谷氨酸脱羧酶通过调节T细胞亚群预防NOD小鼠发生1型糖尿病

目的 了解谷氨酸脱羧酶（ＧＡＤ）对非肥胖糖尿病（ＮＯＤ）小鼠的１型糖尿病是否具有预防作用并探讨其免疫作用机制。方法 用猪脑ＧＡＤ和不完全弗氏佐剂（ＦＩＡ）混合后给４周龄雌性ＮＯＤ小鼠腹腔注射（３２例）,同时单独射等量ＦＩＡ作为对照组。８周龄时腹腔注射环磷酰胺以加速糖尿病。每周测定体重、血糖,糖尿病形成２周或２０周龄处死小鼠后血清Ｃ－肽、ＧＡＤ抗体（ＧＡＤ－Ａｄ）和脾组织Ｔ细胞亚群,观察胰腺病理、免     

谷氨酸脱羧酶可诱导非肥胖糖尿病小鼠免疫耐受

目的 了解猪脑谷氨酸脱羧酶（ＧＡＤ）是否能预防非肥胖糖尿病（ＮＯＤ）小鼠的Ⅰ型糖尿病和影响其胰腺自身ＧＡＤ６５表达。方法 将ＧＡＤ５０μｇ与不完全弗氏佐 剂（ＦＩＡ）５０μｌ混合后给３２只４周龄ＮＯＤ雌性小鼠腹腔注射,同时１９只单独注射ＦＩＡ作为对照。每周测定体重、血糖,２０周龄时处死小鼠,观察其病理、血清Ｃ肽和ＧＡＤ抗体,并用逆转录ＰＣＲ进行胰岛ＧＡＤ６５表达半定量。结果 ２０周龄时,ＧＡＤ组小     

谷氨酸脱羧酶预防NOD小鼠胰岛炎的机制

谷氨酸脱羧酶 (ＧＡＤ)预防ＮＯＤ小鼠胰岛炎和糖尿病(ＤＭ) 〔1,2〕的机制尚未阐明。本研究探讨ＧＡＤ在预防ＮＯＤ鼠胰岛炎过程中 ,对胰岛 β细胞凋亡和Ｆａｓ及其配体ＦａｓＬ及ｂｃｌ ｘ表达的影响。一、材料和方法ＮＯＤ小鼠 ,ＧＡＤ ,动物实验及胰岛炎的检测方法均同先前报道〔1〕。细胞凋亡染色试剂盒、抗Ｆａｓ、抗ＦａｓＬ、抗ｂｃｌ ｘ抗体、生物素标记羊抗鼠ＩｇＧ(1/30 0 )和ＡＢＣ试剂 (1/5 0 0 )均由武汉博士德公司提供 ,二氨基联苯胺由瑞士进口分装。1.β细胞凋亡计数 :用ＴＵＮＥＬ原位末端标记法染色凋亡细胞 ;用ＡＢＣ免…     

口服胰岛素、谷氨酸脱羧酶对NOD小鼠糖尿病发生率的影响

目的 观察雌性非肥胖糖尿病（ＮＯＤ）小鼠口服胰饥素和氨酸脱羧酶（ＧＡＤ）对糖尿病发生的影响。以及对白细胞介素４（ＩＬ－４）的血甭水平和胰腺ＩＬ－４ｍＲＮＡ转录的影响。方法 雌性ＮＯＤ小鼠分为３组：第一组给予ＰＢＳ作为对照组第二组给予胰岛素,第三组予以ＧＡＤ。ＥＬＩＳＡ法检测血清ＩＬ－４水平,Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交检测胰腺Ｌ－４ｍＲＮＡ的表达。结果 胰岛素或ＧＡＤ均能抑制ＮＯＤ小鼠糖尿病的发生,ＰＢＳ     

