红霉素逆转人胃癌细胞株多药耐药性的研究

目的：研究以红霉素逆转人胃癌SGC7901／ADM亚株所呈现的多药耐药性。方法：应用递增阿霉素剂量的方法，诱导建立人胃癌细胞耐药亚株。试以红霉素逆转该耐药亚株对阿霉素等抗癌药物的耐药性，以MTT法测定各药之．细胞毒作用，用LSAB法检测亲本(SGC7901)与耐药细胞亚株(SGC7901／ADM)之P-糖蛋白的表达水平。结果：体外诱导建立之人胃癌细胞耐药亚株SGC7901／ADM，对阿霉素的相对耐受度较亲本细胞SGC7901提高了9.l倍；前者同时对长春新碱、鬼臼乙叉甙呈交叉耐药性，而对丝裂霉素和顺铂则不显示交叉耐药性。红霉素浓度为273、545、1090μmol／L时．均可提高阿霉素、长春新碱、鬼臼乙叉甙对SGC7901／ADM耐药细胞亚株的细胞毒作用。免疫细胞化学研究显示，约86％的耐药亚株表达P-糖蛋白，而亲本细胞则均为阴性。结论：非毒性剂量的红霉素可以逆转人胃癌耐药细胞株的耐药性。为临床上胃癌常规化疗方案中加用红霉素提供了实验依据。     

胃癌CD133阳性细胞的纯化及其生物学特性研究

目的检测人胃癌KATO-Ⅲ、SGC7901、AGS及MKN-45细胞株中CD133基因及蛋白的表达,研究CD133阳性(CD133+)细胞与CD133阴性(CD133-)细胞的生物学特性的差异。方法采用半定量聚合酶链反应及免疫蛋白印迹法分别检测KATO-Ⅲ、SGC7901、AGS及MKN-45细胞株中CD133基因和蛋白的表达;免疫磁珠细胞技术将KATO-Ⅲ细胞株中CD133+和CD133-细胞分离纯化,对比两者生长形态特点、体外增殖能力及分化能力的差异;采用CCK-8法分析CD133+和CD133-细胞对不同浓度(0.05、0.10、0.20、0.50、1.00mg/ml)化疗药物5-氟尿嘧啶(5-FU)敏感性的差别。结果 KATO-Ⅲ细胞中CD133基因及蛋白表达量均明显高于SGC7901、AGS及MKN-45细胞(P<0.05)。CD133+细胞在无血清培养基中呈球形克隆悬浮生长,相比CD133-细胞具有更强的体外增殖能力及潜在分化能力。5-FU耐药性实验中,CD133+细胞在0.50mg/ml浓度下的抑制率较CD133-细胞明显降低(P<0.05),但其他浓度时二者比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论人胃癌细胞株KATO-Ⅲ中的CD133+细胞具有一定增殖、分化及耐药潜能,CD133可作为胃肿瘤起始细胞亚群的表面标志之一。     

ω-3多不饱和脂肪酸二十二碳六烯酸对胃癌细胞株AGS生长和增殖的影响

目的评价ω-3多不饱和脂肪酸（ω-3PUFA）体外抑制胃癌细胞株AGS增殖和诱导细胞凋亡的能力。方法在处于指数生长期的AGS细胞株培养剂中添加二十二碳六烯酸（DHA）,采用噻唑蓝法、DNA琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪等方法检测AGS细胞株的生长和增殖情况,并通过免疫组化检测经DHA处理前后细胞中COX-2的表达。结果经DHA作用后,AGS细胞增殖受抑制,随DHA浓度的递增AGS细胞增殖率逐次下降,呈现明显量效关系,同时诱导细胞凋亡;琼脂糖凝胶电泳显示DNA裂解片段出现典型的阶梯状条带;流式细胞仪检测出凋亡峰,细胞周期分析表明细胞阻滞于G0／G1期。ω-3PUFA对正常肠上皮细胞增殖无明显影响。经DHA作用后,AGS细胞中COX-2表达下调。结论DHA可能通过抑制COX-2而阻遏AGS细胞的增殖,诱发细胞凋亡。     

