细胞外信号调节激酶1/2信号转导通路与细胞凋亡的研究进展

细胞外信号调节激酶1/2(extracellular-signa1regulated kinase,ERK1/2)是广泛存在于真核细胞内的一类丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,属丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)家族成员.从信号转导角度看,活化后的ERK1/2作用于胞浆或胞核内的底物蛋白,引起特定蛋白的表达或活化,调控细胞的增殖、分化、凋亡等.目前关于ERK1/2信号通路在神经细胞凋亡的研究尚处在起步阶段.本文对ERK1/2信号转导通路在细胞凋亡中的作用机制进行综述.     

细胞外信号调节激酶1/2诱导痛觉过敏机制的研究进展

细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)是一类高度保守的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,属于促分裂原活化的蛋白激酶家族。哺乳动物神经系统内ERK1/2参与外周和中枢痛觉信号的调制,在细胞内信号调节和细胞间信息交流过程中扮演重要角色。背根神经节和脊髓背角内ERK1/2能被伤害性刺激信号异常激活,活化的ERK1/2可通过转录或非转录途径促进多种类型疼痛的形成和维持,抑制其活化能显著缓解疼痛,但详细机制及两者作用的鉴别尚未完全明确。随着对疼痛研究的日益深入,ERK1/2参与疼痛进程的理论知识不断得到补充,为疼痛治疗提供了新思路。     

含SH2结构域蛋白酪氨酸磷酸酶2表达变化对肝纤维化大鼠肝组织中细胞外信号调节激酶1/2活性的影响

目的:探讨含SH2结构域的蛋白酪氨酸磷酸酶2(SHP2)表达变化对肝纤维化大鼠肝组织中细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)活性的影响。方法:健康雄性SD大鼠160只被随机分为五组(对照组、模型组、Ad-GFP组、Ad-SHP2组及Ad-shRNA/SHP组),每组32只。除对照组(腹腔注射0.9%氯化钠溶液)外,其余四组构建四氯化碳诱导的大鼠肝纤维化模型,并将表达绿色荧光蛋白(GFP)的空病毒Ad-GFP、表达野生型SHP2及GFP的腺病毒Ad-SHP2、表达GFP及靶向SHP2的短发夹RNA(shRNA)的腺病毒Ad-shRNA/SHP自大鼠尾静脉分别注射入Ad-GFP组、Ad-SHP2组及Ad-shRNA/SHP2组大鼠,各组分别于造模第2、4、6、8周选取8只大鼠留取肝组织标本。采用HE染色观察大鼠肝组织病理学变化;采用Masson三色染色检测大鼠肝组织胶原沉积;采用实时荧光定量PCR检测大鼠肝组织SHP2、ERK1 mRNA表达;采用免疫组织化学染色检测SHP2蛋白表达;采用Western blot检测ERK1和p-ERK1蛋白表达。结果:大鼠肝纤维化模型成功构建,在各造模...     

细胞外信号调节激酶1/2信号通路调控细胞侵袭性的研究进展

细胞外信号调节激酶(ERK)1/2是一种蛋白丝氨酸/苏氨酸激酶,参与Ras-Raf有丝分裂原激活蛋白激酶-ERK的信号转导级联,通过影响基因的转录和表达,参与细胞的生长、增殖甚至侵袭作用。肺癌、肝癌、卵巢癌、宫颈癌、子宫内膜异位症及子痫前期等多种疾病的发生,以及其疾病的转移和病情的进展,均与ERK1/2信号通路调控细胞侵袭性密切相关。因此通过探索ERK1/2信号通路侵袭性在相关疾病发病过程中可能发挥的重要作用,从而寻找更加有效的治疗方案。本文根据近些年国内外的最新研究,介绍ERK1/2信号通路侵袭性这一特性在各个疾病中所发挥的相关调控作用,以期为相关疾病的临床治疗研究提供新启示。     

糖皮质激素对人卵巢癌细胞系3AO细胞周期分布及细胞周期蛋白激酶抑制因子p21/WAF1表达的影响

目的观察糖皮质激素对人卵巢癌细胞系3AO细胞周期分布及细胞周期蛋白激酶抑制因子P21/ WAF1表达的影响。方法采用流式细胞仪技术测定地塞米松(Dex)作用3AO细胞后其细胞周期分布,免疫印迹分析的方法检测Dex对p21／WAF1表达的影响。结果Dex处理后3AO细胞在G_0/G_1期停滞,且这种作用随处理时间延长而更趋明显;同时Dex能够以浓度和时间依赖性方式诱导p21／WAF1表达,这种作用通过GR来介导。结论在GC诱导的抑制细胞增殖的过程中,p21/WAF1的表达增加。     

