IFNγ防治大鼠胆总管结扎所致肝纤维化的实验研究

目的：了解IFNγ对持续肝外性淤胆所致肝纤维化的作用。方法：制作大鼠持续肝外性淤胆模型,用药组于胆管结扎同时每日肌注IFNγ 5×104 U,用药2周;对照组则仅行胆管结扎而不用药。2周后分别测定血清生化指标、肝纤维化指标及肝能量代谢有关指标。结果：IFNγ可改善血清生化指标(P＜0.01或P＜0.05)。在组织学表现上,用药组肝纤维化程度显著低于单纯结扎组(P＜0.01)。用药组大鼠淤胆后肝羟脯氨酸及血清透明质酸水平升高明显受抑(P＜0.01)。肝ATP及CP测定显示淤胆合并用药时两者均保持于较高水平。结论：IFNγ可有效抑制大鼠持续肝外性淤胆所致肝纤维化     

干扰素α对实验大鼠肝纤维化的治疗作用

目的探讨干扰素α(IFNα)对肝纤维化的治疗作用.方法雄性SD大鼠40只,采用复合因素造成肝硬化模型,随机取12只作为A组(模型组),余大鼠分为B组(IFNα治疗组)12只,每日肌注IFNα 1×105U共6W和C组(对照组)12只,每日肌注生理盐水共6W.取肝脏组织行光镜和电镜下观察病理变化.结果 IFNα治疗组肝纤维化程度明显减轻,激活状态的星状细胞(HSC)数量明显减少,并出现凋亡现象.结论 IFNα对肝纤维化有治疗作用.     

腹腔持续注射血管紧张素(-1-7)对胆管结扎大鼠肝纤维化的抑制作用

目的探讨血管紧张素(1-7)[Ang-(1-7)]对胆管结扎(BDL)大鼠肝纤维化的抑制作用。方法 18只Wister雄性大鼠随机分为假手术(SHAME组)组,BDL组和Ang-(1-7)治疗组。假手术组:行开腹术再关腹,在腹腔埋注射泵,以25μg.kg-1.h-1的速度持续注射生理盐水;BDL组:开腹结扎胆总管建立肝纤维化模型,在腹腔埋注射泵,以25μg.kg-1.h-1的速度持续注射生理盐水;Ang-(1-7)治疗组:BDL建立肝纤维化模型,同时在腹腔埋注射泵,以25μg.kg-1.h-1的速度持续注射Ang-(1-7)。4周后宰杀动物、取肝组织,行Masson胶原染色,肝纤维化评分,测定羟脯氨酸含量,免疫组织化学检测α-肌动蛋白(α-SMA)的表达。结果与BDL组相比,Ang-(1-7)治疗组肝纤维化评分(2.33±0.52 vs 5.17±0.75)、胶原面积(23.71±3.43 vs 89.77±9.92)、羟脯氨酸含量(0.36±0.03 vs 0.52±0.04)、α-SMA的表达(54.11±17.55 vs 191.84±31.72)均减少,有统计学意义(P<0.01)。结论Ang-(1-7)对胆总管结扎所致的肝纤维化具有抑制作用。     

干扰素-α对肝纤维化大鼠肝星状细胞凋亡的诱导作用

目的：研究干扰素－α（IFN－α）对肝纤维化大鼠肝星状细胞（HSC）凋亡的影响。方法：用四氯化碳（CCl4)复制肝纤维化模型大鼠32只，随机分为A，B，C3组。A组：6只，造模结束即处死；B组14只，皮下注射－α10万／100g8周，C组12只，注射等量的生理盐水8周。治疗结束时用TUNEL法检测各组肝星状细胞凋亡情况；HE染色观察肝组织学变化；免疫组化染色检测中间丝蛋白（Desmin,),α-平滑肌肌动蛋白（α－SMA），I型胶原，转化生长因子1（TGF－β1）等指标。结果：B组较其他两组肝组织学明显改善，肝纤维化程度减轻，I型胶原，TGF－β1的显色指数降低；B组肝星状细胞明显减少，凋亡指数增加，与C组相比，差异有统计学意义。结论：IFN－α在体内可诱导HSC凋亡，这可能是IFN－α抗肝纤维化的作用机制之一。     