过表达核转录因子Kr(u)ppel样因子4下调胃癌AGS细胞血管内皮生长因子的表达

目的 观察过表达核转录因子Kr(u)ppel样因子4(KLF4)是否下调胃癌AGS细胞血管内皮生长因子(VEGF)的表达.方法 体外培养人胃癌AGS细胞,分为4组:转染空质粒24 h对照组、转染空质粒48 h对照组、转染KLF4表达质粒24 h组、转染KLF4表达质粒48 h组.构建KLF4表达质粒,脂质体LipofectamineTM2000分别转染空质粒、KLF4表达质粒到AGS细胞,24、48 h后提取总RNA和蛋白,实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法、Western blot法分别检测KLF4和VEGF mRNA和蛋白水平的表达.结果 AGS细胞在24 h转染率为65%-75%,48 h转染率为40%～45%.实验组与对照组转染24、48 h后,KLF4 mRNA的表达量分别为:563.584±250.744比4.997±5.729(P＜0.05);351.852±212.439比2.4420±1.3770(P＜0.05).VEGF mRNA表达量分别为:0.008 929±0.003 810比0.002 294±0.000720(P＜0.05);0.018 375±0.008 263比0.002 193±0.001 698(P＜0.05);胃癌AGS细胞KLF4蛋白表达量显著性增加,相对应地VEGF蛋白表达水平显著性降低(P＜0.05).结论 体外胃癌AGS细胞过表达KLF4导致VEGF mRNA和蛋白表达下调,KLF4可能参与抑制调节胃癌AGS细胞VEGF的表达.     

C2基因对人胃癌细胞周期的影响

目的 探索新克隆的编码人蛋白翻译起始因子的全长基因（C2基因）对细胞周期的影响及与细胞凋亡的关系。方法 构建C2基因真核表达载体,转染人胃癌细胞系SGC7901,获得瞬时和稳定表达C2蛋白的人胃癌细胞株,应用流式细胞分析法检测C2蛋白在转染细胞上的表达和转染细胞细胞细胞周期的改变并在电镜下观察转染细胞超微结构的改变。结果 成功构建了C2基因真核表达载体;流式细胞分析法检测转染细胞C2蛋白表达率为32．3％,空白对照为0．9％;细胞周期检测提示瞬时和稳定转染了C2基因的细胞均发生凋亡;电镜下可见转染了C2基因的胃癌细胞发生凋亡。结论 C2基因转染可引起胃癌细胞发生凋亡,机制有待进一步研究。     

胃癌细胞中长链非编码RNA CCAT2的表达及其作用

目的:探讨长链非编码RNA(lnc RNA)CCAT2在胃癌细胞中的表达及其作用。方法:用q RT-PCR检测胃癌细胞系AGS、Hs746T和BSG823及正常胃黏膜上皮细胞GES-1中CCAT2的表达,将胃癌AGS细胞分别转染CCAT2si RNA(si-CCAT2组)与阴性对照si RNA(阴性对照组)后,以无转染的AGS细胞为空白对照,CCK-8法检测细胞的增殖情况,并分别用流式细胞术分、细胞划痕和Trans well实验、Western blot检测si-CCAT2组与阴性对照组的凋亡情况、迁移和侵袭能力以及凋亡相关蛋白的表达。结果:各胃癌细胞系中CCAT2相对表达量均明显高于正常胃黏膜上皮细胞GES-1(均P0.05);转染后72、96h,si-CCAT2组的增殖能力明显低于空白对照组与阴性对照组(均P0.05),而阴性对照组与空白对照组各时间点增殖能力均无明显差异(均P0.05);与阴性对照组比较,si-CCAT2组细胞凋亡率明显升高、划痕愈合率明显降低、侵袭细胞数明显减少(均P0.05);P53、caspase-8、Bax蛋白表达上调,Bcl-2表达下调(均P0.05)。结论:CCAT2在胃癌细胞中高表升高,敲低其表达可抑制胃癌细胞的增殖及迁移与侵袭能力,机制可能与其调控凋亡相关蛋白的表达有关。     

