人子宫内膜基质细胞和腺体细胞的分离培养及鉴定

目的：人子宫内膜分离培工得到纯度较高的内膜基质细胞和腺体细胞。方法：采用二次滤网过滤法进行分离并通过光镜观察和免疫细胞化学染色对其进行鉴别。结果：基质细胞在接种后0．5h开始贴壁,可见梭形和多角形两种形态的细胞。免疫细胞化学染色显示这两种细胞均具有波形蛋白免疫反应,反应率可达95％以上,而细胞角蛋白无免疫反应性,提示它们为来源于内膜基质的基质细胞,大部分腺体细胞在接种24h后贴壁,培养后4d左右腺体细胞呈旋涡状排列,单个细胞为多角形,核大而圆,腺细胞呈细胞角蛋白反应性,反应率在90％以上,结论：采用二次滤网过滤法可成功地分离入人子宫内膜基质细胞和腺体细胞。     

一种新的共刺激信号CD137在人T细胞及其亚群中的表达特点

目的：为了分析ＣＤ１３７ 在正常人静止状态和受ＰＨＡ刺激后不同时间Ｔ淋巴细胞及其亚群上的表达特点和规律。方法：采用免疫细胞化学和流式细胞术。结果：发现未刺激的淋巴细胞上无ＣＤ１３７ 表达。经ＰＨＡ 刺激后（ 仅Ｔ细胞发生转化） ,２４ ｈ 已有表达,以后表达率逐渐增高。免疫细胞化学法显示,２４、４８ 、７２ ｈ ＣＤ１３７ 的表达率分别为（１００ ±２０） ％ 、（１３０ ±２０） ％ 、（２００±４０） ％ ,ＣＤ１３７ 表达在细胞膜表面,细胞浆、细胞核无表达。流式细胞仪测定结果与免疫细胞化学法相吻合,ＰＨＡ 刺激２４、４８ 、７２ ｈ 的表达率分别为（８１６ ±１２８） ％ 、（１２３９ ±２１５） ％ 、（２１６０ ±４３０） ％ 。ＣＤ４＋ Ｔ细胞和ＣＤ８＋ 细胞均可表达,但在ＣＤ４＋ Ｔ细胞上的表达率高于ＣＤ８＋ 细胞。结论：ＣＤ１３７ 仅表达于活化Ｔ细胞表面,ＣＤ４＋ 和ＣＤ８＋ 细胞均可表达。静止Ｔ细胞无ＣＤ１３７ 表达。     

瘦素通过上调基质金属蛋白酶14(MMP14)促进MDA-MB-231人乳腺癌细胞的增殖和迁移

目的 探讨基质金属蛋白酶14(MMP14)在瘦素对MDA-MB-231乳腺癌细胞增殖和迁移的影响.方法 将MDA-MB-231人乳腺癌细胞随机分为对照组和(50、100、200、400)ng/mL瘦素处理组.实时定量PCR和Western blot法分别检测癌细胞MMP14mRNA及蛋白的表达;沉默MDA-MB-231...     

人乳头瘤病毒16型变异株E7蛋白在HeLa细胞中的表达及亚细胞定位

目的构建增强绿色荧光蛋白(EGFP)-人乳头瘤病毒16型变异株E7(HPV16-HBE7)重组质粒pEGFP-HBE7,研究HPV16-HBE7蛋白亚细胞定位,为进一步了解其生物学功能奠定基础。方法采用分子克隆技术,将HPV16-HBE7基因克隆在pEGFP-C1表达载体上,用脂质体法导入宫颈癌细胞中;West-ern印迹检测HBE7蛋白的表达;同时借助免疫荧光技术和EGFP-融合蛋白技术,采用激光共聚焦显微镜观察HBE7蛋白的亚细胞定位。结果重组质粒经PCR、酶切和测序鉴定,其目的片段大小、插入位点和核苷酸序列完全正确;结果表明,转染细胞HBE7蛋白的相对表达量其胞浆明显多于胞核;各个时间段HBE7蛋白均以胞浆分布为主,绿色荧光密集点状分布于细胞浆内,而野生株E7(WE7)蛋白分布在核内。结论人乳头瘤病毒16型变异株E7蛋白主要分布在细胞浆内,以胞浆为主的分布可能和HBE7基因发生突变后丢失核定位信号有关。     

