淀粉样前体蛋白基因在急性髓系白血病的表达及其生物学行为研究

目的 探讨淀粉样前体蛋白(APP)基因在急性髓系白血病(AML)细胞的表达及其生物学行为.方法 应用实时定量PCR方法(2-ΔCt)检测85例初诊AML和20例非恶性血液病患者(对照)骨髓细胞APP mRNA的表达,并研究其表达水平对AML患者的临床特征和治疗反应的影响;应用实时定量PCR和Western blot方法检测APP基因和蛋白在AML细胞株的表达,并与AML原代细胞亚型的结果相比较;化学合成针对APP基因的小干扰RNA(siRNA),利用脂质体转染HL-60细胞,下调APP基因表达.RNA干扰24、48、72 h后,采用MTT法及锥虫蓝拒染细胞计数检测细胞增殖;瑞特-姬姆萨染色观察细胞形态;PI染色流式细胞术分析细胞周期;Annexin V/PI双染色流式细胞术及Hoechst染色检测细胞凋亡;RNA干扰48 h,Western blot法检测凋亡相关蛋白NF-κB、bcl-2和caspase-3的表达;MTT法检测细胞对阿霉素的敏感性.结果 APP mRNA表达在AML亚型间差异有统计学意义(P=0.019),伴t(8;21)的M2b表达最高(中位值0.1080),其次是AML-未定型(0.0467)、M3(0.0266)、M2a(0.0221)、M4a(0.0167)、M5b(0.0151)、M4b(0.0025),两两比较分析显示,M2b患者APPmRNA表达显著高于M5b患者(P=0.000).APP mRNA表达水平对AML亚型以外患者临床特征及治疗反应无显著影响(P＞0.05).Kasumi-1细胞APP基因表达显著高于U937细胞(P＜0.05),与AML各亚型原代细胞中的结果相一致.APP-siRNA转染HL-60细胞后,其APP mRNA表达下凋64%,在培养24、48及72 h后检测HL-60细胞增殖、分化、凋亡、细胞周期及对阿霉素敏感性均无明显变化(P＞0.05).结论 伴t(8;21)异位的M2型白血病高表达APP mRNA,单核细胞白血病低表达APPmRNA.APP基因表达沉默对HL-60细胞的生物学作用无显著影响.     

STAT3基因在急性髓系白血病中的表达及临床意义

目的:探讨STAT3基因在初诊急性髓系白血病(AML)患者骨髓中的表达及其与临床特征的相关性。方法:采用实时荧光定量PCR检测38例AML患者骨髓中STAT3 mRNA表达水平,分析其与临床特征及预后的相关性;利用Western blot检测AML患者骨髓中STAT3蛋白表达水平。选择15例正常人作为对照组。结果:在mRNA水平上,AML组的STAT3表达水平明显高于正常对照组(P0.05);AML组的STAT3表达水平与危险程度呈正相关(P=0.01,r=0.592),高危组的STAT3表达水平明显高于标危组及对照组,其差异均有统计学意义(P0.01,P0.01),其余各组间差异无统计学意义(P 0.05);M5组STAT3表达水平显著高于对照组,且有统计学差异(P=0.01);M2与M5及对照组之间STAT3表达水平无统计学差异(P=1,P=0.066)。STAT3低表达组患者的中位生存时间长于高表达组,但其差异无统计学意义(P=0.146)。在蛋白水平上,AML组STAT3表达水平高于对照组(P=0.017)。结论:STAT3基因在AML患者中存在高表达,且与患者免疫分型、危险度具有相关性。     

