聚合酶链反应在慢性泌尿系统及性病诊断中的应用

淋球菌、沙眼衣原体和解脲支原体均可引起泌尿生殖道炎症 ,分泌物常规涂片及淋病奈瑟氏菌培养对急性淋病大多能正确诊断 ,但对慢性淋病或非淋球菌性尿道炎患者 ,分泌物涂片结果不可靠 (尤其是女性患者 ) ,细菌培养分离率偏低 ,常会引起漏诊或误诊。本实验采用ＰＣＲ技术 ,对 10例慢性尿道炎和 34例性病患者的泌尿生殖道分泌物进行检测[1,2 ] ,结果报道如下。1　材料与方法1.1　试剂ＰＣＲ试剂盒 (上海复华公司 ) ,10 0 0ｍｌ 5 0ｘＴＡＥ电泳缓冲液 (2 4 2 ｇＴｒｉｓ ,5 7.1ｍｌ冰醋酸 ,10 0ｍｌ 0 .5ＭＥＤＴＡ ,蒸镏水补到 10 0 0ｍｌ,ｐ…     

利用雌激素构建小鼠淋病奈瑟菌感染模型

目的探讨用雌激素构建淋病奈瑟菌感染小鼠模型的方法。方法淋病奈瑟菌WHO-A接种经皮下注射苯甲酸雌二醇和真皮下埋植尼尔雌醇片（雌三醇）预处理的雌性ICR小鼠，小鼠阴道拭子接种T-M选择培养基培养分离淋病奈瑟菌，取小鼠阴道分泌物涂片染色观察淋病奈瑟菌感染情况，比较两种雌激素对小鼠淋病奈瑟菌感染的差异。结果与对照组相比，苯甲酸雌二醇小鼠体内淋病奈瑟菌有短时间的定植，而尼尔雌醇组与对照组无差异。结论雌激素（尤其是雌二醇）有利于淋病奈瑟菌在小鼠阴道内的定植。     

淋病奈瑟菌感染动物模型的建立及探讨

目的尝试建立淋球菌感染动物模型,为研究淋球菌致病机制提供良好的动物模型。方法采用野生株淋球菌FA1090接种雌二醇预处理的雌性BALB-c小鼠,小鼠生殖道拭子接种WGC选择培养基培养分离淋球菌,取小鼠阴道分泌物涂片Gram染色观察有无淋球菌,并用瑞氏染色观察小鼠阴道分泌物中多形核白细胞(polymorphonuclearleukocytes,PMN)的数目。结果受试小鼠生殖道中淋球菌平均存活了8d(2×106CFU接种量),阴道分泌物涂片Gram染色可见淋球菌粘附在上皮细胞上,88%的受试小鼠发生了炎症。结论成功建立了淋球菌感染的动物模型,为研究淋球菌的致病机制、毒力及抗菌药物的研究奠定了基础。     

"皮肤物理抗菌膜"专利技术在小鼠生殖道淋病奈瑟球菌感染中的预防作用

目的 探讨"皮肤物理抗菌膜"专利技术在小鼠淋病奈瑟球菌(简称淋球菌)感染中的预防作用,以寻求淋病预防新方法.方法 (1)模拟雄鼠向雌鼠传播淋球菌:将淋球菌WHO-L菌株接种于经过苯甲酸雌二醇预处理的雌性BALB/c小鼠阴道.实验组小鼠阴道使用"皮肤物理抗菌膜"长效抗菌材料,对照组小鼠阴道使用去离子水.接种后第2、4、5天取阴道分泌物做淋球菌培养,比较两组检出率;接种后2～10 d监测小鼠阴道分泌物涂片染色中多形核白细胞(PMN)平均数占总细胞百分数.(2)模拟雌鼠向雄鼠传播淋球菌:用玻璃棒代替小鼠阴茎,与已感染淋球菌的雌鼠模拟性交.实验组玻璃棒用长效抗菌材料浸泡,对照组用去离子水.洗脱玻璃棒头部分泌物,做淋球菌分离培养,比较两组检出率.结果 (1)模拟雄鼠向雌鼠传播淋球菌实验中,实验组淋球菌培养阳性率低于对照组(第4天:10.0%比57.5%;第5天:7.5%比45.0%,均P＜0.01);实验组小鼠在接种后5～8 d PMN百分比显著低于对照组(均P＜0.05).(2)模拟雌鼠向雄鼠传播淋球菌实验中,第1、2天实验组玻璃棒头部分泌物淋球菌培养阳性率分别为8.3%和0,显著低于对照组(72.7%和45.5%,均P＜0.01).结论 长效抗菌材料通过形成物理抗菌膜,可以预防雌性小鼠生殖道淋球菌的感染或定植,同时能对雄性小鼠能起到液态安全套的作用.

