lncRNA FOXCUT调控Notch通路抑制结肠癌细胞增殖、侵袭的实验研究#br#

目的　研究长链非编码RNA（lncRNA）FOXC1启动子临近转录体（FOXCUT）对结肠癌细胞（HCT116）增殖、侵袭的影响及作用机制。方法　向HCT116细胞转染FOXCUT siRNA（FOXCUT siRNA组）,以转染阴性siRNA为阴性对照组（FOXCUT siRNA-NC组）,未转染组为正常对照组（NC组）,通过qPCR法确定FOXCUT干扰效果,并检测结肠癌及癌旁组织、人结肠癌细胞株（SW480、SW620、HCT116、HT29）和人正常结肠上皮细胞（NCM460）中FOXCUT mRNA表达水平;通过CCK-8、集落形成实验和Transwell实验检测沉默FOXCUT对HCT116细胞增殖、集落形成能力及侵袭能力的影响;qPCR检测沉默FOXCUT后HCT116细胞中Notch1、Hes1 mRNA表达变化;蛋白免疫印迹（Western blot）实验检测HCT116细胞中Notch1、Hes1蛋白表达情况。结果　与癌旁组织比较,结肠癌组织中FOXCUT mRNA表达水平显著增高（P＜0.01）;与NCM460细胞比较,SW480、SW620、HCT116、HT29结肠癌细胞株中FOXCUT mRNA表达水平均显著增高（P＜0.05）,其中以HCT116细胞中表达水平最高;与FOXCUT siRNA-NC组比较,FOXCUT siRNA组HCT116细胞中FOXCUT mRNA表达水平显著降低（P＜0.01）;NC组、FOXCUT siRNA-NC组HCT116细胞中FOXCUT mRNA表达水平差异无统计学意义（P＞0.05）;沉默FOXCUT可显著抑制细胞增殖、集落形成能力及侵袭（P＜0.05）,并抑制Notch1、Hes1 mRNA及蛋白表达（P＜0.01）。结论　沉默FOXCUT可抑制结肠癌HCT116细胞增殖及侵袭,可能与抑制Notch通路有关。     

miR-126抑制结肠癌增殖及侵袭转移的功能研究

目的：研究 miR-126在体内是否具有抑制结肠癌细胞增殖及侵袭转移的功能。方法利用慢病毒载体构建稳定过表达miR-126的结肠癌细胞系 HCT116,将实验组及对照组细胞分别进行裸鼠皮下及尾静脉成瘤体内实验。结果成功构建稳定过表达 miR-126细胞系 HCT116;裸鼠皮下成瘤实验结果显示过表达 miR-126实验组皮下移植瘤瘤体平均体积明显小于其对照组瘤体体积（P ＜0．05）;尾静脉成瘤组中稳定过表达 miR-126实验组肺部转移灶的平均数目、面积均明显小于其对照组（P＜0．05）。结论裸鼠移植瘤实验证实 miR-126在体内具有抑制结肠癌细胞增殖及侵袭转移的作用。     

LncRNA TMPO-AS1调节miR-340-5p/RUNX1轴对结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的 探讨长链非编码RNA TMPO反义RNA1(LncRNA TMPO-AS1)调控miR-340-5p/RUNT相关转录因子1(RUNX1)轴对结直肠癌(CRC)细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法 qRT-PCR检测人正常结肠上皮细胞HCoEpiC、人CRC细胞SW480、HCT116、LOVO、HT-29中TMPO-AS1、miR-340-5p、RUNX1表达;将HCT116细胞随机分为：si-ctrl组、si-TMPO-AS1组、mimics NC组、miR-340-5p组、si-TMPO-AS1+anti-miR-ctrl组、si-TMPO-AS1+anti-miR-340-5p组;qRT-PCR检测6组HCT116细胞TMPO-AS1、miR-340-5p、RUNX1水平;CCK-8法检测HCT116细胞活力;EDU法检测HCT116细胞增殖;Transwell检测HCT116细胞迁移和侵袭;western blot检测HCT116细胞RUNX1、PCNA、MMP-2表达;双荧光素酶报告基因实验分别验证TMPO-AS1和miR-340-5p、miR-340-5p和RUNX1的...     