microRNA-31对AGS人胃癌细胞增殖、迁移及其LRH-1表达的影响

目的 探索microRNA-31 （miR-31） 的高表达对AGS人胃癌细胞生物学行为及其成纤维细胞核受体 （LRH-1） 蛋白表达的影响,并探索miR-31调控胃癌发生和发展的机理。方法 将AGS细胞分为3组,分别给予转染miR-31 （MT组）、转染miR-31阴性对照序列即空脂质体 （NC组） 及滴加PBS溶液 （BC组） 处理。分别采用细胞增殖和细胞毒性试剂盒 （CCK-8试剂盒）、流式细胞仪和Transwell实验检测3组细胞的增殖、凋亡、细胞周期和细胞迁移情况。采用Western blot法检测3组细胞中LRH-1蛋白的表达水平;采用双荧光素酶报告系统检测miR-31的作用位点。结果 CCK-8实验结果显示,转染4 d后,MT组、NC组及BC组细胞A450值的均值分别为1.31、2.26和2.14,MT组较低（P＜0.01）;流式细胞仪检测结果表明,MT组、NC组及BC组细胞凋亡率的均值分别为39.5%、9.3%和10.0%,G1＋S期细胞比例分别为92.54%、73.23%及74.58%,MT组的该2个指标均较高（P＜0.05）;Transwell实验结果表明,MT组的迁移细胞数低于NC组及BC组（P＜0.05）。Western blot结果表明,MT组细胞LRH-1蛋白的表达较BC组和NC组下调（P＜0.01）。结论 上调miR-31的表达对AGS细胞的增殖具有明显的抑制作用,且可促进其凋亡并降低细胞的迁移能力;miR-31可使LRH-1蛋白的表达下调,推测LRH-1基因可能是miR-31参与胃癌发生和发展的靶标之一。     

p53对胃癌细胞BGC823中Survivin基因表达的影响

目的 探讨p53基因对胃癌细胞株BGC823中Survivin基因表达的影响及其作用机制。方法 应用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和Western blot技术检测胃癌细胞株BGC823中Survivin和p53基因表达情况；利用质粒pcDNA3．0-rpS3转染该细胞株。应用实时聚合酶链反应（PCR）和Western blot检测细胞在培养后不同时间点Survivin mRNA和蛋白表达水平。结果 确认了胃癌细胞株BGC823中Survivin和突变型p53基因的表达。受野生型p53质粒转染的胃癌细胞在培养16和24h后，Survivin mRNA和蛋白质水平呈明显下降趋势。结论 野生型p53在转染胃癌细胞株BGC823后可显著抑制后者Survivin基因的转录和表达。     

基因Survivin、Caspase-3在胃癌发生中的作用

目的通过观察凋亡相关基因Survivin和Caspase-3在胃癌组织中的表达来探讨Survivin和Caspase-3在胃癌发生中的作用。方法采用RT-PCR方法检测Survivin和Caspase-3 mRNA在30例胃癌组织、10例正常胃组织标本中的表达。结果30例胃癌组织中20例Survivin mRNA表达阳性，10例正常胃组织中无Survivin mRNA表达；30例胃癌组织和10例正常胃组织均有Caspase-3 mRNA表达，20例Survivin mRNA表达阳性的胃癌组织Caspase-3 mRNA表达水平明显低于10例Survivin mRNA表达阴性的胃癌组织和正常胃组织，10例Survivin mRNA表达阴性的胃癌组织Caspase-3 mRNA表达水平明显低于10例正常胃组织。Suvivin阳性表达与胃癌的临床分期、腹膜和(或)远处转移有关，而与患者性别、年龄及胃癌附近淋巴结转移无关。结论Survivin在胃癌组织中的表达与Caspase-3表达水平呈负相关，Survivin在胃癌组织中的高表达及Caspase-3在胃癌组织中的低表达与胃癌发生、发展有关。     

