10Gy X射线照射鼻咽癌移植瘤组织差异表达蛋白质的初步筛选

目的 比较不同放射敏感性的鼻咽癌裸鼠移植瘤组织蛋白质表达的差异,筛选出与鼻咽癌放射抗拒性相关的蛋白质。方法 建立人鼻咽低分化鳞癌细胞（CNE-2）及其放射抗拒性细胞（CNE-2R）裸鼠移植瘤模型,予X射线10 Gy单次照射移植瘤,提取瘤体组织总蛋白质并酶解成肽段,用i TRAQ试剂分别标记后再用二维液相色谱分离,在LTQ-Orbitrap高分辨率质谱仪上鉴定并筛选差异表达的蛋白质,并对差异表达的蛋白质进行基因本体论（Gene Ontology,GO）基因功能分类。结果共鉴定出差异表达的蛋白质61个,其中上调17个,下调有44个,GO分析显示差异表达的蛋白质主要涉及细胞周期调控、分解代谢、信号通路调节、压力应激反应及氧化还原反应等生物学过程。结论 Annexin2、PDIA3、Ubiquitin、14-3-3δ/ζ、CKAP4、HSPA8、NLRC4等差异表达的蛋白质可能与鼻咽癌放射抗拒性相关。     

DNA-PKcs 表达与鼻咽癌细胞株放射敏感性的关系

 目的 探讨不同放射敏感性鼻咽癌细胞株CNE-1（鼻咽高分化鳞癌细胞株）和CNE-2（鼻咽低分化鳞癌细胞株）中DNA依赖蛋白激酶（DNA-PK）的催化亚基DNA-PKCS基因的表达与鼻咽癌细胞放射敏感性的关系。方法 通过克隆形成实验测定CNE-1、CNE-2不同剂量的存活分数，并用线性二次模型拟合剂量存活曲线求出放射生物学参数α、β,SF2、MID值，以及四氮唑蓝比色分析法（MTT法）检测60Co-γ线4Gy照射后12h细胞的存活率，以评价两株细胞的放射敏感性。逆转录实时荧光定量PCR技术（RTrFQPCR）检测照射前、后不同时间及不同剂量CNE-1、CNE-2细胞mRNA水平DNA-PKCS基因的定量表达。结果CNE-1在各个剂量点的存活分数均比CNE-2高，MID值分别为2．78、1．61，SF2值分别为0．627、0．341；4Gy照射后12h的存活率分别为88．2％、72．3％；RT-FQPCR显示两株细胞中均有DNA-PKCS基因的表达，其相对表达量之比为7．54±2．71（t=4．17，P=0．014），表达差异有统计学意义，DNA-PKCS基因在CNE-2细胞中存在时间、剂量依赖关系。结论实验验证了CNB2比CNE-1对射线更敏感，DNA-PKCS基因的表达与鼻咽癌细胞的放射敏感性有关。     

鼻咽癌移植瘤Annexin A3和Nm23-H1蛋白表达与放射敏感相关性的研究

目的:探讨不同放射敏感性鼻咽癌移植瘤中Annexin A3和Nm23-H1蛋白的表达及意义。方法:将不同放射敏感性鼻咽癌细胞CNE-2R和CNE-2分别注射到裸鼠后肢皮下成瘤。成瘤后以X射线分次照射16Gy,计算肿瘤体积及肿瘤倍增时间。采用免疫组化法检测移植瘤中Annexin A3和Nm23-H1蛋白的表达水平。结果:未受照射CNE-2R和CNE-2移植瘤倍增时间分别为4.8和3.9d,受照射CNE-2R和CNE-2移植瘤倍增时间分别为6.2和17.1d。未受照射CNE-2R移植瘤组织Annexin A3蛋白表达明显低于未受照射CNE-2移植瘤组织,MOD值分别为0.035±0.012和0.062±0.009,P=0.000;受照射CNE-2R移植瘤组织明显低于受照射CNE-2移植瘤组织,MOD值分别为0.029±0.007和0.051±0.009,P=0.000。未受照射CNE-2R移植瘤组织Nm23-H1蛋白明显高于未受照射CNE-2移植瘤组织,MOD值分别为0.056±0.007和0.043±0.007,P=0.022;受照射CNE-2R移植瘤组织明显高于受照射CNE-2移植瘤组织,MOD值分别为0.079±0.009和0.046±0.007,P=0.000。结论:CNE-2R移植瘤组织Annexin A3蛋白明显低于CNE-2移植瘤组织,受照射CNE-2R移植瘤组织Nm23-H1蛋白明显高于受照射CNE-2移植瘤组织,与体外实验结论一致,提示与鼻咽癌放射抗拒有关,可作为鼻咽癌放射治疗的新标志。     