RNA干扰对乳腺癌细胞骨桥蛋白基因表达抑制的研究

目的应用RNA干扰术靶向降低乳腺癌MCF-7细胞中骨桥蛋白基因（OPN）的表达水平,研究OPN基因对乳腺癌细胞增殖和侵袭性等生物学行为的影响。方法将设计合成的骨桥蛋白OPN序列特异性小分子干扰RNA（siRNA）,转染乳腺癌细胞株MCF-7,用逆转录PCR和蛋白印记杂交测OPN mRNA及蛋白水平的表达,通过生长曲线、克隆形成实验来检测细胞增殖及侵袭性情况的变化。结果OPN特异性siRNA转染后,骨桥蛋白mRNA及蛋白水平均明显下降,比色法显示转染组72h吸光度值为（0．21±0．06）与空白对照组（1．18土0．05）相比较明显受到抑制。转染组细胞克隆形成数为3．8个,较空白对照组（7．3个）及阴性对照组（7．1个）明显下降（P〈0．05）。结论乳腺癌MCF-7细胞中,针对OPN合成的siRNA能够有效地抑制骨桥蛋白的表达,从而显著抑制细胞的增殖和侵袭能力。     

TGF-β1对结直肠癌细胞株侵袭转移及IL-22表达的影响

目的 探讨转化生长因子β1（TGF-β1）对结直肠癌细胞株侵袭转移及白细胞介素22（IL-22）蛋白表达的 影响。方法 以结直肠癌HCT116细胞株为研究对象,以不同浓度（0、5、10、15、20、30、50 μg/L）TGF-β1处理24、48 h 后,CCK-8法检测结直肠癌HCT116细胞体外增殖情况;将结直肠癌HCT116细胞株分为对照组和10 μg/L TGF-β1 处理组。Transwell侵袭迁移实验和划痕实验检测TGF-β1对HCT116细胞侵袭迁移能力的影响;采用RT-PCR检测 TGF-β1对HCT116细胞TGF-β1、IL-22 mRNA表达的影响;免疫细胞化学染色和Western blot 检测HCT116细胞中 TGF-β1、IL-22、信号转导和转录激活因子3（STAT3）、E-钙黏蛋白（E-cadherin）表达水平。结果 CCK-8结果显示, 0、5、10、15、20、30、50 μg/L TGF-β1 溶液刺激 24、48 h 后,不同 TGF-β1 浓度处理组结直肠癌 HCT116 细胞光密度 （OD）值差异均无统计学意义（均P＞0.05）。10 μg/L TGF-β1处理HCT116细胞48 h后,细胞侵袭能力、迁移能力和 迁移距离均明显升高（均P＜0.01）;TGF-β1处理组TGF-β1 mRNA表达水平明显高于对照组,而IL-22 mRNA表达水 平明显低于对照组（均P＜0.01）;免疫细胞化学染色和Western blot结果显示,TGF-β1处理组TGF-β1、STAT3蛋白表 达水平明显高于对照组,而IL-22、E-cadherin蛋白表达水平明显低于对照组（均P＜0.05）。结论 TGF-β1可能促进 HCT116细胞侵袭和迁移,但对HCT116细胞的增殖影响不明显,结直肠癌HCT116细胞中TGF-β1可能抑制IL-22蛋 白的表达。     

竹根黄酮类成分对小鼠抗心肌缺血损伤的保护作用

目的：观察竹根黄酮类成分对心肌缺血的保护作用并探讨其作用机制。方法通过对前期实验得到的竹根黄酮类成分1号样品低剂量组（1S‐L组）、1号样品高剂量组（1S‐H组）;2号样品低剂量组（2S‐L组）、2号样品高剂量组（2S‐H组）,应用小鼠常压耐缺氧保护和小鼠夹闭气管死亡保护及对小鼠心肌缺血线粒体膜 SOD、MDA的影响实验。观察样品对小鼠缺血心肌的保护作用。结果（1）1S‐H组（P＜0．05）与2S‐H组（P＜0．01）能够延长小鼠常压耐缺氧的存活时间;（2）1S‐L 组（ P＜ 0．05）和1S‐H 组（ P＜ 0．05）与2S‐L 组（ P＜ 0．01）和2S‐H 组（P＜0．01）均可以明显延长夹闭小鼠气管死亡的存活时间;（3）1号样品各剂量组和2号样品各剂量组对小鼠心肌缺血线粒体的SOD值升高差异无统计学意义;1S‐H组（P＜0．05）和2S‐L组（P＜0．05）及2S‐H组（P＜0．01）能够降低小鼠心肌缺血线粒体膜的MDA值。结论竹根黄酮类成分可以延长小鼠常压耐缺氧和夹闭小鼠气管死亡的存活时间;可以降低小鼠心肌缺血线粒体膜的MDA值。     