双氢青蒿素对胆管结扎致大鼠肝纤维化的治疗作用研究

目的 探究双氢青蒿素（Dihydroartemisinin,DHA）对胆管结扎（Bile duct ligation, BDL）所致的大鼠肝纤维化的初步治疗作用。方法 采用BDL诱导大鼠肝纤维化模型,DHA（14mg/kg）及阳性药物秋水仙碱（0.1mg/kg）干预处理,末次给药24h后,取血清检测ALT、AST、Bilirubin;HE染色、马松染色和天狼猩红染色检测肝组织病理变化;Western blot检测肝组织中肝星状细胞（HSC）活化指标α-SMA与α1(Ⅰ) collagen的表达;免疫荧光检测肝组织TGFβ-RⅡ的表达。体外培养活化的HSC-T6,并用DHA干预处理,Western blot检测α-SMA、α1(Ⅰ) collagen以及TGFβ-RⅡ、p-Smad2、Smad2的表达。结果 血清学指标结果显示,与空白对照组比较,模型组SD大鼠ALT、AST、Bilirubin显著升高,DHA能降低血清中ALT、AST、Bilirubin水平;HE、马松染色、天狼猩红染色结果显示,与模型组比较,DHA能够明显改善肝脏病理组织结构以及胶原纤维的沉积;Western blot结果显示,DHA还可抑制HSC活化的标志物α-SMA、α1(Ⅰ) collagen以及TGFβ-RⅡ、p-Smad2的表达。结论 DHA对BDL诱导的肝纤维化具有显著的保护作用,这一效应主要与其抑制HSC活化以及调控TGF-βⅡ/Smad2信号通路相关。      

干扰素对慢性乙型肝炎肝纤维化的疗效观察

目的观察干扰素（IFNα-1b）在治疗慢性乙型病毒性肝炎时的抗肝纤维化的疗效,并探讨其机制。方法40例慢性乙型病毒性肝炎患者随机分为治疗组及对照组,治疗组应用IFNα-1b治疗,对照组应用一般护肝治疗。用放免法测定治疗前后3～6个月的肝纤维化血清学指标：血清透明质酸（HA）、Ⅲ型前胶原（PCⅢ）、Ⅳ型胶原（Ⅳ-C）、层连素（LN）。结果HA、PCⅢ、Ⅳ-C、LN在治疗后3至6个月均较治疗前明显下降,尤以6个月更明显。结论IFNα-1b治疗慢性乙型病毒性肝炎确有抗肝纤维化作用,且随治疗的时间延长而增加疗效。     

软肝饮对免疫性肝纤维化大鼠胶原代谢水平的影响

目的：建立大鼠免疫损伤性肝纤维化的实验模型,研究中药复方软肝饮对血清层粘;连蛋白(Laminin,LN)、透明质酸(Hyaluronic acid,HA)、血清Ⅲ型前胶原(Precollagen typeⅢ,PCⅢ)、肝脏羟脯氨酸(Hydroxyproline,Hyp)含量的影响,探讨其抗肝纤维化的作用机制。方法：在以人血白蛋白(HSA)诱导的免疫损伤性肝纤维化大鼠模型基础上,软肝饮小剂量(1g／kg),大剂量(2g／kg)灌胃给药,连续8周,以鳖甲软肝片和秋水仙碱为阳性对照药;放射性免疫方法测定大鼠血清中HA、LN、PCⅢ含量;化学法测定肝脏羟脯氨酸含量。结果：软肝饮两个剂量组可明显降低HSA诱导免疫性肝纤维化大鼠模型血清中HA、LN、PCⅢ的含量,同时可降低大鼠肝脏中羟脯氨酸的含量。结论：软肝饮通过对肝脏胶原物质代谢的影响而产生抗肝纤维化的治疗作用。     