AML和ALL患者骨髓EVI1表达水平及其与白血病分型、临床特征和预后的相关性分析

目的:探讨白血病患者骨髓中的EVI1基因在AML和ALL中的表达情况,以及其与白血病分型、患者临床特征以及预后的相关性。方法:选取2012年至2016年间中南医学院收治的白血病患者333例,其中AML患者263例,ALL患者70例,正常对照的志愿者13例。抽取患者及志愿者的骨髓样本,用Ficoll法分离骨髓样本中的单个核细胞,提取总DNA,然后采用实时荧光定量PT-PCR检测法检测EVI1 mRNA的相对表达水平,比较EVI1mRNA在AM L、ALL患者中的表达差异。采用相关的统计学方法分析EVI1表达与白血病分型、患者临床特征以及患者预后之间的相关性。结果:根据实时荧光定量PT-PCR检测的EVI1 mRNA表达结果,EVI1 mRNA在AM L、ALL患者中均有较高的表达水平,因此2组的EVI1 mRNA表达水平比较没有显著的差异(t=1. 756,P0. 05),但是ALL患者在EVI1 mRNA发生过表达及低表达的表达率高于AM L患者,而正常表达的表达率低于AM L患者,差异存在统计学意义(χ~2=13. 698,P 0. 05)。在AM L-M1中,T-ALL两个亚型中患者的Plt水平与EVI1 mRNA表达水平呈正相关(r=0. 393,P 0. 05;ρ=0. 442,P 0. 05),而在AM L-M3亚型中,患者的Blasts(%)在AML-M3与EVI1 mRNA表达水平有显著的负相关性(r=-0. 518,P 0. 01)。在EVI1 mRNA表达分布上,EVI1 mRNA的表达分布与AML患者年龄存在相关性(χ~2=6. 684,P 0. 05)。AM L患者中有高表达EVI1mRNA的患者的有较差的预后(Log-Rank检验,P 0. 05),且AM L-M3亚型的EVI1 mRNA高表达患者比非高表达的患者有更显著的较差预后(Log-Rank检验,P 0. 01)。结论:在EVI1的表达水平上,AML及ALL患者并没有太大的差异,但在EVI1的表达分布差异明显,并且其差异与患者的年龄有一定的相关性。同时患者的一些临床特征以及急性白血病的部分亚型均与EVI1的表达水平存在一定相关性。     

CUEDC1在急性髓系白血病(非M_3型)患者中的预后意义

目的:探讨CUEDC1在非M_3型急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)患者中的预后意义。方法:选取52例初诊AML(非M_3型)患者纳入AML(非M_3)组,选取同期10例缺铁性贫血患者纳入对照组,从患者骨髓中分离骨髓单个核细胞(bone marrow mononuclear cells,BMMC),采用实时荧光定量PCR (RT-PCR)检测CUEDC1的表达水平。比较各亚型AML患者BMMC中CUEDC1 mRNA的表达水平;根据CUEDC1 mRNA表达水平将初诊AML患者分为低表达组及高表达组,第一疗程化疗结束后比较初次诱导治疗完全缓解率,并采用回顾性分析比较缓解组和未缓解组CUEDC1 mRNA相对表达水平。结果:CUEDC1在初诊的52例AML(非M_3型)各亚型及10例缺铁性贫血患者BMMC中均表达,但在AML患者组的表达水平高于对照组(P 0.05),且在急性单核细胞白血病(M5)患者中的表达水平最高(P 0.05); CUEDC1低表达的AML患者第一疗程诱导完全缓解率(76.2%,16/21)高于高表达的AML患者缓解率(67.7%,21/31),但差异无统计学意义(P 0.05);初诊AML(非M_3型)缓解组CUEDC1 mRNA表达水平低于未缓解组(P 0.05)。结论:CUEDC1在AML初诊患者BMMC中高表达,且在急性单核细胞白血病(M5)患者BMMC中的表达最高,初诊AML患者CUEDC1的表达水平可能与其预后相关。     

PTEN及BCL-2在急性髓系白血病中的表达及意义

目的:探讨人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源蛋白的基因(PTEN)及B细胞淋巴瘤/白血病-2(BCL-2)在急性髓系白血病(AML)中的表达及意义。方法:采用Real-time PCR和Western blot法检测80例AML(包括56例初治患者,16例缓解患者,8例复发患者)及30例非血液病患者骨髓中PTEN及BCL-2的mRNA及蛋白表达水平,并分析二者与临床病理参数的关系。结果:初治和复发组患者骨髓细胞PTEN mRNA及蛋白表达水平均显著低于对照组及缓解组(P0.01),BCL-2 mRNA及蛋白表达量均显著高于对照组及缓解组(P0.01)。PTEN与BCL-2 mRNA表达水平与AML患者年龄,性别及白细胞计数无相关性(P0.05)。AML患者中PTEN与BCL-2蛋白及mRNA表达水平均呈负相关(r=-0.432,r=-0.569)。结论:PTEN及BCL-2参与AML的发生发展,并对AML的化疗效果起着指示作用。     

