牛乳头瘤病毒E6蛋白与p73蛋白的相互作用

为进一步探讨和阐明E6蛋白的致癌机制以及充分认识新发现的抑癌基因p73的作用，在体外通过免疫共沉淀法研究p73和牛乳头瘤病毒1型E6蛋白（BPI－1E6）的相互结合情况，后将表达p73和BPV－1E6的质粒导入SAOS－2细胞内，进一步研究细胞内E6蛋白对p73蛋白的诱导调亡和转录活化功能等生物学活性的影响。结果发现，BPV－1E6与p73蛋白结合较弱，且未检测到E6能诱导p73蛋白的降解。在SAOS－2细胞内，BPV－1E6蛋白确实能部分抑制p73蛋白的诱导细胞凋亡的功能，并且p73蛋白的转录激活作用也有影响，但这种影响作用颇弱。     

p53蛋白结构和生物功能

ｐ５３具有抑癌和致癌的两种作用，关键在于生物功能得失。野生型ｐ５３限制细胞增殖，与细胞凋亡相关，能与病毒癌蛋白结合，抑制转化细胞和癌细胞的恶性表型。肿瘤细胞的ｐ５３基因点突变、缺失、重排或插入。突变型ｐ５３基因与其它癌基因合作转化细胞，而野生型ｐ５３基因能够抑制细胞转化。     

p73:p53的类似物

p73是近来发现的与p5 3在结构与功能上非常相似的一个基因 ,位于 1p36。p73具有类似于p5 3的抑制细胞生长、促进凋亡的功能 ,还具有与p5 3不同的单基因表达方式 ,不与病毒癌蛋白相互作用。p73与肿瘤的关系密切 ,但到底是通过抑癌基因、癌基因 ,还是表基因机制在肿瘤的发生中起作用则尚未明确。     

子宫内膜癌PTEN及p53蛋白的表达

在子宫内膜癌的研究中已经确定了的、较为常见的分子生物学改变有ｐ5 3突变、Ｋ ｒａｓ突变和微卫星不稳定性 ,大约各占子宫内膜癌的 2 0 %～ 3 0 % [1] 。已发现子宫内膜癌中ＰＴＥＮ抑癌基因 (ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅａｎｄｔｅｎｓｉｎｈｏｍｏｌｏｇｄｅｌｅｔｅｄｏｎｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅｔｅｎ)突变率为 3 2 %～ 5 5 % ,是迄今为止子宫内膜癌中所发现的突变率最高的基因改变[2 4 ] 。我们拟通过观察子宫内膜癌ＰＴＥＮ及ｐ5 3蛋白表达的情况来探讨其与子宫内膜癌的发生、发展和预后的关系。一、材料和方法80例子宫内膜癌标本选自北…     

p73基因研究进展

随着对肿瘤基因的深入研究 ,越来越多的抑癌基因被发现 ,人们对抑癌基因ｐ53在肿瘤发生中的作用已进行了较为深入的研究。ｐ53基因的突变 ,失活及缺失与 50 %的人类肿瘤发生有关。最近 ,又报告发现两个新的“ｐ53样”抑癌基因 -ｐ73与ｐ73Ｌ。ｐ73和ｐ73Ｌ所克隆的基因编码的蛋白质 ,无论在结构上 ,还是在功能上均与ｐ53蛋白相似 ,本文对此方面的研究进展做一综述。　　一、ｐ73:(一 )ｐ73基因的克隆、定位及表达 :Ｋａｇｈａｄ等[1 ] 在 1 997年利用对应于胰岛素信号中介体 (ＩＲＳ- 1 )结合区的简并寡聚苷酸探针筛选ＣＯＳ细胞ｃＤＮＡ文…     

p53蛋白结构和生物功能

ｐ５３具有抑癌和致癌的两种作用，关键在于生物功能得失。野生型ｐ５３限制细胞增殖，与细胞凋亡相关能与病毒癌蛋白结合，抑制转化细胞和癌细胞的恶性表型。肿瘤细胞的ｐ５３基因点突变、缺失、重排或插入。突变型Ｐ５３基因与其它癌基因合作转化细胞，而野生型ｐ５３基因能够抑制细胞转化。     

