健骨二仙丸对成骨细胞分化及IGF-ImRNA表达的影响

目的:在临床研究和动物实验的基础上,进一步探讨健骨二仙丸对成骨细胞分化的影响及其作用机制.方法:分离、培养人的原代成骨细胞,采用PNPP法、RIA法、茜素红染色法以及定量RT-PCR法分别检测碱性磷酸酶活性、骨钙素含量、矿化结节形成和I型前胶原mRNA的表达,从而了解健骨二仙丸对成骨细胞分化的影响.定量RT-PCR和Northern印迹杂交等方法交观察成骨细胞胰岛素样生长因子(insulin-likegrowth factor-I)IGF-I mRNA的表达.结果:健骨二仙丸中、高剂量能显著增加碱性磷酸酶的活性,及矿化结节形成的数量,促进成骨细胞骨钙素的释放(P＜0.01,P＜0.05),与雌激素(倍美力)组比较差异无显著性.显著增加成骨细胞Ⅰ型前胶原mRNA和IGF-I mRNA的表达.结论:健骨二仙丸促进成骨细胞IGF-I mR-NA的表达,从而进一步促进成骨细胞的增殖、分化,改善成骨细胞功能,调节骨重建偶联.表明健骨二仙丸不仅能增加成骨细胞胶原蛋白地合成,而且能促进非胶原蛋白地表达.促进骨的形成是健骨二仙丸作用的主要机制.     

健骨二仙丸含药血清对成骨细胞分化及Ⅰ型前胶原mRNA表达的影响

目的:在临床研究和动物实验的基础上,进一步探讨健骨二仙丸对成骨细胞分化的影响。方法:分离、培养人的原代成骨细胞,采用 PNPP 法、RIA 法、茜素红染色法以及定量 RT-PCR 之法分别检测碱性磷酸酶活性、骨钙素含量、矿化结节形成和Ⅰ型前胶原 mRNA 的表达,从而了解健骨二仙丸对成骨细胞分化的影响。结果:健骨二仙丸中、高剂量能显著增加碱性磷酸酶的活性及矿化结节形成的数量,促进成骨细胞骨钙素和Ⅰ型前胶原 mRNA 的表达(P<0.01,P<0.05),与雌激素(倍美力)组比较差异无显著性。结论:健骨二仙丸能有效促进成骨细胞的分化。     

健骨二仙丸含药血清对人成骨细胞增殖及细胞周期的影响

目的：在临床研究和动物实验的基础上，进一步探讨健骨二仙丸对成骨细胞增殖和细胞周期的影响。方法：分离、培养人的原代成骨细胞，采用^3H-胸腺嘧啶掺入法和四氮唑蓝法检测细胞增殖，流式细胞仪检测细胞周期。结果：健骨二仙丸中、高剂量组细胞增殖率、S期细胞比率和细胞增殖指数等均显著高于空白对照组（P＜0．01，P＜0．05），与此激素组比较差异无显著性。细胞凋亡率和G0－G1期细胞比率显著低于空白对照组（P＜0．01，P＜0．05）。结论：健骨二仙丸能有效促进成骨细胞的增殖、分化，防止成骨细胞的凋亡。     

