自噬相关基因Beclin 1与肿瘤

自噬性细胞死亡是一种不同于凋亡、不依赖于caspase的程序性细胞死亡。研究发现自噬活性的变化、自噬性细胞死亡与恶性肿瘤的发生、发展有关。某些癌基因、抑癌基因参与了自噬活性的调节，其中对Beclin1研究较多，它作为自噬相关基因参与调节自噬活性，从而在肿瘤的发生、发展中发挥作用。现对Beclin1、自噬与肿瘤发生、发展关系的最新进展作一综述。     

自噬/苄氯素1调节因子1在自噬与凋亡中作用的研究进展

细胞凋亡(Ⅰ型程序性死亡)和自噬性细胞死亡(Ⅱ型程序性死亡)这2种细胞死亡方式可通过一些蛋白的相互作用而介导形成平衡对立状态.一方面,细胞凋亡由胱天蛋白酶(caspase,CASP)依赖性通路经内源性、外源性或内质网应激诱导途径予以控制,而死亡信号则可经这3种途径介导受损或感染细胞的清除[1-2].另一方面,细胞自噬由...     

高浓度葡萄糖通过下调自噬增加体外培养雪旺细胞的凋亡

目的 观察高浓度葡萄糖对雪旺细胞自噬活性的影响以及自噬对高糖条件下雪旺细胞增殖活性及凋亡的影响.方法 体外培养RSC96细胞,Western blot和免疫荧光法检测beclinl和caspase-3蛋白表达,MTT检测细胞增殖活性.结果 高浓度葡萄糖组RSC96细胞beclin1的表达减少(P＜0.05),细胞增殖活性降低(P ＜0.05,P＜0.01).自噬被抑制后加剧了高糖对细胞增殖活性的削弱作用(P＜0.01),同时增加了高糖促进caspase-3的活化作用(P＜0.01).结论 高浓度葡萄糖通过下调自噬活性增加细胞凋亡.     

皮肤黑色素瘤中自噬基因 Beclin 1和 MAP1 LC3的表达及意义

目的：检测自噬基因Beclin 1和MAP1LC3在皮肤黑色素瘤中的表达,探讨自噬与黑色素瘤的关系。方法采用免疫组化SP法检测85例标本(包括正常表皮、表皮痣、放射性生长阶段的黑色素瘤、垂直生长阶段的黑色素瘤和转移性黑色素瘤)中Beclin 1和MAP1LC3的表达。结果随着肿瘤的进展,瘤细胞胞质中 Beclin 1和 MAPLC3的表达水平显著下降( P <0．05)。正常表皮、表皮痣、放射性黑色素瘤、垂直性黑色素瘤和转移性黑色素瘤中Beclin 1、MAP1LC3的阳性率分别为100%、85%、58%、49．5%、17%,100%、95%、50%、44．4%、17%(P<0．05)。结论黑色素瘤中Beclin 1和MAP1LC3表达与肿瘤的进展呈负相关,且二者表达与预后因素有关。     

神经干细胞自噬与自噬机制研究现状

<正>自噬(autophagy)作为细胞内物质代谢的重要方式,是亚细胞膜内的结构发生动态变化,也是溶酶体介导细胞内蛋白质和细胞器降解的正常新陈代谢过程。细胞死亡包括坏死、凋亡和自噬三种形式。在细胞平衡合成和分解代谢过程中,通过自噬保持细胞内环境的稳定,使细胞自我更新,保持活力[1-4]。自噬不足则细胞衰老,过度则出现程序性细胞死亡     

缺氧诱导因子-1α参与缺氧条件下小胶质细胞的自噬和凋亡

目的:探讨缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1 alpha,HIF-1α)在缺氧诱导小胶质细胞自噬和凋亡中的作用。方法:体外培养大鼠小胶质细胞,缺氧处理后利用Iba1免疫组织化学法标记小胶质细胞;用RT-PCR检测缺氧后HIF-1αm RNA的表达;Western Blot检测HIF-1α和自噬标记物LC3的蛋白表达;TUNEL染色法检测细胞凋亡。针对大鼠HIF-1α基因序列构建特异的si RNA并转染小胶质细胞,检测缺氧后LC3表达与细胞凋亡的改变。结果:与对照组相比,缺氧后Iba1表达明显增强、HIF-1α和自噬标记物LC3-II表达上升(P0.05)、衡量细胞自噬水平的LC-II/LC3-I比值增高(P0.05),TUNEL+细胞百分数(35.6±5.9%)较对照组(6.8±1.2%)比较显著增加(P0.05);沉默HIF-1α表达后,LC3-II蛋白和LC-II/LC3-I比值均降低(P0.05)、TUNEL+细胞百分数(23.0±0.8%)较对照组(40.1±4.5%)比较亦显著减少(P0.05)。结论:HIF-1α参与缺氧条件下小胶质细胞的自噬和凋亡。     