大鼠免疫性与淤胆性肝纤维化发病机制比较

目的大鼠肝脏长期暴露于猪血清后可出现免疫损伤及随后发生的肝纤维化,而胆总管结扎后亦可诱导大鼠发生胆汁淤积性肝损伤,最终发生肝纤维化。这两种损伤后肝脏纤维化的发生、发展及机制均不同。本研究比较这两种不同处理后肝脏损伤的发生发展,探讨炎症与纤维化形成之间的关系。方法(1)通过给大鼠腹腔注射猪血清(IPS)(3ml/kg,1次/周,连续12周)诱导慢性肝纤维化(IPS组)。通过结扎胆总管诱导急性淤胆性肝纤维化(BDL组);(2)采用Knodell组织学评分评价肝脏组织学改变;(3)采用抗αSMA抗体、抗ED1抗体、抗CK7抗体、抗CD45抗体对肝脏进行免疫荧光染色;(4)采用实时定量PCR技术分别检测肝脏中与炎症相关的细胞因子,包括白介素1β(IL-1β)、白介素6(IL-6)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、巨噬细胞炎性蛋白1(MIP-1)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、受激活调节正常T细胞表达和分泌因子(RANTES)、转化生长因子β(TGF-β)、血小板衍生生长因子A(PDGF-A);与纤维化相关的细胞因子,包括I型胶原蛋白(col-1)、α平滑肌肌动蛋白(αSMA)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、金属...     

姜黄素对实验性肝纤维化大鼠肝损伤的保护作用

目的:观察姜黄素对实验性肝纤维化大鼠肝损伤的保护作用,并探讨其作用机制。方法:采用胆管结扎法诱导大鼠肝纤维化模型,将21大鼠随机分为假手术组(不建模,只给予生理盐水)、肝纤维化模型组(建模后给予生理盐水)和姜黄素给药组(建模后给予姜黄素400 mg·kg^-1),每组7只,给药2周后检测大鼠血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)活性和总胆红素(Tbil) 水平;HE染色观察大鼠肝脏组织病理形态学;Massion染色观察大鼠肝脏组织胶原沉积;Western blotting法检测大鼠肝脏组织中转化生长因子β1 (Tgf-β1)和 α-平滑肌肌动蛋白(α-Sma)表达水平。结果:与假手术组比较,肝纤维化模型组和姜黄素给药组大鼠血清中ALT、AST活性和Tbil水平明显升高(P<0.05);与肝纤维化模型组比较,姜黄素给药组大鼠血清中ALT、AST活性和Tbil水平明显降低 (P<0.05)。肝纤维化模型组大鼠肝脏组织明显破环,大量炎症细胞浸润、胶原沉积及胆管增生,姜黄素给药组大鼠肝纤维病理变化明显减轻。Western blotting 检测,与假手术组比较,肝纤维化模型组大鼠肝脏组织中Tgf-β1和 α-Sma蛋白表达水平升高(P<0.05);与肝纤维化模型组比较,姜黄素给药组大鼠肝脏组织中Tgf-β1和α-Sma蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论:姜黄素有治疗肝纤维化的作用,有望成为预防和治疗胆汁淤积性肝纤维化的药物。     

施普瑞对大鼠实验性肝纤维化的防治作用

为观察施普瑞对大鼠实验性肝纤维化的防治作用。采用40%CCl_4诱导大鼠肝纤维化。实验分为正常对照组、CCl_4组及施普瑞组。施普瑞组每公斤饲料加入螺施藻精粉50.4g。共12周。观察肝脏组织学,肝脏羟脯氨酸含量和血清Ⅲ型前胶原肽(PC—Ⅲ)及透明质酸(HA)水平。结果施普瑞组大鼠肝纤维化程度、PC—Ⅲ、HA水平及肝羟脯氨酸含量明显低于CCl_4组(P<0.05或<0.01)。结果提示施普瑞对实验性肝纤维化有防治作用。     

