cancer Stem Cells in Breast Cancer Initiation and Progression: Potential Cancer Stem Cell‐Directed Therapies

Recent studies have identified a small population of highly tumorigenic cells with stem cell properties in human breast and other solid tumors that are considered to be the source of tumor initiation and maintenance; these cells are referred to as cancer stem cells (CSCs). Preclinical data suggest that current breast cancer treatment strategies lead to CSC enrichment, contributing to chemotherapy and radiotherapy resistance, although a strong correlation with clinical parameters and prognosis is yet to be established. Importantly, overcoming treatment failure by effective targeting of CSCs may be an appealing approach, potentially leading to improved clinical outcomes for patients with breast cancer. Several preclinical studies provide promising results that support this hypothesis. The purpose of this review is to summarize the role of CSCs in breast cancer recurrence and resistance and to discuss current attempts of CSC targeting.     

CD44v6基因在宫颈癌组织中的表达及其临床意义

目的:探讨CD44v6基因在宫颈癌组织中的表达情况及其临床意义。方法:用免疫组织化学S-P法,检测56例宫鳞癌,32例宫颈腺癌中CD44v6蛋白的表达情况并分析相关的临床病理因素。结果:CD44v6表达与宫颈癌组织学类型无关;无论宫颈腺癌或鳞癌,淋巴结转移组中CD44v6阳性表达明显高于无淋巴结转移组（P<0.05）;CD44v6表达与宫颈癌临床分期、病理分级、病灶大小无关（P>0.05）。结论:CD44v6在宫颈癌淋巴结转移及癌细胞分化过程中可能起着重要作用,对早期预测癌细胞的转移潜能、判断宫颈癌预后具有一定的临床意义。     

胃癌干细胞中差异表达microRNA对其生物学特性的影响

[目的]探讨胃癌干细胞中差异表达microRNA及其对胃癌干细胞生物学特性(自我更新、侵袭、耐药能力)的调控作用.[方法]采用无血清悬浮培养法和干细胞标志物流式分选术分离人胃癌干细胞;分别采用胃癌细胞球形成实验、体外侵袭、耐药实验鉴定胃癌干细胞的生物学特性;microRNA表达谱芯片检测人胃癌干细胞中差异表达microRNA;采用定量逆转录PCR(qRT-PCR)技术检测相关差异表达microRNA的表达情况,验证microRNA芯片结果;相关microRNA抑制剂干扰后,分别进行胃癌细胞球形成实验、体外侵袭与耐药实验检测microRNA对人胃癌干细胞自我更新、侵袭、耐药能力的影响.[结果]成功分离得到人胃癌干细胞CD44(+)亚群,其具有典型的肿瘤干细胞生物学特性:较强的自我更新能力、侵袭和耐药能力.与CD44(-)细胞亚群相比,人胃癌干细胞CD44(+)细胞亚群高表达miRNAs共有17个;低表达miRNAs共有33个.采用qPCR技术验证microRNA表达谱芯片相关结果,得到:CD44(+)亚群中miR-196a-5p、miR-155-5p、miR-30a、miR-30b、miR-30c表达上调,miR-1246、miR-195-5b表达下调.抑制相关高表达microRNA(miR-196a-5p、miR-155-5p,miR-30a,miR-30b、miR-30c)表达后,肿瘤干细胞的自我更新能力、侵袭和耐药能力均下降.[结论]胃癌干细胞中具有多种差异表达microRNA,microRNA对胃癌干细胞生物学特性具有调控作用.     

CD44+/CD24-/low在乳腺癌中的表达及其与含蒽环类药物化疗方案敏感度的关系

目的研究乳腺癌中CD44+/CD24-/low的表达及其与含蒽环类药物化疗方案敏感度的关系。方法 91例乳腺癌接受含蒽环类药物的术前新辅助化疗,2～4个疗程后进行效果评价;采用双染免疫组织化学方法检测化疗前后CD44+/CD24-/low的表达,t检验分析化疗前后CD44+/CD24-/low细胞比例的变化,χ2检验分析乳腺癌CD44+/CD24-/low表型与乳腺癌临床病理参数及化疗疗效的关系。结果乳腺癌中CD44+/CD24-/low阳性表达率为39.6%(36/91),在接受含蒽环类药物的新辅助化疗后乳腺癌中CD44+/CD24-/low细胞比例较化疗前明显增加(P=0.028)。CD44+/CD24-/low阳性组ER阳性率明显低于CD44+/CD24-/low阴性组(25.0%vs.47.3%,P=0.033)。三阴性乳腺癌中CD44+/CD24-/low阳性率明显高于非三阴性乳腺癌(61.9%vs.32.9%,P=0.017)。CD44+/CD24-/low表型与年龄、肿瘤大小、临床分期、病理类型、组织学分级等乳腺癌临床病理参数无明显关系(P>0.05)。CD44+/CD24-/low阳性组的总有效率高于CD44+/CD24-/low阴性组,但两组之间差异无统计学意义(75%vs.69.1%,P=0.542);CD44+/CD24-/low阳性组的病理完全缓解率明显高于CD44+/CD24-/low阴性组(38.9%vs.18.2%,P=0.028)。结论 CD44+/CD24-/low细胞仅存在于部分乳腺癌,CD44+/CD24-/low表型与ER(﹣)、三阴性乳腺癌相关,CD44+/CD24-/low表型与乳腺癌对含蒽环类药物化疗方案的敏感度相关,CD44+/CD24-/low表型可能成为乳腺癌临床化疗疗效的预测指标之一。