下调lncRNA-H19表达促进人瘢痕疙瘩成纤维细胞凋亡和自噬

目的 探讨下调长链非编码RNA-H19(lncRNA-H19)表达对人瘢痕疙瘩成纤维细胞系凋亡和自噬的影响,并初步探讨其作用机制.方法 取人类瘢痕成纤维细胞系(KFs)及健康人皮肤成纤维细胞系(HDFs),将KF细胞感染lncRNA-H19F低表达腺病毒(si-lncRNA-H19)及不含si-lncRNA-H19的空...     

乳腺癌中自噬相关基因LC3与凋亡相关基因XIAP的表达及意义

目的观察自噬相关基因LC3和凋亡相关基因XIAP在乳腺癌组织中的表达,探讨其表达与乳腺癌临床病理特征的关系。方法采用组织芯片平台,应用免疫组化法检测121例乳腺癌组织中LC3、XIAP的表达,并结合临床病理因素进行分析。结果乳腺癌组织中,LC3和XIAP的高表达率分别为84.2%(102/121)和90.9%(110/121)。LC3的高表达与HER-2过表达呈显著正相关(P0.05),XIAP的高表达与Ki-67和HER-2过表达呈显著正相关(P均0.05),但均与患者年龄、肿瘤大小、组织学分级、TNM分期、淋巴结转移、ER和PR表达无关(P均0.05)。经Spearman秩相关检验,LC3和XIAP在乳腺癌中的表达呈显著正相关(P0.05)。结论在乳腺癌中,高自噬活性与低凋亡现象并存,HER-2可能参与其中。     

中药热敷颈椎病模型兔椎间盘自噬及凋亡相关因子的表达

背景：中药热敷作为治疗颈椎病的常用方法,具有操作便捷、临床疗效稳定、不良作用少的优势,但其效应机制尚不明确。目的：观察中药热敷对颈椎病模型兔椎间盘自噬及凋亡相关因子的影响,探讨其治疗颈椎病的作用机制。方法：将24只新西兰兔随机分为对照组、模型组、中药热敷组,每组各8只。除对照组外,其余两组建立颈椎病兔模型。通过对比造模前、后颈椎影像学变化,观察是否有颈椎生理曲度变化、椎间孔变小、椎间隙变窄以及骨赘生成等改变,作为造模评价标准。动物模型建成后,中药热敷组予中药热敷干预治疗,20 min/次,每5 min更换一次药包,每日治疗一次,疗程共20次;其余两组正常饲养,不做干预。通过苏木精-伊红染色法观察各组兔颈椎间盘组织形态改变;采用TUNEL法检测颈椎间盘细胞凋亡情况;运用qRT-PCR法测定颈椎间盘组织Bcl-2、Beclin1、微管相关蛋白1轻链3 mRNA的相对表达水平。结果与结论：(1)模型组兔颈椎间盘组织形态学评分比对照组高(P <0.05),中药热敷组椎间盘组织形态学评分比模型组低(P <0.05);(2)模型组兔颈椎间盘中细胞凋亡率较对照组增高(P <0.05...     

沉默信息调节因子1对缺氧心肌细胞凋亡和自噬的影响

目的:分析沉默信息调节因子1(Sirt1)对缺氧条件下心肌细胞凋亡和自噬的影响。方法:将心肌H9c2细胞分为Control组、Hypoxia组(缺氧处理24h)、NC+Hypoxia组(转染阴性对照并缺氧处理24h)和Sirt1+Hypoxia组(转染Sirt1过表达载体并缺氧处理24h)。以qRT-PCR和Western blot测定心肌细胞中Sirt1mRNA和蛋白表达水平,MTT方法评估细胞存活率,流式细胞术测定细胞总凋亡水平,Western blot检测凋亡蛋白Bax、Cleaved Caspase-3水平和自噬蛋白LC3-Ⅱ/Ⅰ、Beclin-1水平。结果:与Control组比较,Hypoxia组细胞中Sirt1mRNA和蛋白表达水平降低,细胞存活率降低,细胞凋亡率和Bax、Cleaved Caspase-3蛋白水平升高,LC3-Ⅱ/Ⅰ、Beclin-1蛋白水平降低(P0.05)。与NC+Hypoxia组比较,Sirt1+Hypoxia组细胞中Sirt1mRNA和蛋白表达水平升高,细胞存活率升高,细胞凋亡率和Bax、Cleaved Caspase-3蛋白水平降低,LC3-Ⅱ/Ⅰ、Beclin-1蛋白水平升高(P0.05)。结论:Sirt1可抑制缺氧心肌细胞凋亡并诱导细胞自噬。     