地塞米松对人卵巢癌细胞糖皮质激素受体的调节

目的：观察地塞米松调节人卵巢癌细胞系3AO细胞增殖分化的作用机制及3AO细胞中糖皮质激素受体（GR）的表达。方法：①采用氨基安替比林法测定糖皮质激素受体拮抗剂（RU486）作用3AO细胞后阻断糖皮质激素的效应；②采用放射配体结合分析法检测3AO细胞中GR的表达；③采用定量RT-PCR法检测地塞米松对3AO细胞中GR的调节作用。结果：①RU486可完全阻断地塞米松对3AO细胞活性的诱导作用；②3AO细胞中存在高亲和力、低容量糖皮质激素受体；③地塞米松使GR结合活性明显降低，且具有时间依赖性。结论：3AO细胞中存在GR，地塞米松调节3AO细胞增殖分化的作用由GR介导，地塞米松可向下调节3AO细胞GR的结合活性，且具有时间依赖性。     

糖皮质激素对人卵巢癌细胞系(3AO)的诱导分化作用

目的　观察不同浓度的地塞米松 (Dex)对人卵巢癌细胞系 ( 3AO)增殖及分化的影响 ,在 3AO细胞中是否有糖皮质激素受体 (GR)的表达。方法　以不同浓度Dex( 1× 10 -10 ～ 1× 10 -6 mol/L)处理培养 3AO细胞后 ,采用活细胞计数法观察细胞增殖情况 ,采用氨基安替比林法测定碱性磷酸酶 (AKP)活性 ;采用酶联免疫法测定 3AO细胞分化标志抗原CA12 5水平的变化 ;测定GR拮抗剂RU486作用于 3AO细胞后能否阻断糖皮质激素的效应 ,用放射配体结合分析法和定量RT PCR法检测 3AO细胞中GR的表达。结果　Dex对 3AO细胞的增殖有明显抑制作用 ,1× 10 -6 mol/LDex作用 5d后活细胞计数为对照组的 5 6.78% ,同时伴有细胞形态的变化 ;Dex还可使 3AO细胞AKP活性增高 ,这种作用具有时间和剂量依赖性 ;1× 10 -6 ～ 1× 10 -10 mol/LDex作用于3AO细胞后 ,明显抑制卵巢癌细胞标志抗原CA12 5的表达 ;RU486可完全阻断Dex对 3AO细胞活性的诱导作用 ;在细胞中存在高亲和力、低容量GR。结论　Dex对 3AO细胞有明显的增殖抑制和诱导分化作用 ,在 3AO细胞中存在GR ,Dex调节 3AO细胞增殖分化的作用通过GR介导     

细胞外信号调节激酶1/2在肾癌中的表达及临床意义

目的:探讨细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)及其磷酸化状态(p-ERK1/2)在肾癌中的表达及临床意义.方法:选取78例肾癌患者的肾癌组织及距离病灶超过3 cm的癌旁组织,免疫组织化学法检测ERK1/2及p-ERK1/2表达情况,比较性别、年龄、肿瘤直径、临床分期、淋巴结转移、远处转移、病理Fuhrman分级与癌组织ERK1/2及p-ERK1/2的关系,并通过Kaplan-Meier生存分析癌组织中ERK1/2、p-ERK1/2与肾癌患者生存情况的相关性.结果:肾癌组织中ERK1/2及p-ERK1/2阳性表达率均高于癌旁组织(P<0.05).不同性别、年龄、肿瘤直径患者癌组织ERK1/2及p-ERK1/2阳性表达率之间比较,差异无统计学意义(P>0.05);临床分期为Ⅲ-Ⅳ期、有淋巴结转移、远处转移、病理Fuhrman分级为G2+G3者的癌组织中ERK1/2及p-ERK1/2阳性表达率分别高于临床分期Ⅰ-Ⅱ期、无淋巴结转移、远处转移、病理Fuhrman分级为G1者(P<0.05).Kaplan-Meier生存分析结果显示,相较于ERK1/2、p-ERK1/2阴性表达者,肾癌组织中ERK1/2、p-ERK1/2阳性表达的患者生存情况较差(P<0.001).结论:ERK1/2及p-ERK1/2在肾癌组织高表达,且与患者临床分期、淋巴结转移、远处转移、病理Fuhrman分级及生存期相关.     