组织因子表达影响阿霉素对人胶质母细胞瘤细胞毒性的研究

目的 研究组织因子(TF)对人胶质母细胞瘤细胞化疗药物敏感性的影响.方法 分子生物学方法构建TF-pcDNA3表达载体,以脂质体介导进行基因转染.以Western Blotting检测TF表达,WST法检测阿霉素的细胞毒性.结果 人胶质母细胞瘤细胞系LN-229低表达TF.以TF-pcDNA3真核表达载体转染LN-229细胞,TF表达水平呈剂量依赖性增强.转染TF-pcDNA3表达载体的LN-229细胞及对照细胞分别以阿霉素处理,可见转染TF-pcDNA3表达载体的细胞存活率较对照细胞均显著增多(P<0.05).阿霉素在转染TF-pcDNA3表达载体的LN-229细胞中的IC50为1.33μg/ml,较转染pcDNA3表达载体的LN-229细胞(0.92μg/ml)、未转染的LN-229细胞(0.98μg/ml)均显著增高(P<0.05).结论 人胶质母细胞瘤细胞LN-229中TF表达的上调,可降低阿霉素的细胞毒性,提高肿瘤细胞对阿霉素的抵抗性.TF的异常高表达可能增强肿瘤细胞对化疗药物的耐受性.     

胃癌细胞中miR-455-3p的表达及其对增殖和凋亡的影响

目的:探讨mi R-455-3p在胃癌细胞中的表达及对胃癌细胞增殖和凋亡的影响。方法:用q RT-PCR检测mi R-455-3p在正常胃黏膜上皮细胞RGM-1及5种胃癌细胞系(AGS、Hs746T、MGC-803、SGC-7901及BSG-823)中的表达。将胃癌细胞mi R-455-3p模拟物后,分别用CCK8法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测细胞p27 kip1、p21的蛋白表达,分光光度法检测细胞caspase酶活性。结果:mi R-455-3p在5种胃癌细胞系中的表达水平明显低于RGM-1细胞系,其中在AGS细胞中降低最为明显(均P0.05)。AGS细胞转染mi R-455-3p模拟物后,增殖能力明显降低而胞凋亡率明显升高,p27 kip1蛋白表达量明显升高,caspase-3与caspase-9相对活性明显升高(均P0.05),但p21蛋白表达量与caspase-8相对活性无明显改变(均P0.05)。结论:mi R-455-3p在胃癌细胞表达下调,增加其表达可抑制胃癌细胞增殖并促进凋亡,其机制可能与其上调p27 kip1表达及增强caspase-3、caspase-9活性有关。     

多种化疗药物对胃癌细胞杀伤效应的研究

目的：探讨不同分化的胃癌细胞对不同化疗药物的敏感性。 方法：选择低分化的MGC-803和高分化的AGS两种胃癌细胞系,以及正常胃黏膜上皮细胞GES-1,分别加入不同浓度的5-氟尿嘧啶（5-FU）、奥沙利铂（L-OHP）、多西他赛（DXT）、顺铂（DDP）、伊立替康（CPT-11）作用48 h后,用MTT法检测药物对细胞的抑制作用,并计算药物半数抑制浓度（IC50）。用IC50的5-FU、DDP、L-OHP作用于MGC-803和AGS细胞48 h后,检测细胞凋亡及细胞周期分布情况。 结果：5种化疗药物对MGC-803、AGS细胞以及GES-1细胞均有明显的抑制作用（均P<0.05）,其中5-FU、DDP、CPT-11对AGS细胞的作用较强;L-OHP、DXT对MGC-803细胞作用较强;DDP对GES-1细胞的抑制作用较强。5-FU、DDP、L-OHP均明显诱导两种胃癌细胞凋亡,其中5-FU组与L-OHP组凋亡率高于DDP组（均P<0.05）;细胞周期分析显示,L-OHP增加两种细胞的S期阻滞,DDP增加MGC-803细胞的S期阻滞,5-FU与DDP增加AGS细胞的G1阻滞（均P<0.05）,但5-FU对MGC-803细胞周期无明显影响（P>0.05）。 结论：化疗药物对胃癌细胞的抑制作用与其病理类型有关,且对胃癌细胞凋亡的诱导和细胞周期阻滞作用均不同。     