Abstract：

Objective To explore a new method of preventing Neisseria gonorrhea (N.gonorrhoeae) by simulating intercourse in mice and verify the effect of a long-acting antibacterial material in the gonococcal infection in mice.Methods (1) Simulated male-female gonococcal transmission: the estradio-treated BALB/c female mice were inoculated with N.gonorrhoeae WHO-L via a vaginal route.In treated group,the mice received the long-acting antibacterial material via vaginal route while deionized water was administered in the control group.At Days 2-10 post-inoculation,the average number of polymorphonuclear cells (PMNs) was monitored in stained smears of vaginal cells from test mice.And the vaginal fluid was cultured for N.gonorrhoeae at Days 2,4,5 post-inoculation.N.gonorrhoeae genital tract infection was determined to compare the difference between the two groups.(2) Simulated female-male gonococcal transmission: a treated or sham glass rod was used instead of male mice's penis to simulate intercourse in gonococcus-infected female mice.The vaginal fluid on top of glass top was eluted and cultured for N.gonorrhoeae and the difference of relevance ratios compared.Results ( 1 ) In the experiment of simulated male-female gonococcal transmission,At Days 4 and 5,the positive rates of culture for N.gonorrhoeae of the tested group were lower than those of the control group,and there was significant difference between both groups ( 10.0% vs 57.5%,7.5% vs 45.0%,both P ＜0.01 ).The percentage of PMNs in the treated group was significantly lower than that of the control group at Days 5-8 post-inoculation (all P＜0.05 ).(2) In the experiment of simulated female-male gonococcal transmission,the positive rates of culture for N.gonorrhoeae from the vaginal fluid on top of glass top were 8.3% and 0 at Days 1 and 2 in the tested group respectively.And they were significantly lower than those of the control group (72.7% and 45.5% respectively,both P＜0.01 ).Conclusion After topical application in murine vagina,the longacting antibacterial material forms a layer of physically antibacterial molecular film to prevent the occurrence of N.gonorrhoeae genital tract infection or colonization in mice.It may be used as a liquid condom for male mice.     

抗角蛋白自身抗体对角质形成细胞增殖影响的实验研究

目的 :研究抗角蛋白自身抗体治疗银屑病的作用机制。方法 :利用雌激素周期小鼠阴道上皮模拟银屑病角质形成细胞过度增殖 ,用天然缺乏颗粒层的鼠尾表皮模拟银屑病角质形成细胞分化障碍的特征。以抗角蛋白自身抗体腹腔注射作用于 BALB/ c小鼠 ,分别以生理盐水和丙种球蛋白作为对照 ,观察其对角质形成细胞增殖的调节作用。结果 :抗角蛋白自身抗体 ,有较好的降低嗜银蛋白含量和小鼠阴道上皮细胞有丝分裂 ,以及促使角质形成细胞分化的作用。结论 :抗角蛋白自身抗体治疗银屑病的作用机制与调节角质形成细胞增殖有关     