进展性大鼠肝纤维化组织中整合素αVβ3受体和血小板内皮细胞黏附分子的表达

目的 探讨整合素αVβ3和血小板内皮细胞黏附分子(CD31)表达与肝纤维化进展和间质重建的关系.方法 硫代乙酰胺(TAA)腹腔注射和胆总管结扎(BDL)建立两种大鼠肝纤维化模型,TAA组和BDL组每组8只,分别在第3、9周末和第2、4周末取材.肝组织切片天狼猩红染色和计算机图像分析,整合素αVβ3、CD31免疫化学和荧光染色.整合素αVβ3与α-平滑肌肌动蛋白(SMA)荧光染色双重染色及激光共聚焦观察.实时定量PCR和Western印迹分析肝组织中整合素αVβ3、CD31的相对定量表达.结果 肝纤维化中αVβ3表达范围扩大并与α-SMA表达部位一致,CD31在肝血窦、扩大的汇管区和纤维隔表达明显增加,伴有血管新生.模型组和对照组比较肝组织中αVβ3、CD31表达水平差异均有统计学意义(TAA组F=28.66、P＜0.01,F=19.62、P＜0.01和BDL组F=32.60、P＜0.01,F=42.36、P＜0.01).TAA 3周和9周整合素αVβ3和CD31 mRNA的△Ct值分别为5.70±0.25、5.50±0.18和4.40±0.25、4.00±0.18.BDL组1周和4周分别为5.60±0.24、5.30±0.14和4.20±30.16、3.80±0.23,表达增加和纤维化进展一致.结论 肝纤维化进展中整合素αVβ3表达水平增加与星状细胞活化和血管新生有关,并与间质重建程度平行.     

阻塞性黄疸大鼠肝功能和病理形态学研究

目的:探讨胆管阻塞对大鼠肝脏功能和病理形态学的影响.方法:60只健康雄性SD大鼠随机分为6组:胆总管结扎组(BDL,n=50)和假手术组(n=10,仅游离胆总管不予结扎).BDL组据结扎持续时间又分为BDL3、BDL7、BDL14、BDL28和BDL42组(每组10只),分别于术后第3、7、14、28、42日测定血清总胆红素(TBIL)、直接胆红素(DBIL)、总胆汁酸(TBA)、谷丙转氨酶 (ALT)等肝功能指标,并观察肝脏组织病理形态.假手术组于术后7 d行上述检测.结果:与假手术组相比,BDL组大鼠肝脏功能指标明显改变,血清TBIL、DBIL、TBA值在阻塞早期(BDL3 或BDL7 组)为最高,后呈下降趋势,至实验末期(BDL42组)时仍高于对照组;ALT等酶学指标也有类似变化.BDL组大鼠的主要病理形态学改变为肝内小胆管增生和肝纤维化.结论:大鼠肝脏功能阻塞早期即发生明显的损害,机体可产生一定的代偿以改善肝功能,但持续存在的胆管阻塞最终导致肝纤维化.大鼠阻塞性黄疸期内病理形态学的改变显示其肝功能测定值并不能反映其肝脏组织的实际损害程度.     

苦参素穴位注射对肝纤维化防治及对肝组织金属蛋白酶组织抑制因子2表达影响

目的：观察苦参素足三里（OMZSL）注射预防及治疗大鼠肝纤维化的疗效及对肝组织中TIMP-2表达的影响。方法：采用四氯化碳诱导大鼠肝纤维化模型，SD大鼠35只，随机分为5组：正常对照组、模型对照组、苦参素腹腔注射（OMip）对照组、OMZSL注射治疗组、OMZSL注射预防组。实验至10周末，测定血清ALT、AST、TBA、白蛋白（ALB）及肝组织中总蛋白（TP）水平。光镜、电镜观察肝细胞结构和肝纤维化程度；RT-PCR法检测肝组织中基质金属蛋白酶组织抑制因子-2（TIMP-2）mRNA的表达。结果：OMZSL注射预防与治疗给药均能明显降低四氯化碳诱导肝纤维化大鼠ALT、AST、TBA含量，增加ALB及TP水平，（P〈0．05，P〈0．01）。病理学观察，OMZSL注射防、治组大鼠肝组织病理改变明显减轻，假小叶结构明显减少；且OMZSL预防组肝纤维化程度轻于治疗组。OMZSL防、治组肝组织中TIMP-2mRNA的表达显著低于模型对照组（P〈0．05，P〈0．01）。结论：OMZSL注射对四氯化碳诱导的肝纤维化有较好的预防及治疗作用，其部分机制是通过保护肝细胞，减少TIMP-2mRNA的表达，促进细胞外基质的降解，抑制细胞外基质沉积，从而减轻或逆转肝纤维化。     