circ_0009910在胃癌细胞中作用机制初步研究

目的通过检测分析胃癌细胞中circ_0009910表达,初步探讨其在胃癌细胞中的作用机制。方法用qRT-PCR检测胃癌细胞系BGC823、SGC7901、AGS、MGC803、MKN45中的circ_0009910表达水平,在BGC823、AGS细胞中采用circ_0009910 siRNA转染敲降circ_0009910,验证转染效果;在circ_0009910敲降的BGC823、AGS细胞中,用MTT法检测细胞增殖、平板法检测集落形成、Transwell检测迁移和侵袭、western-blotting检测上皮间质转化(EMT),采用SPSS 18.0软件进行统计学分析。结果BGC823、SGC7901、AGS、MGC803、MKN45中的circ_0009910相对表达水平为(7.238±0.895)、(5.023±0.786)、(4.184±0.356)、(8.561±1.026)、(3.478±0.301),较正常胃癌显著升高(P<0.01),siRNA转染敲降circ_0009910后,BGC823、AGS细胞活力、集落形成数目、迁移和侵袭能力与对照组相比均明显降低(P<0.01),N-cadherin、Snail蛋白的相对表达降低,而E-cadherin表达增加。结论circ_0009910在胃癌细胞中高表达,可促进胃癌细胞增殖、集落形成、迁移和侵袭及EMT。     

整合素αvβ6在胃癌AGS细胞增殖和凋亡中的作用

目的：研究整合素αvβ6在胃癌AGS细胞增殖和凋亡中的作用。方法：用单克隆抗体10D5封闭AGS细胞表面αvβ6功能,并采用10D5的阴性对照剂鼠IgG2a处理细胞作为阴性对照。MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,Westernblot检测caspase-3蛋白的表达情况。结果：用10D5封闭αvβ6后,10D5组AGS细胞的存活率较对照组和IgG2a组下降,而凋亡率和caspase-3的表达水平则增加,差异均有统计学意义（P〈0.05）。IgG2a组与对照组相比差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：整合素αvβ6表达促进胃癌AGS细胞增殖并抑制其凋亡。     

microRNA-124对胃癌细胞增殖与凋亡的影响及其与PI3K/Akt信号通路的关系

背景与目的:研究显示,microRNA-124(miR-124)在多种肿瘤中发挥抑癌基因的功能,并且在胃癌细胞及组织中表达下调,在胃癌的发生发展中发挥重要调控作用。本研究探讨miR-124对人胃癌细胞增殖、凋亡的影响及其与PI3K/Akt信号通路的关系。方法:用qRT-PCR检测人胃癌细胞系MGC803、AGS、MNK-45、SGC-7901和人正常胃黏膜上皮细胞GES-1中miR-124的表达。用miR-124模拟物(miR-124模拟物组)及miR-124阴性对照序列(阴性对照组)分别转染至MGC803细胞后,用CCK-8法及细胞克隆实验检测MGC803细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测PI3K、Akt、p-PI3K和p-Akt蛋白水平,qRT-PCR检测PI3K和Akt mRNA 表达。结果:与人正常胃黏膜上皮细胞GES-1比较,miR-124在各胃癌细胞中的表达均明显降低(均P0.05)。与阴性对照组比较,miR-124模拟物组转染后的OD450值与细胞克隆形成数均明显降低(P0.05);细胞凋亡率明显增加(P0.05);PI3K/Akt信号通路中关键分子PI3K、Akt、p-PI3K和p-Akt蛋白水平明显降低(均P0.05),PI3K和Akt基因表达水平也明显降低(均P0.01)。结论:miR-124表达的下调可促进胃癌细胞的增殖、抑制其凋亡,该作用机制可能与PI3K/Akt信号通路活化有关。     

