miR-126在人结肠癌细胞中的表达及其对结肠癌细胞耐药性的影响

目的探讨miR-126在人结肠癌细胞中的表达及其对结肠癌细胞的耐药性影响。方法采集我院肿瘤科2010年7月至2013年8月收治的45例结肠癌患者的癌组织、癌旁组织及30例同期体检健康对象的正常结肠组织(正常组织),采用荧光PCR检测miR-126表达水平;体外培养HCT116细胞,通过转染抑制序列抑制miR-126的表达,检测抑制HCT116细胞miR-126的表达对结肠癌细胞耐药性的影响。结果结肠癌组织的miR-126阳性表达率显著低于癌旁组织、正常组织(P0.05);癌旁组织的miR-126阳性表达率低于正常组织但差异不显著(P0.05);miR-126表达在年龄、性别、分化程度、肿瘤大小间差异不显著(P0.05),不具统计学意义;miR-126表达与淋巴结转移、Dukes分期、临床分期具有显著的相关性,且miR-126表达水平在各个层之间差异显著(P0.05);在0、5、10、20 mg/L的奥沙利铂培养基中,miR-126阳性组的癌细胞活性(吸光度值)均显著低于miR-126阴性组且差异具有统计学意义(P0.05)。结论结肠癌组织中的miR-126阳性表达率较低,癌细胞组织中的miR-126阳性表达有利于降低癌细胞的耐药性,有利于对结肠癌的治疗效果。     

内皮细胞缺氧后miR-210、miR-92a、miR-126表达及意义

目的进一步探讨缺氧后血管新生的调控机制。方法常规方法培养人微血管内皮细胞,低氧培养箱制备内皮细胞缺氧模型（观察组）,正常细胞作为对照组。采用real time PCR法检测两组内皮特异性microRNA（miR-210、miR-92a、miR-126）表达变化。结果与对照组比较,miR-210、miR-92a、miR-126分别上调了（5.19±0.99）、（3.02±0.88）、（3.87±0.83）倍,P均〈0.05。结论缺氧可促使内皮细胞特异性microRNA表达改变,此可能为缺氧后血管新生的主要调控机制。     

circPUM1通过调控miR-524-5p表达对结肠癌细胞恶性生物学行为的影响

目的探讨环状RNA PUM1(circPUM1)对结肠癌细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的影响及其分子机制。方法实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测结肠癌组织、癌旁组织中circPUM1、微小RNA-524-5p(miR-524-5p)的表达量。体外培养人结肠癌细胞株SW620,分别将si-NC、si-circPUM1、miR-NC、miR-524-5p mimics、si-circPUM1与anti-miR-NC、si-circPUM1与anti-miR-524-5p转染至SW620细胞。甲基噻唑基四唑(MTT)检测细胞增殖;Transwell小室实验检测细胞迁移、侵袭能力;流式细胞术检测细胞凋亡率;双荧光素酶报告实验验证circPUM1是否能够结合miR-524-5p;蛋白免疫印迹法(Western blotting)检测细胞周期蛋白1(Cyclin D1)、p21、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、B淋巴细胞瘤-2相关蛋白(Bax)表达量。结果结肠癌组织circPUM1的表达水平显著高于癌旁组织(P<0.05),miR-524-5p的表达水平显著降低(P<0.05);干扰circPUM1表达或miR-524-5p过表达后,细胞活力显著降低(P<0.05),迁移细胞数与侵袭细胞数显著减少(P<0.05),细胞凋亡率显著升高(P<0.05),Cyclin D1、MMP-2、MMP-9、Bcl-2蛋白表达显著降低(P<0.05),p21、Bax蛋白表达显著升高(P<0.05);双荧光素酶报告实验证实circPUM1可靶向结合miR-524-5p的作用位点;抑制miR-524-5p表达可减弱干扰circPUM1表达对SW620细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的作用。结论circPUM1可通过海绵吸附miR-524-5p促进结肠癌细胞增殖、迁移、侵袭,抑制细胞凋亡。     