DNA甲基转移酶抑制剂5-杂氮-2’-脱氧胞苷对人鼻咽癌细胞株CNE2的影响

目的探讨DNA甲基转移酶抑制剂5-aza-2dC对人低分化鼻咽鳞癌细胞株CNE2的影响。方法应用10-7、10-6、10-5、10-4mol/L浓度的5-aza-2dC,处理人低分化鼻咽鳞癌细胞株CNE2 12、24、36、48、72 h后,应用MTT法测定CNE2细胞株的生存情况,应用流式细胞仪检测细胞凋亡情况。用甲基化特异性PCR检测药物处理前后死亡相关蛋白激酶(DAPK)启动子甲基化状态。结果同一作用时间不同药物浓度组间,细胞存活率差异有统计学意义(P<0.05),且作用72 h对人低分化鼻咽鳞癌细胞株CNE2生长抑制作用最强。流式细胞仪检测结果显示:10-4mol/L 5-aza-2dC诱导细胞凋亡最明显(P<0.01)。甲基化特异性PCR显示鼻咽癌细胞株中,5-aza-2dC可成功逆转DAPK基因启动子高甲基化状态。结论 5-aza-2dC对人低分化鼻咽鳞癌细胞株CNE2生长有抑制作用,且呈浓度和时间依赖性。     

转导人baxα基因的CNE-2B细胞株凋亡及其裸鼠成瘤能力的改变

目的　观察导入 baxα基因并稳定表达的人低分化鼻咽癌细胞株 (CNE- 2 B)生物学行为变化。方法　琼脂糖凝胶电泳分析 DNA片段化 ;γ-射线照射。结果　CNE- 2 B在进行正常及受 γ-射线照射后传代培养时 ,其细胞总数的增加速度比导入载体的对照组 CNE- 2 P细胞株明显减慢 ;自发性细胞凋亡数明显增加。 CNE- 2 B细胞接种到 10只裸鼠双侧背部皮下均未见形成移植瘤 (0 / 2 0 ) ,而对照的 10只裸鼠的成瘤率为 10 0 % (2 0 / 2 0 )。结论　转导人 baxα基因的CNE- 2 B细胞株的生物学行为发生了显著性改变 (P<0 .0 1)     

松胞素阻滞微核法检测鼻咽癌细胞株放射敏感性的研究

目的：探讨用松胞素阻滞微核法来预测鼻咽癌细胞株放射敏感性价值。方法：用松胞素阻滞微核法微核率、微核细胞率检测鼻咽癌高分化鳞癌细胞株CNE1及低分化鳞癌细胞株CNE2,在不同X线剂量照射下染色体断裂或缺失程度的差异,与经典的克隆形成法存活分数比较。结果：CNE1、CNE2的微核率、微核细胞率在照射剂量0、0．5Gy时,差异无统计学意义,P〉0．05;但在剂量1、2、4、6和8Gy时,CNE2的微核率、微核细胞率明显比CNE1大,P〈0．05。CNE1、CNE2的微核率、微核细胞率与照射剂量间呈线性正相关,其斜率CNE2明显比CNE1大。微核率、微核细胞率与细胞株的存活分数明显负相关。结论：松胞素阻滞微核法微核率、微核细胞率敏感检测出CNE1、CNE2放射敏感性差异,与克隆形成法检测结果一致。松胞素阻滞微核法是一种检测鼻咽癌细胞株放射敏感性准确、简便和有效的方法。     