真核表达的人Y盒结合蛋白1(YB-1)促进人HepG2肝癌细胞的增殖和迁移

目的 构建带有FLAG标签的Y盒结合蛋白1(YB-1)真核表达载体,转染至HepG2肝癌细胞探究YB-1对肝癌细胞增殖和迁移的影响。方法 以人卵巢文库为模板并采用PCR扩增出YB-1基因片段,经双酶切后与pcDNA3.0-FLAG载体连接,构建pcDNA3.0-FLAG-YB-1真核表达载体;将其转染至HepG2细胞,通过Western blot法验证YB-1在HepG2细胞的表达;CCK-8法和集落形成实验验证YB-1对HepG2细胞生长的影响;划痕实验验证YB-1对HepG2细胞迁移的影响。结果 成功构建出pcDNA3.0-FLAG-YB-1真核重组表达载体,且能在HepG2细胞中表达YB-1蛋白;YB-1能够促进HepG2细胞的增殖和迁移。结论 YB-1促进HepG2细胞的增殖和迁移。     

CD1C和S-100蛋白在乳腺癌组织树突状细胞的表达

目的观察CD1C和S-100蛋白在人乳腺癌组织中树突状细胞(DC)的表达。方法利用CD1C和S-100蛋白作为DC不同的特征性标志分子,用免疫组织化学方法观察20例乳腺癌组织及癌旁相对正常乳腺组织中CD1C+和S-100+DC的分布和形态学变化。结果乳腺癌组织S-100和CD1C表达阳性树突状细胞的平均光密度值(MOD)均明显弱于正常乳腺组织(P<0.05),面数密度也少于正常乳腺组织(P<0.05),且CD1C+DC数量的减少较S-100+DC数量的减少明显。结论DC可能与乳腺癌的发生、发展及愈后有一定关系,CD1C+DC的影响可能较S-100+DC大。     

Bmi-1、hTERT在乳腺癌细胞中的表达及与凋亡的关系

目的　研究原癌基因Bmi-1和hTERT的表达变化及其与细胞凋亡的关系,探讨它们在乳腺癌发生、发展过程中的作用。 方法　采用MTT法检测乳腺癌细胞的增殖抑制情况,并确定所选用的药物浓度。RT-PCR、Western Blot检测Bmi-1、hTERT的mRNA及蛋白的表达情况;TUNEL、流式细胞技术检测乳腺癌细胞的凋亡情况。 结果　5-FU对乳腺癌细胞有明显抑制作用,各实验组与对照组OD值的差异有统计学意义(P<0.05)。 用5-FU干预后,实验组Bmi-1和hTERT 的mRNA及蛋白表达水平均降低,细胞凋亡指数增加,与对照组相比差异显著有统计学意义(P<0.05),经统计学分析两者呈正相关（P<0.05）,且两者的表达与凋亡呈负相关（P<0.05）。 结论　Bmi-1和hTERT的表达下调可促进乳腺癌细胞凋亡。     

泛素连接酶hHrd1在人乳腺癌组织表达的意义

目的探讨一种泛素连接酶hHrd1在人乳腺癌发病中的病理意义。方法应用免疫组织化学SP法研究正常人乳腺组织、乳腺增生症、乳腺纤维腺瘤、原发性乳腺癌组织中hHrd1的表达。结果人乳腺癌组织hHrd1蛋白表达水平明显强于正常人乳腺组织、乳腺增生症、乳腺纤维腺瘤。导管内癌（或伴早浸）与浸润性导管癌相比，表达水平低，差异有显著性意义（P〈0．05）。人乳腺浸润性导管癌组织hHrd1表达与肿瘤大小有关（P〈0．05），与组织学分级、淋巴结是否转移无关（P〉0．05）。结论泛素连接酶hHrd1参与人乳腺癌的发生。     