益心泰含药血浆对血管紧张素Ⅱ诱导的心肌成纤维细胞增殖、凋亡的影响及机制研究

目的探讨益心泰含药血浆对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的心肌成纤维细胞（CFs）增殖、凋亡的影响及 相关机制。方法将分化完全的CFs 随机分为空白血浆组、模型组、益心泰含药血浆组,每组6 个复孔。除 空白血浆组外,其余各组以AngⅡ（10-7 mol·L-1）诱导构建细胞增殖及纤维化模型。空白血浆组及模型组以15% 空白血浆培养,益心泰含药血浆组以15%益心泰含药血浆培养,干预24 h。采用CCK-8 法检测CFs 细胞增殖 情况;ELISA 法测定细胞中Ⅰ型胶原（CollagenⅠ）、Ⅲ型胶原（Collagen Ⅲ）及转化生长因子（TGF-β1）含量;流 式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期;Western Blot 法检测细胞中TGF-β1、B 细胞白血病/淋巴瘤-2（Bcl-2）及 Bcl-2 相关X 蛋白（Bax）的蛋白表达水平;RT-qPCR 法检测CFs 的增殖细胞核抗原（PCNA）、α-平滑肌肌动蛋 白（α-SMA）、CollagenⅠ/Ⅲ mRNA 表达水平。结果15%益心泰含药血浆对CFs 无明显的促细胞增殖或抑制作 用。与空白血浆组比较,模型组细胞G0/G1 期的细胞百分率明显降低（P＜0.01）,S 期和G2/M 期的细胞百分率 明显升高（P＜0.01）;细胞凋亡率有所下降,但差异无统计学意义（P＞0.05）;Ⅰ/Ⅲ型胶原含量及TGF-β1 水平 均显著升高（P＜0.01）;TGF-β1、Bcl-2 蛋白表达明显上调（P＜0.01）,Bax 蛋白表达明显下调（P＜0.01）; PCNA、α-SMA、CollagenⅠ/Ⅲ mRNA 表达水平均明显升高（P＜0.01）。与模型组比较,益心泰含药血浆组细胞 的G0/G1 期细胞百分率明显升高（P＜0.01）,S 期和G2/M 期的细胞百分率明显降低（P＜0.01）,细胞凋亡率明 显升高（P＜0.01）;Ⅰ、Ⅲ型胶原含量及TGF-β1 水平明显降低（P＜0.01）;TGF-β1、Bcl-2 蛋白表达明显下 调（P＜0.01）,Bax 蛋白表达明显上调（P＜0.01）;PCNA、α-SMA、CollagenⅠ/Ⅲ mRNA 表达水平均明显降 低（P＜0.01）。结论益心泰含药血浆能够抑制CFs 细胞增殖分化及纤维化,可能与其调控Bax/Bcl-2 平衡及 下调纤维化相关因子表达有关。     

抗纤软肝颗粒对肝星状细胞增殖与凋亡的影响

目的:研究抗纤软肝颗粒(KXR)对肝星状细胞增殖、凋亡及凋亡相关蛋白的影响.方法:传代培养的大鼠肝星状细胞系HSC-T6与中药复方抗纤软肝颗粒(终浓度为5mg/ml、2.5mg/ml、1.25mg/ml)及药物血清(5%、10%、20%)共同培养48小时后,应用MTT法测定细胞增殖,TUNEL法及流式细胞仪测定细胞凋亡、免疫组化检测凋亡相关蛋白Bcl-2/Bax.结果:抗纤软肝颗粒无论是药物还是含药血清,均能显著抑制HSC-T6增殖,并使细胞周期阻滞于S期,在安全浓度范围内,5mg/ml组和10%药物血清组作用最强(P＜0.01); 并可诱导HSC凋亡, 且凋亡抑制分子Bcl-2表达下调, 促凋亡分子Bax表达增强(P＜0.01).结论:抗纤软肝颗粒抗肝纤维化的作用机制可能在于抑制肝星状细胞增殖,并通过下调Bcl-2/Bax比率,促进HSC凋亡.     

中药复方对骨质疏松大鼠雌激素受体mRNA及Ⅰ型胶原mRNA表达的影响

目的:探讨自拟中药复方对实验性骨质疏松大鼠雌激素受体mRNA及Ⅰ型胶原mRNA表达的影响及骨细胞数目的影响.方法:切除大鼠卵巢造成骨质疏松模型,随机分组对照处理,3月后应用原位杂交法和HE色观察雌激素受体mRNA及Ⅰ型胶原mRNA的表达及成骨细胞数量.结果:中药复方组成骨细胞数目增加(P＜0.01),雌激素受体mRNA及Ⅰ型胶原mRNA表达水平提高(P＜0.01).结论:自拟中药复方具有拟雌激素样作用,可使骨质疏松大鼠骨内雌激素受体mRNA及Ⅰ型胶原mRNA表达增强,调节骨代谢,增加骨质疏松大鼠成骨细胞数目.     