沉默Prohibitin基因对人结直肠癌细胞株HCT116增殖和凋亡的影响

目的 siRNA介导抗增殖蛋白Prohibitin (PHB)基因沉默对人结直肠癌细胞株HCT116增殖和凋亡的影响.方法 通过脂质体LipofectamineTM 2000在HCT116细胞中转染PHB-siRNA,以Western blot来筛选siRNA片段.设立阴性对照NC组和高效沉默PHB138,PHB539 siRNA片段为实验组,重新转染HCT116,通过平板克隆形成实验、CCK-8检测细胞增殖能力;Annexin Ⅴ-FITC细胞凋亡试剂流式细胞术、Caspase-3/ Caspase-9活性检测等方法检测细胞凋亡;Annexin Ⅴ-FITC和Hoechst染色荧光显微镜观察.结果 Western blot结果显示siRNA片段PHB138、PHB539能明显抑制PHB蛋白表达;转染后HCT 116平板克隆形成率分别PHB138 (31.1±4.0)％、PHB539 (12.4±1.2)％、NC (43.4±2.1)％,差异有统计学意义(P＜0.001);CCK8实验发现转染后1～5 d,实验组与对照组比较,细胞增殖未收到显著影响(P＞0.05).在转染第7天,PHB539 siRNA能显著抑制细胞增殖(P＜0.01);Caspase-3活性度为PHB138 (1.50±0.39)、PHB539 (1.81±0.41),Caspase-9活性度PHB138(2.02±0.43)、PHB539 (2.81±0.51),差异有统计学意义(P＜0.05);Annexin Ⅴ-FITC和Hoechst染色均在荧光显微镜下观测有明显的凋亡现象,且凋亡比例和强度比阴性对照强.结论 靶向PHB-siRNA干扰可以有效地沉默结直肠癌细胞HCT116 PHB基因,下调PHB蛋白水平,从而抑制结直肠癌细胞HCT116增殖、促进凋亡.     

血吸虫虫卵抗原对巨噬细胞和肺动脉内皮细胞 IL-1β表达的影响

目的：探讨血吸虫虫卵抗原（SEA ）对巨噬细胞 RAW264．7和肺动脉内皮细胞（HPAECs）上清液中白细胞介素1β（IL‐1β）表达的影响。方法体外培养 RAW264．7细胞和HPAECs ,随机分为对照组（A组）、脂多糖＋SEA组（B组）和SEA组（C组）,采用 ELISA法检测细胞上清液中IL‐1β表达量。结果与 A 组相比,B组和 C 组细胞上清液中 IL‐1β的表达均上调（P＜0．05）;C组IL‐1β的表达低于B组（P＜0．05）。结论 SEA诱导巨噬细胞和 HPAECs上清液中IL‐1β的表达,提示SEA诱导的炎症可能参与血吸虫病相关性肺动脉高压的发生。     

胰岛素对骨骼肌细胞固醇调节原件结合蛋白1c的调节作用

目的：研究胰岛素对骨骼肌细胞固醇调节原件结合蛋白1c（SREBP‐1c）的调节作用。方法将诱导分化完成的大鼠骨骼肌L6肌管细胞分为对照组、胰岛素组、磷酸酰基醇3激酶抑制剂wortmannin＋胰岛素组、单磷酸腺苷依赖的蛋白激酶（AM PK ）抑制剂compound C＋胰岛素组、高脂对照组、高脂＋胰岛素组、高脂＋wortmannin＋胰岛素组和高脂＋compound C＋胰岛素组。Western blot检测SREBP‐1c、苏氨酸蛋白激酶（Akt）‐哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）、AMPK‐mTOR通路相关蛋白的表达。结果与对照组相比,胰岛素组SREBP‐1c、p‐Akt、p‐AMPK、p‐mTOR蛋白表达升高（P＜0．05）;与胰岛素组相比,wortmannin＋胰岛素组SREBP‐1c表达降低（P＜0．05）;与高脂对照组相比,高脂＋胰岛素组 SREBP‐1c、p‐mTOR 蛋白表达降低,p‐Akt、p‐AMPK 蛋白表达升高（P＜0．05）;与高脂＋胰岛素组相比,高脂＋compound C＋胰岛素组SREBP‐1c表达升高（P＜0．05）。结论骨骼肌细胞生理状态下,胰岛素对SREBP‐1c的上调作用可能主要通过Akt‐mTOR通路;胰岛素抵抗状态下,胰岛素治疗对SREBP‐1c的下调作用可能主要通过AMPK‐mTOR通路。     