树突状细胞标志分子在人乳腺癌中的表达及与T细胞的关系

目的通过观察人乳腺癌组织中CDlc、S-100、HLA-DR阳性细胞数和表达强度的变化及其与T细胞的关系,了解乳腺癌局部微环境的免疫状态,探讨树突状细胞与乳腺癌发生、发展的关系,为乳腺癌的生物治疗提供实验依据。方法收集手术切除的人乳腺癌组织和癌旁相对正常乳腺组织,用免疫组织化学方法和图像分析技术对20例乳腺癌标本进行检测。结果乳腺癌组织中CDlc、S-100和HLA—DR的表达强度均较相对正常乳腺组织明显减弱（P〈0．05）;CDlc^＋ DC、S-100^＋ DC、HLA—DR^＋ DC、CD4^＋T细胞和CD8^＋T细胞的数量均较相对正常乳腺组织明显减少（P〈0．05）,且乳腺癌组织中CDlc^＋DC细胞的数量比S-100^＋DC细胞的数量减少更明显,HLA-DR^＋DC与CD4^＋T细胞的数量呈明显相关关系（r=0．998）;结论树突状细胞表面标志分子在人乳腺癌组织中的表达总量下降,树突状细胞在抗乳腺癌的免疫反应中可能起重要作用;这为临床开展乳腺癌的生物治疗提供了实验依据。     

卡介苗胞壁蛋白诱导人肺腺上皮细胞hBD-1mRNA表达及其抗菌活性的增强

目的分离和鉴定刺激人肺腺上皮细胞(SPC-A-1)β-防御素-1(hBD-1)基因表达的卡介苗胞壁活性蛋白,开发增强粘膜抗菌肽基因表达的免疫增强剂为防治粘膜感染的研究打基础。方法采用超声破碎细胞、蔗糖密度梯度离心、SephadexG-150柱层析等方法分离卡介苗胞壁蛋白质组分;应用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法和Northern杂交检测SPC-A-1细胞hBD-1mRNA的表达;采用琼脂糖弥散杀菌法检测SPC-A-1细胞培养上清的抗菌活性。结果利用RT-PCR和Northern杂交分析,证实卡介苗刺激SPC-A-1细胞hBD-1mRNA的表达增强了2倍。卡介苗胞壁蛋白SephadexG-150层析所得6个组分中,组分5［相对分子质量（Mr）范围在21×103～29×103］诱导SPC-A-1细胞hBD-1mRNA的表达增强4倍,其培养上清的抗菌活性显著增强。这种诱导作用具剂量和时间依赖关系。结论卡介苗能增强人肺腺上皮SPC-A-1细胞hBD-1mRNA的表达及其抗菌活性;Mr为21×103～29×103的胞壁蛋白组分起这种刺激作用。     

CyclinB1 deubiquitination by USP14 regulates cell cycle progression in breast cancer

Breast cancer is the most common malignant tumor among women in China, which seriously threatens women's physical and mental health. Tumorigenesis is closely related to the dysregulation of cell cycle. The cell cycle progression includes interphase and mitotic phase (M phase). Cyclin B1 is a key protein in regulating M phase, which is essential for the whole cell cycle progression. CyclinB1 can be degraded through ubiquitination mediated by the anaphase promoting complex/cyclosome (APC/C). However, the mechanism of how CyclinB1 is deubiquitinated in breast cancer still remains unclear. In this study, we discovered that CyclinB1 interacted with ubiquitin-specific peptidase 14 (USP14). Based on the deubiquitinating function of USP14, we detected the effect of USP14 on the ubiquitination of CyclinB1. Inhibiting the activity of USP14 or USP14 knockdown significantly increased the ubiquitination of CyclinB1. In accordance with this, knocking down USP14 arrested cell cycle at G2/M phase. Knocking down USP14 with siRNAs significantly inhibited the proliferation and migration of breast cancer cells. In conclusion, our study demonstrated that USP14 regulated the cell cycle of breast cancer cells by regulating the ubiquitination of CyclinB1, which will provide a solid theoretical basis for the development of anti-cancer drugs targeting USP14.     

Histone H1 expression in human prostate cancer tissues and cell lines

Histone H1, one of the histone superfamilies, is known to determine chromatin structure and alter gene expression. It also contributes to regulation of cell proliferation in breast cancer. We hypothesized a similar association in prostate cancer, and therefore examined relationships between histone H1 expression and Gleason pattern, Ki-67 and androgen receptor levels in a series of prostate cancer tissues and cell lines. Histone H1 positive cancer cells increased with the Gleason pattern. Gleason pattern 3 tumors were divided into two groups, one with high histone H1 positivity (H1-high cases, 60-100% positivity) and the other with low histone H1 positivity (H1-low cases, 0-20% positivity). Ki-67 or androgen receptor positivity in H1-high cases was significantly higher than in H1-low cases. PC3 cells demonstrated more frequent histone H1 and Ki-67 positivity as compared to LNCaP cells. Silencing of histone H1 by siRNA transfection significantly reduced cell proliferation in LNCaP and PC3. These findings suggest that histone H1 expression is associated with the Gleason pattern, cell proliferation and androgen receptor expression in prostate cancers.     

