盐酸埃他卡林对谷氨酸所致PC12细胞损伤的保护作用

目的 研究盐酸埃他卡林(Ipt)对谷氨酸(Gli)所致细胞损伤的保护作用。方法 采用培养PC12细胞,MTT法测细胞存活率。结果 Ipt 1×10~(-10)～1×10~(-4)mol·L~(-1)可拮抗Glu介导的神经毒作用,提高细胞存活率,该保护作用可被10 μmol·L~(-1)格列苯脲(ATP敏感性钾通道拮抗剂)所取消。结论 Ipt可拮抗Glu介导的神经毒作用,该保护作用可能与ATP敏感性钾通道相关。     

盐酸埃他卡林对H2O2所致PC12细胞损伤的保护

目的:研究KATP 通道开放剂盐酸埃他卡林(iptakalimhydrochloride ,Ipt)对H2 O2 所致PC12细胞损伤的保护作用及其作用机制。方法:采用培养的PC12细胞,MTT法测定细胞存活率,HPLC法测定细胞培养液中谷氨酸(Glu)的含量,荧光法测定胞内钙离子([Ca2 ]i)浓度。结果:Ipt可浓度依赖性的拮抗H2 O2 介导的细胞毒性,提高细胞生存率,降低胞外Glu的释放以及胞内Ca2 浓度。该保护作用可被2 0 0 μmol·L- 15 - HD(线粒体KATP通道阻断剂)部分拮抗。结论:Ipt可拮抗H2 O2 介导的细胞损伤作用,该保护作用可能与线粒体ATP敏感性钾通道相关。     

盐酸埃他卡林对缺氧诱导神经细胞凋亡的影响

目的 :探讨盐酸埃他卡林 (Ipt)对缺氧诱导的大鼠皮质神经细胞凋亡的影响。方法 :用电镜和流式细胞分析技术 ,检测原代培养的大鼠皮质神经细胞凋亡 ;应用免疫组化法 ,观察凋亡相关蛋白Bcl 2、Bax表达的改变。结果 :Ipt 10 μmol·L-1可减轻缺氧诱导的细胞染色质浓缩现象 ,逆转缺氧诱导的Bcl 2表达的下调 ,对Bax表达无显著影响 ;Ipt(0 .1～10 μmol·L-1)能剂量依赖性地降低凋亡细胞百分率 ,以 10 μmol·L-1浓度组效果最好 ,其作用可被ATP敏感性钾通道特异性阻断剂格列本脲 (Gli)所拮抗。结论 :Ipt对缺氧诱导的神经细胞凋亡有明显的抑制作用 ,其作用机制与ATP敏感性钾通道、Bcl 2表达相关。     

盐酸埃他卡林对PD模型大鼠脑内突触体谷氨酸摄取的影响

目的　研究谷氨酸转运体功能改变与帕金森病(Parkinson’sdisease ,PD)发病的相关性 ,探讨新型ATP敏感性钾通道 (ATPsensitivepotassiumchannel,KATP)开放剂盐酸埃他卡林 (Iptakalimhydrochloride ,Ipt)对PD模型大鼠脑内突触体摄取谷氨酸的影响及其机制。方法　采用 6 hydrox ydopamine(6 OHDA)建立PD大鼠模型 ,制备脑组织突触体 ;用同位素标记法测定L [3 H] glutamate摄取活性。 结果　PD模型大鼠纹状体和皮层的谷氨酸转运功能明显降低 ;Ipt(10、5 0和 10 0 μmol·L-1)具有恢复转运功能的作用 ,此作用可被KATP阻断剂Glibenclamide (2 0 μmol·L-1)逆转。结论　谷氨酸转运体功能下降与PD发病密切相关 ;Ipt通过激活KATP发挥促进谷氨酸摄取的作用 ,有望成为新一代PD治疗药物     