登革病毒E蛋白区段基因克隆及高效表达

目的进行登革病毒Ｅ蛋白区段的高效表达,制备抗原,为分析Ｔ、Ｂ细胞表位及免疫功能的研究奠定基础。方法以含有Ｄ２ＶＥ区的质粒ｐ３０．ＶＤ２为模板,ＰＣＲ扩增了编码Ｄ２ＶＥ蛋白３０８～４６８ａａ区段的基因片段,以ｐＭＹ为表达载体,构建了表达质粒ｐＤＥ１,并用酶切法使之缺失跨膜区疏水ａａ较多的编码序列,又构建了表达质粒ｐＤＥ２,分别转化大肠杆菌,获得了不同的工程菌株。经诱导培养,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ,免疫印迹及酶联检测分析表达产物。结果含ｐＤＥ１质粒工程株只能表达微量的特异性蛋白;而含ｐＤＥ２质粒的工程菌株则能高效表达Ｄ２Ｖ特异性Ｅ蛋白,重组表达产物占菌体蛋白的２５．３１％。用４ｍｏｌ／Ｌ尿素溶解包涵体,上清中Ｅ蛋白纯度可达８０％。以粗提物包板进行酶联检测,结果表明,该重组Ｅ蛋白具有ＤＶ４个型交叉抗原的特性。结论缺失Ｃ末端疏水区编码序列的Ｄ２ＶＥ基因片段,可在Ｅ．ｃｏｌｉ中获得高效表达,其表达产物具有ＤＶ属特异性。     

肿瘤抗原p185蛋白的纯化及其鉴定

目的：从转染ＨＥＲ２／ｎｅｕ 基因的３Ｔ３／ｎｅｕ细胞中纯化ｐ１８５蛋白,研究其免疫原性和作为肿瘤疫苗的可能性。方法：采用溴化氰活化的Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ为基质,通过交联５２０Ｃ９单克隆抗体（杂交瘤腹水中沉淀的γ－球蛋白）,用亲和层析的技术纯化ｐ１８５蛋白。经梯度盐溶液解离与抗体结合的ｐ１８５蛋白,收集到蛋白洗脱峰,用ＥＬＩＳＡ检测ｐ１８５的免疫反应性,并经ＳＤＳＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏ     

p73：p53的类似物

ｐ７３是近来发现的与ｐ５３在结构与功能上非常相似的一个基因,位于１ｐ３６。ｐ７３具有类似于ｐ５３的抑制细胞生长、促进凋亡的功能,还具有与ｐ５３不同的单基因表达方式,不与病毒癌蛋白相互作用。ｐ７３与肿瘤的关系密切,但到底是通过抑癌基因,癌基因,还是表基因机制在肿瘤的发生中起作用则尚未明确。     

P53蛋白家族的研究进展

近年新发现的P6 3和P73蛋白与已知的肿瘤抑制蛋白P5 3在结构和功能上都很相似 ,同属于P5 3蛋白家族。虽然这三种蛋白均具有类似的转录激活和诱导凋亡的活性 ,但是它们在抑制肿瘤的发生及生长发育的调控中各自起着特别的作用     

肝细胞肝癌组织中PTEN和p53蛋白的表达

ＰＴＥＮ又名ＭＭＡＣ1或ＴＥＰ1,其表达产物参与细胞骨架重组及由此引发信号传导并影响细胞转移。目前 ,有关ＰＴＥＮ的研究多集中于基因的突变和缺失 ,而对ＰＴＥＮ基因蛋白的表达则研究极少 ,尤其是肝癌组织中ＰＴＥＮ蛋白的表达研究 ,国内外尚未见文献报道。为此 ,我们应用免疫组化技术对肝细胞肝癌组织中抑癌基因ＰＴＥＮ及 ｐ5 3蛋白表达情况进行了研究 ,以探讨两种抑癌基因在肝细胞肝癌发生发展中的作用及其临床病理意义。1　材料与方法1.1　材料　 4 1例肝癌及癌旁组织为 1996～ 2 0 0 0年邮电总医院病理科存档外科手术标本。年龄 2…     

肺癌p73蛋白表达及其临床病理学意义

p73基因与p53基因同抑癌基因家族,p73蛋白在结构和功能上具有与p53蛋白高度相似性,都具有抑制肿瘤细胞生长、诱导细胞凋亡的功能。但两者双存在明显差异。文献报道,p73蛋白在一些癌细胞中呈高水平表达,与多种人类肿瘤的发生、发展密切相关。     

p73基因与乳腺癌

p73基因作为p5 3基因家族新发现的成员之一 ,其编码蛋白在结构和功能上与p5 3蛋白很相似 ,但也存在显著的差异。p73基因在乳腺癌的发生、发展和预后中可能起到较为重要的作用     

p53家族新成员研究进展

在对肿瘤抑制基因p5 3进行了近二十年的研究之后 ,人们终于发现了p5 3家族的第二个成员—p73,p73蛋白在结构和功能上均与p5 3相似。随后又克隆的p5 1基因 ,被列为该家族的另一个新成员。p73及p5 1基因均能激活p2 1的转录 ,引起细胞周期停滞 ,诱导细胞凋亡 ,用于缺失p5 3基因肿瘤细胞的基因治疗可能具有很大潜力。本文对p5 3基因家族的新成员作一简介。     