舍曲林促进PC12细胞活性、酪氨酸羟化酶和磷酸化细胞外信号调节激酶1/2的表达

目的 研究舍曲林对对NGF诱导的PC12细胞细胞活力以及酪氨酸羟化酶(TH)和磷酸化细胞外信号调节激酶1/2(pERK1/2)表达的影响.方法 以NGF诱导后的PC12细胞为细胞模型,给予5μM、10μM、20μM、50μM不同剂量舍曲林,分别进行直接作用和保护作用处理后,采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)检测细胞活性,免疫组织化学观察细胞形态学改变以及蛋白质斑迹法(western blot)检测PC12细胞酪氨酸羟化酶(TH)和磷酸化细胞外信号调节激酶(pERK1/2)的表达水平的变化.结果 中等剂量的舍曲林促进PC12细胞的活性,直接作用24h后20μM(1.32±0.11)、10μM(1.17±0.05),保护作用24h后20μM(1.15±0.11)显著高于对照组,高剂量50μM的舍曲林PC12细胞有很强的毒性作用.20μM舍曲林直接作用后PCI2细胞TH表达增加,TH与β-actin表达阳性面积的比值24h作用组(1.27±0.05)以及48 h作用组(1.23±0.08)与对照组(作用24h和48 h分别为0.99±0.04,0.92±0.07)相比差异有统计学意义(P＜0.01,P＜0.05),20μM 舍曲林直接作用后PC12细胞pERK1/2表达也增加,pERK1/2与β-actin表达阳性面积的比值24 h作用组(1.41±0.05)以及48 h作用组(1.40±0.06)与对照组(作用24 h和48 h分别为0.86±0.04,0.78±0.06)相比差异有统计学意义(P＜0.01,P＜0.05),免疫组织化学结果与上述一致.结论 舍曲林能提高PC12细胞的活性,对神经元提供保护可能是舍曲林抗抑郁作用机制之一,而这种作用可能是通过上调TH以及pERK1/2的表达实现的.     

二烯丙基二硫通过细胞外信号调节激酶途径调节HepG2细胞Survivin表达

目的探讨二烯丙基二硫（DADS）对HepG2细胞增殖的影响及其机制。方法W estern b lot法检测survivin、细胞外信号调节激酶（ERK1/2）和p-ERK1/2的表达;AO/EB染色观察细胞形态学变化。结果ERK1/2抑制剂PD98059抑制DADS诱导survivin表达的作用。PD98059与DADS联合应用可以促进HepG2细胞凋亡。结论DADS诱导HepG2细胞survivin的表达与ERK1/2信号通路有关。     

Glucocorticoid modulation of extracellular signal-regulated protein kinase1/2 and p38 in human ovarian cancer HO-8910 cells

Objective To investigate the signaling pathway through testing the effects of dexamethasone (Dex)on the activation of the extracellular signal-regulated protein kinase 1/2 (ERK1/2 and p38 kinase(p38) in HO-8910 cells.Methods Activation of the ERK1/2against the total ERK1/2 and p38 mitogen-activated protein kinases (MAPKs) protein and the phosphorylated forms of them.Results Dex could suppress the activation of ERK1/2, while enhance the activation of p38 rapidly and strongly in a dose- and time- dependent manner. Neither effect could be blocked by RU486, the antagonist of glucocorticoid receptor (GR).Conclusion Dex has rapid effects on the activation of ERK1/2 and p38, and these effects are not mediated by GR.     