牛膝甾酮对小鼠MC3T3-E1细胞成骨分化和增殖的影响

目的研究牛膝甾酮(IS)对小鼠成骨细胞系(MC3T3-E1细胞)增殖、分化的影响及其可能的分子机制。方法将MC3T3-E1细胞分为对照组及IS不同浓度组(10~(-4)～10~(-1)ng/μL),24、48 h后采用细胞计数(CCK8)试剂盒检测细胞增殖,7、14天后采用碱性磷酸酶(ALP)活性试剂盒检测ALP活性,茜素红染色检测矿化结节,原位末端标记(TUNEL)试剂盒检测细胞凋亡情况,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测成骨分化相关标志物Ⅰ型胶原(CollagenⅠ)、骨保护素(OPG)、骨桥蛋白(OPN)、骨钙素(OCN)、ALP以及雌激素受体alpha(ERα)、雌激素受体beta(ERβ) mRNA的表达水平。结果与对照组比较,在干预48 h后,10~(-3)、10~(-2)、10~(-1)ng/μL IS能抑制细胞的增殖(P0.05),但对细胞凋亡无明显影响。10~(-4)、10~(-3)、10~(-2)、10~(-1)ng/μL IS均能够促进ALP活性及矿化结节的形成(P0.05),亦能促进ERα、OPG、CollagenⅠ、ALP mRNA表达(P0.05);10~(-3)、10~(-2)、10~(-1)ng/μL IS均能促进OPN、OCN mRNA表达(P0.05),10~(-1)ng/μL IS能够促进ERβmRNA表达(P0.05)。结论 IS能促进MC3T3-E1细胞的成骨分化,其可能机制与上调成骨分化标志物及提高ERαmRNA表达有关。     

生脉成骨胶囊在激素性股骨头坏死防治中的应用研究

目的:通过研究生脉成骨胶囊对激素性股骨头缺血性坏死的股骨和髂骨骨髓间充质细胞增殖及矿化结节生成作用,及骨髓间充质细胞的碱性磷酸酶(ALP)和骨钙素(BGP)的变化,探讨其对机体髂、股骨间充质细胞成骨能力的影响,了解生脉成骨胶囊在防治激素性股骨头坏死方面的作用机理.方法:将40只SD雄性大鼠随机分为4组:空白对照组、模型组、生脉成骨预防用药组、生脉成骨治疗组,通过测定ALP、BGP、充质细胞的增殖能力、矿化结节数,推断股骨和髂骨近端成骨能力变化规律.结果:空白对照组、生脉成骨预防用药组、生脉成骨治疗组股骨髂骨的ALP、BGP含量均显著高于模型组(P＜0.05);各组股骨、髂骨间充质干细胞向成骨细胞转化增殖的吸光度值(OD570)和矿化结节数明显高于模型组;生脉成骨预防用药组股骨和髂骨矿化结节数、ALP高于生脉成骨治疗组.结论:生脉成骨胶囊可以促进激素性股骨头坏死大鼠模型的股骨、髂骨间充质细胞碱性磷酸酶和骨钙素合成及骨髓间充质细胞向成骨细胞转化的细胞增殖及矿化结节形成.认为生脉成骨胶囊防治激素性股骨头缺血性坏死的作用机理与促进成骨细胞的分化成熟程度以及提高成骨细胞骨蛋白的分泌速度有关.     

肉桂酸对大鼠骨髓间充质干细胞增殖及分化的影响

目的研究肉桂酸(CINN)对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖和向成骨细胞分化的影响。方法实验分为CINN组和对照组。CINN组采用CINN处理BMSCs,对照组细胞培养基不加任何药物处理。显微镜观察细胞形态变化,四甲基偶氮唑蓝法(MTT)测定细胞增殖能力,流式细胞仪分析细胞周期,茜素红染色观察BMSCs向成骨细胞的分化能力,RT-PCR及放免方法检测骨钙素(BGP)的表达。结果与对照组比较,CINN组BMSCs增殖能力显著下降,细胞周期出现向G0/G1期移行的特征性动力学改变。CINN作用14 d后钙化结节形成,且骨钙素的表达明显升高。结论肉桂酸可抑制大鼠BMSCs增殖,促进其向成骨细胞分化。     