结直肠癌组织中 IGFBP-3和 P53的表达及临床意义

目的：探讨胰岛素样生长因子结合蛋白3（ IGFBP-3）、P53在结直肠癌发生发展中的作用。方法应用免疫组化SP法检测IGFBP-3、P53在138例结直肠癌和69例正常结直肠黏膜中的表达情况。结果 IGFBP-3在CRC中的阳性率显著低于对照组（ P ＜0．05）,P53在CRC中的阳性率显著高于对照组（ P ＜0．01）;IGFBP-3在CRC中的表达与组织学分级、TNM分期、淋巴结转移的表达有关（ P ＞0．05）;P53在CRC中的表达与结直肠癌TNM分期、淋巴结转移、远处转移有关（ P ＞0．05）,二者与其他因素均无关（P ＞0．05）。 IGFBP-3与P53的表达呈负相关性（ r ＝-0．27, P ＜0．01）。结论 IGFBP-3与P53可能均参与了CRC的侵袭、转移过程,且二者起到了协同作用,联合检测二者在CRC中表达对预测预后具有重要意义。     

子宫中隔切除术后预防粘连方法探讨

目的 探讨子宫中隔并不孕患者宫腔镜术后不同处理方法预防宫腔粘连的效果.方法 55例子宫中隔并不孕患者行腹腔镜监护下宫腔镜子宫中隔切除术(TCRS),术后针对不同患者采用不同术后处理措施,包括宫腔放置与不放IUD,是否进行人工周期治疗,部分患者术后使用GnRH-a类药物治疗术后第1、3个月行宫腔镜检查随访,宫内放置IUD的患者;于术后第3个月取环.结果 54例患者术后进行宫腔镜检查随访,其中40例分别于术后第1、3个月完成了术后2次宫腔镜检查,另14例只完成一次检查.宫腔术后放环与否对术后宫腔形态影响无差异(P>0.05),术后使用人工周期治疗患者较未使用者子宫内膜厚,此两者术后第3个月宫腔镜检查发现宫底创面均已有内膜覆盖.使用GnRH-a类药物患者术后官腔形态满意.结论 TCRS术后宫腔放置IUD无助于预防术后粘连的发生;术后人工周期治疗应更个体化并有针对性的使用GnRH-a类药物治疗.术后及时进行宫腔镜检查随访可防止术后宫底新粘连的形成.     

10例狂犬病误诊原因分析

狂犬病近年来发病率有逐年增加的趋势,近十二年来,我们共遇见狂大病２３例,其中１０例被误诊为其它疾病,现就其误诊原因进行分析如下。１临床资料１．１ 一般资料：男８例,女２例;年龄最大７８岁,最小４岁。发病季节为３月～１１月。首诊科室,儿科３例、内科３例、转院３例、急诊科１例。１．２ 临床表现：发热７例,恐风５例,恐水６例,怕光３例,流涎１０例,胸闷、气促、呼吸困难４例,烦躁不安１０例,多汗７例,恐惧６例,肢体麻木４例,抽搐４例,恶心、呕吐２例,昏厥１例。所有病例发病至死亡时间为２天～６天,死亡原因为…     

住院患者精神用药情况调查分析

目的：了解目前住院精神患者的药物使用情况。方法：采用一日法调查西安市精神卫生中心403例住院精神患者诊断和治疗情况，并与上海市精神卫生中心2004年调查结果相比较。结果：①传统精神药物使用显著减少，新型精神药物使用占据首位；②抗精神病药物使用趋向小剂量化；③本组联用丙戊酸盐类药物显著增多；④我院精神药物使用情况与上海精神卫生中心比较有显著差异。结论：近年来精神药物使用情况已发生了显著变化，与新型精神药物疗效好，副作用少，患者依从性高有关。     