重组表达幽门螺杆菌致病岛CagL蛋白及其中和抗体初步研究

目的 重组表达幽门螺杆菌(Helicobacterpriori,Hp)cagL基因,并制备兔抗多克隆抗体及阻断Hp黏附宿主细胞实验.方法 用PCR方法 扩增出cagL基因片段,将目的 基因构建至表达载体pET22b中并诱导表达.采用亲和层析法纯化蛋白,以纯化蛋白为抗原免疫家兔,制备兔抗CagL多克隆抗体血清,并用多克隆抗体血清进行阻断坳黏附宿主细胞实验及细胞因子IL-8活性分析.结果 成功构建表达纯化了CagL重组蛋白,制备CagL蛋白兔抗多克隆血清,并初步验证了多克隆抗体血清在体外和Hp黏附作用的关系.与对照菌相比,重组菌CagL在25 X 103.附近均出现新的蛋白表达条带,且诱导6 h时表达量最高.UVP扫描分析目的 蛋白占菌体总蛋白的35%～40%.SDS-PAGE显示重组蛋白CagL主要以包涵体形式存在于超声沉淀中.ELISA结果显示兔抗CagL多克隆抗体的滴度为1:16 000 EU.Giemsa染色后显微镜观察可见坳菌与HeLa细胞呈典型的聚集性黏附,抗体中和后Hp与HeLa细胞未见黏附,加入DH5α的HeLa细胞也未见细菌黏附.结论 多克隆抗体血清对Hp黏附定植有一定阻断作用,并且可以减少Hp促进细胞分泌IL-8的能力.     

28例老年女性淋病奈瑟氏菌药敏试验分析

目的探讨老年女性淋病奈瑟氏菌（淋球菌）药敏试验现状,为淋病患者合理用药提供依据。方法对28例确诊感染淋球菌的老年女性阴道分泌物,做淋球菌培养、鉴定及药敏试验,分析淋球菌耐药现状。结果在进行药敏试验的11种药物中,β-内酰胺类的阿莫西林/克拉维酸、头孢克洛、头孢塞肟和头孢呋辛药物敏感率均为100%,氯霉素为95%,氨卞西林为45%,其它药物的敏感率在氯霉素和氨卞西林之间。结论淋球菌对β-内酰胺类药物普遍敏感,对喹诺酮类、四环素和氯霉素类药物及利福平都表现出一定得耐药性。淋病治疗应首选β-内酰胺类药物。     

β_2-微球蛋白单克隆抗体淋巴细胞杂交瘤的建立及鉴定

以人淋巴细胞为抗原免疫BALB/c小鼠,然后取脾细胞与骨髓瘤细胞Sp2/0-Ag14融合,经以人淋巴细胞为抗原的间接ELISA初筛和以纯化的8_2m为抗原的间接ELISA筛选,获一株分泌抗β_2 m抗体的淋巴细胞杂交瘤。两次克隆化后,阳性率达100％。细胞表面抗原免疫荧光试验和兔抗人β_2 m抗血清阻断荧光抗体试验鉴定结果表明,此杂交瘤分泌β_2 m专一性抗体。该抗体为1gG_1。该杂交瘤命名为GA9。     

淋球菌与解脲支原体在性传播疾病情况的研究

目的　研究淋球菌、解脲支原体、在性传播疾病感染情况及特点。方法　对 90例性病患者泌尿生殖道分泌物做淋球菌和解脲支原体DNA检测。结果　 90例性病患者淋球菌、解脲支原体的感染率分别为70 %、16 .7% ,淋球菌合并解脲支原体的感染率达 13.3%。男女性别间淋球菌感染率有显著差异 (P <0 .0 5 )。淋球菌、解脲支原体单一或合并感染率之间有非常显著差异 (P <0 .0 1)。结论　性病患者中淋球菌感染率高 ,且有性别分布差异。淋病患者合并解脲支原体感染率较高。     

性三项在泌尿生殖道疾病可疑人群中的检验与结果分析

目的:了解本地区男、女患者对淋病奈瑟菌、沙眼衣原体、解脲支原体三种病原体的易感性是否存在差异以及淋病奈瑟菌、沙眼衣原体、解脲支原体三种病原体在可疑人群中的感染情况.方法:对来自妇科门诊、皮肤性病科、泌尿生殖科选取387例疑为泌尿生殖道感染者进行淋病奈瑟菌(NG)、沙眼衣原体(CT)、解脲支原体(Uu)的检测并对淋菌培养基所长细菌涂片检查,结果进行统计分析.结果:淋病奈瑟菌在可疑人群中阳性率0%,沙眼衣原体阳性率75例(阳性率19.38%),其中男性阳性46例(阳性率19.82%),女性阳性29例(阳性率18.7%),解脲支原体(Uu)阳性123例(阳性率31.78%),其中男性阳性54例(阳性率23.27%),女性阳性69例(阳性率44.5%);非淋细菌检出57例(阳性率14.72%),其中男性44例(阳性率18.96%),女性13例(阳性率8.38%).结论:淋病奈瑟菌、沙眼衣原体男、女性感染率差异无统计学意义(P＞0.05),解脲支原体男、女性感染率差异有统计学意义(P＜0.01).387例衣原体、支原体阳性率51.16%(198/387),结合非淋菌检出率可使总阳性率达到65.89%(255/387).淋病奈瑟菌、沙眼衣原体、解脲支原体三种病原体在可疑人群中的感染率分别为0%、19.38%、31.78%,差异有统计学意义(P＜0.01).     

