甲状腺素对胃腺癌细胞VLDL-R选择性剪接的影响

目的探讨甲状腺素对低分化胃腺癌细胞MKN45细胞中极低密度脂蛋白受体(VLDL-R)选择性剪接的影响。方法在体外,用一定浓度的甲状腺素与MKN45细胞温育不同时间后,采用RT-PCR和Western印迹技术检测两型VLDL-R mRNA和蛋白质的表达水平,以两型受体的比值间接反映甲状腺素对VLDL-R选择性剪接的影响。结果甲状腺素可明显上调两型VLDL-R的表达,Ⅱ型受体与Ⅰ型受体mRNA的比值随时间延长逐渐增大。结论甲状腺素可显著增强VLDL-R的选择性剪接,表现为Ⅱ型受体表达的增高幅度明显大于Ⅰ型受体。     

Akt与细胞生存

细胞死亡包括坏死和凋亡两种方式 ,抑制凋亡 ,促进细胞生存已成为当前研究的热点。PI- 3K/Akt信号转导通路在生长因子介导的细胞生存中发挥了重要作用 ,Akt的激活能够阻断许多刺激因子所诱导的细胞凋亡     

水通道蛋白-1对胃腺癌细胞分化的影响

目的研究aquaporin-1(AQP1)的表达与胃腺癌细胞分化之间的关系。方法采用免疫组织化学SP法研究人胃腺癌细胞的AQP1和增殖细胞核抗原(PCNA)的表达。结果高、中分化的胃腺癌细胞表达AQP1,低分化的癌细胞不表达AQP1;从高分化到低分化的胃腺癌,表达PCNA的细胞逐渐增多。结论AQP1不参与胃腺癌细胞的增殖,但是参与胃腺癌细胞的分化。     

Ach对人胃腺癌细胞内蛋白激酶A及cAMP的影响

目的：探讨乙酰胆碱(Ach)对人胃腺癌细胞内蛋白激酶A (PKA)及环一磷酸腺苷(cAMP)水平的影响。 方法： 将Ach作用于体外培养的人胃腺癌细胞，利用酶免疫分析法测定癌细胞内PKA活性和cAMP的浓度。 结果： 10 μmol/L Ach使胃腺癌细胞内cAMP水平和PKA活性显著高于空白对照组，该作用可被阿托品(atropine)阻断。 结论： Ach对胃腺癌细胞的增殖分化具有一定的调控作用，这种作用是通过毒蕈碱受体实现的。     

姜黄素对不同分化程度胃腺癌细胞迁移侵袭能力的影响

目的探讨姜黄素对正常胃上皮细胞GES-1、高分化胃腺癌细胞MKN28、中分化胃腺癌细胞SGC-7901、低分化胃腺癌细胞MKN45生长增殖、迁移及侵袭能力的影响。方法 MTT法测定姜黄素对4种细胞的增殖抑制率,Hoechst 33342染色观察姜黄素对4种细胞的胞核影响,Transwell小室实验测定姜黄素对4种细胞迁移及侵袭能力的影响。结果姜黄素对4种细胞的抑制率随时间的延长及剂量的增长而增加(P0.05),呈时间及剂量依赖性;Hoechst 33342提示随着剂量的增加,凋亡细胞数增加;Transwell小室迁移及侵袭实验提示GES-1细胞在姜黄素浓度为20、40μmol/L时,可促进GES-1细胞的迁移及侵袭能力(P0.05);姜黄素浓度为80μmol/L时呈明显抑制作用(P0.05),姜黄素对于高、中、低分化胃腺癌细胞,经Transwell小室实验证明随姜黄素浓度增加,明显抑制细胞迁移及侵袭能力(P0.05)。结论姜黄素在较低浓度(20、40μmol/L)时可促进胃正常上皮GES-1细胞迁移及侵袭能力,姜黄素在高浓度(80μmol/L)时可抑制细胞迁移及侵袭能力;其对胃正常上皮细胞及不同分化程度胃腺癌细胞的增殖抑制、诱导凋亡及迁移侵袭能力均呈剂量及时间依赖性。     

