分级定量PCR检测血清HBV DNA

目的利用竞争ＰＣＲ法建立分级测定ＨＢＶＤＮＡ含量的定量方法．方法设立３个标准竞争模板（１０２ｃｏｐ,１０４ｃｏｐ,１０６ｃｏｐ）,分别和恒量的待测模板混合,分别进行４０,３０,２０次循环的ＰＣＲ扩增,最后凝胶电泳分离待测模板和竞争模板的ＰＣＲ产物,测定两者的荧光强度的比值,计算待测模板的初始量．结果对乙型肝炎血清ＨＢＶＤＮＡ定量表明,１２份ＨＢｅＡｇ阳性血清,ＨＢＶＤＮＡ的血清浓度在６×１０７～１×１０１１ｃｏｐ／Ｌ,而１２份ＨＢｅＡｂ阳性血清只有７份可检出ＨＢＶＤＮＡ,它们的血清浓度均在３×１０８ｃｏｐ／Ｌ以下,其余５份用该ＰＣＲ方法,检测不到．结论该方法可用于ＨＢＶＤＮＡ以及其他病原体ＤＮＡ的定量     

UCP基因A→G（—3826）变异与中国人2型糖尿病脂代谢,体脂 …

观察解偶联蛋白基因Ａ→Ｇ（－３８２６）变异与２型糖尿病脂代谢，体脂含量及分布的关系。方法２３８例中国人（其中耐量正常者１３２例，２例糖尿病１０６例）及６４例白种人用ＰＣＲ－ＲＦＬＰ检测ＵＣＰ基因Ａ→Ｇ（－３８２６）变异。     

原位PCR技术

原位ＰＣＲ技术原位ＰＣＲ即是将ＰＣＲ技术的高效扩增特点与原位杂交的细胞定位方法相结合，在组织细胞原位检测单拷贝或低拷贝的特定ＤＮＡ或ＲＮＡ序列．首先将待检标本经化学固定，以保持组织细胞良好的形态结构。经蛋白酶处理增加细胞膜及核膜通透性，使ＰＣＲ扩增反...     

PCR技术在呼吸系统感染病原学诊断中的应用

ＰＣＲ技术在呼吸系统感染病原学诊断中的应用徐启勇，张天民，朱卫华一、ＰＣＲ技术简介聚合酶链反应（ＰｏｌｙｍｅｒａｓｅＣｈａｉｎＲｅａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ）技术，为１９８４年美国Ｃｅｔｕｓ公司人类遗传研究室Ｍｕｌｌｉｓ等创建的体外扩增技术。该方法应用１０...     

PCR 与 DIFA 检测沙眼衣原体的比较研究

用所建立的沙眼衣原体质粒引物聚合酶链反应技术（ＰＣＲ）检测１１６例泌尿生殖道沙眼衣原体，并与直接免疫荧光法（ＤＩＦＡ）进行比较。结果ＰＣＲ阳性３８例，ＤＩＦＡ阳性的３２例中有３１例ＰＣＲ阳性。ＰＣＲ敏感性为９６．９％，特异性为９１．７％。ＰＣＲ阳性者于治疗结束１～２周后复诊２１例，其中４例ＰＣＲ仍然阳性。结果显示，ＰＣＲ可快速、敏感、特异地检测泌尿生殖道沙眼衣原体ＤＮＡ，然而对治疗后短期内复诊患者，似乎不宜仅以ＰＣＲ阳性结果作为重复治疗的依据。     

核酸体外扩增技术诊断骨结核的临床研究

目的探讨核酸体外扩增（ＰＣＲ）技术在骨结核诊断中的价值。方法对６０例骨结核标本与２０例非骨结核标本分别应用ＰＣＲ、抗酸染色镜检及分离培养法进行结核分支杆菌检测。同时，分析了影响ＰＣＲ结果的有关因素与相应处理措施。结果６０例骨结核标本中三种方法的阳性检出率分别为：ＰＣＲ法８３％，镜检法３％，培养法７％。经统计学处理，Ｐ＜０．００５，ＰＣＲ法与镜检及培养法对结核分支杆菌的阳性检出率比较具有显著性差异，ＰＣＲ法明显优于镜检及培养法。２０例非骨结核标本镜检及培养法均阴性，ＰＣＲ法阳性率１０％。盲法结核分支杆菌和对照菌ＰＣＲ检测结果表明，ＰＣＲ的特异性为１００％。ＰＣＲ扩增整个过程自动化控制，可在数小时内完成。结论ＰＣＲ技术是一种快速、敏感、特异与简便的骨结核标本结核分支杆菌检测方法，对骨结核的诊断与鉴别诊断具有重要价值。     