Up-regulation of matrix metalloproteinase 9 by thrombospondin 1 in gastric cancer

BACKGROUND: Matrix metalloproteinase 9 (MMP-9) plays a key role in tumor cell invasion. It was recently reported that plasma levels of MMP-9 in patients with gastric cancer correlate with the tumors' metastatic potential. We previously demonstrated that thrombospondin 1 (TSP-1) up-regulates MMP-9 expression by endothelial cells and promotes tumor cell invasion. We hypothesized that TSP-1 plays a role in the up-regulation of MMP-9 in gastric cancer. METHODS: MMP-9, TSP-1, and CSVTCG-specific TSP-1 receptor expression were measured by immunohistochemical staining in 31 consecutive gastric adenocarcinomas from patients who did not undergo neoadjuvant chemotherapy or radiation therapy. Additionally, we measured TSP-1, CSVTCG-specific TSP-1 receptor, and MMP-9 expression by Western blotting, zymography, and immunohistochemical staining in AGS gastric adenocarcinoma cells. We also investigated the effect of TSP-1 on MMP-9 expression by AGS cells. RESULTS: TSP-1 localized to the tumor-associated extracellular matrix. CSVTCG-specific TSP-1 receptor and MMP-9 colocalized to tumor cells, fibroblasts, and tumor-associated microvessels. Intense staining for TSP-1, CSVTCG-specific TSP-1 receptor, and MMP-9 correlated with markers of aggressive tumor behavior. AGS gastric adenocarcinoma cells expressed high levels of CSVTCG-specific TSP-1 receptor but not TSP-1. TSP-1 up-regulated MMP-9 expression by AGS cells. CONCLUSIONS: We conclude that TSP-1 plays a role in the up-regulation of MMP-9 expression in gastric cancer. Our data also suggest a correlation between expression of TSP-1, CSVTCG-specific TSP-1 receptor, and MMP-9 and the acquisition of an aggressive tumor phenotype.     

不同胃癌细胞系尿激酶型纤溶酶原激活物表达与腹膜转移潜能相关的体外研究

目的比较不同胃癌细胞系尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)表达及其活性与腹膜转移潜能的关系。方法采用ELISA和Western印迹方法,比较不同胃癌细胞系uPA表达的差异,并测定其活性。在24孔培养板或Boyden小室中与生长良好的间皮细胞共同培养不同时间,在显微镜下直接计数与间皮细胞黏附的胃癌细胞,而用MTT法评估胃癌细胞在间皮细胞间的迁移和侵袭情况。结果4株胃癌细胞(AGS、SGC7901、MKN45和MKN28)的uPA表达以SGC7901最高,uPA活性以MKN45最高,AGS两者皆最低。MKN45的黏附能力明显强于MKN28(P<0.05)、SGC7901(P<0.05)和AGS(P<0.01),但其迁移和侵袭能力与SGC7901和MKN28相比差异无统计学意义;而AGS在3方面均明显弱于其他3株细胞。结论4株胃癌细胞uPA表达量及其活性差异较大,并且与其腹膜转移潜能呈正相关。     

LYN通过Wnt/β-catenin信号通路对胃癌细胞迁移、侵袭能力的影响

目的 探讨LYN对胃癌细胞迁移、侵袭等生物学行为的影响,并分析其对Wnt/β-catenin信号通路的调控机制.方法 选取2017年10月-2018年5月承德医学院附属医院收治的胃癌患者的胃癌组织和癌旁组织样本,采用qRT-PCR检测在临床收集的胃癌和癌旁组织样本中的LYN表达水平.以胃癌AGS细胞为实验对象,利用脂质...