ATP敏感性钾通道开放剂埃他卡林对高原脱习服的影响

目的：观察长期口服埃他卡林对高原脱习服的影响。方法：该临床研究采用随机双盲安慰剂平行对照试验方法,随机分为埃他卡林试验组和安慰剂对照组,两组受试者分别为39例和17例。其中,受试者分别口服埃他卡林片（5mg／片,1次／日）或安慰剂（1片／日）,连续服用药物7个月,下山到3700m停留2d并停止服药,再返回到海拔1400m的平原地区,自返回平原的第2、4、6天,进行高原脱习服症状调查,随访受试者的高原脱习服症状并进行症状评分。结果：长期驻扎在5200～5380m高海拔地区的受试者,返回平原后第2、4、6天,分别有82．4％、52．9％、23．5％的人员产生显著的高原脱习服症状,长期口服埃他卡林,高原脱习服发生率分别为43．6％、30．8％、38．5％;安慰剂对照组返回平原后脱习服反应程度的评分,在第2、4、6天分别为（6．0±1．9）、（4．6土1．0）、（3．8±1．5）分,埃他卡林治疗组分别为（4．4±2．4）、（3．3±1．8）、（4．0±1．5）分,两组比较,在返回低海拔第2、4天,高原脱习服反应的发病率及发病程度均显著减少,第6天的数据两组之间差别无统计学意义。结论：高原地区长期口服埃他卡林可显著减轻高原脱习服的发病程度,降低高原脱习服的发生率,预防高原脱习服。     

新型KATP开放剂埃他卡林对氟哌啶醇诱导的大鼠帕金森样症状的影响

目的 :研究ATP敏感性钾通道 (ATP sensitivepotassiumchannels ,KATP)开放剂埃他卡林 (iptakalim ,Ipt)对由氟哌啶醇 (haloperidol)诱导产生的大鼠帕金森样症状的影响。方法 :应用氟哌啶醇诱导大鼠帕金森样症状 ,以左旋多巴 (levodopa ,L DOPA)为阳性对照 ,观察不同剂量Ipt对大鼠运动潜伏时间、行走时间以及直立和梳洗次数的影响。结果 :Ipt能显著改善氟哌啶醇引起的大鼠自发性活动减少 ;能缓解氟哌啶醇引起的大鼠全身僵硬 ,并且随剂量的增加 ,Ipt的作用逐渐增强。结论 :KATP通道开放剂Ipt能够改善氟哌啶醇引起的大鼠帕金森样症状 ,是一个极富治疗潜力的先导化合物。     

新型KATP开放剂埃他卡林对原代培养人肺动脉平滑肌细胞ERK1／2磷酸化的影响

目的：研究新型ATP敏感性钾通道（KATP）开放剂埃他卡林（I阴）对内皮素-1（ET-1）诱导的原代培养人肺动脉平滑肌细胞细胞外信号调节激酶1和2（ERK1／2）磷酸化的影响。方法：原代培养人肺动脉平滑肌细胞,用Western blot方法检测磷酸化细胞外信号调节激酶1和2（p-ERK1／2）。培养液中加入ET-1（10nmol／L）,孵育0、1、2、5、10、30、60min。培养液中加入ET-1（10nmol／L）前30min分别加入0．1、1．0和10．0umol／LIPT．孵育10min。培养液中加入ET-1（10nmol／L）和IPT（10umol／L）前30min加入格列本脲（CU）（10umol／L）,孵育10min。结果：在2min至30min之间,ET-1呈时间依赖性促进人肺动脉平滑肌细胞ERK1／2磷酸化,10min时最明显。IPI、呈浓度依赖性拮抗ET-1对ERK1／2磷酸化的影响。特异性KATP阻断剂GLI逆转IPT的作用。结论：IPT可能通过激活KATP通道,抑制ET-1诱导的原代培养人肺动脉平滑肌细胞ERK1／2磷酸化,可能可用于肺血管重构、肺动脉高压的治疗。     

盐酸埃他卡林对自发性高血压大鼠肾组织KATP通道基因表达的影响

目的:从分子生物学水平探讨盐酸埃他卡林(iptakalimhydrohloride,Ipt)对自发性高血压大鼠(spontaneouslyhypertensiverats,SHR)肾组织KATP亚型表达的影响。方法:SHR于第12周龄进入实验,实验设Ipt1、3和9mg·kg-1·d-13个剂量组,盐酸苯那普利(benazepril)3mg·kg-1·d-1治疗组及SHR空白对照组,另设同周龄同种属正常血压大鼠(wistarKyotorat,WKY)为正常对照组,灌胃给药每天1次,连续12周,观察盐酸埃他卡林对血压和肾组织KATP亚型表达的影响。结果:SHR肾组织SUR2、Kir6.1、Kir1.1mRNA表达较WKY大鼠明显升高,盐酸埃他卡林1、3、9mg·kg-1·d-13个剂量组治疗后均可明显降低血压同时下调肾脏高表达的Kir6.1、Kir1.1mRNA水平,而对SUR2表达无明显影响。结论:盐酸埃他卡林对SHR降压治疗对肾脏的保护作用可能与其影响Kir6.1、Kir1.1基因表达有关。     