应用聚合酶链反应快速检测临床标本中的肺炎支原体

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测临床标本中的肺炎支原体（ＭＰ）。在１４０例非细菌性肺炎患者的标本中，ＰＣＲ试验阳性３０例。其中间接血凝试验阴性面ＰＣＲ试验阳性者２１例。ＰＣＲ阳性标本经ＭＰ５－４寡核苷酸探针检测验证，均为阳性结果。     

应用分子生物学技术检测布鲁氏菌抗原的研究：Ⅱ PCR技…

用ＰＣＲ技术诊断动物布病，还未见报道。作者首欠用牛种布氏菌１０４Ｍ株１００万１只的菌量感染普通小鼠，分别在感染第５ｄ，１０ｄ采血，同时做血清学反应和ＰＣＲ检测为阳性，同时，还检查了感染１５ｄ的豚鼠，其ＳＡＴ和ＰＣＲ结果均为阳性，ＰＣＲ和ＳＡＴ在感染的后期有很高的符合率。     

定量分析的体外基因扩增法

定量分析的体外基因扩增法解放军农牧大学刘纯杰综述军事医学科学院生物工程研究所张兆山审校ＰＣＲ技术自１９８５年建立以来，在短短的几年里得到了迅速的发展和广泛的应用，被誉为分子生物发展史上的一个重要里程碑。笔者曾就ＰＣＲ技术的新发展及ＰＣＲ在基因重组与突...     

涂片法和PCR检测74例胸液标本结果的对比分析

涂片法和ＰＣＲ检测７４例胸液标本结果的对比分析毕达义·杜来提吐汉为进一步评价聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术在诊断结核性胸膜炎中的使用价值，我们同时应用涂片法和ＰＣＲ技术，对７４例患者，包括结核性４２例（均经涂片及Ｘ线胸片检查，并经抽胸液及抗结核治疗效果满...     

HCV 5′NCR和结构蛋白编码序列的克隆及对PA317细胞的转染

目的进一步研究丙型肝炎病毒５′ＮＣＲ对结构蛋白编码基因的表达调控。方法以拼接好的ＨＣＶ５′ＮＣＲ，Ｃ，Ｅ１和Ｅ２／ＮＳ１区基因共长２５４７个核苷酸片段克隆于逆转录病毒载体ＬＮＳＸ得重组体ｐＬＨＣ２５４７，用聚合酶链反应（ＰＣＲ）及核苷酸序列分析等方法对重组体进行鉴定。通过磷酸钙－ＤＮＡ共沉淀法把经鉴定的重组体转染入ＰＡ３１７细胞，用Ｇ４１８进行克隆筛选，以ＮＩＨ３Ｔ３细胞测其病毒滴度。提取转染细胞ＤＮＡ及培养上清ＲＮＡ分别用ＰＣＲ和逆转录ＰＣＲ进行鉴定。结果培养上清的病毒滴度为２×１０５ＣＦＵ／ｍｌ，ＰＣＲ及逆转录ＰＣＲ（ＲＴ－ＰＣＲ）分别可以从转染的细胞ＤＮＡ及培养上清中扩增出ＨＣＶ的基因片段。结论目的基因已整合到细胞的基因组中并得以表达     

定量聚合酶链反应技术研究进展

自Ｍｕｌｌｉｓ等于 1985年创建了聚合酶链反应(ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ ,ＰＣＲ)技术以来 ,该技术经过十几年的发展与完善 ,已在基础研究领域得到了广泛的应用 ,并在临床疾病的诊断方面进行了一些探索性研究。根据ＰＣＲ扩增策略和检测产物手段的不同 ,可分为定性ＰＣＲ(ｑｕａｌｉｔａｔｉｖｅＰＣＲ ,以下简称ＰＣＲ)和定量ＰＣＲ(ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅＰＣＲ ,Ｑ ＰＣＲ)。一、ＰＣＲ在结核分支杆菌检测中的研究现状1989年Ｈａｎｃｅ等[1] 将ＰＣＲ用于结核分支杆菌的检测 ,1990年我国引进该项技术 ,从而在…     

PCR诊断结核性胸腔积液33例临床分析

ＰＣＲ诊断结核性胸腔积液３３例临床分析山东医科大学附属医院（２５００１２）董亮，王伟，许仁和，王玲结核性胸腔积液的病原学诊断是临床的一大难点。多聚酶链反应（ＰＣＲ）技术的问世，大大增强了结核杆菌检测的敏感性及特异性。我们对３３例胸腔积液患者应用ＰＣＲ...     