CD69 expression on airway eosinophils and airway inflammation in a murine model of asthma

Background Asthma is a chronic airway disease with inflammation characterized by physiological changes （airway hyper-responsiveness, AHR） and pathological changes （inflammatory cells infiltration and mucus production）. Eosinophils play a key role in the allergic inflammation. But the causative relationship between eosinophils and airway inflammation is hard to prove. One of the reasons is lack of activation marker of murine eosinophils. We investigated the expression of CD69 on murine eosinophils in vitro, the relationship between the expression of CD69 on eosinophils from peripheral blood and bronchoalveolar lavage fluid and on airway inflammation in asthmatic mice. Methods Eosinophils from peripheral blood of IL-5 transgenic mice （NJ.1638） were purified. Mice were divided into five groups： wild type mice sensitized and challenged with saline （WS group）, wild type mice sensitized and challenged with ovalbumin （WO group）, IL-5^-/- mice sensitized and challenged with saline and transferred with purified eosinophils （ISE group）, IL-5^-/- mice sensitized and challenged with OVA and transferred with purified eosinophils （IOE group）, IL-5^-/- mice sensitized and challenged with OVA and transferred with purified eosinophils, pretreated with anti CD4 monoclonal antibody （IOE＋antiCD4mAb group）. IL-5^-/- mice were sensitized with OVA at day 0 and day 14, then challenged with OVA aerosol. On days 24, 25, 26 and 27 purified eosinophils were transferred intratracheally to IL-5^-/- mice. On day 28, blood and BALF were collected and CD69 expression on eosinophils measured by flowcytometry. Results Purified eosinophils did not express CD69. But eosinophils cultured with PMA＋MA, IFN- T, IL-5 or GM-CSF expressed CD69 strongly. Eosinophils from blood of WO, WS group did not express CD69 at all. The numbers of eosinophils in BALF of WO group, IOE group, ISE group and IOE＋antiCD4mAb group were significantly higher than in mice of WS group which did not have eosinophils at all. CD69 expression on eosinophils in BALF of IOE and WO groups was strong. Eosinophils in BALF of ISE and IOE＋antiCDmAb groups did not express CD69. The mucus production result was similar to CD69 expression. There were eosinophils infiltration in lung slides of all groups except WS group. Conclusion Activation in airway of eosinophils could directly lead to airway inflammation.     

瑞舒伐他汀抑制小鼠哮喘模型慢性气道炎症反应的实验研究

目的 评价瑞舒伐他汀对小鼠哮喘模型气道炎症反应的影响.方法 30只雄性BALB/C小鼠随机平均分为3组,即空白组（Control组）、卵清蛋白＋瑞舒伐他汀组（OVA＋ RUS组）和卵清蛋白组（OVA组）.在干预81天后处死小鼠获取支气管灌洗液（BALF）并使用ELISA测定IL-4、IL-5、IL-13和TNF-α含量,同时测定BALF中细胞总数、嗜酸性粒细胞、中性粒细胞、淋巴细胞和巨噬细胞数;并获得肺组织标本,进行HE染色和PAS染色及粘蛋白糖原表达测量.结果 HE染色发现,OVA致敏和激发81天后BALF中IL-4、IL-5、IL-13和TNF-α以及细胞总数、嗜酸性粒细胞、中性粒细胞、淋巴细胞和巨噬细胞数均明显增加（均P＜0.05）;同时小鼠肺组织出现明显的病理改变,且OVA组较OVA＋RUS组更加明显（均P＜0.05）.PAS染色和粘蛋白糖原表达分析发现,OVA干预后小鼠粘蛋白糖原表达明显增加,且OVA组较OVA＋RUS组增加更显著（均P＜0.05）.结论 瑞舒伐他汀可以减轻OVA诱导的慢性哮喘导致的气道炎症反应和气道粘液高分泌,为进一步临床应用奠定了基础.     