PTEN与Beclin1在子宫内膜异位症的表达和临床意义

目的 考察PTEN与Beclin1在子宫内膜异位症的表达和临床意义.方法 采用免疫组化法测定40例子宫内膜异位症患者在位内膜、异位内膜和20例正常对照的PTEN与Beclin1表达水平.并考察不同病理资料与两者表达水平关联.结果 正常对照、在位内膜、异位内膜三者的PTEN与Beclin1表达水平均逐渐下降(P＜0.05).其中PTEN在正常对照、在位内膜和异位内膜的增生期、分泌期表达均无显著差异(P＞0.05).但Ⅲ-Ⅳ期表达率低于Ⅰ-Ⅱ期患者(P＜0.05).Beclin1在在位内膜和异位内膜的增生期、分泌期表达均无显著差异(P＞0.05),却在正常对照中具有显著差异(P＜0.05),同时Ⅲ-Ⅳ期表达率低于Ⅰ-Ⅱ期患者(P＜0.05).PTEN与Beclin1在子宫内膜异位症组织中表达水平正相关.结论 PTEN与Beclin1的低表达与子宫内膜异位症的发生和发展相关,但其具体作用机制值得进一步深入研究.     

地塞米松诱导的危重病性肌病大鼠骨骼肌Beclin1、LC3的表达

目的 　观察地塞米松对大鼠危重病性肌病（CIM）比目鱼肌细胞自噬相关因子Beclin1和LC3表达的影响,探讨地塞米松诱导的大鼠危重病性肌病的可能机制。 方法　将健康SD大鼠分为对照组和实验组;实验组又分为7,9,11d 3个时相点（n=10）。实验组采用5mg/kg地塞米松连续腹腔注射,每天1次,对照组腹腔注射等量的生理盐水。采用足迹法判定肌功能缺损情况。利用免疫组化和Western blot检测比目鱼肌细胞自噬相关因子Beclin1和LC3的表达情况。 结果　与对照组相比,实验组大鼠出现不同程度肌肉功能缺损症状,以11d时大鼠缺损程度最为严重。Western blot结果显示,对照组或可见微弱的Beclin1、LC3阳性表达,随着时间延长,实验组可见明显的Beclin1、LC3阳性表达,以11d时相点表达最为明显。免疫组化结果也证实了同一趋势。 结论　地塞米松诱导的大鼠CIM可能通过激活Beclin1和LC3的表达从而发挥对细胞自噬的调节作用。     

TAp73和Beclin1在人骨肉瘤中表达及其临床意义

目的检测抑癌基因TAp73与自噬相关因子Beclin1在人骨肉瘤中的表达,探讨TAp73与肿瘤自噬的关系。方法采用免疫组织化学SP法检测TAp73、Beclin1在48例骨肉瘤患者的瘤体组织中的表达,结合患者的临床资料进行相关性分析。结果 TAp73在人骨肉瘤组织中的阳性率54.17%,Beclin1的阳性率为62.50%,TAp73阳性表达,其Beclin1表达程度较高(Z=-2.146,P=0.032)。在人骨肉瘤中TAp73的表达程度与Beclin1的表达程度呈正相关(r=0.470,P=0.001)。TAp73、Beclin1阳性表达的患者总体生存率优于阴性表达(80.8%vs 50.0%,P=0.000;80.0%vs 44.4%,P=0.001)。TAp73、Beclin1不同表达程度与患者的生存时间呈正相关(r=0.696,P=0.00;r=0.372,P=0.009)。结论在人骨肉瘤中TAp73可能与骨肉瘤中Beclin1依赖的肿瘤自噬活性上调有关。检测TAp73和Beclin1在人骨肉瘤中的表达水平有助于患者临床预后判断。     

