细胞外基质与胚泡着床

细胞外基质是细胞产生的一些大分子物质 ,包括胶原蛋白、非胶原糖蛋白和蛋白多糖三大类。层粘连蛋白和纤维粘蛋白是非胶原糖蛋白中的主要成分。研究表明[1～ 5] ,层粘连蛋白、纤维粘连蛋白不仅具有调节细胞的粘附、生长、分化 ,促进细胞迁移、增殖等功能 ,并且与胚泡着床也有着密切关系。1　层粘连蛋白和纤维粘连蛋白的分子结构层粘连蛋白分子由三种不同源的多肽链α、β和γ经二硫键连接而成。目前已知 ,α链有 5条 (α1、α2 、α3、α4、α5) ,β链有 3条( β1、β2 、β3) ,γ链有 2条 (γ1、γ2 ) ,上述 10条多肽链通过不同的组合方式…     

纤维粘连蛋白EDA片段调控结肠癌SW480细胞的增殖、凋亡

目的研究纤维粘连蛋白EDA片段对结肠癌SW480细胞增殖、凋亡的影响。方法慢病毒感染结肠癌SW480细胞干扰纤维粘连蛋白EDA片段表达,建立纤维粘连蛋白EDA片段低表达的SW480细胞。利用MTT检测干扰前后细胞增殖的变化,并采用流式细胞术检测干扰前后细胞凋亡的变化。同时使用Western blot分别检测干扰前后凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的表达变化。结果慢病毒感染结肠癌SW480细胞后,纤维粘连蛋白EDA片段持续低表达。MTT法结果显示,干扰纤维粘连蛋白EDA片段24、48、72、96 h后细胞生长速度明显降低。转染组与未转染组及空载体组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。流式细胞术显示未转染组、空载体组及转染组的细胞凋亡率分别为(3.09±1.13)%、(3.71±0.42)%、(47.76±1.51)%,差异有统计学意义(P<0.05)。Western blot的结果显示干扰纤维粘连蛋白EDA片段后促凋亡因子Bax表达上调,同时,凋亡抑制因子Bcl-2表达降低。结论纤维粘连蛋白EDA片段对结肠癌SW480细胞具有促增殖、抗凋亡作用。     

纤维粘连蛋白和骨桥蛋白对血管平滑肌细胞增殖、迁移的影响及分子机制

血管平滑肌细胞 (ｖａｓｃｕｌａｒｓｍｏｏｔｈｍｕｓｃｌｅｃｅｌｌ,ＶＳＭＣ)增殖、向内膜下迁移是动脉粥样硬化、血管再狭窄等病理过程的关键环节。有报道ＶＳＭＣ的增殖和迁移与病变局部细胞外基质 (ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｍａｔｒｉｘ)的合成降解的再平衡即细胞外基质的重构有关。纤维粘连蛋白 (ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ)和骨桥蛋白(ｏｓｔｅｏｐｏｎｉｔｉｎ)是细胞外基质中的重要功能蛋白 ,在血管受损伤时表达量均明显增加 ,但是纤维粘连蛋白和骨桥蛋白对ＶＳＭＣ增殖和迁移的影响及其分子机制尚不清楚。本研究探讨了纤维粘连蛋…     

正常人胚早期绒毛膜及蜕膜组织中层粘连蛋白和纤维粘连蛋白的定位研究

目的　探讨层粘连蛋白和纤维粘连蛋白在绒毛发生、发育,胎盘的形成、构建过程中的作用。方法　采用免疫组织化学方法观察层粘连蛋白和纤维粘连蛋白在正常人胚早期绒毛膜和蜕膜组织中的分布。结果　层粘连蛋白在正常绒毛上皮基膜、毛细血管内皮基膜、蜕膜细胞及细胞间质内呈阳性表达。纤维粘连蛋白在绒毛间质、毛细血管内皮基膜、蜕膜细胞及细胞间质内呈阳性表达。结论　层粘连蛋白和纤维粘连蛋白是滋养细胞对子宫内膜粘附和侵蚀的重要生物学因素,在绒毛的发生、发育,胎盘形成和构建过程中均起重要作用。     