盐酸埃他卡林对动脉平滑肌钾电流的影响

目的　探讨抗高血压新药盐酸埃他卡林对动脉平滑肌细胞钾电流的作用。方法　分离大鼠动脉平滑肌细胞 ,用膜片钳全细胞记录技术记录细胞钾电流 ,通过浴槽内给药 ,观察盐酸埃他卡林对钾电流的影响。结果　盐酸埃他卡林(0 1、1、10、10 0 μmol·L-1)均可明显引起正常血压大鼠肺动脉平滑肌外向钾电流I U曲线上移 ,盐酸埃他卡林作用后 5min内细胞外向钾电流强度分别增强为初始电流强度的[(118 6± 15 9) % ,P <0 0 1vscontrol,n =6 ]、[(10 3 9±5 9) % ,P <0 0 1vscontrol,n =5 ]、[(132 7± 2 3 9) % ,P <0 0 1vscontrol,n =6 ]、[(15 0 1± 2 5 1) % ,P <0 0 1vscontrol,n =7];盐酸埃他卡林 (1、10、10 0 μmol·L-1)均可引起肾性高血压大鼠肺动脉平滑肌外向钾电流I U曲线上移 ,盐酸埃他卡林作用后 5min内细胞外向钾电流强度分别增强为初始电流强度的 [(12 1 5± 4 2 ) % ,P <0 0 1vscon trol,n =7]、[(132 2± 6 7) % ,P <0 0 1vscontrol,n =8]、[(114 2± 7 7) % ,P <0 0 1vscontrol,n =8];盐酸埃他卡林 (10 μmol·L-1)可引起肺动脉高压大鼠肺动脉平滑肌外向钾电流I U曲线上移 ,盐酸埃他卡林作用后 5min内细胞外向钾电流强度为初始电流强度的 [(80 6± 10 1) % ,n =5 ],同时间对照     

埃他卡林对长期低氧大鼠肺动脉平滑肌KATP mRNA的影响

目的 :研究慢性低氧对大鼠肺动脉平滑肌ATP敏感钾通道 (KATP)mRNA表达的影响及新型KATP开放剂盐酸埃他卡林的作用。方法 :SD雄性大鼠 16只随机分成对照组、低氧组、低剂量治疗组 (盐酸埃他卡林 0 .75mg·kg-1·d-1,ig)、高剂量治疗组(盐酸埃他卡林 1.5mg·kg-1·d-1,ig)。将低氧组和治疗组大鼠放入常压低氧舱制备动物模型 ;采用RT PCR技术 ,分析各组肺动脉主干平滑肌KATP mR NA表达。结果 :低氧组SUR2mRNA水平显著低于正常组 ,高剂量治疗组SUR2显著高于低氧组 ,各组Kir 6 .1没有显著差异。结论 :慢性低氧抑制KATP 通道表达 ,而盐酸埃他卡林能提高表达 ,可从肺动脉高压发病机制上理解该药物治疗价值。     

Ⅱ、Ⅲ组亲代型谷氨酸受体激动剂对6-羟基多巴诱导的PC12细胞毒性无保护作用

阐明Ⅱ、Ⅲ组亲代谢型谷氨酸受体(metabotropic glutamate receptors,mGluRs)激动剂对6—羟基多巴(6-hydroxydopamine,6-OHDA)诱导的PC12细胞毒性是否具有保护作用。方法：应用高效液相色谱仪联用荧光检测技术测定谷氨酸浓度，应用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法测定PC12细胞活性。结果：6—OHDA剂量依赖性地诱导PC12细胞释放谷氨酸、减低细胞活性，Ⅱ组mGluRs激动剂DCG—IV和Ⅲ组mGluRs激动剂L-AP4对6—0HDA诱导的PC12细胞释放谷氨酸和细胞活性的降低均无显影响。结论：6—OHDA对多巴胺神经元的损伤作用与其诱导谷氨酸过度释放及其继发的兴奋性神经毒性有关，Ⅱ、Ⅲ组亲代谢型谷氨酸受体激动剂对6—OHDA诱导的PC12细胞毒性无保护作用。     