葛根素对高糖培养成骨细胞增殖、矿化及凋亡的影响

目的:探讨葛根素(PUE)对高糖培养成骨细胞(OB)增殖、矿化及凋亡的影响,为临床治疗糖尿病骨质疏松提供实验依据。方法:体外分离培养成骨细胞,接种24 h后分为正常组、高糖组、葛根素各浓度组和高糖培养加葛根素各浓度组,各组成骨细胞分别培养48 h,每组8孔。MTT法测定OB细胞的增殖活力,茜素红染色计数矿化结节;Annexin V-FITC/PI双标记流式细胞仪分析细胞早期凋亡情况。结果:与正常组相比,高糖组成骨细胞增殖明显降低,矿化结节明显减少,早期凋亡率明显升高具有统计学意义(P0.05或P0.01);葛根素各组均能促进成骨细胞增殖、矿化,抑制凋亡,与高糖组比较,差异显著(P0.01),以10~(-8) mol/L浓度组效果最为显著;高糖+葛根素各组成骨细胞增殖较高糖组也明显增强,矿化结节明显增多,凋亡抑制率明显降低,差异均具有统计学意义(P0.05)。结论:葛根素具有促进高糖培养成骨细胞增殖、矿化及抑制凋亡作用。     

淫羊藿苷对人成骨细胞的作用

为探讨淫羊藿苷对人成骨细胞的影响,采用分次酶消化法做离体人成骨细胞培养,得到性状稳定、纯度高的成骨细胞;用MTT法做淫羊藿苷对成骨细胞增殖的研究。结果发现不同浓度的淫羊藿苷对成骨细胞的生长增殖均有促进作用,以10ng·ml-1浓度时其作用最强(P<0.05);生化方法测定淫羊藿苷浓度为100ng·ml-1和10ng·ml-1对成骨细胞分泌碱性磷酸酶(AKP)有促进作用。表明淫羊藿苷促进成骨细胞增殖的同时,增强了成骨细胞成骨活性。     

乌麻颗粒抗炎镇痛作用的实验研究

为了解乌麻颗粒的抗炎镇痛作用,分别取50只ICR小鼠或SD大鼠,随机分为2个对照组和乌麻颗粒小、中、大剂量组,共5组,每组10只,采用了小鼠二甲苯耳廓肿胀法、大鼠角叉莱胶足跖肿胀法、小鼠热板法及小鼠醋酸扭体法进行了动物实验。结果显示,乌麻颗粒经口给药后对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀均有抑制作用,其中大剂量组（72g.kg^－1）有非常显著的抑制作用;对角角叉莱胶所致大鼠足跖肿胀有明显的减退肿胀效果,其中10g.kg^－1、20g.kg^-1剂且消肿作用可持续3h,40g.kg^－1剂量消肿作用可维持6h。说明鸟麻颗粒能够明显提高小鼠热板法痛阈,抑制小鼠醋酸扭体反应率,两种镇痛试验表明乌麻颗粒有一定的镇痛作用,且有一定的量效关系,其镇痛作用在用药60min后有有效。实际提示该药具有较好的抗炎镇痛作用。     

中药对家兔实验性膝关节骨性关节炎氧自由基代谢的影响

为探讨中药对骨性关节炎氧自由基代谢的影响 ,采用 Hulth方法复制出家兔膝骨关节炎模型并随机分为模型组、芬必得组和中药逐痹汤组。均于治疗 1个月后测定红细胞超氧化物歧化酶 (SOD)活性及血清脂质过氧化物 (L PO)含量 ,并做统计学分析。结果显示逐痹汤组动物的 SOD活性显著高于其他两组 ,而 L PO含量显著低于其他两组 (P<0 .0 1) ,模型组与芬必得组无显著性差异 (P>0 .0 5 )。认为逐痹汤可显著提高 SOD的活性 ,降低 L PO含量 ,从而起到延缓关节软骨的退变 ,促进软骨修复的作用     

腰腿痛胶囊抗炎镇痛作用的实验研究

为了解腰痛胶囊的抗炎镇痛作用进行了动物９实验。结果显示,腰腿痛胶囊能够明显提高小鼠热板地痛闽,降低小鼠醋酸扭体反应发生率,对二甲苯所较小鼠耳肿胀、角叉交所致大鼠足跖肿胀及醋酸经起的小鼠腹腔毛细血管通透性增加均有显著的抑制作用,提示该药具有较好的抗炎镇痛作用。     