泛素相关蛋白1基因与肿瘤抑制基因p16在急性白血病中的表达研究

为了探讨泛素相关蛋白1(UBAP1)基因和肿瘤抑制基因(p16)在急性白血病中的表达水平及二者的相关性,采用实时荧光定量PCR技术检测68例急性白血病患者和22例对照者骨髓细胞中ubap1基因和p16基因的mRNA的表达水平。结果发现,在急性白血病中ubap1基因呈高表达,p16基因呈低表达,与对照组相比较有显著性差异(p0.01)。然而,进一步分组比较发现,ubap1基因仅在成人急性髓系白血病的M4和M5亚型中的表达有统计学意义(p0.05),p16基因除成人FAB分型的M1和M2亚型外,其余组差异均有统计学意义(p0.05);而ubap1基因和p16基因的mRNA表达水平在染色体预后分组间差异无统计学意义(p0.05)。ubap1基因和p16基因的表达水平在对照组中呈显著负相关(r=-0.827,p0.01),在病例组中无相关性(r=0.065,p0.05)。结论:ubap1基因高表达与p16基因低表达可能同时参与急性白血病的发病,其中ubap1基因高表达主要影响AML中M4和M5亚型的发病,这一发现为进一步探讨急性白血病发病机制及靶向治疗提供重要的理论依据。     

SHP-1 mRNA在髓系白血病患者中的表达及临床意义

目的:探讨造血细胞磷酸酶(SHP-1)信使核糖核酸(mRNA)在髓系白血病患者中的表达及其与治疗效果和慢性髓系白血病(CML)临床分期的关系。方法:54例CML患者,30例初诊急性髓系白血病(AML)患者,10例非恶性肿瘤常规查体者做对照组(CG),应用SYBR Green荧光定量PCR的方法,检测骨髓或外周血单个核细胞中SHP-1 mRNA的表达情况。结果:CG、慢性髓系白血病慢性期(CP-CML)、进展期CML、AML组SHP-1 mRNA的相对表达水平分别为:1.15±0.62,4.96±1.76,2.60±0.90,0.45±0.20。CML患者SHP-1 mRNA表达水平较CG组表达水平显著增高(P0.05)。CML患者中,CP-CML患者的SHP-1 mRNA表达水平非常显著高于进展期CML患者(P0.0001)。AML患者较CG组SHP-1 mRNA表达水平明显降低(P=0.0442)。CP-CML患者伊马替尼(IM)治疗3个月时的治疗反应理想组初诊时SHP-1 mRNA表达水平为5.712±0.4476,非常显著地高于反应不佳或失败组4.044±0.3701(P=0.0090)。AML患者诱导化疗达完全缓解组(CR)初诊时SHP-1 mRNA表达水平为0.4984±0.05164,高于未完全缓解组(non-CR)0.3537±0.02388(P=0.0017)。结论:CML患者SHP-1 mRNA表达水平高于AML患者,且与CML疾病进展相关;初诊时SHP-1 mRNA表达水平可以作为预测CP-CML对伊马替尼早期治疗反应及AML患者诱导化疗效果的指标。     

急性髓系白血病HGFA、Matriptase、HAI-1、HAI-2表达水平及临床意义

目的:探讨HGFA、Matriptase、HAI-1、HAI-2在急性髓系白血病患者中的表达水平及其临床意义。方法:收集91例急性髓系白血病初治患者、41例急性髓系白血病缓解患者和32例正常人的骨髓标本,利用实时荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)法检测髓系白血病细胞HGFA、Matriptase、HAI-1、HAI-2 mRNA表达水平;比较上述基因在人急性髓系白血病患者初治组和缓解组以及健康对照组中的表达情况;分析其表达情况与其临床特征的相关性。结果:在AML初治组HGFA水平高于健康对照组(P=0.010);而HAI-2 mRNA水平则低于健康对照组(P=0.0158),但均与AML缓解组无统计学差异。HAI-1、Matriptase mRNA水平在各组中均无明显差异。在高白细胞组中HAI-2 mRNA表达较低(P=0.03902)。结论:HGF/c-Met信号系统在AML中的异常激活,有可能是其上游的调控因子HGFA表达增高和HAI-2表达降低的结果。     