转移性癌细胞体外水解酶表达及影响因素的作用

目的　为阐明树突状细胞肉瘤 (DCS)细胞在体外培养条件下其水解酶表达的类型及一些影响因素的作用。方法　采用水解空斑法检测 10种特异性蛋白酶抑制剂、不同抗体及基质对 DCS细胞的体外蛋白水解作用的影响。结果　抑肽酶 (aprotinin)、乙二胺四乙酸钠 (EDTA- Na2 )、抑胃酶 ((pepstatin)可显著抑制 DCS细胞的蛋白水解作用。抗泛素抗体、抗 DCS抗体对 DCS的蛋白水解作用无明显影响。在纤粘连蛋白 (FN)、层粘连蛋白 (L N)基质上 DCS细胞铺展良好 ,蛋白水解作用不明显。结论　本实验条件下 ,DCS细胞可表达丝氨酸蛋白酶、金属蛋白酶(非基质水解酶 )、天门冬氨酸蛋白酶的活性。抗泛素抗体、抗 DCS抗体对 DCS细胞的蛋白水解作用无明显影响。不同基质上 DCS细胞水解酶表达状态不同     

反义寡核苷酸转染对胆管癌细胞侵袭能力的实验研究

目的　探讨层粘连蛋白受体反义寡核苷酸 (AS OD)对胆管癌细胞体外侵袭和转移能力的影响。方法　以层粘连蛋白受体反义寡核苷酸片段转染胆管癌细胞高转移性亚群 ,RT PCR和流式细胞仪检测转染前后细胞层粘连蛋白受体mRNA和蛋白的表达差异 ,体外粘附实验和侵袭实验检测转染前后细胞粘附和侵袭能力的改变。结果　反义寡核苷酸转染后可在mRNA水平和蛋白水平下调层粘连蛋白受体的表达 ,且下调作用呈剂量依赖性。与空白对照组及顺义寡核苷酸转染组比较相差均显著 (P<0 0 5 )。体外粘附和侵袭实验显示转染后细胞粘附和侵袭能力均较之转染前有显著下降 ,两者间相差均显著 (P <0 0 5 )。结论　层粘连蛋白受体反义寡核苷酸可降低胆管癌细胞体外侵袭和转移能力。     

正常人胚早期绒毛膜及蜕膜组织中层粘连蛋白和纤维粘连蛋白的定 …

目的 探讨层粘连蛋白和纤维粘连蛋白在绒毛发生，发育，胎盘的形成，构建过程中的作用。方法 采用免疫组织化学方法观察层粘连蛋白和纤维粘连蛋白在正常人胚早期绒毛膜和蜕膜组织中的分布。结果 层粘连蛋白在正常绒毛上皮基膜，毛细血管内皮基膜，蜕膜细胞及细胞间质内呈阳性表达。纤维粘连蛋白在绒毛间质，毛细血管内皮基膜，蜕膜细胞及细胞间质内呈阳性表达。结论 层粘连蛋白和纤维粘连蛋白是滋养细胞对子宫内膜粘附子和侵蚀的     

免疫学

叭刃月13三个细胞外基质成分任人那泡分布的免佼组织化学观察/肖娜…//生殖医学杂志一1995,4(2)一80一83 本文作者为进一步揭示细胞外基质(ECM)一与卵巢功能的关系,ECM对卵泡发育局部发挥既独特又协同作用提供依据,应用ABC免疫组织化学方法,观察了ECM的主成分IV型胶原、纤维粘连蛋白和层枯连蛋白在人卵泡的分布。结果发现: .80.IV型胶原分布在泡膜细胞和分隔顺粒细胞、泡膜细胞的基膜上.纤维粘连蛋白分布在卯泡颗粒细胞和泡膜细胞,而层粘连蛋白则分布在基膜以及基膜两侧的颖粒细胞和泡膜细胞。这3个细胞外基质成分分布规律不同。提示…     

成骨细胞及破骨细胞的整合素表达及其在骨质疏松中的意义

粘附分子 (ａｄｈｅｓｉｏｎｍｏｌｅｃｕｌｅ)是一类介导细胞与细胞、细胞与细胞外基质间粘附作用的膜表面糖蛋白。粘附分子种类很多 ,包括选择素家族、整合素家族、免疫球蛋白超家簇。整合素是一类细胞膜表面糖蛋白 ,其配体为细胞外基质 (ＥＣＭ)成份 ,如纤维粘连蛋白 (ＦＮ)、纤维蛋白原 (ＦＢ)、胶原蛋白 (ＣＡ)、体外粘连蛋白 (ＶＮ)、层粘蛋白 (ＬＭ)和ｖｏｎｗｉｌｅｂｒａｎｄ因子(ｖＷＦ)等。近年来 ,人们发现成骨细胞、破骨细胞表面均有整合素受体表达 ,其表达水平对骨形成及骨吸收有调控作用 ,与很多骨代谢性疾病的病理机制有很…     