miRNA-542-3p对胃腺癌细胞侵袭转移能力的影响

目的研究microRNA-542-3p(miR-542-3p)在人胃腺癌细胞系及组织中的表达水平及对胃腺癌细胞侵袭转移的影响。方法通过RT-PCR检测miR-542-3p在人正常胃粘膜上皮细胞GES-1及人胃癌细胞系SGC-7901和BGC-823中的表达水平;同时应用RT-PCR检测miR-542-3p在50组患者胃腺癌和癌旁组织中的表达差异。体外实验通过外源转染miR-542-3p的模拟物和抑制剂,分别于24,36,48h检测SGC-7901的转染效率,选取最佳转染时间。应用划痕实验和Transwell评估细胞侵袭转移能力的变化。结果胃腺癌细胞系SGC-7901和BGC-823中miR-542-3p的表达水平低于其在GSE-1中的表达水平(P0.05);miR-542-3p在癌组织中表达低于癌旁组织(P0.05)。24 h后,miR-542-3p模拟物组侵袭转移能力显著低于对照组(P0.05),而miR-542-3p抑制剂组侵袭转移能力显著高于对照组(P0.05)。结论miR-542-3p在多种人胃癌细胞和胃腺癌组织中呈低表达,miR-542-3p抑制胃腺癌SGC7901细胞的侵袭转移能力。     

外源性3′,5′,环腺苷酸对人胃腺癌细胞系的影响

本实验通过外源性3′,5′环腺苷酸(cAMP)对人胃腺癌SGC-7901细胞系的连续作用,观察到癌细胞的增殖受到明显抑制的同时,膜表面环腺苷酸-磷酸二酶(cAMP-PDEase)的活性及Mg~(++)-ATPase活性均明显下降,而细胞内cAMP免疫荧光强度则明显增强,进一步证实了细胞内cAMP水平与细胞的生长、分化,及膜表面ATPase、cAMP-PDEase的活性有密切的关系。     

APCP对人胃腺癌细胞HGC-27生长及血管内皮生长因子的影响

目的体外应用CD73(5’-核酸酶)特异性抑制剂APCP(alpha,beta-methylene adenosine-5’- diphosphate,5’-α,β-亚甲基-二磷酸腺苷),探讨其对人胃腺癌细胞HGC-27细胞生长及其对血管内皮生长因子VEGF-C、VEGF-D表达的影响。方法体外培养HGC-27细胞达指数生长,设正常组和APCP不同浓度干预组,倒置显微镜观察各组细胞生长状态,MTT法检测各组细胞活性,免疫组化法观测两组细胞VEGF-C、VEGF- D的表达及其积分光密度。结果同正常组相比,随药物浓度增加,APCP各干预组细胞在生长方面表现为生长缓慢,胞浆皱缩,细胞界线模糊,细胞数量减少(P<0.05);各干预组细胞内VEGF-C、VEGF-D的表达低于正常对照组(P<0.05)。结论APCP抑制HGC-27细胞生长,细胞数量减少,降低细胞内VEGF-C、VEGF-D的表达。     

miRNA-146a对过氧化氢所致人胃腺癌细胞株AGS氧化应激损伤的影响

目的建立应激性溃疡细胞损伤模型,观察过氧化氢对人胃腺癌细胞株AGS的浓度及时间损伤效应,并探讨miRNA-146a对其调控作用。 方法(1)将人胃腺癌细胞株AGS分为5组,每组4孔：其中4组在200 μmol/L过氧化氢处理3、6、12、24 h,另1组为未处理组,分别检测人胃腺癌细胞株AGS脂质过氧化代谢产物丙二醛含量和超氧化物歧化酶(SOD)活力。(2)将人胃腺癌细胞株AGS分为6组,每组4孔,其中4组分别用50、100、200、400、600 μmol/L过氧化氢处理6 h,另1组为未处理组,检测其丙二醛含量和SOD活力。(3)将人胃腺癌细胞株AGS分为2组,实验组和对照组,每组4孔,对照组不做处理,实验组用200 μmol/L过氧化氢刺激6 h后,采用实时定量PCR法分别检测两组细胞miRNANA-146a的相对表达量。(4)将人胃腺癌细胞株AGS分为4组,每组4孔：未处理组、miRNANA对照组、miRNA-146a抑制组、miRNA-146a增强组。处理组分别转染miRNA-146a对照剂、miRNA-146a抑制剂和miRNA-146a模拟物,培养24 h后,用200 μmol/L过氧化氢刺激6 h,检测细胞miRNA-146a表达、丙二醛含量和SOD活力。多组间比较采用单因素方差分析,两组间比较采用LSD-t检验。 结果(1)在200 μmol/L过氧化氢刺激后,未处理组、不同时间培养组组间细胞丙二醛含量、SOD活力比较,差异均有统计学意义(F＝46.744、42.736,P值均小于0.01);随着作用时间的延长,细胞丙二醛含量逐渐升高,在培养6 h时达到峰值(2.15±0.50)μmol/mg,然后逐渐降低;随着作用时间的延长,SOD活力逐渐降低,在培养6 h时达到最低(6.51±0.54)U/mg,然后逐渐升高。(2)用不同浓度的过氧化氢处理人胃腺癌细胞株AGS 6 h后,未处理组、不同浓度处理组组间细胞丙二醛含量、SOD活力比较,差异均有统计学意义(F＝152.786、129.231,P值均小于0.01);随着浓度的增加丙二醛含量逐渐升高,600 μmol/L处理组时最高(2.46±0.07) μmol/mg;随着浓度的增加SOD活力逐渐降低,600 μmol/L处理组时最低(3.14±0.10) U/mg。(3)实验组人胃腺癌细胞株AGS miRNA-146a表达明显量高于对照组(t＝－17.398,P<0.01)。(4)不同转染组用200 μmol/L过氧化氢刺激6 h后,miRNA-146a增强组与未处理组、miRNA-146a对照组、miRNA-146a抑制组组间细胞miRNA-146a的相对表达量、SOD活力和丙二醛含量比较,差异均有统计学意义(F＝232.643、1 070.580、56.191,P值小于0.01);miRNA-146a增强组数百倍高于其他3个小组,差异均有统计学意义(P值均小于0.01);miRNA-146a增强组SOD活力均较miRNA-146a抑制组和miRNA-146a对照组高,差异均有统计学意义(P值均小于0.01);miRNA-146a增强组丙二醛水平均较miRNA-146a抑制组和miRNA－146a对照组低,差异均有统计学意义(P值均小于0.01)。 结论200 μmol/L过氧化氢刺激人胃腺癌细胞株AGS 6 h能较好地建立应激性胃溃疡氧化损伤细胞模型,miRNA-146a可负性调控过氧化氢所致人胃腺癌细胞株AGS应激性溃疡的氧化应激反应。     