细胞外信号调节激酶ERK1/ERK2对胰腺癌生长的影响

目的研究胰腺癌患者组织中及细胞系Pane-1及Jf-305中的ERK1／ERK2蛋白表达情况,以探讨其在胰腺癌发生、发展过程中的意义。方法应用免疫组织化学技术检测临床胰腺癌患者组织中ERK1／ERK2蛋白表达;Western blot方法观察胰腺癌细胞系Pane-1及Jf-305中的ERK1／ERK2蛋白表达。结果胰腺癌患者组织ERK1和ERK2蛋白均呈显著性高表达,阳性率分别为86．7％(39／45)和84．44％(38／45),而对照组织的阳性率分别为30％(6／20)和20％(4／20),胰腺癌组织和对照组织阳性率有显著差异;胰腺癌细胞系Panc-1及Jf-305中均有ERK1／ERK2蛋白的高表达。结论胰腺癌患者组织及细胞系中均有ERK1／ERK2蛋白强表达,ERK1和ERK2蛋白的过表达可能在人胰腺癌的发生、发展过程中起重要作用。     

γ-干扰素对姜黄素抑制人卵巢癌细胞株3AO增殖的影响

目的 :研究γ 干扰素 (IFN γ)对姜黄素抑制人卵巢癌细胞株 3AO增殖的影响。方法 :采用MTT法计算细胞存活率、Giemsa染色观察细胞形态变化及凋亡情况、流式细胞术检测细胞周期变化。结果 :姜黄素可明显抑制 3AO细胞的生长 ,其半数生长抑制率 (IC50 )约为 1 8.5 μmol/L;姜黄素将肿瘤细胞聚集在S期和G2 /M期并可诱导细胞凋亡。IFN γ与姜黄素联用后 ,使上述作用明显增强 ,与两药单用组相比有统计学差异(P <0 .0 5 )。结论 :IFN γ可协同姜黄素抑制人卵巢癌细胞株 3AO增殖     

Genistein对人卵巢癌细胞系3AO抑制增殖的作用及机制的探讨

目的:研究植物雌激素染料木黄酮对人卵巢癌细胞系3AO细胞增殖的抑制作用和凋亡的诱导作用,探讨其抗癌作用的机制. 方法:应用MTT法检测不同浓度染料木黄酮对3AO细胞的生长抑制作用,电镜观察药物作用后细胞的超微结构改变,TUNEL法确定凋亡,流式细胞仪检测细胞周期、定量分析凋亡,免疫细胞化学技术检测雌激素β受体的表达. 结果: 3AO细胞经不同浓度染料木黄酮处理后,细胞生长明显受到抑制,且这种抑制作用随时间延长及浓度增高而增强,10 mg/L和20 mg/L染料木黄酮作用72 h后,抑制率分别达到54.24%和65.99%. 染料木黄酮阻断3AO细胞生长于G2/M期,在G0/G1前出现典型亚二倍体凋亡峰,且凋亡呈时间依赖性. 电镜观察到用药后凋亡细胞典型的形态学特征. TUNEL法观察到大量阳性凋亡细胞. 免疫细胞化学法检测到用药后,ERβ表达明显加强. 结论:染料木黄酮对3AO细胞的生长有明显的呈时间及浓度依赖性的抑制作用,并诱导其发生凋亡. 染料木黄酮可能通过雌激素β受体途径发挥药理作用,诱导卵巢癌细胞发生凋亡.     

拓扑替康与顺铂对bcl-2及fas在卵巢癌细胞系3AO及其耐药系3AO/cDDP表达的影响

目的:研究bcl鄄2及fas在体外培养的卵巢癌细胞系3AO及其耐药系3AO/cDDP的表达及化疗药物拓扑替康(topotecan熏TPT)与顺铂穴cisplatinum熏cDDP雪对两种基因表达的影响。方法:用人卵巢上皮癌细胞系3AO及其cDDP耐药细胞系3AO/cDDP进行体外培养实验,用流式细胞仪(flowcytometry熏FCM)检测两种细胞系在化疗药物顺铂(cDDP)与拓扑替康治疗前后的fas和bcl鄄2表达。结果:与3AO相比,fas与bcl鄄2在3AO/cDDP中的表达明显降低(P<0.01);cDDP和TPT可使fas在3AO中的表达明显升高(P<0.01),bcl鄄2明显降低(P<0.01);cDDP和TPT对fas表达影响较为显著(P<0.01)熏对bcl鄄2无显著影响(P>0.05)。结论:fas可能在卵巢癌的化疗耐药中起作用,但bcl鄄2的作用尚不明确;cDDP及TPT可能通过fas介导的细胞凋亡机制促进细胞死亡。     