赫赛汀对鼻咽癌荷瘤裸鼠肿瘤生长影响的实验研究

目的：探讨赫赛汀（Herceptin）对HER-2/neu基因蛋白高表达的鼻咽癌荷瘤裸鼠肿瘤生长的影响.方法：用鼻咽癌CNE-2Z细胞株接种于裸小鼠右腋下建立HER-2/neu基因蛋白高表达的裸鼠移植瘤模型.将已构建模型的裸鼠24只随机分为4组,每组6只,分别设阴性和阳性对照两组,Herceptin 10mg/kg和20mg/kg两实验组,以观察Herceptin对移植瘤体内生长的影响.结果：用Herceptin处理后的裸鼠移植瘤肿瘤体积均低于阴性对照组,其中10mg/kg剂量组与阴性对照组相比有统计学差异（P〈0.05）,但无量效关系;瘤重抑制率Herceptin 10mg/kg和20mg/kg分别为33.7%和23.3%,均未达到阳性标准;对裸小鼠生长无明显影响.结论：Herceptin对HER-2/neu基因过表达的鼻咽癌细胞株移植的荷瘤裸鼠肿瘤体内的生长具有一定的抑制作用,但效果并不满意.     

人鼻咽癌细胞株自发性凋亡与放射敏感性的研究

  目的   探讨鼻咽癌细胞自发性凋亡对放射敏感性的预测意义及自发性凋亡水平差异的分子学基础。   方法   克隆形成实验测定人鼻咽高分化鳞癌细胞株(CNE-1)、人鼻咽低分化鳞癌细胞株(CNE-2)接受Varian加速器单野照射(6 MV X线)的存活分数, 单击多靶和线性二次模型拟合辐射剂量存活曲线并求出放射生物学参数; 流式细胞术检测自然生长2、4、6、8d细胞凋亡情况; RT-PCR、Western blot检测凋亡相关基因Bcl-2、Bcl-xl、Bcl-w、Bax、Bad、Bid、Bak转录及蛋白表达水平。   结果   函数模型参数显示CNE-2较CNE-1具有更高的辐射敏感性; 相同培养天数下CNE-2早期及晚期凋亡率显著高于CNE-1(P < 0.05);CNE-2中Bcl-2、Bcl-xl、Bcl-w、Bax、Bad、Bid、Bak基因转录及蛋白表达水平均高于CNE-1(P < 0.05)。   结论   自发性凋亡可能成为放射敏感性的预测指标, 自发性凋亡水平差异可能与凋亡相关基因差异性表达有关。      

模拟调强模式下CNE-2细胞学中ATM和Ku80表达的研究

目的:研究延长时间的IMRT模式对鼻咽低分化鳞癌细胞株(CNE-2)与DNA损伤修复相关的Ku80、ATM转录水平表达的影响及临床意义.方法:选取鼻咽低分化鳞癌细胞株CNE-2为实验对象,分为常规照射、模拟IMRT两组,分别给予6MV-X线2、4、6、8Gy4个剂量点的照射;应用RT-PCR,检测CNE-2在不同照射模式下,与DNA损伤修复相关的Ku80、ATM转录水平表达.结果:常规照射与模拟IMRT组不同剂量点之间Ku80的转录水平表达差异有统计学意义(P均=0.000);在相同剂量点,常规照射组与模拟IMRT组LSD法两两比较,4个剂量点Ku80的转录水平表达差异均有统计学意义(P均<0.05);接受照射后CNE-2细胞中Ku80表达上调,模拟IMRT组Ku80的表达更高(P均=0.000),在4Gy剂量点时两组细胞Ku80的表达到达峰值,随后表达均下降.接受照射后,与空白对照比较,常规照射与模拟IMRT组CNE-2细胞中ATM转录水平表达均上调(P均<0.005);常规照射与模拟IMRT组不同剂量点之间,ATM的转录水平表达差异无统计学意义(P均>0.05);在相同剂量点,常规照射组与模拟IMRT组LSD法两两比较,ATM的转录水平表达差异均无统计学意义(P均>0.05).结论:由于亚致死性损伤修复增加,大幅延长照射时间的调强放疗的生物效应下降,Ku80的相对高表达可能是鼻咽低分化鳞癌细胞株模拟IMRT的放射生物学效应的下降的原因之一.     