男性生殖道感染与不育症

目的：研究淋球菌、解脲支原体、沙眼衣原体感染与男性不育症之间的关系。方法：将32例生殖道感染并发不育患者尿道分泌物做淋球菌、解脲支原体、沙眼衣原体培养；精液进行计算机系统检查分析；血清做抗精子抗体的测定。结果：生殖道感染并发不育者的精液质量下降；精液中白细胞数量增加；血清中抗精子抗体阳性率升高。结论：淋球菌、角脲支原体、沙眼衣原体感染可能引起精液质量下降，抗精子抗体产生，从而生育力降低。     

狼疮诱导药物对小鼠免疫系统功能的影响

目的:建立药物诱导狼疮(drug-induced lupus, DIL)的动物模型,研究狼疮诱导药物对小鼠免疫功能的影响.方法:用普鲁卡因酰胺(procainamide, Pca)、盐酸肼苯哒嗪(hydralazine, Hyd)和2,2′-偶氮-双(3-乙苯基-噻唑啉-6-硫酸)诱导DIL的动物模型.用3H-TdR参人法分析细胞增殖,流式细胞分析法分析细胞表型.结果:Pca和Hyd能诱导BALB/C小鼠而不是C57BL/6小鼠产生抗核抗体.对用药BALB/C小鼠的免疫功能(包括对外来抗原的免疫应答、外周血中淋巴细胞的分型等)的分析发现其部分免疫功能的异常.结论:狼疮诱导药物能够导致BALB/C小鼠部分免疫功能的紊乱.     

TSHR及活性多肽对BALB/c小鼠甲状腺的影响

目的:探讨促甲状腺激素受体(TSHR)及活性多肽对BALB/c小鼠甲状腺的影响。方法:对BALB/c小鼠腹腔注射血蓝蛋白耦联的人TSHR(hTSHRaa352～366)和从豚鼠脂肪细胞提取的TSHR(gTSHR)进行免疫,每2周免疫1次共6次,每次免疫前2d取血,检测血清T4、促甲状腺激素受体抗体(TRAb)水平。12周后处死小鼠,取甲状腺做病理组织学检查。结果:血清T4水平hTSHRaa352～366组从第6周开始下降(P<0.01),而且一直维持到12周,血清TRAb水平明显升高(P<0.01),甲状腺组织显示滤泡上皮细胞扁平、核缺失、皱缩、胶质浓缩等甲状腺功能减退病理改变;gTSHR组血清T4水平在第6周已下降,而12周时有的下降、有的则升高,无统计学意义,血清TRAb水平升高(P<0.01),甲状腺组织出现不均一的病理表现。结论:hTSHRaa352～366刺激BALB/c小鼠产生TRAb和促甲状腺激素受体抑制抗体(TBAb),抑制促甲状腺激素(TSH)与TSHR结合,降低了甲状腺激素T4水平;而gTSHR刺激BALB/c小鼠同时产生TRAb、促甲状腺激素受体刺激抗体(TSAb)和TBAb,引起甲状腺功能亢进或甲状腺功能减退。     

组织因子单克隆抗体及对照抗体的制备、纯化和鉴定

目的纯化组织因子(TF)单克隆抗体及对照抗体。方法给小鼠腹腔注射杂交瘤8A3和9E10细胞,产生的腹水应用凝胶过滤层析法和Protein A亲和层析法纯化组织因子抗体及对照抗体,并用SDS-PAGE和BCA法检测纯化后单克隆抗体的纯度及蛋白浓度。结果单抗纯化后电泳重链和轻链都呈一条带,TF抗体和对照抗体的最终浓度分别为0.7726mg/ml和0.8592mg/ml。结论应用层析法和凝胶过滤和Protein A亲和分离层析法纯化抗体,能够得到纯度较高的单克隆抗体。     