螺内酯对肝纤维化大鼠肝窦血管生成的抑制作用

摘要：目的探讨螺内酯对肝纤维化大鼠肝窦血管生成的抑制作用。方法雄性Wistar 大鼠24 只,随机分为3 组,每组8 只大
鼠。分组如下：假手术组（Sham 组）;胆总管结扎组（BDL 组）,予行胆总管结扎术;螺内酯治疗组（BDL+SP组）,于手术后第2天
给予螺内酯20 mg/kg灌胃处理,1次/d。于4周后取材。Masson三色染色检测胶原和大鼠的肝组织学改变。运用实时荧光定量
聚合酶链反应（Real time-qPCR）检测各组血管内皮生长因子A（VEGF-A）mRNA的表达。运用免疫组织化学技术检测各组血
管性假血友病因子（vWF）的表达。结果BDL+SP组纤维化程度较BDL组低［(2.84±0.44) vs (19.73±3.54), P=0.00］,差异有统
计学意义;免疫组织化学结果显示：BDL组vWF表达较Sham组增高［(3.08±0.17) vs (0.98±0.11), P=0.00］,BDL+SP组较BDL组
表达下降［(1.15±0.09) vs (3.08±0.17), P=0.00］,差异有统计学意义;在BDL组VEGF-A mRNA的表达增加,BDL+SP组则表达
下降［(0.71±0.12) vs (1.75±0.15), P=0.00］,差异有统计学意义;且各分组中VEGF-A mRNA的表达与vWF表达呈现显著正相关
关系（r=0.890, P=0.000）。结论螺内酯通过抑制肝脏VEGF-A mRNA的表达抑制肝窦毛细血管生成。
     

保肝宁对肝纤维化大鼠瘦素及瘦素受体的影响

目的 探讨保肝宁抗肝纤维化的作用机制.方法 采用复合因素建立肝纤维化大鼠模型,采用同位素放射免疫分析法检测血清瘦素水平.用免疫组化方法观察保肝宁对肝纤维化大鼠肝组织瘦素、瘦素受体表达的影响.结果 与正常组比较,模型组及各药物组血清瘦素水平均明显升高(P＜0.01).与模型组比较,保肝宁药物组血清瘦素水平明显下降,差异有显著性意义(P＜0.01),保肝宁明显抑制模型大鼠肝组织瘦素、瘦素受体的表达.与模型组比较,差异有显著性意义(P＜0.01).结论 保肝宁可有效防治大鼠肝纤维化,其作用机制可能与通过降低血清瘦素水平,抑制模型大鼠肝组织瘦素、瘦素受体的表达密切相关.     

干扰素β—1α治疗慢性丙型肝炎对肝纤维化的影响

OBJECTIVE: To access the effect of pegylated interferon (PEGIFN) beta-1a on the reduction of liver fibrosis in chronic hepatitis C (HVC). METHODS: Twenty-one patients with chronic HVC were divided into two groups randomly and treated with recombinant human PEGIHN-beta-1a (n = 13) or PEGIHN-beta-1a plus ribavirin (RBV) (n = 8) for 24 weeks, and then followed up for another 24 weeks. The clinical manifestations were observed and the clinical effects were evaluated. Biopsy was conducted before and after the treatment to analyze the histological activity index (HAI) and staging of fibrosis according the modified Knodell scoring system. Immunohistochemical analysis was used to examine the levels of alpha-smooth muscle actin (alpha-SMA), marker of activation of hepatic stellate cells (HSCs), and collagen type III in the HSCs. RESULTS: Sustained viral response (SVR) was achieved in 7 patients, and end-of-treatment virologic response (ETVR) was achieved in 9 patients. The HAI after treatment was 4.3 +/- 2.2, significantly lower than that before treatment (6.6 +/- 2.2, t = 4.77, P < 0.01). The fibrosis score after treatment was 1.1 +/- 1.1, significantly lower than that before treatment (1.7 +/- 1.2, t = 1.92, P < 0.05). The alpha-SMA score after treatment was 14 +/- 8, significantly lower than that before treatment (20 +/- 11, t = 2.15, P < 0.05). The integrated light density of collagen type III after treatment was 10 +/- 10, significantly lower than that before treatment (16 +/- 12, t = 1.83, P < 0.05). The improvement levels of fibrosis, alpha-SMA score, and integrated light density of collagen type III of the patients with SVR were all better than those of the patients without SVR; however, the differences were all not significant. The patients with combination therapy, female patients, and the patients with the HCV RNA < 2 x 10(6) copies/ml before treatment all showed higher levels in histology response. HAI, alpha-SMA level, and collagen type III values were all significantly correlated with the values of the semiquantitative indexes of fibrosis (all P < 0.01). CONCLUSION: Resisting hepatitis virus C and inhibiting and reversing the fibrotic progress, IFN-beta-1a therapy improves the liver histology of chronic HVC regardless of the viral response.     