I型糖尿病患者谷氨酸脱羧酶反应性T淋巴细胞与自身抗体的比较

应用ＮＡＧ微量酶反应比色法反映细胞增殖，检测３０例Ｉ型糖尿病（Ｉ型ＤＭ）患者外周血单个核细胞对谷氨酸脱羧酶（ＧＡＤ）的反应性，并以Ⅱ型糖尿病（Ⅱ型ＤＭ）、其它自身免疫性疾病、正常人各３０例作对照。同时应用间接ＥＬＩＳＡ法检测Ｉ型ＤＭ患者血清中ＧＡＤ自身抗体作比较。结果ＧＡＤ反应性Ｔ淋巴细胞Ｉ型ＤＭ的阳性率为３６．７％（１１／３０），其它自身免疫性疾病１０％（３／３０），而Ⅱ型ＤＭ和正常对照组无一例     

T细胞接种对环磷酰胺处理NOD小鼠糖尿病的影响

目的 探讨T细胞接种（TCV）对Ⅰ型糖尿病的预防作用。方法 将6周龄未发病的雌性NOD鼠用4周龄未发病、18周龄新近发病和32周龄发病时间长的NOD鼠脾细胞制得的T细胞疫苗接种,检测TCV对环磷酰胺处理的NOD鼠糖尿病发病率和胰岛炎程度的影响,以及接种后宿主淋巴细胞亚群的变化情况。结论 TCV可以降低糖尿病发病率、减轻胰岛单个核细胞的浸润程度,诱导宿主脾脏CD8^ T细胞百分比升高、CD4^＋／CD8^ 比值和IL－2R^ 细胞下降,胸腺CD4^- CD8^-单阳性细胞百分比升高。结论 TCV可降低宿主对自身免疫的反应性,这种作用可能与宿主脾脏、胸腺淋巴细胞亚群的变化和对糖尿病的预防效应有关。     

Ⅰ型糖尿病患者谷氨酸脱羧酶反应性T淋巴细胞与自身抗体的比较

应用NAG微量酶反应比色法反映细胞增殖，检测30例Ⅰ型糖尿病（Ⅰ型DM）患者外周血单个核细胞对谷氨酸脱羧酶（GAD）的反应性，并以Ⅱ型糖尿病（Ⅱ型DM）、其它自身免疫性疾病、正常人各30例作对照。同时应用间接ELISA法检测Ⅰ型DM患者血清中GAD自身抗体作比较。结果GAD反应性T淋巴细胞Ⅰ型DM的阳性率为36．7％（11／30），其它自身免疫性疾病10％（3／30），而Ⅱ型DM和正常对照组无一例阳性，Ⅰ型DM阳性率显著高于正常对照组（P＜0．005）。新发病Ⅰ型DM（病程≤1年）阳性率高达62．5％（10／16），与GAD抗体81．3％（13／16）的阳性率相比无显著性差异（P＞0．05）；长病程（1．5～20年）Ⅰ型DM的阳性率为7．1％（1／14），与正常对照组相比无显著性差异（P＞0．05），且明显低于GAD抗体64．3％的阳性率（P＜0．05）。这些结果表明新发病Ⅰ型DM存在GAD反应性T淋巴细胞，这对阐明Ⅰ型DM的发病机理，确定早期糖尿病的分型及指导治疗都有一定意义。     

谷氨酸脱羧酶基因疫苗与1型糖尿病

研究发现谷氨酸脱羧酶(GAD)与1型糖尿病(T1DM)关系密切，含相关载体、免疫佐剂的GAD基因疫苗能有效减轻胰岛炎、预防或延缓T1DM的发生。其机理与GAD基因疫苗在体内产生GAD，诱导T细胞向Th2细胞分化以及T细胞的Fas表达上调引起T细胞凋亡有关。     

糖尿病患者谷氨酸脱羧酶自身抗体测定的临床意义

应用间接ＥＬＩＳＡ法测定３７例胰岛素依赖型糖尿病（ＩＤＤＭ）患者血清谷氨酸脱羧酶（ＧＡＤ）自身抗体，并以非胰岛素依赖型糖尿病（ＮＩＤＤＭ）、及其它自身免疫性疾病、正常人各３０例作对照，同时用间接免疫荧光法测定胰岛细胞浆抗体（ＩＣＡ）作比较。结果：ＩＤＤＭ患者的阳性率高达８３．８％（３１／３７），ＮＩＤＤＭ患者为１６．７％（５／３０），而其它自身免疫性疾病及正常人无１例阳性。在ＩＤＤＭ患者中，ＧＡＤ     