老年大鼠肺泡Ⅱ型细胞细胞外基质成分和基底膜厚度的变化

目的 :探讨老年大鼠肺泡Ⅱ型细胞细胞外基质成分和基底膜厚度的变化。方法 :用免疫细胞化学和图像分析技术分析幼年 (1～ 2个月 )、中年 (8～ 9个月 )和老年 (2 5～ 2 8个月 )大鼠肺泡Ⅱ型细胞层粘连蛋白和纤维连接蛋白的变化及肺泡Ⅱ型细胞基底膜的厚度。结果 :老年大鼠肺泡Ⅱ型细胞层粘连蛋白减少 ,纤维连接蛋白增多 ,基底膜增厚。结论 :老年大鼠肺泡Ⅱ型细胞细胞外基质的代谢发生改变 ,可能导致肺泡修复能力的异常     

层粘连蛋白在小鼠肾小体胚胎发育中的表达

目的 了解层粘连蛋白(LN)在小鼠肾小体胚胎发育过程中的表达规律及层粘连蛋白与肾小体成熟的关系。方法 用免疫组化链霉菌素亲和生物素——过氧化物酶连接法(SP)测定不同胚龄的胚胎肾小体层粘连蛋白的表达。结果 在肾小体发育过程中层粘连蛋白表达于输尿管芽细胞周围和肾小体基膜，其表达随着胚龄增加和肾小体成熟而增加。结论 层粘连蛋白在肾小体的表达存在着时空顺序，遵循一个离心方式，推测它可能对肾小体的发生、成熟起重要作用。     

层黏连蛋白及其受体与急性肺损伤

层粘连蛋白(LN)又称Ⅳ型胶原基质,是细胞外基质中一种非胶原糖蛋白,存在于多种组织的基底膜.现有资料表明,LN是细胞与基质黏着的介质,而LN与细胞的黏着是通过层粘连蛋白受体完成的[1-2].     

用Wang树脂固相法合成YIGSR

在肿瘤侵袭过程中,肿瘤细胞通过膜表面受体与基底膜、基质的层粘连蛋白(Laminin,LN)、纤维粘连蛋白(Fibronectin,FN)和胶原蛋白(Collagen)等成分粘附.研究表明,YIGSR(Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg)是LN和FN中与肿瘤细胞粘附相关的短肽序列[1,2].Yudok等[3]发现,LN使高转移(RCT )肉瘤细胞的Ⅳ型胶原酶分泌增加,体外迁移能力增强,YIGSR能抑制RCT( )细胞与LN的粘附以及LN在瘤细胞中的迁移.本文以Fmoc保护氨基酸为原料,用Wang树脂固相法合成了YIGSR.     

细胞外基质的表达与滋养细胞肿瘤的侵袭转移

目的 探讨层粘连蛋白和纤维粘连蛋白在滋养细胞肿瘤的发生及侵袭转移过程中的作用。方法 采用免疫组织化学方法检测１５例葡萄胎、６例侵蚀性葡萄胎和６例绒毛膜癌组织中层粘连蛋白和纤维粘连蛋白的表达状况。结果 葡萄胎、层粘连蛋白在绒毛上皮基膜呈强阳性表达,在间质呈阳性,纤维粘连蛋白在线间质内呈阳性表达。侵蚀性葡萄胎和绒毛膜癌,层粘连蛋白和纤维粘连蛋白在细胞浆中呈强阳性表达,在细胞间质内呈弱阳性或阴性表达。结     

Cogan综合征是自身免疫性疾病

Claudio Lunaridi及其同事研究发现,游离的12-残基Cogan肽是4种自身抗原(层粘连蛋白、连接蛋白-26、胶原性疾病相关的Ssa/Ro和受体样磷酸酶DEP-1/CD148)与1种病毒蛋白质的同源体,从而使鉴定Cogan综合征(非梅素性角膜炎伴前庭听觉症状)的眼、内耳、神经系统以及内皮的自身抗原的研究工作取得巨大进展。连接蛋白-26属于裂隙连接蛋白家族,它对于细胞与细胞间的粘附以及相邻细胞间氨基酸、电解质与其他小分子的通行起着重要作用。层粘连蛋白通过与各种细胞外基质组分和细胞表面受体(如整     

胆管癌细胞层粘连蛋白受体表达下调对蛋白水解酶尿激酶型纤维蛋白溶解酶原激酶mRNA表达的影响

目的　研究层粘连蛋白受体 (LNR)反义寡核苷酸硫代修饰片段 (AS OD)对人胆管癌QBC939细胞尿激酶型纤维蛋白溶解酶原激酶 (u PA)基因表达的调节。方法　应用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)分析浓度 12 μmol/L的LNRAS OD在作用 4 8h后对QBC939细胞u PAmRNA表达水平的影响。结果　LNRAS OD能明显抑制人胆管癌细胞表达u PA ,与正常对照相比 ,其u PAmRNA水平下降了 30 0 % (P <0 0 5 )。结论　胆管癌细胞u PA基因表达水平与层粘连蛋白受体的表达水平明显相关 ,抑制层粘连蛋白受体的表达能够使胆管癌细胞u PA基因表达下降 ,提示层粘连蛋白受体在介导胆管癌转移中发挥重要作用     