中期因子在急性白血病中的表达及其意义

目的 检测中期因子(Midkine,MK)基因在白血病患者中的表达,初步探讨其与白血病的关系.方法 应用实时定量逆转录PCR(RQ-RT-PCR)方法,对181例急性白血病(AL)患者、31名正常人骨髓标本进行了中期因子转录本的检测.结果 中期因子在初治和复发AL患者、AL完全缓解(CR)患者及正常人骨髓细胞均有表达.初治和复发AL患者中期因子表达明显高于正常人及CR患者(P＜0.01及P＜0.05).而正常人与CR患者相比差异无统计学意义.中期因子的表达在B细胞急性淋巴细胞白血病(B-ALL)各亚型(包括pro-B-ALL,common-B-ALL,pre-B-ALL)及各年龄段均有显著升高(P＜0.01),且与T细胞急性淋巴细胞白血病(T-ALL)、急性杂合性白血病及急性髓系白血病(AML)各FAB亚型问差异均有统计学意义(P值均＜0.01);与正常人相比,M2型患者中期因子表达明显升高(P＜0.01),与AML其他FAB亚型相比差异亦有统计学意义(P值均＜0.05);M3患者中期因子表达也较正常人明显升高(P＜0.05),但与除B-ALL和AML-M2外的其他白血病亚型间差异无统计学意义.CD34+患者较CD34-患者中期因子表达显著升高(P＜0.01),AML1-ETO融合基因阳性的M2患者较阴性的M2患者中期冈子表达显著升高(P＜0.05).结论 B-ALL、AML-M2和AML-M3型白血病患者中均存在中期因子基因不同程度的表达升高,为白血病诊断及其发病机制的研究提供了新的方向.     

PRAME mRNA在初诊急性髓系白血病患者中的表达及微量残留病监测中的应用

目的 了解黑色素瘤优先表达的抗原(PRAME)mRNA在初诊急性髓系白血病(AML)患者中的表达,评估其在微量残留病(MRD)监测中的作用.方法 采用基于TaqMan探针的实时定量RT-PCR技术检测142例初诊AML患者(其中72例不具有特异融合基因)骨髓单个核细胞PRAMEmRNA水平,动态观察3例持续缓解及6例血液学复发患者(2例不具有特异融合基因)治疗前后共60份骨髓标本PRAME mRNA水平,以22份异基因骨髓移植供者的骨髓标本作为健康对照.随访的7例AML1-ETO(+)M2患者同时检测AML1-ETO mRNA水平.以abl作为内参基因.结果 健康对照骨髓标本均表达PRAME mRNA,表达水平最高为0.28%.全部初诊AML患者骨髓中位PRAME mRNA水平为3.97%(0.00%～714.97%).无特异融合基因的AML患者骨髓中位PRAME mRNA水平为0.60%(0.00%～408.72%).PRAME mRNA水平在AML各亚型之间差异有统计学意义(P＜0.01),AML1-ETO(+)M2患者PRAME mRNA水平高于其他亚型(P值均＜0.01),S型PML-RARa(+)急性早幼粒细胞白血病患者次之.随访的AML1-ETO(+)M2患者PRAME mRNA与AML1-ETO mRNA呈现同样的变化趋势,二者呈明显正相关(r=0.88,P＜0.01).血液学复发患者中3例复发前PRAMEmRNA水平逐步升高,分别在复发前1～4个月超过正常上限,另3例患者在血液学缓解状态时PRAME mRNA水平始终未降至正常.结论 PRAME mRNA可以用于监测AML患者MRD,其水平持续升高或始终异常预示血液学复发.