survivin基因沉默对头颈鳞癌细胞凋亡的影响

目的探讨survivin基因沉默对人头颈鳞癌细胞PCI-37B调亡的影响。方法将survivin-SiRNA转入人头颈鳞癌细胞PCI-37B,采用流式细胞仪检测PCI-37B细胞凋亡。结果 survivin基因沉默能够使人头颈鳞癌细胞的凋亡率显著增高(<0.01),抑制survivin基因能够干扰细胞周期,使细胞在S期比例显著下降(<0.05)。结论survivin基因沉默能够诱导人头颈鳞癌PCI-37B细胞凋亡,抑制肿瘤生长。     

血管生成抑制素对胃癌细胞的影响

目的探讨血管生成抑制素对胃癌细胞增殖和游走的影响及对胃癌细胞分泌血管内皮生长因子A和C(VEGF-A和VEGF-C)的影响并分析其作用机制。方法采用MTT法和划线法观察0、0.5、1.0、1.5μg/ml浓度的血管生成抑制素对胃癌细胞增殖和游走的影响。免疫组化的方法检测0、0.5、1.0、1.5μg/ml浓度的血管生成抑制素对胃癌细胞内血管内皮生长因子(VEGF)-A和VEGF-C的影响。结果 MTT法显示不同浓度的血管生成抑制素对胃癌细胞增殖无明显影响(p0.05),同样,划线法测得的胃癌细胞迁移距离同对照组相比无明显差异(p0.05)。但免疫组化法结果显示,0.5、1.0、1.5μg/ml浓度的血管生成抑制素组胃癌细胞VEGF-A和VEGF-C的表达同对照组相比明显减少(p0.05)。结论血管生成抑制素明显减少胃癌细胞内的VEGF-A和VEGF-C的分泌,但对胃癌细胞的增殖和游走无明显作用。     

Interferon-gamma cooperates with Helicobacter pylori to induce iNOS-related apoptosis in AGS gastric adenocarcinoma cells

Helicobacter pylori colonizes the human stomach and causes gastric disease. The resulting gastric damage is a multi-step process involving several molecular factors and different target cells. Th1 cytokines released by neutrophils and lymphoid cells that infiltrate gastric mucosa, nitric oxide production and inducible nitric oxide synthase (iNOS) are associated with immune activation and tissue injury. Many other molecular processes such as apoptosis, as well as angiogenic factors and integrins, are involved in H. pylori pathogenesis. We used cancer gastric cells AGS and MKN as experimental models to evaluate apoptotic rates, iNOS gene expression with and without the presence of interferon-gamma (IFN-gamma), placenta growth factor gene expression and alphav modulation. Our results show that AGS cells stimulated with H. pylori underwent apoptosis. Moreover, the addition of IFN-gamma caused a further increase in iNOS gene expression and in the apoptotic rates. We also found early modulation in PlGF and alphav expression, and noted that p53 and bax gene expression was involved in the apoptotic process. Taken together, these findings demonstrate that H. pylori employs a series of mechanisms to avoid the host defense and cause gastric mucosa damage. One H. pylori pathogenic mechanism for causing gastric damage is the induction of iNOS-dependent apoptosis that is strongly enhanced by IFN-gamma. Thus, data obtained indicate that Th1 cytokines such as IFN-gamma, via modulation of iNOS gene expression, may contribute to an increase in the pathogenicity of H. pylori infections.     