X线照射对不同放射敏感性鼻咽癌细胞中ATM mRNA表达的影响

[目的]研究X线照射对鼻咽癌细胞株CNE1、CNE2中ATM mRNA表达水平的影响。[方法]采用逆转录酶聚合酶链式反应（RT-PCR）技术．以β-actin为内参照,测定10GyX线照射前后CNE1、CNE2中ATM mRNA表达水平的变化：[结果]在X线照射前,CNE1中ATM mRNA基础水平与CNE2相似：存X线照射后,CNE1中ATM mRNA水平在照射4h后明显升高。12h后恢复：CNE2中ATM mRNA水平在照射后12h内无显著变化．[结论]在具有不同放射敏感性的鼻咽癌细胞株CNE1、CNE2中．ATM mRNA表达的基础水平相似,在经X射线处理后,CNE1和CNE2中ATM mRNA水平变化规律不同。这种ATM mRNA表达差异可能是导致两者放射敏感性不同的原因之一．     

miRNA-381表达及其与鼻咽癌放疗敏感性的关系

目的:观察人鼻咽癌细胞及组织中miRNA-381的表达变化,探讨其与放射敏感性的关系.方法:采用RT-PCR法测定正常鼻咽部上皮细胞株NP460,人鼻咽癌细胞株CNE-2,放疗抵抗细胞株CNE-2R及20例符合纳入标准的鼻咽癌组织中miRNA-381的表达.完成放疗后3个月接受影像学复查,分析患者的近期放疗疗效.所有病例都有2年或2年以上随访记录,根据随访记录制定放疗敏感性评估标准.采用克隆形成实验检测细胞的放疗敏感性.结果:入组患者根据放疗敏感性评估标准,分为放疗抵抗组(7例)和放疗敏感组(13例),放疗抵抗组的miRNA-381表达显著低于放疗敏感组(P＜0.01).克隆形成实验结果显示细胞的放疗敏感性为NP460＞ CNE-2＞CNE-2R,且有显著统计学差异(P＜0.01).RT-PCR结果显示正常鼻咽部上皮细胞株NP460中miRNA-381表达量高于鼻咽癌细胞株,放疗抵抗细胞株CNE-2R中miRNA-381表达量远低于其亲代细胞株CNE-2.近期疗效和鼻咽癌组织中miRNA-381相对表达量的相关性分析显示miRNA-381相对表达量与近期疗效呈正相关(r=0.77,P ＜0.000 1).结论:miRNA-381在放疗抵抗的鼻咽癌细胞及临床标本中的表达量显著低于放疗敏感的细胞及组织.miRNA-381相对表达量越高的鼻咽癌患者接受根治性放疗后的近期疗效越好.     

茶多酚对人鼻咽癌细胞及其裸鼠移植瘤生长的抑制作用

背景与目的:许多研究报告表明,茶多酚(TP)有防癌和抗癌作用,但对鼻咽癌细胞作用的报道很少。我们最近研究证明TP对人鼻咽癌CNE2细胞有抗增殖和诱导凋亡的作用。为进一步了解TP对人鼻咽癌细胞的作用,进行TP对多种鼻咽癌细胞和人鼻咽癌裸鼠移植瘤生长影响的实验研究。方法:以MTT法检测TP对NPC/HK1、CNE1、CNE2、HNE1、HNE2、SUNE1和Fadu7种人鼻咽癌细胞株的生长抑制作用。以人鼻咽癌细胞株(CNE2)裸鼠移植瘤为模型,作体内抑瘤试验。结果:在体外抗癌细胞增殖试验中,TP对NPC/HK1、CNE1、CNE2、HNE1、HNE2、SUNE1和Fadu的IC50分别为55.83、98.43、119.21、127.74、158.07、160.72μg/ml和163.59μg/ml。在TP对人鼻咽癌细胞株(CNE2)裸鼠移植瘤的抑瘤试验的3批实验中,5mg·(kg·d)-1TP作用18天的平均抑瘤率为12.7%,P>0.05;10mg·(kg·d)-1TP作用18天的平均抑瘤率为31.0%,P<0.01;20mg·(kg·d)-1TP作用18天的平均抑瘤率为38.5%,P<0.01。结论:TP对7种人鼻咽癌细胞株均有不同程度的生长抑制作用,对人鼻咽癌CNE2裸鼠移植瘤的生长有一定的抑制作用。     