PRDM14在肺癌细胞系中的表达

目的检测PRDM14在肺癌细胞系中的表达及分布情况。方法采用RT-PCR技术和免疫荧光方法分别检测人支气管上皮细胞系(HBE)和6个肺癌细胞系中PRDM14mRNA和蛋白的表达。结果 RT-PCR结果显示PRDM14与GAPDH电泳条带的平均光密度比值在肺癌细胞系中显著高于HBE细胞系(P0.001);免疫荧光结果显示PRDM14蛋白表达的平均荧光强度在肺癌细胞系中高于HBE细胞系(P0.05),PRDM14蛋白荧光信号主要定位于细胞浆。结论 PRDM14在HBE细胞系低表达,在肺癌细胞系高表达,主要分布于细胞浆,PRDM14可能在肺癌的发生发展中发挥作用。     

miR-580对乳腺癌细胞系中Twist1的调节作用

目的：探讨miR-580在MCF-10A细胞系中对Twist1的调节。方法：本实验利用生物信息学方法预测Twist1的靶miRNA是miR-580。首先,采用qPCR法检测在MCF-10A系列细胞系中Twist1及miR-580的表达。然后,在MCF-10A细胞系中分别转染miR-580类似物和miR-580抑制物后,利用RT-PCR、Western blot、t检验分析Twist1的表达及细胞迁移能力的变化。最后利用荧光素酶实验验证miR-580通过结合在Twist1的3'UTR调节其表达。结果：1)在MCF-10A细胞系中Twist1与miR-580的表达呈负相关;2)在MCF-10A细胞系中转染miR-580类似物后,Twist1的表达下调;在MCF-10A细胞系中转染miR-580抑制物后Twist1的表达上调;3)在MCF-10A细胞系中引入miR-580类似物后细胞迁移能力降低;4)miR-580直接结合在Twist1的3'UTR。结论：miRNA-580在MCF-10A细胞系中通过结合在Twist1的3'UTR负向调节Twist1的表达从而克制细胞的迁移。     

用细胞原位杂交方法检测NPY mRNA在PC12细胞中的表达

目的：建立ＮＰＹ ｍＲＮＡ物细胞原位杂交检测方法,并以ＮＧＦ为诱导因子研究Ｄｅｘ对大鼠嗜铬细胞瘤ＰＣ１２细胞中ＮＰＹｍＲＮＡ表达的影响。方法：采用细胞原位杂交方法。方法：ＮＧＦ具有诱导ＮＰＹ基因表达的生物学效应且呈剂量效应关系;Ｄｅｘ对ＮＰｘＲＮＡ表达具有双相调节效应,即早期（〈８ｈ）可促进ＮＧＦ的诱导作用,而晚期（〉１６ｈ）则具有抑制作用（Ｐ〈０．０１）,但单独Ｄｅｘ对ＮＰＹｍＲＮＡ表达无显著影     