6A8 α-甘露糖苷酶表达抑制致人鼻咽癌细胞CNE-2L2与层粘连蛋白粘附减弱及片状伪足减少

目的探讨6A8α-甘露糖苷酶表达抑制对CNE-2L2细胞与层粘连蛋白的粘附及细胞表面片状伪足的影响。方法Western印迹检测6A8α-甘露糖苷酶的表达。置细胞于层粘连蛋白(laminin)包被的培养板孔中,37℃孵育1h后,用结晶紫染色细胞,用0.1mol/L枸橼酸钠/50%乙醇溶解结合到细胞中的染料。测定540nm处的吸光度值(AT),按R=AT/A100×100%计算粘附率(A100为100%粘附值)。扫描电镜观察细胞表面的片状伪足。结果6A8α-甘露糖苷酶表达抑制的2个克隆细胞株(AS1和AS2)对层粘连蛋白的相对粘附率分别为0.447±0.096与0.533±0.065,而6A8α-甘露糖苷酶表达正常的对照细胞(W、M和S)的相对粘附率分别为0.78±0.035、0.7±0.05和0.80±0.04。两者的差别有生物学意义(P<0.01)。6A8α-甘露糖苷酶表达正常的细胞表面片状伪足丰富,6A8α-甘露糖苷酶表达抑制的细胞表面的片状伪足基本上消失。结论6A8α-甘露糖苷酶表达抑制可导致人鼻咽癌细胞CNE-2L2与层粘连蛋白粘附减弱及片状伪足减少。     

整合素α5亚基及纤维粘连蛋白与肺腺癌细胞凋亡关系的实验研究

目的探讨整合素α5亚基及纤维粘连蛋白与人肺腺癌A549细胞凋亡之间的关系.方法无血清培养,以抗整合素α5亚基单克隆抗体(SAM-1)封闭A549细胞表面的整合素α5亚基,阻断其与纤维粘连蛋白的粘附作用.结果SAM-1封闭整合素α5亚基后细胞凋亡明显增强.各实验组AI值与对照组相比差异有显著性意义(P＜0.01),在一定范围内,呈剂量、时间依赖关系.结论整合素α5亚基与纤维粘连蛋白可能抑制体外无血清培养诱导的A549细胞的凋亡.     

纤粘连蛋白诱导Hela细胞黏附及MMP-2基因表达

目的 观察纤粘连蛋白(fibronectin,FN)诱导的Hela细胞的黏附及基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)基因的表达,探讨恶性肿瘤细胞侵袭、转移发生的机制。方法 无血清培养Hela细胞,以FN作为细胞外基质(extracellular matrix,ECM)成分,用MTT法检测Hela细胞的黏附率及光镜下计数Hela细胞的铺展率并观察Hela细胞形态的变化;用明胶酶谱法检测MMPs的活性。结果 无FN作用的Hela细胞不发生黏附及铺展,亦无明显MMPs基因表达;当纤粘连蛋白浓度为5—10μg/ml时,黏附率及铺展率最大;黏附的Hela细胞启动MMP-12基因的表达,纤粘连蛋白浓度为5～10μg/ml时,MMP-2活性最大。结论 FN可诱导Hela细胞黏附,进而引发一系列细胞内信号转导机制,启动MMP-2基因表达,促进肿瘤细胞的侵袭与转移。     

β1整合素及纤维粘连蛋白与肺癌细胞凋亡关系的实验研究

目的 研究β1整台素及纤维粘连蛋白与人肺癌细胞凋亡之间的关系．方法 体外无血清培养条件下，以培养在包被纤维粘连蛋白底物上的人肺腺癌SPC-A-1细胞为靶细胞、用不同浓度抗β1，整台素单克隆抗体阻断β1整合素与纤维粘连蛋白相互作用，采用苏木素-伊红(HF)染色．吖啶橙荧光染色，DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡情况，并计算凋亡指数。结果 抗β1整合素单克隆抗体列SPC-A-1细胞凋亡有明显的促进作用，在一定的范围内，呈时间、剂量依赖性。结论 肺癌细胞凋亡与β1整合素受体有密切关系，且β1整台素受体与其特异配体纤维粘连蛋白的相互作用能促进细胞生存，当二者作用阴断导致肺癌细胞凋亡。