沉默VEGF对人鼻咽癌放射抗拒细胞株CNE-2R侵袭迁移的影响

目的 探讨沉默血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）对人鼻咽癌放射抗拒细胞株CNE-2R迁移和侵袭能力的影响。方法 制备含VEGF-shRNA的慢病毒载体（VEGF-LV1、VEGF-LV2、VEGF-LV3）和对照shRNA重组慢病毒（VEGF-NC）,并转染人鼻咽癌放射抗拒细胞株CNE-2R,建立稳定沉默VEGF细胞（CNE-LV1、CNE-LV2和CNE-LV3）和阴性对照细胞（CNE-NC）。采用RT-qPCR和Western blot法检测细胞转染效果,划痕实验和Transwell小室实验检测VEGF沉默后细胞的迁移和侵袭能力。结果 成功构建VEGF-shRNA重组慢病毒并建立了稳定沉默VEGF细胞CNE-LV3。划痕实验和Transwell小室迁移实验显示,与空白对照组和CNE-NC组相比,CNE-LV3组细胞迁移率明显降低［（50.17±1.76）% vs （37.97±1.56）%,P＝0.001;（50.63±1.52）% vs （37.97±1.56）%,P＝0.001］,穿膜细胞数亦明显下降［（95.3±3.8） 个 vs （41.3±1.5） 个,P＜0.001;（94.3±4.0） 个 vs （41.3±1.5） 个,P＜0.001］;Transwell小室侵袭实验结果亦显示,CNE-LV3组细胞穿膜细胞数较空白对照组和CNE-NC组明显下降［（46.3±2.1） 个 vs（105.3±1.5） 个,P＜1.001;（46.3±2.1） 个 vs （93.3±2.5） 个,P＜0.001］。结论 沉默VEGF表达可抑制人鼻咽癌放射抗拒细胞株CNE-2R的迁移和侵袭能力。     

Inhibition of protein phosphatase 2A with a small molecule LB100 radiosensitizes nasopharyngeal carcinoma xenografts by inducing mitotic catastrophe and blocking DNA damage repair

Nasopharyngeal carcinoma (NPC), while uncommon worldwide, is a major health problem in China. Although local radiation and surgery provide good control of NPC, better treatments that permit reductions in radiation dosing are needed. Inhibition of protein phosphatase 2A (PP2A), a ubiquitous multifunctional enzyme with critical roles in cell cycle regulation and DNA-damage response, reportedly sensitizes cancer cells to radiation and chemotherapy. We studied PP2A inhibition with LB100, a small molecule currently in a Phase I clinical trial, on radiosensitization of two human nasopharyngeal cell lines: CNE1, which is reportedly radioresistant, and CNE2. In both cell lines, LB100 exposure increased intracellular p-Plk1, TCTP, and Cdk1 and decreased p53, changes associated with cell cycle arrest, mitotic catastrophe and radio-inhibition of cell proliferation. Mice bearing subcutaneous xenografts of either cell line were administered 1.5 mg/kg LB100 daily for three days and a single dose of 20 Gy radiation (day 3), which produced marked and prolonged tumor mass regression (dose enhancement factors of 2.98 and 2.27 for CNE1 and CNE2 xenografts, respectively). Treatment with either LB100 or radiation alone only transiently inhibited xenograft growth. Our results support further exploration of PP2A inhibition as part of radiotherapy regimens for NPC and potentially other solid tumors.     