自然杀伤细胞与肝纤维化

 肝淋巴细胞中含有丰富的自然杀伤细胞（natural killer cells,NK）,后者通过影响天然免疫抵御肝内病毒感染及肿瘤转移。而活化的肝星状细胞（hepatic stellate cells,HSCs）在肝纤维化发生发展中起着关键作用。近来一些研究表明NK细胞可通过产生具有抗纤维化作用的IFN-γ以及直接杀死活化HSCs,起到明显的抗肝纤维化作用。因此,刺激NK细胞活化极可能成为治疗肝纤维化的新途径,但其有效性及安全性需进一步通过临床研究来证明。     

扶正化瘀方影响转化生长因子β1/Smad信号通路的抗肝纤维化作用机制

目的：探讨扶正化瘀方影响转化生长因子β1（transforming growth factor-β1,TGF-β1）/Smad信号转导的抗肝纤维化作用机制。方法：本研究分体内实验和体外实验两部分。在体内实验中,37只雄性Wistar大鼠分为正常组（5只）、模型组（18只）和扶正化瘀方组（14只）。模型组和扶正化瘀组大鼠采用二甲基亚硝胺（dimethylnitrosamine,DMN）腹腔注射复制大鼠肝纤维化模型。灌胃治疗4周后,采用盐酸水解法检测肝组织中羟脯氨酸（hydroxyproline,Hyp）含量,蛋白质印迹法分析肝组织中TGF-β1、TGF-β1Ⅰ型受体（TGF-β1 type Ⅰ receptor,TβR-Ⅰ）、Smad2、Smad3及磷酸化Smad2/3蛋白的表达。体外实验采用培养4d的原代大鼠肝星状细胞（hepatic stellate cell,HSC）,分为对照组、TGF-β1组、10%扶正化瘀方药物血清组及TβR-Ⅰ胞内激酶抑制剂（SB-431542）组。后3组用2.5ng/mLTGF-β1刺激24h后,对照组及TGF-β1组加10%正常大鼠血清,10%扶正化瘀方药物血清组加10%服用扶正化瘀方的大鼠血清,SB-431542组加10%正常大鼠血清及10μmol/LSB-431542。共孵育24h后,免疫荧光染色检测HSC中α平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin,α-SMA）和Smad3蛋白的表达,蛋白质印迹法分析HSC中α-SMA蛋白的表达。结果：体内实验发现,扶正化瘀方可明显降低纤维化肝组织中异常升高的Hyp含量及TGF-β1、TβR-Ⅰ、磷酸化Smad2/3蛋白的表达。体外研究发现,正常HSC中α-SMA、TβR-Ⅰ表达较低,TGF-β1刺激可显著上调其表达;扶正化瘀方药物血清共孵育后,可明显抑制TGF-β1诱导的HSC中α-SMA的表达;正常HSCSmad3主要表达在细胞质中,细胞核中表达较低,TGF-β1可显著刺激Smad3向细胞核转移,扶正化瘀方药物血清可明显抑制TGF-β1诱导的Smad3核转位。结论：扶正化瘀方可下调纤维化大鼠肝脏及HSC中的TGF-β1/Smad病理信号转导通路,这可能是扶正化瘀方抗肝纤维化的部分作用机制。