A组轮状病毒外壳蛋白VP4的原核表达

选用原核表达载体ｐＧＥＸ２Ｔ，该载体表达谷胱苷肽－Ｓ转移酶融合蛋白，将完整的Ａ组轮状病毒外壳蛋白基因插入ｐＥＧＸ２Ｔ中，在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ上没有明显的表达条带，而将部分ＶＰ４基因和６３１个碱基，插入ｐＧＥＸ２Ｔ，在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ中有明显的表达条带。     

p73基因的研究进展

1997年 Kaghad等在 1p36区发现了 p73基因 ,其编码的 p73蛋白在结构与功能上与 p5 3蛋白均具有相似性 ,遂被认为是一候选的抑癌基因。但此后的一些研究资料对此又提出质疑。究竟 p73是 p5 3的“兄弟”还是“披着羊皮的狼”?其真正的作用还有待进一步研究     

表达人膜辅助因子蛋白基因的猪内皮细胞可抑制人血清补体的细胞毒作用

目的研究转染人膜辅助因子蛋白基因的猪内皮细胞抗补体的细胞毒作用。方法从人胎盘组织提取总ＲＮＡ,用ＲＴ－ＰＣＲ技术扩增得到人膜辅助因子蛋白（ｈＭＣＰ）基因全长ｃＤＮＡ,将其克隆到带有巨细胞病毒（ＣＭＶ）ＩＥ启动子的ｐＣＩ－ｎｅｏ哺乳动物表达载体和以ｐＣＩ－ｎｅｏ为基础构建成的带有人ＥＦ－１α启动子的ｐＥＦ－ｎｅｏ哺乳动物表达载体上,得到质粒ｐＣＩＭ和ｐＥＦＭ。利用电穿孔基因转移方法分别转染猪内皮细胞（ＰＥＣ）,以Ｇ４１８筛选稳定表达克隆。用正常人血清处理此转基因细胞来检测其抗补体作用。结果Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交结果表明,在ＥＦ－１α启动子引导下的ｈＭＣＰ基因得到了高效表达。死细胞计数和ＬＤＨ释放实验结果表明,表达ｈＭＣＰ基因的ＰＥＣ可有效抑制人血清补体对其的裂解作用（Ｐ＜０．０１）。结论克隆的ｈＭＣＰ基因在ＥＦ－１α启动子引导下于ＰＥＣ可高效表达,且使ＰＥＣ能够抗人补体的细胞毒作用。     

p73-一个p53家族新基因

p73基因是一新发现的与经典抑癌基因p5 3具有相似结构、功能和活性的基因 ,并由于其在染色体上特殊的定位 ,被认为是一种新的候选抑癌基因。本文介绍了p73发现以来国外有关p73基因的研究进展 ,特别对p73基因的定位、p73与p5 3的关系、是否抑癌基因以及该基因在肿瘤发生发展中的作用和地位进行了综述。     

p53蛋白的转录调节功能及其相应的结构特征

本文综述了ｐ５３蛋白在ＤＮＡ结合、转录调控、活性及其功能域等方面的研究进展。ｐ５３能够抑制带有ＴＡＴＡ启动子表达,但是ｐ５３结合特定顺序又可以活化某些基因的转录。ｐ５３可分成几个结构域,每一个结构域有其自己的功能。Ｎ 末端具有转录活化功能,中央核心区对特定ＤＮＡ顺序结合是必需的,而Ｃ 末端又是一个繁忙的部分。ｐ５３对抑制肿瘤的发生起重要作用,对ｐ５３的兴趣已经成为癌症研究中的热点。     

p73基因研究进展

p73是最近发现的p53家族的一员,它与p53不仅在蛋白结构上具有较高的同源性,功能也具有一定的相似性,被认为是一种潜在的抑癌基因。但随着研究的深入,发现P73在功能和调控机制上与P53都具有不同点。P73具有诱导细胞凋亡的能力,其机制与P53不同。P73在很多肿瘤中的表达高于相应的正常组织,这与经典的抑癌基因也不同。因此对于P73基因仍需进一步的研究。