miR-126对人晶状体上皮细胞凋亡的影响

目的探讨miR-126表达水平对人晶状体上皮细胞系HLEB3凋亡的影响及作用机制。方法使用H2O2构建HLEB3体外凋亡模型,qRT-PCR检测miR-126水平变化;使用脂质体2000分别将miR-126模拟物(mimic)和抑制物(inhibitor)以及二者相应的阴性对照转染到HLEB3中,分别上调、下调细胞中miR-126表达,转染48 h后qRT-PCR验证转染效率,流式细胞仪检测各组HLEB3凋亡水平;通过靶基因预测软件预测miR-126可能靶向调控KLF6基因的表达,检测各组HLEB3中KLF6 mRNA和蛋白表达水平。结果 HLEB3凋亡模型中miR-126相对表达量明显高于正常HLEB3,差异有统计学意义(P0.01)。模拟物组HLEB3凋亡率明显低于模拟物阴性对照组;抑制物组HLEB3凋亡率明显高于抑制物阴性对照组;差异均有统计学意义(均P0.05)。模拟物组HLEB3中KLF6 mRNA相对表达量明显低于模拟物阴性对照组,抑制物组KLF6 mRNA相对表达量明显高于抑制物阴性对照组,差异均有统计学意义(均P0.05);模拟物组HLEB3中KLF6蛋白相对表达量明显低于模拟物阴性对照组,抑制物组KLF6蛋白相对表达量明显高于抑制物阴性对照组,差异均有统计学意义(均P0.05)。结论 miR-126在HLEB3凋亡模型中表达上调,miR-126可通过调控KLF6基因表达来影响HLEB3凋亡,在白内障发病机制中发挥作用。     

circPTPRA与miR-1252在胃癌中的表达及其对细胞生物学行为的影响

目的 探讨circPTPRA与miR-1252在胃癌中的表达及其对胃癌细胞生物学行为的影响.方法 取术中切除的胃癌组织与癌旁组织(距癌组织>5 cm处的组织)进行实验,随后采用qRT-PCR检测胃癌组织、癌旁组织中circPTPRA与miR1252的表达情况.体外培养人胃癌细胞HGC-27,分别转染pcDNA、pcDN...     

难治性哮喘患者血浆中miR-21和miR-126的表达及意义

目的 探讨miR-21和miR-126在难治性哮喘及完全控制性哮喘患者血浆中的表达水平和意义.方法 采用实时荧光定量PCR法检测miR-21和miR-126在28例难治性哮喘及完全控制性哮喘患者血浆中的表达水平.结果 难治性哮喘患者血浆中miR-21和miR-126的表达水平均显著高于完全控制性哮喘患者,差异均有统计学意义(t=29.300、3.667,P值均＜0.01).结论 miR-21和miR-126在难治性哮喘患者血浆中的表达均高于完全控制性哮喘患者,miR-21和miR-126的表达水平可能与难治性哮喘有关,且调控可能参与了支气管哮喘发生过程.     

miR-346及分泌型卷曲相关蛋白4在结肠癌中的表达及其对结肠癌细胞增殖的作用

目的检测结肠癌组织及细胞中miR-346及人分泌型卷曲相关蛋白4(SFRP4)的表达,观察其对结肠癌细胞增殖的作用及可能的机制。方法选取30例经手术切除的结肠癌组织及其相应的癌旁正常组织(距离肿瘤边缘5cm),另选取结肠癌细胞株及正常结肠上皮细胞株,采用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)及免疫印迹(Western blot)方法检测组织及细胞中的miR-346、SFRP4mRNA及蛋白的表达,采用Pearson rank检验miR-346与SFRP4的相关性,采用Target Scan及Find Tar软件预测两者的靶向调节作用。转染miR-346拟似物(mimics)或抑制物(inhibitor)以上调或下调miR-346的表达,MTT法检测结肠癌细胞的增殖,qRT-PCR及Western blot检测SFRP4mRNA和蛋白的表达。结果 miR-346在结肠癌组织中的表达高于癌旁正常组织(t=12.871,P0.001)。SFRP4mRNA及蛋白在结肠癌组织中的表达低于癌旁正常组织(t=8.609,P0.001;t=20.892,P0.001)。miR-346在结肠癌细胞株(SW480、SW620、HCT116、CaCo-2、LoVo、HT29)中的表达高于正常结肠上皮细胞株FHC(F=10.17,P0.001)。SFRP4mRNA及蛋白在结肠癌细胞株中的表达低于正常结肠上皮细胞株(F=39.01,P0.001;F=16.25,P0.001)。结肠癌组织中miR-346与SFRP4mRNA的表达呈负相关(r=-0.55,95%CI:-0.757～-0.230,P=0.001 8)。与miRNA阴性对照(miR-NC)组比较,给予miR-346mimics后,MTT显示在72h、96h时间点miR-346组细胞存活率升高(t=3.484,P0.05;t=5.868,P0.001),SFRP4mRNA及蛋白表达下降(t=2.267,P0.05;t=5.889,P0.01);给予miR-346inhibitor后,MTT显示在72h、96h时间点miR-346组细胞存活率下降(t=4.400,P0.001;t=3.591,P0.001),SFRP4mRNA及蛋白表达升高(t=4.495,P0.01;t=7.130,P0.01)。结论 miR-346在结肠癌中高表达,SFRP4低表达,miR-346通过靶向作用于SFRP4来调控结肠癌细胞的增殖。     

