细胞分化帮助剂提高低浓度As2O3对肝癌细胞凋亡作用的体外实验

目的 研究细胞分化帮助剂（CDA-Ⅱ）促进低浓度三氧化二砷（As2O3）对肝癌细胞株HepG-2，BEL-7402凋亡的协同效应。方法 用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测单用CDA-Ⅱ或As2O3和联用对肝癌细胞株HepG-2，BEL-7402生长及抑制率的影响；用乳酸脱氢酶（LDH）法检测药物对细胞膜的毒性反应；流式细胞仪（FCM）分析细胞周期和凋亡率变化。结果 单用CDA-Ⅱ和As2O3分别为3．0mg／ml和50μmol／L时，肝癌细胞株BEL-7402，HepG-2发生凋亡达到最大值，而联用5μmol／LAs2O3＋1mg／mlCDA-Ⅱ可达到同样效果；结果显示：该浓度下HepG2的抑制率可达88％；BEL-7402的抑制率在100％；LDH检测表明联用比单用As2O310μmol／L更安全。流式细胞仪结果显示凋亡率联合组为40．2％，明显高于单用组As2O3（11．3％）或CDA-Ⅱ（8．7％）。结论 细胞分化帮助剂1mg／mlCDA-Ⅱ联用5μmol／LAs2O3可促进肝癌细胞株HepG-2，BEL-7402凋亡，可以明显降低As2O3的使用浓度，减少对正常细胞的毒副作用。二者联用具有协同作用。     

脱氧氟尿苷增强顺铂对人肝癌BEL-7402细胞株的增殖抑制作用

目的 探讨脱氧氟尿苷（5-DFUR）和顺铂（CDDP）联合应用对人肝癌细胞系BEL-7402的增殖抑制作用。方法 采用克隆形成法检测细胞的增殖抑制率、流式细胞术检测细胞周期的改变及凋亡率。结果 5-DFUR（7.815～250mg/L）和CDDP（0.63～20mg/L）单独应用均对人肝癌BEL- 7402细胞有抑制作用，呈现剂量效应关系。5-DFUR与CDDP联合应用对人肝癌细胞BEL-7402产生显著的协同杀伤作用，5-DFUR与CDDP浓度接近IC50时即5-DFUR 62.5mg/L与CDDP 2.5mg/L联合用药时可使CDDP的抑制率从单独用药的45.12%提高到联合用药的89%（P〈0.01）。CDDP、5-DFUR单独应用48h后可诱导人肝癌BEL-7402细胞发生凋亡，凋亡比率分别为15.37%和21.25%，联合用药组在48h细胞凋亡的比率则为19.37%，72h后CDDP、5-DFUR单独应用诱导人肝癌BEL-7402细胞发生凋亡的比率分别为19.3%和28.37%，而联合应用组诱导凋亡细胞的比例达到55.7%（P〈0.01），CDDP与5-DFUR单用72h时，细胞周期G1期阻滞较为明显，而当5-DFUR与CDDP合用后，G1期、S、G2期/M期细胞增加，尤其是G2期/M期细胞数增加明显。结论 5-DFUR与CDDP联合应用对人肝癌细胞BEL-7402可产生显著的协同杀伤作用，其细胞周期调节发生在G2～M期，细胞被阻滞于G2～M期。     

基因重组人生长激素对人肝癌细胞系生长的影响

目的 研究基因重组人生长激素(rhGH)作用人肝癌细胞系后细胞周期动力学的改变，了解其对人肝癌细胞系生长的影响。方法 不同浓度rhGH(0、2、5、25、50、150、500μg／L)作用于人肝癌细胞系HepG2，采用流式细胞仪检测作用24、48、72h后的细胞周期动力学，分析其增殖指数、S期细胞百分比及细胞凋亡率的变化。结果 rhGH作用后的HepG2细胞周期动力学改变与作用时间无显著相关；与对照组比较，在生理浓度(25μg/L)rhGH作用下，PI及S％显著上升(P＜0．05)，但在超生理浓度(500μg／L)rhGH作用下，PI及S％无显著改变(P＞0．05)；另2、5、25、50、150、500μg/L rhGH均诱导人肝癌细胞凋亡，且呈浓度—效应关系。结论 在体外培养体系中，rhGH在低于或等于生理浓度时，促进人肝癌细胞增殖；在高于生理浓度时，抑制人肝癌细胞增殖。     