洛铂对鼻咽癌抗肿瘤作用的体外实验研究

目的 探讨洛铂对鼻咽癌的体外抗肿瘤作用及其可能的机制,为洛铂用于鼻咽癌的临床治疗提供实验依据。方法 在体外将不同浓度洛铂分别作用于低分化鼻咽癌细胞株CNE2、HONE1和SUNE1,采用CCK-8法检测细胞活性;碘化丙啶（PI）染色分析细胞中DNA的含量,流式细胞仪检测细胞周期情况;采用Annexin V-FITC／PI双染法检测细胞凋亡情况;采用蛋白印迹法（Western blotting）检测细胞周期和细胞凋亡相关蛋白的表达。结果 在体外洛铂作用3种鼻咽癌细胞株48h具有明显的细胞抑制作用,并表现出浓度依赖性。洛铂作用鼻咽癌细胞株CNE2、HONE1、SUNE1的半数抑制浓度（IC₅₀）分别为（4.05±0.49）μmol/L、（4.32±1.17）μmol/L和（2.51±0.15）μmol／L。洛铂作用3种鼻咽癌细胞株48h后,在较低浓度（0.125倍IC₅₀）时将细胞周期阻滞在G₂期,同时伴随G₂期相关蛋白Cyclin B1和phospho-cdc2（Tyr15）表达增高;而在较高浓度（0.5倍IC₅₀）时则诱导细胞呈Caspase依赖性细胞凋亡,并具有浓度依赖性。结论 洛铂对鼻咽癌细胞具有明显的细胞毒作用,且呈浓度依赖性;其机制表现为双重作用,即在较低浓度时阻滞细胞于G₂期和在较高浓度时诱导细胞凋亡,这为洛铂用于鼻咽癌的临床治疗提供可能性。     

Silencing of the retinoid response gene TIG1 by promoter hypermethylation in nasopharyngeal carcinoma

Tazarotene-induced gene 1 (TIG1) and Tazarotene-induced gene 3 (TIG3) are retinoid acid (RA) target genes as well as candidate tumor suppressor genes in human cancers. In our study, we have investigated the expression of TIG1 and TIG3 in nasopharyngeal carcinoma (NPC). Loss of TIG1 expression was found in 80% of NPC cell lines and 33% of xenografts, whereas TIG3 was expressed in all NPC samples and immortalized nasopharyngeal epithelial cells. In order to elucidate the epigenetic silencing of TIG1 in NPC, the methylation status of TIG1 promoter was examined by genomic bisulfite sequencing and methylation-specific PCR (MSP). We have detected dense methylation of TIG1 5'CpG island in the 5 TIG1-negative NPC cell lines and xenograft (C666-1, CNE1, CNE2, HONE1 and X666). Partial methylation was observed in 1 NPC cell line HK1 showing dramatic decreased in TIG1 expression. Promoter methylation was absent in 2 TIG1-expressed NPC xenografts and the normal epithelial cells. Restoration of TIG1 expression and unmethylated alleles were observed in NPC cell lines after 5-aza-2'-deoxycytidine treatment. Moreover, the methylated TIG1 sequence was detected in 39 of 43 (90.7%) primary NPC tumors by MSP. In conclusion, our results showed that TIG1 expression is lost in the majority of NPC cell lines and xenografts, while promoter hypermethylation is the major mechanism for TIG1 silencing. Furthermore, the frequent epigenetic inactivation of TIG1 in primary NPC tumors implied that it may play an important role in NPC tumorigenesis.     

人结肠癌放射抗拒性细胞株的建立

目的应用连续照射的方法建立人结肠癌放射抗拒细胞株SW480-R,为研究人结肠癌放射抗拒的机制提供模型。方法用2Gv剂量的x射线照射人结肠癌SW480细胞株,每天1次,每周5d,分别照射不同周期后,按照细胞存活率筛选出放射抗拒细胞株SW480．R,并检测细胞的倍增时间。以细胞克隆形成实验检测细胞的放射敏感性,MTT法检测照射后不同时间点的细胞存活分数,流式细胞仪检测细胞的细胞周期分布,并分别与亲代结肠癌细胞株进行比较。结果经2Gy照射3周后细胞仍有存活,可作为放射抗拒细胞株的模型。SW480．R细胞株的倍增时间明显长于亲代SW480细胞株（脚．05）,SW480-R细胞株的放射抗拒l生增加,照射后12h的细胞存活率较SW480细胞株显著增高（98．40％US92．81％,P〈0．001）。流式细胞仪检测细胞周期显示,SW480一R细胞株的细胞周期分布与SW480细胞株不同,G2／M期明显增高。结论人结肠癌细胞株SW480每天经x射线照射2Gy,连续照射3周后可以得到具有放射抗拒细胞株SW480．R。此细胞株具有稳定的放射抗拒性,且与亲代细胞株有不同的细胞周期分布。     