ST14/MT-SP1影响MT2-MMP和TIMP-2的表达而增强结直肠癌细胞的侵袭力

目的： 膜型丝氨酸蛋白酶（ST14 / MT-SP1）和它的同源物在细胞迁移和肿瘤转移中起重要作用。本研究目的是评估ST14/MT-SP1过度表达如何影响结直肠癌细胞的侵袭能力。方法: 全长人ST14/MT-SP1基因被瞬时转染到结直肠癌细胞系RKO。表达产物由Ni2+-亲和层析柱纯化并通过明胶酶谱法分析蛋白的明胶酶活性。用ECM体外侵润试验确定细胞的体外侵袭力。用cDNA微阵列法测定ST14/MT-SP1转染细胞中MMPs和TIMPs表达变化情况。用实时定量PCR 来验证这些基因表达的变化。结果: 人全长ST14/MT-SP1基因被转染到结直肠癌细胞系RKO后，纯化表达的蛋白具有明胶酶的活力。RKO细胞过度表达ST14/MT-SP1 后其体外侵润转移能力显著增强(P<0.01),而ST14/MT-SP1蛋白被阻断后使SW480和SW620细胞的侵袭能力降低(P<0.01)。进一步发现，ST14/MT-SP1 过度表达使RKO 细胞的 MT2-MMP(MMP-15)表达显著上调（约2.5倍） 和TIMP2表达下调（约0.35倍）。结论: ST14/MT-SP1 过度表达导致了结直肠癌细胞侵袭力增强，这种能力的增强是由于ST14/MT-SP1自身具有明胶酶的活性和ST14/MT-SP1 能上调 MT2-MMP与下调TIMP-2的表达。因此,ST14/MT-SP1过度表达可能增强结直肠癌细胞的侵袭能力。     

MUC1/Y基因在胃肠道肿瘤中的表达及诱导抗肿瘤免疫

目的 研究MUC1／Y基因异常表达在消化道肿瘤中的临床意义；构建MUC1／YcDNA全长载体，修饰树突状细胞(DC)诱导杀伤细胞治疗消化道肿瘤。方法 采用RT-PCR方法检测标本中MUC1／YmRNA表达。选取8例HLA-A2^ 消化道肿瘤患者，体外诱导DC，以构建的MUCl／YcDNA真核表达载体pcDNA3．1-MUC1／Y修饰DC诱导CTL。通过检测对靶细胞SW620和Raji的杀伤作用和诱导靶细胞凋亡的能力来评价抗肿瘤免疫反应。结果 93．88％肿瘤组织表达较高水平的MUC1／Y。分析表明：消化道肿瘤中MUC1／YmRNA表达与组织学分型、肿瘤生长方式、浸润程度及TNM临床分期有关；与性别、肿瘤发生部位及分化程度无关。pcDNA3．1-MUC1／Y修饰DC诱导的CTL对特异性靶细胞的杀伤活性显著高于对照组，并能有效诱导靶细胞凋亡。结论 MUC1／YmRNA表达在消化道肿瘤组织具有重要意义；经pcDNA3．1-MUC1／Y修饰的DC可有效诱导特异性抗肿瘤免疫应答。     

JAB1过表达增加人肺腺癌细胞对化疗的敏感性

目的通过探讨缺氧诱导因子1（HRE-1）启动子诱导JAB1过表达致人肺腺癌细胞（A549）对化疗敏感性的增加程度,来找到提高肺癌缺氧区肿瘤细胞对化疗敏感性的方法,最终达到逆转肺癌化疗耐药的目的。方法首先成功构建缺氧反应元件启动子所驱动的pUC57-HRE-JAB1真核表达质粒。随后,将该质粒导入A549细胞,化疗药物顺铂（C-DDP）也同时加入处理A549细胞。采用RFPCR和Western blot分别检测转染后A549中JAB1的mRNA和蛋白表达水平。采用流式细胞术检测经pUC57-HRE-JAB1质粒转染后A549细胞周期和凋亡的改变。结果较空白对照组和空载体组,经pUC57-HRE-JAB1真核表达质粒转染后,A549细胞中JAB1的表达明显增加（P〈0.05）。同时,细胞周期被阻滞于G1期,并且转染后顺铂所诱导的细胞凋亡率较单纯顺铂处理明显增加（P〈0.01）。更为重要的是,pUC57-HRE-JAB1导入增加了A549细胞对C-DDP的敏感性。结论缺氧诱导因子1启动子所诱导的JAB1过表达增加了肺癌细胞的化疗敏感性,为逆转肺癌化疗耐药提供了一种可行的治疗策略。     

Oxytocin inhibits proliferation of human breast cancer cell lines

In this study we show that treatment of MDA-MB231 hormone-independent human breast cancer cells with oxytocin (OT) or with the OT analogue F314 induces significant growth inhibition together with a change in cell phenotype. In MCF7 and T47D human breast cancer cells, OT inhibits oestrogen-induced cell growth. In these same cells, OT administration significantly enhances the inhibitory effect of tamoxifen on cell proliferation. MDA-MB231, MCF7 and T47D cells all express mRNA specific for the OT receptor. These data suggest that it may be possible to inhibit breast cancer growth using OT and OT analogues.