Th1细胞在NOD小鼠糖尿病早期的应用

目的评价Th1细胞对NOD小鼠糖尿病早期变化的作用。方法选择4 w、8 w和16 w的雌性NOD小鼠,采用流式细胞术测定脾Th1细胞,采用免疫组化法检测胰腺内Th1细胞。结果随年龄增加,雌性NOD小鼠脾和胰腺内Th1细胞逐渐增加。结论 Th1细胞参与NOD小鼠糖尿病早期的病理过程。     

胰岛素样生长因子Ⅰ基因转移对NOD鼠胰岛炎及胰岛β细胞凋亡的保护作用

探讨腺病毒介导的胰岛素样生长因子Ⅰ(Ad-IGF-Ⅰ)对NOD鼠胰岛炎及胰岛β细胞凋亡的影响.结果 发现Ad-IGF-Ⅰ可减少糖尿病的累积发病率,降低胰岛炎积分、促进胰岛β细胞增殖,减少β细胞凋亡率,使Fas、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)的蛋白低表达,Bcl-xl蛋白高表达.提示Ad-IGFⅠ可减少NOD鼠胰岛炎,通过Fas和Bcl-xl途径发挥抗凋亡作用.

Abstract：

To explore the protective effect of adenovirus mediated IGF-Ⅰgene(Ad-IGF-Ⅰ)transfer on non-obese diabetic(NOD)mice. The results showed that the incidence of diabetes and degree of insulitis were significantly reduced in mice receiving Ad-IGF- Ⅰ . Treatment with Ad-IGF- Ⅰ significantly decreased apoptosis rate,expression of Fas and caspase-3, and increased expression of Bcl-xl. This study indicates the potential of IGF- Ⅰ gene therapy in protecting NOD mice from insulitis and apoptosis.     

白细胞介素17介导致糖尿病性T细胞诱导的NOD小鼠糖尿病的发生

目的 研究白细胞介素17(IL-17)在致糖尿病性BDC2.5 T细胞转移性糖尿病发病中的作用.方法 通过注射转基因IL-17 BDC2.5 T细胞(IL-17组,n=6)、IL-17 siRNA BDC2.5 T细胞(silL-17组,n=5),观察高表达和低/无表达IL-17转基因BDC2.5 T细胞对NOD.scid小鼠转移性糖尿病的影响,进行小鼠胰岛组织学鉴定、脾脏和胰腺淋巴结染色和血浆细胞因子测定.非转基因BDC2.5 T细胞注射为对照组(n=8).结果 在观察期内,IL-17组小鼠全部发生糖尿病,而silL-17组和对照组则无一例发病.胰腺病理HE染色显示IL-17组小鼠出现严重的胰岛炎,胰岛受到破坏,结构模糊不清;而silL-17组小鼠胰腺仅表现为轻、中度胰岛炎,可见胰岛内散在的细胞浸润,胰岛组织结构基本完整,细胞形态正常.小鼠脾脏和淋巴结染色显示,IL-17组小鼠脾脏和胰腺淋巴结中CD11c+/CD11b+的树突细胞增殖显著高于silL-17组和对照组(均P＜0.01),且胰腺淋巴结中该细胞增殖显著高于脾脏.IL-17组小鼠血浆IL-17、肿瘤坏死因子α、γ-干扰素和白细胞介素6水平均显著高于siIL-17组和对照组(均P＜0.01),后两组间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 BDC2.5 T细胞的IL-17高表达可显著加速NOD.scid小鼠发生转移性糖尿病,且与宿主树突细胞增殖和在胰腺淋巴结局部的聚集以及多种细胞因子作用有密切关系.     