不同转移特性的人鼻咽癌细胞株中Tiam-1表达及其意义

目的探讨Tiam-1在不同转移特性的人鼻咽癌细胞株中的表达,分析Tiam-1表达与鼻咽癌侵袭转移特性的关系。方法采用免疫组化SP-9000法和RT-PCR方法 ,分别从蛋白表达水平和mRNA水平检测Tiam-1在人鼻咽癌细胞5-8F、6-10B、C666-1和CNE2中的表达。结果①Tiam-1蛋白分布于人鼻咽癌细胞胞质中,在具有高转移特性的5-8F细胞中呈棕黄、棕褐色强表达,在没有转移特性的6-10B细胞中呈淡黄色弱表达或不表达,在具有一定转移特性的C666-1、CNE2细胞株中呈黄色中度表达。②Tiam-1mRNA在5-8F细胞中灰度密度比值为（0.817±0.040）,在6-10B细胞中为（0.103±0.015）,在C666-1、CNE2细胞株中分别是（0.383±0.025、0.497±0.047）,各灰度密度比值比较具有统计学差异（F=220.770,P〈0.05）,且与细胞株转移特性呈正相关（γs=0.852,P〈0.05）。结论 Tiam-1在不同转移特性的人鼻咽癌细胞株中呈现不同程度的表达,与细胞株转移特性密切相关。提示Tiam-1可作为鼻咽癌恶性程度及其预后的判断指标。     

X线反复照射人食管鳞癌细胞系KYSE-150的生物效应研究

目的 建立人食管鳞癌放射抗拒性细胞系,并检测肿瘤干细胞标志物的表达,以期了解肿瘤干细胞与放射抗拒性形成之间的关系.方法 分次照射建立人食管鳞癌放射抗拒性细胞系KYSE-150R,在相差显微镜下观察细胞形态学差异,用G显带法进行染色体分析.用成克隆实验验证KYSE-150和KYSE-150R细胞的放射敏感性差异,流式细胞术检测它们的细胞周期分布,Western Blotting法检测它们中肿瘤干细胞(CSCs)标志物β-catenin和Integrin-β_1的表达.结果 KYSE-150R细胞的群体倍增时间长于亲代细胞KYSE-150[(25.90±0.55)h:(23.62±0.23)h,t=6.62,P=0.00].KYSE-150R细胞的染色体数目增加,并观察到染色体畸变.KYSE-150R细胞SF_2、D_0、D_q及N值均高于KYSE-150细胞,Dn值比为1.21.流式细胞仪分析显示KYSE-150细胞照射后S期比例增加(45.35%±4.03%:55.09%±1.70%,t=-3.86,P=0.02),G_2+M期比例下降(9.91%±3.83%:1.15%±0.32%,t=3.95,P=0.02),而KYSE-150R则变化不大.Western Blotting结果 显示KYSE-150R中的β-catenin和Integin-β_1的表达量约为KYSE-150细胞的2倍.结论 新细胞系KYSE-150B比其亲本更具放射抗拒性,其含有的CSCs比例也较其亲本高,证明CSCs与放射抗拒性产生机制有关.     

放射抗拒性食管癌细胞株KYSE-150R上皮—间质转化特性鉴定

[目的]鉴定放射抗拒性食管癌细胞株KYSE-150R获得上皮—间质转化(EMT)表型。[方法]食管鳞状细胞癌细胞株KYSE-150经分次反复照射、单克隆培养,筛选出具有放射抗拒性细胞株KYSE-150R。克隆形成实验计算细胞存活率,拟合生存曲线并计算放射生物学参数。高倍显微镜下观察细胞形态学变化。采用RT-PCR、Western Blot和免疫荧光检测上皮表型标志物E钙黏蛋白(E-cad)、间质表型标志物波形蛋白(VIM)和转录因子Slug、Snail与Twist的表达。[结果]构建的食管癌细胞株KYSE-150R比其亲本对射线更加抗拒,经传代50代后仍保留放射抗拒性。放射抗拒的食管癌细胞株KYSE-150R发生EMT相符的形态学改变:细胞呈纺锤体状,极性消失。与母株相比,KYSE-150R中E-cad表达下降,VIM、Slug及Snail表达上调,Twist表达未见明显变化。免疫荧光染色证实细胞膜E-cad蛋白的丢失,上调的β-catenin移位至细胞核。[结论]放射抗拒的食管癌细胞株KYSE-150R获得了EMT表型,其与食管癌放射抗拒的形成有关。