多聚酶链反应和病毒分离检测巨细胞病毒的比较研究

９２名住院患儿病毒分离，常规ＰＣＲ，热启动ＰＣＲ，碘化钠抽提结合热启动ＰＣＲ的ＣＭＶ检出率分别为６１％，２８％，３９％和４８％，与病毒分离比较，常规ＰＣＲ，热启动ＰＣＲ，碘化钠抽提结合热启动ＰＣＲ检测极低拷贝数ＣＭＶＤＮＡ的敏感性分别为８％，３６％和６４％。从而显示碘化钠抽提结合加热启动ＰＣＲ，敏感性高，简便快速，４ｈ内可判定结果，颇具临床实用价值。     

新发现的糖尿病亚型—线粒体tRNA^Leu（UUR）基因突变糖尿病的…

作者介绍检测一种糖尿病亚型的ＰＣＲ／ＡｐａⅠ及ＰＣＲ／ＨａｅⅢ基因诊断２技术，具有省时，简便，结果易于判断的特点，适用于临床医学实验室进行。     

结核分支杆菌DNA的单管巢式聚合酶链反应检测

目的探讨单管巢式聚合酶链反应（ＳＮＰＣＲ）检测石蜡包埋组织结核分支杆菌ＤＮＡ的特异性和敏感性。方法应用普通ＰＣＲ（ＧＰＣＲ）、双管巢式ＰＣＲ（ＤＮＰＣＲ）和ＳＮＰＣＲ对结核分支杆菌ＢＣＧ和３０例结核性淋巴结炎石蜡包埋组织进行结核分支杆菌复合群ＩＳ６１１０特异插入序列片段ＤＮＡ检测。结果ＤＮＰＣＲ和ＳＮＰＣＲ检测ＢＣＧＤＮＡ均于１５ｆｇ以上呈现阳性结果，其敏感性明显优于ＧＰＣＲ（４８０ｆｇ）。ＧＰＣＲ、ＤＮＰＣＲ和ＳＮＰＣＲ检测３０例结核性淋巴结炎阳性率分别为４３％、１００％和１００％，抗酸染色阳性率（１０％）与３种ＰＣＲ法相比差异有非常显著意义（均Ｐ＜０．０１）。ＧＰＣＲ阳性率与ＤＮＰＣＲ和ＳＮＰＣＲ相比差异亦具非常显著意义（均Ｐ＜０．０１）。ＳＮＰＣＲ阳性率与ＤＮＰＣＲ相同。结论巢式ＰＣＲ检测淋巴结石蜡包埋组织结核分支杆菌的敏感性显著高于ＧＰＣＲ，其中ＳＮＰＣＲ具有与ＤＮＰＣＲ相同的特异性和敏感性，并具有更大的实用价值。     

PCR与DIFA检测沙眼衣原体的比较研究

用所建立的沙眼衣原体质粒引物聚合酶链反应技术检测１１６例泌尿生殖道沙眼衣原体，并与直接免疫荧光法进行比较。结果ＰＣＲ阳性３８例，ＤＩＦＡ阳性的３２例中有３１例ＰＣＲ阳性。ＣＰＲ敏感性为９６．９％，特异性为９．１７％。ＰＣＲ阳性者于治疗结束１－２财后复诊２１例，其中４例ＰＣＲ仍然阳性。     

新发现的糖尿病亚型——线粒体 tRNA~(Leu(UUR))基因突变糖尿病的临床基因诊断技术

作者介绍检测一种糖尿病亚型的ＰＣＲ／ＡｐａＩ及ＰＣＲ／ＨａｅＩＩＩ基因诊断技术，具有省时、简便、结果易于判断的特点，适用于临床医院实验室进行。     

三种快速结核病实验室检测方法的评价

三种快速结核病实验室检测方法的评价李晓明庄玉辉李国利吴雪琼张小刚夏湘萱近年来，聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术为结核病的快速诊断提供了新方法。但ＰＣＲ方法也有其局限性。我们对结核杆菌特异重复序列ＩＳ９８６部分基因进行扩增，建立了ＰＣＲ检测结核杆菌的方法，用...     

原位PCR检测外周血单个核细胞中丙型肝炎病毒

原位ＰＣＲ检测外周血单个核细胞中丙型肝炎病毒胡奎我们用原位ＰＣＲ和原位杂交检测丙型肝炎患者ＰＢＭＣ中ＨＣＶＲＮＡ。材料和方法：２２人／份肝素化的静脉血１０ｍｌ经淋巴细胞分离液分离出ＰＢＭＣ，用ＰＢＳ液冲洗３次，离心，制成每毫升含１×１０５以上细胞浓度...