他克莫司对肝癌细胞增殖、凋亡及其对5-氟尿嘧啶敏感性的影响

目的探讨他克莫司(FK506)对肝癌细胞增殖、凋亡及其对5-氟尿嘧啶(5-Fu)敏感性的影响及其机制。方法体外培养人肝癌细胞株SMMC-7721,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测FK506对细胞增殖的影响;应用流式细胞术分析FK506、5-Fu及联合FK506和5-Fu对SMMC-7721细胞周期和凋亡的影响。结果FK506(10、100、1000μg/L)对肝癌SMMC-7721细胞的增殖有抑制作用(P<0.05),但作用24h后各组凋亡率与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05);5-Fu(50、75、100、200mg/L)作用24h后,其诱导细胞凋亡率呈浓度依赖关系,分别为13.2%、15.3%、21.7%和35.9%,与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.001);随着5-Fu用药浓度的增加,S期细胞比例和细胞增殖指数也增加;FK506预处理增强了5-Fu诱导SMMC-7721细胞凋亡的作用,24h细胞凋亡率分别为27.6%、32.0%和39.0%。结论FK506能够显著抑制肝癌SMMC-7721细胞增殖,并能增强该细胞系对5-Fu的敏感性,这一作用可能与FK506和5-Fu协同诱导凋亡和G0/G1期停滞有关。     

5-Fu对肝癌细胞内凋亡抑制蛋白Survivin的诱导作用

目的 研究化疗药物5-Fu对肝癌细胞内凋亡抑制蛋白Survivin的诱导作用，探讨Survivin在肝细胞癌化疗抵抗中的作用机制。方法 培养人肝癌细胞株HepG2,加入低浓度的化疗药物5-Fu ，分别在加药前，加药后24h和48h采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和免疫印迹技术（western-blot)检测Survivin mRNA和蛋白的表达。结果 给予低浓度的5-Fu可诱导SurvivinmRNA和蛋白的表达发生变化，其中mRNA的加药后24h和48h分别较加药前提高了1.2倍和3.9倍，蛋白在加药后24h和48h分别较加药前提高了0.9倍和4.7倍。结论 5-Fu可诱导肝癌细胞内Survivin的表达增加，抵抗化疗药物诱导的细胞凋亡。     

靶向Polo-like kinase 1基因的shRNA对肝癌BEL-7402细胞株生物学行为的影响

目的利用RNA（RNAi）干扰技术,研究表达Polo-like kinase 1（Plk1）的短发夹RNA（shR-NA）载体对肝癌细胞株BEL-7402生物学行为的影响。方法根据靶基因的不同区域构建针对Plk1mRNA的两组干扰质粒shRNA-Plk1：Plk1siRNA-251,Plk1siRNA-1396以及阴性对照质粒Plk1siRNA-hk,利用电穿孔法转染入肝癌细胞株BEL-7402,获得稳定表达的克隆后,RT-PCR检测肝癌细胞株BEL-7402的Plk1mRNA的变化,Western blot检测Plk1蛋白的表达,MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期变化。结果利用电穿孔将载体转入肝癌细胞株BEL-7402,利用G418筛选,获得稳定表达的克隆。RT-PCR检测Plk1siRNA-251,Plk1siRNA-1396组Plk1mRNA表达较Plk1siRNA-hk转染组与空白对照组明显下降（P〈0.01）。Western blot检测转染BEL-7402细胞shRNA载体后的Plk1蛋白的表达分别为0.032±0.007、0.040±0.008、0.272±0.041、0.278±0.053。MTT检测发现转染shRNA载体后BEL-7402细胞增殖明显减慢。细胞周期检测证实转染Plk1siRNA可以引起BEL-7402细胞G0/G1期减少,G2/M期增高,而对S期影响不大。结论成功构建出两条能特异而高效抑制Plk1基因表达的shRNA,可以显著抑制Plk1 mRNA的转录及Plk1蛋白的表达,并明显抑制细胞增殖,从而为肝癌的基因治疗提供新的切入点。     