大肠癌中Beclin1、LC3和mTOR的表达及意义

目的：探讨Beclin1、LC3和mTOR在大肠癌中的表达及意义。方法采用免疫组化EnVision法、Western blot和RT-PCR技术检测Beclin1、LC3和mTOR在大肠癌中的表达,并结合临床病理因素进行分析。结果 Beclin1、LC3和mTOR在大肠癌中的阳性率分别为90．50%、87．19%和46．28%,均明显高于癌旁组织( P<0．05),且LC3蛋白在中+低分化大肠癌中的表达(91．34%、89．58%)高于高分化大肠癌(77．61%),在有淋巴结转移组的表达(95．41%)高于无淋巴结转移组(80．45%), mTOR在有淋巴结转移组的表达(57．80%)高于无淋巴结转移组(35．33%)(P<0．05),Beclin1过表达与大肠癌分化程度和淋巴结转移均无关(P>0．05)。 LC3与Beclin1在大肠癌中表达呈正相关(rs =0．593,P<0．01),与mTOR表达呈负相关(rs =-0．165,P<0．01),Beclin1和mTOR表达之间无明显相关性(P>0．05)。 Kaplan-Meier生存分析显示,Beclin1和LC3均阳性、mTOR阴性、无淋巴结转移的大肠癌患者5年生存率高于Beclin1和LC3均阴性、mTOR阳性及有淋巴结转移的患者。多因素分析显示,LC3、mTOR和淋巴结转移是影响大肠癌预后的独立因素。 RT-PCR和Western blot检测结果显示：Beclin1、LC3和mTOR mRNA和蛋白表达水平均明显高于癌旁组织(P<0．05)。结论自噬相关基因Beclin1、LC3和mTOR的异常表达可能与大肠癌的发生、发展及预后相关;联合检测Beclin1、LC3和mTOR在大肠癌中的表达有助于评估进展程度和预后判断。     

Expression and clinical significances of Beclin1, LC3 and mTOR in colorectal cancer

Autophagy is related to cancer and other diseases, and compromised autophagy could promote chromosome instability associated with carcinogenesis and tumor progression. The role of autophagy in the growth and metastasis of colorectal cancer (CRC) remains poorly understood. Beclin1 mediates autophagic initiation, and LC3 is a specific marker for autophagy. Inactivation of mTOR caused by cellular hypoxia or energy deficiency induces autophagic activity. This study aims to examine the expression and clinical significance of these proteins in CRC. Immunohistochemistry results showed that the positive expression rates of Beclin1, LC3, and mTOR in cancer tissues were 90.50%, 87.19%, and 46.28%, respectively, which were higher than those in adjacent tissues (P < 0.05). Differentiation degree and lymph node metastasis were associated with LC3 overexpression (P < 0.05) but not with Beclin1 (P > 0.05). Lymph node metastasis was also related to mTOR. Spearman analysis results showed that LC3 expression was positively correlated with Beclin1 but negatively correlated with mTOR (r = 0.593 and -0.165, respectively; P < 0.01). Beclin1 expression was also not associated with mTOR (P > 0.05). Survival analysis further indicated that LC3, mTOR, and lymph node metastasis were independent prognostic factors in CRC. Real-time PCR results and Western blot indicated that Beclin1, LC3, and mTOR expression in CRC was significantly higher than that in adjacent tissues (P < 0.01). The aberrant protein expression may be associated with the development and progression of CRC. The LC3 and mTOR genes must be simultaneously detected to evaluate progression and prognosis of CRC.     

前列腺癌组织中Apaf-1和Caspase-9表达及临床意义

目的检测凋亡蛋白酶活化因子-1(Apaf-1)和细胞凋亡蛋白酶-9(Caspase-9)在前列腺癌(prostatic carcinoma,PCa)和良性前列腺增生(benign prostatic hyperplasia,BPH)中的表达,探讨Apaf-1、Caspase-9表达与PCa临床病理特征的关系。方法采用免疫组化SP法检测45例PCa和60例BPH组织中Apaf-1和Caspase-9蛋白的表达。结果 PCa组中Apaf-1和Caspase-9的阳性率明显低于BPH组,差异有统计学意义(P<0.05);Apaf-1和Caspase-9的表达与患者年龄及远处转移无关,与病理分级及临床分期相关(P<0.05)。结论 Apaf-1和Caspase-9在PCa组织中低表达,二者呈正相关(rs=0.645,P<0.01),Apaf-1和Caspase-9可能与PCa的发生、发展密切相关。     