Mesenchymal stem cells protect NOD mice from diabetes by inducing regulatory T cells

Aims/hypothesis  Displaying immunomodulatory capacities, mesenchymal stem cells (MSCs) are considered as beneficial agents for autoimmune diseases. The aim of this study was to examine the ability of MSCs to prevent autoimmune diabetes in the NOD mouse model. Methods  Prevention of spontaneous insulitis or of diabetes was evaluated after a single i.v. injection of MSCs in 4-week-old female NOD mice, or following the co-injection of MSCs and diabetogenic T cells in irradiated male NOD recipients, respectively. The frequency of CD4⁺FOXP3⁺ cells and Foxp3 mRNA levels in the spleen of male NOD recipients were also quantified. In vivo cell homing was assessed by monitoring 5,6-carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester (CFSE)-labelled T cells or MSCs. In vitro, cell proliferation and cytokine production were assessed by adding graded doses of irradiated MSCs to insulin B9–23 peptide-specific T cell lines in the presence of irradiated splenocytes pulsed with the peptide. Results  MSCs reduced the capacity of diabetogenic T cells to infiltrate pancreatic islets and to transfer diabetes. This protective effect was not associated with the modification of diabetogenic T cell homing, but correlated with a preferential migration of MSCs to pancreatic lymph nodes. While injection of diabetogenic T cells resulted in a decrease in levels of FOXP3⁺ regulatory T cells, this decrease was inhibited by MSC co-transfer. Moreover, MSCs were able to suppress both allogeneic and insulin-specific proliferative responses in vitro. This suppressive effect was associated with the induction of IL10-secreting FOXP3⁺ T cells. Conclusions/interpretation  MSCs prevent autoimmune beta cell destruction and subsequent diabetes by inducing regulatory T cells. MSCs may thus offer a novel cell-based approach for the prevention of autoimmune diabetes and for islet cell transplantation. Electronic supplementary material  The online version of this article (doi:) contains supplementary material, which is available to authorised users.     

雷公藤多甙对NOD小鼠胰岛β细胞半胱天冬蛋白酶表达的影响

用环磷酰胺促进NOD小鼠1型糖尿病的发病，腹腔注射雷公藤多甙（TWP）4周，监测糖尿病发病率，TUNEL法检测胰岛细胞凋亡，免疫组化法观察胰岛β细胞半胱天冬蛋白酶（caspase）3的表达，RT-PCR方法检测胰腺caspase-8 mRNA的表达。结果提示TWP组糖尿病发病率下降，胰岛β细胞凋亡减少，胰岛β细胞caspase-3蛋白及胰腺caspase-8 mRNA的表达均减少。     

完全弗氏佐剂预防NOD鼠胰岛炎和糖尿病的机理研究

目的　研究Ｂａｘ 蛋白和热休克蛋白（ＨＳＰ）７０ 在完全弗氏佐剂（ＣＦＡ）预防ＮＯＤ 鼠胰岛炎和糖尿病中作用及意义。方法　给４ 周龄雌性ＮＯＤ 鼠后脚板注射５０ μｌ ＣＦＡ 和生理盐水（ＮＳ组） ，于３０ 周龄或糖尿病发生时处死，胰腺组织置１０ ％ 中性福尔马林固定后常规制成石蜡切片，ＨＥ染色后行光镜下胰岛炎评分，ＡＢＣ免疫组化染色Ｂａｘ 蛋白和ＨＳＰ７０ 并光镜下计数。结果　ＣＦＡ 组鼠胰岛内炎计数和胰岛炎评分均数均明显低于ＮＳ组鼠（Ｐ＜ ０．０１）；ＣＦＡ 组鼠无１ 只发生糖尿病，ＮＳ组鼠中有３ 只（６０％ ）发生糖尿病；ＣＦＡ 组鼠胰岛细胞Ｂａｘ 蛋白阳性率明显低于ＮＳ组鼠，而ＨＳＰ７０ 阳性率明显高于ＮＳ组鼠，均有极显著性差异（Ｐ＜ ０．０１） ； 胰岛炎分值与Ｂａｘ 蛋白阳性率呈正相关（ｒ＝０．６１３） ，与ＨＳＰ７０ 阳性率呈负相关（ｒ＝ － ０．９１３）。结论　ＣＦＡ 能减轻ＮＯＤ 鼠胰岛炎发生程度和预防糖尿病发生，ＣＦＡ能抑制胰岛细胞Ｂａｘ 蛋白表达和诱导胰岛细胞ＨＳＰ７０ 表达。     