Ⅰ组亲代谢型谷氨酸受体配基不影响6-羟基多巴胺诱导的PC12细胞死亡及谷氨酸的释放

黑质致密部多巴胺能神经元大量缺失是帕金森病(Ｐａｒｋｉｎｓｏｎｓｄｉｓｅａｓｅ,ＰＤ)的一个重要特征。近年来 ,研究者对ＰＤ的发病机制提出了兴奋性氨基酸 (ＥＡＡ)的神经毒性学说。中枢神经系统中的主要ＥＡＡ是谷氨酸 (ｇｌｕｔａｍａｔｅ,Ｇｌｕ) ,其受体分为两大类 :亲离子型受体 (ｉｏｎｏｔｒｏｐｉｃｇｌｕｔａｍａｔｅｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ,ｉＧｌｕＲｓ)和亲代谢型受体 (ｍｅｔａｂｏｔｒｏｐｉｃｇｌｕｔａｍａｔｅｒｅｃｅｐｔｏｒｓ,ｍＧｌｕＲｓ)。已发现的ｍＧｌｕＲｓ被分为三组 ,即ＧｒｏｕｐⅠ (ｍＧｌｕＲ1和ｍＧｌｕ…     

Neuroprotective effects of adenosine isolated from Cordyceps cicadae against oxidative and ER stress damages induced by glutamate in PC12 cells

Glutamate has been proven to induce oxidative stress through the formation of reactive oxygen species (ROS) and increased calcium overload which results in neuronal injury, development of neurodegenerative diseases and death. Adenosine is one of the bioactive nucleosides found in Cordyceps cicadae and it has displayed several pharmacological activities including neuroprotection. In this study, the protective effects of adenosine from C. cicadae against glutamate-induce oxidative stress in PC12 cells were evaluated. The exposure of PC12 cells to glutamate (5 mM) induced the formation of ROS, increased Ca²⁺ influx, endoplasmic reticulum (ER) stress and up regulated the expression of pro-apoptotic factor Bax. However, pretreatment with adenosine markedly increased cell viability, decreased the elevated levels of ROS and Ca²⁺ induced by glutamate. Furthermore adenosine increased the activities of GSH-Px and SOD, as well as retained mitochondria membrane potential (MMP), increased Bcl-2/Bax ratio, and reduced the expression of ERK, p38, and JNK. Overall, our results suggest that adenosine may be a promising potential therapeutic agent for the prevention and treatment of neurodegenerative disorders.     

丹皮酚对过氧化氢诱导的PC12细胞凋亡的抑制作用(英文)

目的探讨丹皮酚对过氧化氢(H2O2)诱导的PC12细胞凋亡的抑制作用及其机制。方法建立H2O2致PC12细胞损伤模型,采用MTT法测定细胞存活率,流式细胞术测定细胞凋亡率及细胞内活性氧含量,化学比色法测定乳酸脱氢酶(LDH)释放量及细胞内丙二醛(MDA)含量。结果PC12细胞经H2O2100μmol.L-1处理10 h可致细胞存活率下降,并能诱导细胞凋亡,LDH释放量及细胞内活性氧和MDA含量明显增加;丹皮酚(12,25和50μmol.L-1)预处理1 h可提高细胞存活率,减少细胞凋亡、LDH释放量及细胞内活性氧和MDA含量。结论丹皮酚对H2O2诱导的PC12细胞凋亡具有抑制作用,该作用可能与其抗氧化作用有关。     

6-羟基多巴胺诱导PC12细胞释放谷氨酸及死亡不受Ⅰ组亲代谢型谷氨酸受体配基的影响(英文)

目的:探讨Ⅰ组亲代谢型谷氨酸受体(mGluR)配基对6-羟基多巴胺(6-OHDA)诱导的PC12细胞死亡及谷氨酸(Glu)释放的影响。方法:培养PC12细胞,以100μmol/LⅠ组mGluR激动剂(RS)-3,5-dihydroxyphenylglycine(DHPG)和拮抗剂DL-2-amino-3-phosphonopropionic acid(DL-AP3)预先剌激细胞1h,再加入6-OHDA100μmol/L共孵育24h,显微镜下观察细胞形态变化,用TUNEL法检测凋亡细胞,用噻唑蓝(MTT)法检测细胞存活率,并用高效液相色谱检测Glu的释放量。结果:6-OHDA 降低PC12细胞存活率(P<0.01),其诱导的Glu释放呈浓度和时间依赖性。Ⅰ组mGluR配基不能减少6-OHDA引起的PC12细胞死亡,也不影响6OHDA引起的Glu释放量。结论:Ⅰ组mGluR配基对6-OHDA引起死亡的PC12细胞无保护作用。     