依托泊苷对卵巢癌细胞3AO肿瘤转移抑制基因KAI1表达的影响

目的 研究依托泊苷（VP16）对人卵巢上皮性癌细胞3AO的生长抑制作用及其对细胞中肿瘤转移抑制基因KAI1表达的影响.方法 倒置显微镜下观察3AO细胞在不同浓度的药物作用下形态学变化;采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法观察药物对3AO细胞的生长抑制作用;运用RT-PCR、免疫细胞化学的方法 分别从转录和蛋白翻译水平检测不同药物浓度作用的3AO细胞中肿瘤转移抑制基因KAI1的表达情况.结果 药物作用下,3AO细胞体积缩小,核固缩、深染及凋亡小体出现;MTT法结果 显示药物对3AO细胞的生长抑制率呈明显的剂量依赖性;免疫细胞化学染色显示VP16能显著上调肿瘤转移抑制基因KAI1的表达;RT-PCR检测结果 显示VP16能同样增强KAI1mRNA的表达.结论 VP16不仅能抑制卵巢上皮性癌细胞的生长,而且能增强癌细胞中肿瘤转移抑制基因KAI1的表达,可能为临床上抑制肿瘤转移的药物治疗带来希望.     

ERK蛋白在上皮性卵巢癌中的表达及意义

目的：研究细胞外信号调节激酶（ERK）在上皮性卵巢癌发生发展中的作用。方法：采用Westem blot技术和免疫组化方法，研究ERKI和ERK2蛋白在50例上皮性卵巢癌，10例卵巢良性肿瘤，10例正常卵巢组织中的表达。结果：ERK1和ERK2在卵巢癌中有过度表达，与正常卵巢及卵巢良性肿瘤相比，差异十分显著（P〈0．01）。Ⅲ～Ⅳ期表达高于Ⅰ～Ⅱ期，差异显著（P〈0．05）。ERK1和ERK2与卵巢癌分化程度、病理类型无关。结论：ERK的过度表达在卵巢癌的发生发展中起重要作用。     

细胞外调节蛋白激酶在雌激素促乳腺癌细胞MCF-7增殖中的作用

目的:探讨细胞外调节蛋白激酶(ERK）在雌激素促乳腺癌细胞MCF-7增殖、细胞周期转化中的作用及机制。方法:以雌激素受体阳性乳腺癌细胞MCF-7为研究对象, MTT法检测17β-雌二醇（17β-E2）对MCF细胞增殖的影响,确定实验处理用浓度;MTT法检测PD98059对17β-E2促MCF-7细胞增殖作用的影响,求取其中效抑制浓度;流式细胞术检测细胞周期;TRAP-PCR银染法检测端粒酶活性,Western印迹法检测p-ERK1/2、野生型p53蛋白水平;RT-PCR检测野生型p53 mRNA水平。结果:ERK磷酸化抑制剂PD98059能抑制17β-E2对MCF-7细胞的促增殖作用,具有时效-量效关系,其差异具有显著统计学意义(P＜0.01）, 各作用时间点PD98059中效抑制浓度分别为89.28 μmol/L·24 h、39.81 μmol/L·48 h、21.87 μmol/L·72 h。应用PD98059 48 h后,能抑制17β-E2促进MCF-7细胞周期转化作用,使G1期细胞增加,S期和G2期细胞减少(P＜0.01); 阻抑17β-E2增强MCF-7细胞端粒酶活性的作用(P＜0.05）; 增强野生型p53蛋白表达和p53基因转录水平(P＜0.01）;p-ERK1/2蛋白表达水平显著降低(P＜0.01)。 结论:ERK在17β-E2促乳腺癌细胞MCF-7增殖、细胞周期转化中具有重要的作用,其机制与野生型p53转录和端粒酶活性改变有关。     

丙泊酚对大鼠海马神经元ERK1/2磷酸化水平的影响

目的:探讨丙泊酚对大鼠海马神经元细胞外信号调节激酶(ERK1/2)磷酸化水平的影响。方法:取SD胎鼠海马神经元体外培养,用不同浓度的丙泊酚处理海马神经元不同的时间,Western Blot半定量检测神经元中ERK1/2磷酸化的水平。结果:丙泊酚能降低ERK1/2磷酸化水平,随丙泊酚孵育时间的延长及浓度的增加,ERK1/2的磷酸化水平逐渐降低。结论:丙泊酚能显著地抑制大鼠海马神经元ERK1/2磷酸化水平。