胰岛素预防NOD鼠糖尿病的机制研究

目的观察胰岛素（Ins）对非肥胖糖尿病（NOD）小鼠胰岛炎和糖尿病的影响，并探讨其诱导免疫耐受的机制。方法60只NOD雌鼠随机分为胰岛素（NPH）处理组和PBS对照组，分别于第4、12、20、28周予皮下注射NPH6U（60μl）及PBS60μl十不完全弗氏佐剂60μl。于12周龄观察胰岛炎和胰岛β细胞凋亡；测定血清和脾细胞上清IL-4和干扰素（IFN）γ浓度；检测胰岛内和脾细胞IL-4、IFN-γ mRNA的表达；并行联合过继转移实验。结果Ins组糖尿病发病率和β细胞凋亡率比PBS组低。血清和脾细胞上清IL-4浓度及胰岛内和脾细胞IL-4mRNA表达较PBS组高，而IFN-γ浓度及IFN—γ mRNA表达比PBS组低。过继转移实验Ins组DM发病率比PBS组低。结论Ins能诱导NOD鼠调节T细胞的产生，使全身和胰岛局部T细胞由Th1向Th2转型，抑制β细胞凋亡，从而预防DM．     

人胰岛素原DNA疫苗预防非肥胖糖尿病鼠胰岛β细胞凋亡的机制探讨

目的探讨人胰岛素原DNA疫苗预防非肥胖糖尿病（NOD）小鼠胰岛β细胞凋亡的机制。方法（1）4周龄NOD雌鼠随机分为磷酸盐缓冲液（PBS）、质粒载体PcDNA3．1（PcDNA）、胰岛素原（Pins）3组，由胫前肌分别注射PBS、质粒PcDNA3．1、人胰岛素原DNA疫苗50pg，1周后重复1次。（2）各组取12周龄未发病的NOD鼠10只，分离胰腺，HE染色观察胰岛炎；TUNEL＋SABC法检测胰岛β细胞凋亡；取脾制成细胞悬液培养72h，ELISA法测定血清白介素4（IL-4）和γ干扰素（IFN-γ）水平；MTT法检测脾细胞增殖反应。结果（1）12周龄时Pins组正常胰岛比例高于PBS组和PcDNA组（均P〈0．01），胰岛周围炎比例低于PcDNA组（P=0．02），胰岛内炎比例则低于PBS组（P〈0．01）和PcDNA组（P=0．006）；（2）Pins组胰岛β细胞凋亡率低于PBS组和PcD—NA组（均P〈0．01）；（3）PIns组血清IL-4／IFN-γ比值显著高于PBS组（P=0．014）和PcDNA组（P=0．036）；（4）PIns组脾细胞对人胰岛素增殖反应的刺激指数（SI）低于PcDNA组（P=0．021）。结论人胰岛素原DNA疫苗通过上调IL-4／IFN-γ比值，使免疫平衡向Th2偏移，致NOD鼠胰岛炎减轻，胰岛β细胞凋亡减少。     

Failure in immune regulation begets IDDM in NOD mice

The nonobese diabetic (NOD) mouse model of insulin-dependent diabetes mellitus (IDDM) has provided evidence which suggests that an important mechanism of the induction of this T-cell-mediated autoimmune disease is a failure in immune regulation. The role of T-cell immune dysregulation in the initiation of diabetes is the focus of this review. Immunological mechanisms such as T-cell anergy and deficient T-cell-mediated suppression are discussed as mediators of IDDM susceptibility. In particular, T helper (Th) 2 cell anergy may be responsible for defective regulation of autoreactive effector T-cells. Therapies designed to overcome these T-cell-mediated deficiencies may prevent IDDM onset. © 1998 John Wiley & Sons, Ltd.