卡铂碳包铁纳米笼壳聚糖微球对人肝癌细胞株HepG2的影响

目的探讨卡铂碳包铁纳米笼壳聚糖微球（C-Fe@CN-CN）对人肝癌细胞株HepG2增殖和细胞周期的影响。方法应用反相微乳法制备C-Fe@CN-CN，采用噻唑蓝（MTT）法检测不同药物浓度（20、40、80、160mg／L）的C-Fe@CN-CN对HepG2细胞作用24、48、72h的生长抑制效应；流式细胞仪分析药物浓度为8、16mg／L，作用48h时细胞周期的改变。结果C-Fe@CN—CN对人肝癌细胞增殖有明显抑制作用，并呈剂量和时间依赖性。随剂量增加，24h抑制率由18．8％增至53．2％，随时间延长，抑制率由53．2％增至98．7％。微球作用24h时抑制效应低于原药。作用48h和72h时抑制效应等同于原药。C-Fe@CN-CN或原药作用48h后，肝癌细胞周期阻滞于S期（47．2％），随药物浓度增加，S期阻滞（59．3％）更加明显。空白微球对肝癌细胞增殖和细胞周期分布无影响。结论C-Fe@CN—CN在体外能有效地抑制肝癌细胞增殖，机制与原药相同。均为诱导S期阻滞。     

转染TSLC1基因肝癌细胞株BEL-7402生物学特性的研究

目的 将人TSLCl基因转染人肝癌细胞BEL-7402中稳定表达,检测转染后细胞生物学特性的变化.方法 用脂质体法将TSLCl基因的真核质粒表达载体pcDNA3.1(+)/TSLCl导人人肝癌细胞株BEL-7402中,G418筛选克隆,再以逆转录-聚合酶链反应(RTPCR)、Western blot的方法检测TSLCI的表达,细胞计数、流式细胞术及裸鼠负荷瘤实验分析转染后细胞的生物学特性变化.结果 TSLCl在BEL-7402细胞中的表达可抑制BEL-7402细胞的生长,BEL-7402-TSLCI与BEL-7402比较s期及G2/M期的细胞减少,G0/G1期的细胞增加.转染后的BEL-7402-TSLCl细胞的凋亡明显增加,转染后荷瘤裸小鼠肿瘤的生长受到抑制.结论 TSLCl基因的转染可以抑制BEL-7402细胞的增殖、诱导肝癌细胞的凋亡,为肝癌的基因治疗提供理论依据.     

增殖性腺病毒CNHK600-p53的构建及对肝癌细胞抑制的体外实验研究

目的研究携带p53基因的新型增殖性腺病毒CNHK600-p53的导入是否增加肝癌细胞株PLC／PRF5对化疗药物的敏感性。方法采用四甲基偶氮唑盐(methylthiazolyl tetrazolium assay,MTT)法,观察化疗药物5-氟尿嘧啶(Fluorouracil,5-Fu)、丝裂霉素(Mitomycin,MMC)和表阿霉素(Epirubicin,EPI)单独及与CNHK600-p53联合对肝癌细胞株PLC／PRF5的杀伤效应。结果PLC／PRF5在5-Fu浓度为400μg／ml时细胞抑制率为(65±4．2)％,MMC浓度为1μg／ml细胞抑制率为(41±1．9)％,EPI浓度为10μg／ml细胞抑制率为(65±1．8)％。转入CNHK600-p53(MOI= 0．625)后再使用上述浓度的化疗药物,细胞抑制率分别为(89±5．3)％、(60±2．3)％和(75±1．5)％。当MOI值为0．3125,0．625,1．25时,CNHK600-p53组和Ad-p53组的细胞抑制率分别为(27±2．5)％、(30±3．7)％、(61±4．3)％和(4±2．7)％、(5±3．5)％、(16±4．5)％。结论单用CNHK600-p53效果优于Ad-p53,携带p53基因的CNHK600-p53能提高肝癌细胞株PLC／PRF5对化疗药物的敏感性。     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素对原发性肝癌细胞周期和凋亡的影响

目的 观察组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素(TSA)对原发性肝癌细胞周期和凋亡的影响.方法 采用Wester blot检测经TSA处理后肝癌细胞的乙酰化水平;运用流式细胞计数(FCM)分析TSA对肝癌细胞周期和凋亡的影响.结果 TSA处理BEL-7402细胞16 h后细胞乙酰化水平到达最高峰;用TSA处理BEL-7402细胞16 h后,肝癌细胞G0/G1细胞从43.39%升高到53.82%,统计学检验,其差异有统计学意义.S细胞从26.62%降到20.85%,G2/M细胞从27.86%降到22.07%,细胞凋亡由0.93%降到0.75%,差异无统计学意义(P>0.05).结论 TSA能够阻滞HCC细胞周期C1～S期进程,抑制细胞生长,而对HCC细胞凋亡无明显影响.     