冠心病患者血液循环miR-126表达及与阿司匹林抵抗的关系

目的探讨冠心病(CHD)患者血液循环微小RNA(mi)-126的表达及与阿司匹林抵抗(AR)的关系。方法收集牡丹江医学院第二附属医院2015年3月至2017年1月的CHD患者106例,选择同期在院内的健康体检志愿者51例作为对照。检测所有受试者的血小板聚集率并判断是否存在AR,采用RT-PCR法检测血小板的miR-126表达,并分析miR-126与AR的相关性。结果与对照组比较,CHD组AR的发生率较高(P=0.005),血小板的miR-126明显降低(P=0.000)。与对照组的AR和非AR(NAR)亚组比,CHD的AR和NAR亚组miR-126水平均明显降低(P=0.000)。结论 CHD患者血小板miR-126水平低于健康人,与AR存在相关性,血小板miR126水平降低可能会增加健康人群发生CHD的发生。     

2型糖尿病患者血清miR-126表达的临床意义

目的探讨2型糖尿病患者外周血血清中miR-126的表达水平及其临床意义。方法采用荧光定量PCR方法检测77例糖代谢异常患者血清miR-126的表达(其中糖调节受损组26例,初发2型糖尿病组23例,2型糖尿病伴有血管病变患者28例,和30例健康对照组)。结果 miR-126在健康对照组与糖调节受损组血清中的表达无统计学意义(P>0.05);初发糖尿病组与健康对照组及糖调节受损组之间均有统计学意义(P<0.01);糖尿病伴有血管病变组与健康对照组及糖调节受损组之间均有统计学意义(P<0.01),但与初发糖尿病组无统计学意义(P>0.05)。结论 2型糖尿病及合并有血管病变患者外周血血清中miR-126水平呈低表达。     

miR-93在结肠癌中的表达及其意义

目的研究miR-93在结肠癌组织中的表达与临床病理特征的关系,并探讨其对结肠癌细胞的增殖及细胞周期的影响。方法收集108例结肠癌患者的癌组织及癌旁组织,应用原位杂交和荧光定量PCR检测结肠癌组织及癌旁组织中miR-93的表达水平,分析miR-93表达与结肠癌临床病理特征之间的关系。采用反义miR-93转染降低结肠癌细胞SW480和LoVo中miR-93的表达,采用MTT比色法检测结肠癌细胞增殖的变化情况,利用流式细胞仪检测结肠癌细胞周期的变化情况。结果原位杂交检测显示,结肠癌组织miR-93阳性表达率高于癌旁组织(P<0.05);荧光定量PCR检测显示,61.11%(66/108)的结肠癌组织miR-93表达明显高于癌旁组织(P<0.05);随着结肠癌临床分期的进展,miR-93的表达量逐渐升高,临床Ⅲ/Ⅳ期、Ⅰ/Ⅱ期结肠癌miR-93的表达与癌旁组织相比都显著增高(P<0.05);有淋巴结转移的结肠癌患者的miR-93的表达比无淋巴结转移者显著增加(P<0.05);反义miR-93转染结肠癌细胞SW480和LoVo后,miR-93的表达明显降低,SW480和LoVo结肠癌细胞生长受到明显抑制,其生长主要停滞在G0/G1期,而S期和G2/M期细胞的比例下降。结论 miR-93与结肠癌的发生发展密切相关,其可以通过调节细胞周期中G1/S期的转换而影响结肠癌细胞的生长,为结肠癌治疗提供新的靶点。     

miR-21和VEGF在结肠癌中的表达变化及临床意义

目的 探讨微小RNA-21(miR-21)和血管内皮生长因子(VEGF)在结肠癌中的表达变化及临床意义.方法 80例结肠癌患者,采用实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测结肠癌组织及癌旁组织中miR-21、VEGF mRNA的表达量;根据miR-21、VEGF表达量的平均值将结肠癌患者分为miR-21高表达组...     