Caspase-9和caspase-3在创伤后应激障碍大鼠海马神经元的表达及意义

目的:探讨caspase-9和caspase-3在创伤后应激障碍(PTSD)大鼠海马神经元中的表达及意义.方法:采用国际认定的无连续单一应激(SPS)方法刺激大鼠建立PTSD大鼠模型,取SPS刺激后1、4、7、14、28 d组和正常对照组.应用免疫组织化学、免疫荧光双标、激光共聚焦显微镜技术和免疫印迹法检测caspase-9和caspase-3蛋白的表达.结果:与正常对照组相比,caspase-9活性于SPS刺激后1 d升高,SPS刺激后7 d再次上调并达到高峰,之后逐渐下降.Caspase-3活性于SPS刺激后7 d达到高峰,之后逐渐下降.结论:caspase-9和caspase-3共同参与了PTSD大鼠海马神经元凋亡的调控.     

重构型人caspase-7基因对肿瘤细胞的促凋亡作用

目的观察重构型caspase-7的表达对肿瘤细胞的凋亡诱导作用。方法用反转录PCR方法获取野生型人caspase-7基因,用重组PCR构建了两种重构型caspase-7基因,即大、小亚基序列次序颠倒的rev-ca2spase-7以及N-端带有绿脓杆菌外毒素转膜结构域部分肽段的融合蛋白(PEⅡ=rev-caspase-7)的基因。将两种重构型caspase-7基因克隆入表达载体pIRES2-EGFP,脂质体法转染肿瘤细胞,通过荧光显微镜观察、电镜观察、MTT检测等方法检测重组基因的表达及其对肿瘤细胞的促凋亡活性。结果 成功获得了caspase-7基因,构建了rev-caspase-7基因和rev-caspase-7与绿脓杆菌外毒素(PE)转膜肽段的融合蛋白(PEⅡ-rev-caspase-7)基因及其表达载体。将两种重构型caspase-7转染肿瘤细胞后,证实细胞发生凋亡。结论两种重构型caspase-7均可以有效地诱导肿瘤细胞发生凋亡。     

口腔癌患者中 SOX9、 Beclin1 的表达与预后转归的关系

目的 探讨口腔癌患者中性别决定基因盒 9 ( sex-determining region Y box 9, SOX9)、 自噬基因 (Beclin1) 的表达与预后转归的关系。 方法 选取 2017 年 5 月至 2018 年 5 月河北省保定市第一中心医院口 腔科收治的 38 例口腔癌患者, 取其口腔癌组织标本 38 份和癌旁组织标本 30 份, 检测患者口腔癌组织中 SOX9、 Beclin1 的表达情况。 分析 SOX9、 Beclin1 阳性表达与临床病理因素的关系, 采用 COX 分析影响口腔 癌预后转归的危险因素, 分析 SOX9、 Beclin1 与预后转归的关系。 结果 口腔癌组织中 SOX9 和 Beclin1 阳 性表达率显著高于癌旁正常组织 (P< 0. 05), SOX9、 Beclin1 阳性表达与年龄、 性别无关 (P > 0. 05), 与 肿瘤分期、 分化程度和淋巴转移相关 (P< 0. 05)。 对口腔癌预后影响因素采取 Cox 逐步回归分析, 结果显 示肿瘤分期、 淋巴转移、 SOX9、 Beclin1 是影响口腔癌患者预后转归的独立危险因素 (P< 0. 05)。 SOX9 阳 性及阴性表达患者无进展生存期分别为 10 ~ 18 月 [平均 (12. 5 ± 2. 4) 月]、 14 ~ 23 月 [平均 (17. 5 ± 3. 1) 月]; Beclin1 阳性及阴性表达患者无进展生存期分别为 11 ~ 18 月 [平均 (13. 7 ± 2. 4) 月]、 13 ~ 22 月 [平均 (15. 7 ± 3. 1) 月]。 SOX9、 Beclin1 阳性表达患者无进展生存期显著低于阴性表达患者 (c²=7.969、3.315,P＜0.05）。结论 口腔癌患者中 SOX9、 Beclin1 呈阳性表达, 其表达与预后转归密切相关, 口腔癌患者 SOX9、 Beclin1 表达越高预后转归越差。