胚胎干细胞分化为软骨细胞的研究现状与展望

胚胎干细胞具有多向分化潜能,在组织修复治疗方面具有广阔的应用前景.近年研究表明,胚胎干细胞在细胞因子、激素、微环境等作用下能够分化为软骨细胞.本文对近年来胚胎干细胞向软骨细胞定向分化中的各种因素进行综述.     

Small cell squamous and mixed small cell squamous--small cell anaplastic carcinomas of the lung

Five patients are presented who had neoplasms which, by light microscopy and in two cases cytologically, appeared to be small cell anaplastic (polygonal and fusiform cell type) carcinomas of the lung. However, by electron microscopy, four of the carcinomas exhibited squamous characteristics including desmosomes and tonofilament bundles, and lacked demonstrable neurosecretory granules, suggesting that they were small cell squamous carcinomas. The fifth carcinoma contained cells with neurosecretory granules as well as cells demonstrating squamous differentiation. One patient died within 3 months of presentation. Three patients survived for approximately 18 months each; two received chemotherapy but one was treated by surgical resection alone. The fifth patient had a peripheral coin lesion which was treated by surgical resection only; he is alive without evidence of recurrent carcinoma 1 year after operation. We suggest that some carcinomas of the lung with the light-microscopic and cytologic appearance of small cell anaplastic carcinoma are actually small cell variants of squamous cell carcinoma and lack the characteristic neurosecretory granules of classic small cell carcinoma. The behavior of these tumors needs to be determined.     

体细胞核移植的研究进展——核移植供体细胞与受体细胞的选择

根据近年来国外的研究进展,对核移植研究中的有关内容,如供体核的获得、受体卵母细胞与去核、核卵重组进行了综述,望能对核移植研究有所帮助。     

Blockade of cell adhesion molecules enhances cell engraftment in a murine model of liver cell transplantation

AimOLT is the best alternative for patients with end-stage liver diseases. However, as the need for organs surpasses donor availability, alternatives to OLT are required. LCT could be a useful option versus OLT in several patients even though its low cell-engraftment hampers its efficiency. Endothelial cell barrier is the main obstacle for the implantation of cells into the parenchyma. Our study has focused on the modification of the endothelial barrier with monoclonal antibodies against adhesion molecules in order to increase cell engraftment in a mouse model of liver cell transplantation.MethodsAnti-mouse CD54 and anti-mouse CD61 antibodies were administered intrasplenically to healthy mice within 60 min prior to stem cell transplantation. Animals were sacrificed either short term at 2 h or middle term seven days after transplantation. Immunohistochemical techniques to detect alkaline phosphatase activity were used to identify the transplanted cells within the liver parenchyma.ResultsAnti-CD54 and anti-CD61 administration increases vascular patency and cell engraftment. This represents a 32% and 45% increase, respectively, of engrafted cells compared to the control (p < 0.05).ConclusionModification of the vascular wall with monoclonal antibodies against endothelial adhesion molecules before cell transplantation enhances cell engraftment into the mouse liver.     

弥散张量成像鉴别诊断肾透明细胞癌与肾盂移行细胞癌

目的评价MRI弥散张量成像(DTI)在肾透明细胞癌(ccRCC)与肾盂移行细胞癌(TCC)鉴别诊断中的价值。方法回顾性分析行腹部MR检查、经病理证实为ccRCC及TCC的患者38例(ccRCC 29例,TCC 9例)。患者均行MR T1W脂肪抑制和T2W脂肪抑制序列扫描、LAVA增强扫描、DTI序列扫描(b=0、600s/mm~2)。由2名放射科医师采用AW 4.4工作站采用Functool后处理软件进行图像分析和测量。采用组内相关系数(ICC)检验2名察者所测数据的一致性。ccRCC和TCC ADC值及FA值的比较采用独立样本t检验。采用ROC曲线分析ADC值、FA值对ccRCC与TCC的鉴别诊断效能。结果 2名观察者测量各参数一致性良好(ICC值均0.75)。ccRCC的ADC值[(2.03±0.49)×10~(-3) mm~2/s]高于TCC[(1.57±0.43)×10~(-3 )mm~2/s;P=0.015)],但ccRCC的FA值(0.24±0.10)低于TCC(0.42±0.22);P=0.002)。ADC值曲线下面积0.761(P0.05),敏感度和特异度分别为79.3%、77.8%,阈值为1.59×10~(-3) mm~2/s。FA值曲线下面积为0.762(P0.05),敏感度和特异度分别为66.7%、93.1%,阈值为0.326。结论 MR DTI可有效鉴别ccRCC和肾盂TCC,其中FA值对鉴别两者的特异度较高。