炎症性肠病患者血清miR-181a-5p和miR-126表达水平及其与肠道菌群相关性的研究

目的 探讨miR-181a-5p、miR-126在炎症性肠病(IBD)患者血清中的表达及其与肠道菌群的相关性.方法 收集2016年10月至2018年12月保定市第二医院收治的100例活动期IBD患者作为研究组,根据IBD类型分为溃疡性肠炎(UC)组(60例)和克罗恩病(CD)组(40例),另选择同期在本院体检的50名健...     

miR-223-3p在老年结肠癌组织和癌旁组织中的表达水平及其生物学功能作用机制

目的 探讨miR-223-3p在老年结肠癌组织和癌旁组织中的表达水平及其生物学功能作用机制。方法 选取108例初诊为老年结肠癌患者,经手术切除的结肠癌组织标本作为研究标本,癌旁组织标本(距结肠癌组织边缘至少5 cm)作为对照标本。购置人结肠癌细胞(SW480)和人结肠癌细胞(SW620)。通过实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)测定结肠癌组织、癌旁组织、SW480及SW620细胞中miR-223-3p表达水平,通过敲低或增加SW480及SW620细胞中miR-223-3p表达观察miR-223-3p对细胞增殖、运动、侵袭、凋亡及凋亡蛋白的影响。结果 结肠癌组织中miR-223-3p表达水平显著高于癌旁组织(P<0.001);SW620细胞中miR-223-3p表达水平显著高于SW480细胞(P<0.05);SW480细胞中,转染组miR-223-3p表达水平显著高于未转染组(P<0.001);SW620细胞中,转染组miR-223-3p表达水平显著低于未转染组(P<0.001);转染24、48、72 h后SW480细胞转染组细胞计数显著多于未转染组(P<...     

Survivin基因小于扰RNA对人结肠癌细胞生物学行为的影响

目的 探讨载体介导的Survivin小干扰RNA(siRNA)对人结肠癌细胞株Lovo生物学行为的影响.方法 构建Survivin特异性siR-NA真核表达载体.转染结肠癌癌细胞后,以噻唑蓝(MTT)比色法、克隆形成试验、流式细胞术测定细胞增殖、周期变化.结果 与对照组相比,pGenesil-2-Survivinl和2载体干扰组增殖能力明显减弱(P<0.05);转染pGenesil-2一Survivinl和2质粒后14 d,Lovo细胞形成克隆的百分率较正常组明显降低(P<0.05).转染了pGenesii-2-Survivinl和pGenesil-2-Survivin2质粒后48 h,Lovo细胞GO/G1和G2/M期细胞百分比较正常组明显增加(P<0.05),而S期细胞百分比较正常组明显减少(P<0.05).结论 载体介导的Survivin siRNA对Survivin的抑制可显著抑制结肠癌细胞株Lovo的恶性生物学行为.     

miR-497抑制人结肠癌细胞血管生成及迁移侵袭能力的研究

目的 研究miR-497抑制人结肠癌细胞血管生成及迁移侵袭能力的作用及其机制.方法 以转染过表达miR-497的人结肠癌HT-29细胞作用于人脐静脉内皮细胞(HUVEC),观察其对血管内皮细胞募集实验和小管形成实验的影响,以ELISA和Western blotting法检测其对VEGFA蛋白表达水平的影响.观察HT-2...     