咖啡酸对氧化应激诱导的PC12细胞5-脂氧酶激活的抑制作用

目的探讨咖啡酸是否通过抑制氧化应激诱导的5-脂氧酶(5-LOX)激活而减轻细胞损伤。方法稳定转染绿荧光蛋白(GFP)-5-LOX的PC12细胞,预先给予咖啡酸0.001~10μmol.L-1和对照药MK886,30min后观察缺氧缺糖/恢复(OGD/R)及过氧化氢(H2O2)160μmol.L-1处理后的变化。MTT法和碘化丙啶染色法分析细胞存活率和死亡率;荧光显微镜观察OGD 2 h/R2 h和H2O2处理40 min时5-LOX的核膜移位;ELISA法测定OGD 2 h/R 3 h时5-LOX代谢产物的生成;DCF法检测OGD 2 h/R 0.5 h细胞内活性氧(ROS)的产生。结果 OGD 2 h/R 24 h GFP-5-LOX转染和GFP-转染PC12细胞的存活率分别为(63.1±6.6)%和(70.7±6.9)%;H2O2处理24 h细胞存活率分别为(62.5±7.7)%和(75.7±9.5)%。在GFP-5-LOX转染的PC12细胞中,咖啡酸和对照药MK886可使OGD/R细胞存活率从(63.1±6.6)%分别增加到(87.3±2.0)%和(89.9±6.3)%,细胞坏死率从(31.4±1.5)%降低到(10.1±2.0)%和(11.7±1.3)%(P<0.01);使H2O2处理细胞存活率从(62.51±7.65)%增加到(92.59±4.02)%和(75.31±6.60)%;使OGD/R细胞CysLTs的生成从261.1±33.7降低到108.5±16.7和(90.6±19.5)ng.g-1蛋白(P<0.01)。此外,咖啡酸抑制OGD/R诱导PC12细胞的ROS产生,IC50值为8.021μmol.L-1;抑制OGD/R诱导的GFP-5-LOX转染的PC12细胞5-LOX核膜移位,IC50值为0.974μmol.L-1;抑制H2O2诱导的GFP-5-LOX转染的PC12细胞5-LOX核膜移位,IC50值为0.501μmol.L-1;MK886无上述作用。结论咖啡酸可抑制氧化应激诱导的PC12细胞5-LOX激活,对缺血损伤的PC12细胞具有保护作用。     

Protective effect of Xanthoceraside on injuried PC12 cells in vitro

Objective To investigate the protective effect of Xanthoceraside on various injured PC12 cells models and to indicate the mechanism of Xanthoceraside therapying dementia.Methods Four injured PC12 models induced by glutamate,hydrosulfurous sodium,sodium nitroprusside and potassium chloride accordingly were used to assay the effect of Xanthoceraside on PC12 cells by using morphological examination and MTT assay.In addition,in the model of glutamate injury,the Lactate dehydrogenase(LDH)and the lipid peroxidation products malondialdehyde(MDA)were measured by a spectrophotometric method,reactive oxygen species(ROS)generation were measured with flow cytometry.Results It was found that Xanthoceraside could obviously increase the viability of PC12 cells injured by four injury models.Xanthoceraside could also decerase the levels of LDH release,MDA production,and ROS generation induced by glutamate.Conclusions These data indicate that Xanthoceraside may provide a useful therapeutic strategy for the treatment of progressive neurodegenerative diseases such as Alzheimer's disease(AD).     

1-甲基-4-苯基吡啶离子诱导大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤PC12细胞发生铁死亡的实验观察

目的 进行1-甲基-4-苯基吡啶离子(1-methyl-4-phenyl pyridine,MPP+)诱导大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤PC12细胞铁死亡(Ferroptosis)的研究.方法 采用噻唑蓝法(MTT)检测细胞存活率和筛选铁死亡抑制剂(Ferrostatin-1)的最佳作用浓度;倒置显微镜观察Ferrostatin-1对PC12细胞的保护作用;MDC染色检测细胞自噬;ELISA法检测caspase-3的酶活性;流式细胞术检测活性氧ROS.结果 1 mmol·L-1 MPP+对PC12细胞有明显抑制作用;5 μmol·L-1 Ferrostatin-1能够明显提高PC12细胞的存活率;倒置显微镜观察结果表明Ferrostatin-1预保护后,PC12细胞损伤明显减少;MDC染色检测细胞自噬和ELISA法检测caspase-3的酶活性结果显示Ferrostatin-1对MPP+诱导的PC12细胞自噬和凋亡的保护作用不明显;ROS活性氧检测结果显示ROS在胞内增加,可能发生氧化应激,加Ferrostatin-1后ROS荧光强度减弱.结论 Ferroptosis能够显著抑制MPP+诱导的PC12细胞损伤,且Ferrostatin-1对细胞的自噬和凋亡作用不明显,推测出MPP+诱导PC12细胞的损伤可能有Ferroptosis的存在.