乙型肝炎表面抗原亚型决定簇“a”单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

本研究中用纯化乙型肝炎表面抗原(HBsAg)“adr”免疫Balb/c小鼠的脾细胞与SP 2/0骨髓瘤细胞在PEG作用下融合。以ELISA和RIA法检测抗体,获得9孔抗-HBs阳性的杂交瘤,经过5次有限稀释,建立4株单克隆细胞。选其中一株SH_1D_9杂交瘤细胞进行体外连续传代,接种小鼠腹腔,抗-HBs滴度在组织培养上清液中为1∶10,000,小鼠腹水为1∶50,000。经特异性、稳定性鉴定,证明其抗-HBs对HBsAg具有持续的和良好的亲和性,正常人血清无交叉反应,经亚型及Ig亚类鉴定为抗-HBs“a”亚型决定簇,IgG型单克隆抗体,杂交瘤细胞染色体平均为104个。本文并对HBsAg免疫Balb/c小鼠采取的不同方案及建立单克隆抗体杂交瘤细胞株的实验方法加以讨论。     

空肠弯曲菌粘附蛋白PEB1原核表达、纯化及多克隆抗体制备

【目的】克隆、表达空肠弯曲菌表面蛋白PEB1,并制备针对该蛋白的多克隆抗体。【方法】采用PCR方法从空肠弯曲菌Penner19标准株基因组中扩增出PEB1蛋白基因,用限制性内切酶消化后插入到pUC-19克隆载体中,测序正确后,再亚克隆到融合表达载体pPro-EXHTb中,转化大肠杆菌DH5α,目的基因经IPTG诱导,由T7启动子调控表达了氨基端带6个连续组氨酸残基的PEB1蛋白,并经Western-blotting证实。然后,在非变性条件下用Ni-NTA亲和色谱柱纯化目的蛋白。用纯化的PEB1蛋白作为免疫原免疫BALB/c小鼠,制备多克隆抗体,用ELISA法检测抗体效价。【结果】在非变性条件下用Ni2＋-NTA亲和色谱柱纯化PEB1融合蛋白,纯化获得的蛋白纯度大于90%。用该融合蛋白免疫小鼠后,得到抗PEB1抗体,效价达1：2×105。【结论】成功构建了空肠弯曲菌PEB1基因原核表达载体,并获得了高纯度的PEB1蛋白及其高效价多抗,对进一步制备肠粘膜高亲和力的过敏原重组BCG打下了坚实的基础。     

柯萨奇病毒B_3致病模型的建立

目的 :建立柯萨奇病毒 (CV)B3 的实验动物模型 ,以期为抗病毒药物筛选提供工具。方法 :雄性BALB/C鼠腹腔注射CVB3 后 ,观察小鼠发病症状 ,并在不同时间处死小鼠 ,取小鼠心、脾、肝、肾等组织进行病毒分离、病毒核酸检测、心肌组织病理检查。结果 :感染后第 3d小鼠即出现症状 ,第 5d在小鼠的心脏、脾脏、肾脏均可分离出感染性病毒 ,其滴度分别为 :10 4 .7,10 3.3 ,10 3.2 TCID50 / 0 .1ml,同时小鼠心、脾、肾、等组织及血清中CVB RNA检测为阳性 ,心肌组织出现典型炎性改变。结论 :雄性BALB/C鼠感染CVB3 后可引起病毒性心肌炎发生     

不同饲养环境、种属、佐剂及激发方法对小鼠哮喘炎症的影响

目的研究不同饲养环境、种属、佐剂及激发方法对小鼠哮喘样炎症的影响。方法应用普通级或清洁级的BALB／c和C57BL小鼠，以鸡卵白蛋白作过敏原，采用氯氧化铝和明矾佐剂及滴鼻和雾化的激发方式制备小鼠哮喘模型，进行支气管肺泡灌洗液（BALF）炎症细胞分类记数和观察细支气管周围的嗜酸性粒细胞（Eos）炎症。结果BALB／c和C57BL小鼠嗜酸性粒细胞炎症无差异，清洁级比普通级、明矾佐剂比氯氧化铝佐剂、多次的雾化比一次滴鼻的激发方式能更明显地诱导小鼠哮喘炎症。结论小鼠哮喘炎症程度受饲养环境、种属、佐剂厦激发方法的影响，实验设计时应予充分的注意。