欧洲药典适用性认证介绍

目的介绍欧洲药典适用性认证程序,为国内药品监管机构和原料药生产企业提供信息,促进我国原料药生产企业的国际化。方法通过查阅调研欧盟相关药品法规和与EDQM同行面对面的交流,详细了解欧洲药典适用性认证的组织机构和具体程序。结果与结论欧洲药典适用性认证程序在对原料药的质量控制有重要作用,加强了药典的监管力度,进一步保证了原料药的质量、安全性和有效性。     

不同方法治疗慢性宫颈炎的疗效分析

目的慢性宫颈炎是妇科最常见的疾病之一,可引起盆腔脏器炎症,并且与宫颈癌的发生关系密切。本文诣在探讨不同方法在慢性宫颈炎中的疗效。方法回顾性分析新乡市中心医院收治的210例宫颈炎患者,采用药物保妇康栓、聚焦超声治疗及宫腔镜下宫颈电切术的临床效果进行统计分析。结果宫颈电切术治疗有效率为97.9%,明显高于另外两组,差异有统计学意义。结论宫腔镜下宫颈电切术治愈慢性宫颈炎,并且切除宫颈移行带,减少宫颈癌发生。     

新疆维吾尔自治区基层医院平均住院日调查分析

目的 通过对新疆维吾尔自治区14个县乡级医疗机构住院患者平均住院日及影响因素进行分析,为县乡级医疗机构进一步提高医疗管理质量提供依据.方法 将2009-2010年1504例县乡级医院住院患者平均住院天数,按性别、年龄、院别、付费方式、疾病分类进行描述性统计和秩和检验分析.结果 不同性别间及院别间平均住院日差异均有统计学意义(均P＜0.05),男性平均住院日为10.39 d,女性为8.69d,乡级医院为9.27d,县级医院为9.50 d.不同年龄间平均住院日差异有统计学意义(P＜0.05),小于15岁组、15 ～24岁组、25～44岁组、45 ～65岁组、大干65岁组平均住院日分别为8.10 d、7.66d、8.83 d、10.26 d和11.33 d.自费患者平均住院日为8.39 d,新农合组为9.10 d,商业保险组10.17 d,社会基本医疗保险患者则为11.08 d.不同疾病分类间平均住院日差异明显,妊娠类平均住院日最短,为6.73 d,而肿瘤患者则为14.26 d.结论 不同性别、不同年龄段、不同疾病分类及不同付费方式间平均住院日存在差异,县级医疗机构和乡级医疗机构住院患者平均住院日也存在差异.     

The effect of temperature and of cetrimide on the rate of loss of refractility of spores of Bacillus megaterium

The rate of germination of spores of Bacillus megaterium at 30° is not significantly different from the rate at 37° but the onset of germination is delayed; outgrowth is normal. At 45° germination of some spores occurs but the rate is much slower than at 37°, and there is no lag; emergence occurs from only a proportion of the germinated spores and after 3 or 4 vegetative cells have been produced, replication ceases. A single regression equation can represent the germination rate of the spores at 37° in the presence of from 0.0005 to 0.02% w/v of cetrimide and in its absence. In 0.0005% w/v of cetrimide, germ cells emerge from some of the germinated spores but many of them become swollen and disintegrate. Concentrations of 0.00125% w/v or more progressively inhibit swelling and completely inhibit emergence.     

经尿道前列腺汽化电切术与经尿道前列腺电切术治疗前列腺增生症的效果对比

目的 对比分析经尿道前列腺汽化电切术与经尿道前列腺电切术治疗前列腺增生症的效果.方法 将本院2011年3月～2013年2月收治的90例前列腺增生症患者随机分为观察组（n=45）和对照组（n=45）,观察组患者采用经尿道前列腺汽化电切术治疗,对照组患者采用尿道前列腺电切术治疗,比较两组患者的疗效.结果 观察组的手术时间、术中出血量、术后冲洗时间、术后留置导尿管时间、住院时间少于对照组（P＜0.05）,残余尿量、国际前列腺症状评分和生活质量评分优于对照组（P＜0.05）,但是两组患者的并发症发生率差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 经尿道前列腺汽化电切术治疗前列腺增生症具有疗效更确切、出血少、恢复快等优势,可以作为治疗前列腺增生症的首选方法.