人端粒酶逆转录酶RNA干扰对结肠癌细胞生物学行为的影响

目的研究端粒酶逆转录酶（hTERT）RNA干扰对结肠癌HCT116细胞生物学行为的影响。方法将HCT116细胞分为转染组（转染重组质粒真核表达载体）、对照组（转染空载体质粒）和未转染组。PCR方法检测hTERT干扰序列,RT—PCR方法检测hTERT表达,HE染色、生长曲线和流式细胞术方法分别检测细胞形态、细胞增殖和细胞周期,β-半乳糖苷酶染色方法检测细胞衰老,Annexin V／PI染色流式细胞光度术检测细胞凋亡。结果转染细胞内均存在hTERT干扰序列,hTERT干扰率为21．5％;与未转染细胞相比,转染细胞核质比明显缩小,增殖率显著下降（P〈0．05）,衰老细胞和G2-M期细胞明显增加（P〈0．05）。hTERT干扰显著增加结肠癌细胞凋亡（P〈0．05）,而对照细胞各指标均无显著变化。结论hTERT干扰显著影响结肠癌细胞的生物学行为。     

siRNA抑制PTTG表达对人结肠癌LoVo细胞生物学活性的影响

目的 探讨PTTG干扰质粒对人结肠癌LoVo细胞黏附、侵袭及迁移能力的影响.方法 分别采用MTT和Transwell小室研究转染PTTG-siRNA对结肠癌细胞LoVo黏附、侵袭及迁移的作用.结果 特异性siRNA干扰PTTG表达后,LoVo细胞黏附百分率显著低于正常对照组(P＜0.01),穿透Transwell小室的细胞百分率显著低于正常对照组,细胞迁移百分率低于正常对照组.结论 特异性siRNA干扰PPTTG表达后,LoVo细胞黏附、侵袭及迁移能力受到抑制.     

HSP70,HSP90在结肠癌中表达及其和生物学行为的相关性

目的:探讨HSP70,HSP90在人结肠癌中的表达情况及其和结肠癌细胞生物学行为的相关性.方法:结肠癌患者手术标本40例,分别以癌组织、癌旁2cm组织和远离癌灶的正常黏膜组织作为病例组和对照组.用亲和免疫组织化学技术方法检测HSP70和HSP90,并收集该40例患者的临床Duke's分期,分析HSP70和HSP90蛋白的阳性程度和结肠癌临床分期是否存在相关性.结果:癌组织HSP70和HSP90的表达明显增高,癌组织、癌旁组织和正常黏膜组织三组之间HSP70和HSP90表达率有明显差异(HSP70:82.5%vs52.5%vs25%,χ2=26.58,P=0.000;72.5%vs42.5%vs22.5%,χ2=20.41,P=0.000);HSP70和HSP90蛋白的阳性程度和结肠癌临床分期存在相关性(HSP70:tau_b=0.392,P=0.006;HSP90:tau_b=0.396,P=0.006).结论:结肠癌细胞存在HSP70和HSP90蛋白的过度表达,HSP70,HSP90和结肠癌细胞的生物学行为存在相关性.     

血小板miR-126表达与冠状动脉粥样硬化心脏病的相关性研究

目的 观察冠心病患者血小板miR-126表达与冠状动脉粥样硬化指标的关系,探讨其在冠心病诊断、预测及预后分析中的应用价值。方法 随机选取2016年3月-2018年3月在沈阳市第四人民医院循环内科确定诊断为冠心病的患者60例为实验组,包括SAP(稳定性心绞痛)组(n=30)及ACS(急性冠状动脉综合征)组(n=30),健康人30例作为健康对照组(NC组),qRT-PCR检测血小板miR-126表达,评价miR-126在健康人群、急性冠状动脉综合征及稳定型心绞痛患者中的表达水平差异,miR-126与冠脉斑块CT值分型的关系,miR-126表达与冠脉造影病变程度、分型及病变支数相关性。结果 qRT-PCR显示,ACS组及SAP组miR-126表达高于NC组(P＜0.01),ACS组高于SAP组(P＜0.05);miR-126在冠脉斑块CT值分型中钙化型高于纤维型及软质型,纤维型高于软质型(P＜0.05);miR-126表达水平在中度、重度及闭塞组高于轻度组(P＜0.05),重度及闭塞组高于中度组(P＜0.05);miR-126表达水平在2支及≥3支病变组高于1支病变组(P＜0.05),≥3支病变组高于2支病变组(P＜0.05)。结论 血小板miR-126表达于冠状动脉粥样硬化严重程度具有相关性,miR-126表达高者冠状动脉病变程度及支数均较高。