活络止痛膏抗炎镇痛活血作用的实验研究

为探讨活络止痛膏的抗炎镇痛活血作用，分别取健康昆明种小鼠和Wister大鼠随机分为4组，即赋形剂对照组、阳性对照组和活络止痛膏高、低剂量组，分别外用凡士林膏、通络祛痛膏、活络止痛膏高剂量(每公斤含生药70g)、低剂量(每公斤含生药35g)。采用了小鼠二甲苯耳廓肿胀法、大鼠足跖蛋清肿胀法、小鼠醋酸扭体法、小鼠热板法、小鼠腹腔血瘀证模型羊红细胞测定法等进行实验观察。结果显示，活络止痛膏高、低剂量对小鼠耳廓二甲苯所致肿胀均具有明显抑制作用；高、低剂量均对蛋清诱导的大鼠足跖炎症具有较好的抑制作用；对醋酸诱导的小鼠扭体反应为指标的疼痛具有明显的抑制作用；对热板法致痛具有明显的抑制作用；可明显促进血瘀证模型体内羊红细胞的吸收，具有良好的活血化瘀作用，表明活络止痛膏具有良好的抗炎镇痛和活血化瘀作用。     

雌激素对卵巢切除小鼠骨折愈合影响的实验研究

将卵巢切除后 3个月已经出现明显骨丢失的 balb/ c小鼠用折骨器造成右股骨中段闭合性骨折 ,应用不同剂量的雌激素治疗 ,然后分批处理取出骨痂标本进行组织学检查。结果发现卵巢切除后未用雌激素治疗者骨痂形成较小 ,而应用高剂量雌激素治疗者骨痂发育明显推迟 ,表明补充超生理剂量雌激素对卵巢切除小鼠骨折愈合 (早期 )不利。     

复元活血汤抗炎镇痛作用的实验研究

为研究复元活血汤的抗炎、镇痛作用，进行了药效学研究。结果显示，复元活血汤对醋酸引起的小鼠腹腔毛细血管通透性增加、角叉菜胶所致的大鼠足跖肿胀、二甲苯所致的小鼠耳肿胀均有显著的抑制作用；能显著降低小鼠腹腔注射醋酸引起的扭体反应次数，明显提高小鼠热板法的痛阈值，说明该药有较强的抗炎、镇痛作用。     

九香接骨丹促进骨折愈合的动物实验

为探讨九香接骨丹促进骨折愈合的机理，给临床应用提供了可靠依据。取健康雄性Labrador犬18只，造成右胫骨中段3mm缺损骨折模型，将模犬随机分为九香接骨丹组，七厘散组和模型对照组，术后连续灌胃给药14天，并进行下列观察：（1）一般行为表现；（2）X线片分析；（3）伤肢墨汁灌注观察；（4）大体标本骨折愈合情况比较；（5）组织学观察。结果显示九香接骨丹组与模型对照组有比较显著的差异，说明了九香接骨丹能促进骨折早期愈合，并且其作用优于七厘散组，表明九香接骨丹具有消炎，镇痛，改善，微循环，促进伤区血液循环和促进骨折早期愈合的作用。     

中药熏蒸疗法治疗关节炎30例疗效观察及其抗炎机理研究

为观察中药熏蒸疗法治疗关节炎的疗效,随机选择关节炎患者30例,每天治疗1次,连续10天,观察治疗前后临床症状、急性炎性指标及炎症因子的变化,探讨该疗法治疗关节炎的部分抗炎机制.结果显示中药熏蒸治疗可明显缓解关节疼痛、压痛、肿胀、晨僵等症状,并明显降低CRP、ESR、PLT计数等急性炎性指标水平,统计学有非常显著性差异(P＜0.01);还能显著降低RA患者血清IL-1β和NO的水平(P＜0.05),揭示其抗炎作用可能与降低血液中多种炎症介质的水平有关.     

淫羊藿影响骨折愈合的骨组织学及骨组织形态计量学研究

以中医“肾主骨”理论为指导,通过组织形态学观察,运用骨计量学技术,对淫羊藿促进骨折愈合的作用进行了实验研究。结果表明,淫羊藿早期能促进骨折处血肿机化吸收、软骨钙化、骨痂生长及外骨痂桥接;后期能促进骨痂改建,使板层骨提早出现和髓腔再通。骨计量参数显示该药能促进骨痂生长,提高成骨细胞的活性和数量,促进骨基质钙化,提高破骨细胞活性和数量,加速骨痂的改建。说明该药具有促进骨折愈合的作用