二氢杨梅素对肺癌A549细胞凋亡的作用

目的 探讨二氢杨梅素（DMY）对肺癌A549细胞的诱导凋亡作用。方法 以肺癌A549细胞为研究对象,采用MTT法研究DMY对A549细胞的抗肿瘤作用,并进一步通过流式细胞术检测DMY对A549细胞的凋亡作用,免疫印迹法（Western blotting）检测促凋亡因子Bax和抗凋亡因子Bcl-2表达水平,进一步探讨其机制。
结果 DMY浓度越大,对A549细胞的抑制作用越明显,48h的IC50为64.45g/L;流式细胞术显示,随着DMY浓度的增加A549细胞凋亡也逐渐增加;Western blotting结果显示,DMY可诱导A549细胞中凋亡因子Bax蛋白表达增加,同时抗凋亡因子Bcl-2蛋白表达减少,尤其高浓度组改变明显。
结论 DMY可以在体外诱导A549细胞凋亡。     

CARD18在凋亡素基因转染的胃癌细胞的表达及其在临床样本中的检测和意义

目的 探讨caspase募集结构域家族成员18(CARD18)在凋亡素诱导胃癌细胞凋亡的机制及在胃癌发生发展中的作用.方法 运用二维凝胶电泳法分离凋亡素作用胃癌细胞后表达的差异蛋白质,通过基质辅助激光解吸附飞行时间质谱技术(MALDI-TOF-MS)和生物信息学方法确定其中部分差异蛋白质,RT-PCR和Western blot法检测CARD 18的表达,采用免疫组化检测56例胃癌组织及癌旁组织中CARD 18的表达,并分析其与胃癌临床病理参数的关系.结果 凋亡素处理后的胃癌细胞CARD18表达下调最明显,CARD18蛋白在胃癌组织中的表达明显高于癌旁组织(P＜0.05),且与胃癌的分化程度和淋巴结转移有关(P＜0.05).结论 CARD18可作为一个潜在的预后标志物和靶向标志物.     

Complex cellular responses of Helicobacter pylori-colonized gastric adenocarcinoma cells

Helicobacter pylori is an important class I carcinogen that persistently infects the human gastric mucosa to induce gastritis, gastric ulceration, and gastric cancer. H. pylori pathogenesis strongly depends on pathogenic factors, such as VacA (vacuolating cytotoxin A) or a specialized type IV secretion system (T4SS), which injects the oncoprotein CagA (cytotoxin-associated gene A product) into the host cell. Since access to primary gastric epithelial cells is limited, many studies on the complex cellular and molecular mechanisms of H. pylori were performed in immortalized epithelial cells originating from individual human adenocarcinomas. The aim of our study was a comparative analysis of 14 different human gastric epithelial cell lines after colonization with H. pylori. We found remarkable differences in host cell morphology, extent of CagA tyrosine phosphorylation, adhesion to host cells, vacuolization, and interleukin-8 (IL-8) secretion. These data might help in the selection of suitable cell lines to study host cell responses to H. pylori in vitro, and they imply that different host cell factors are involved in the determination of H. pylori pathogenesis. A better understanding of H. pylori-directed cellular responses can provide novel and more balanced insights into the molecular mechanisms of H. pylori-dependent pathogenesis in vivo and may lead to new therapeutic approaches.     

MADD在肺腺癌组织中的表达及对肺腺癌A549细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨MADD在肺正常组织及肺腺癌组织中的表达及其对肺腺癌细胞增殖和凋亡的影响。方法:收集肺临床病理组织标本,免疫组化法检测肺正常组织和肺癌组织MADD表达;培养人肺腺癌A549细胞,逆转录PCR检测其IG20基因表达;用携带MADD基因的质粒和能够沉默MADD表达的慢病毒载体分别转染A549细胞,Western blot、MTT分析和流式细胞术检测其MADD表达、增殖及凋亡。结果:肺腺癌组织MADD表达水平明显高于肺正常组织和肺鳞癌组织;A549细胞能够表达MADD;高表达MADD能抑制A549细胞凋亡,提高其增殖活力,而沉默MADD表达则能促进A549细胞凋亡,降低其增殖活力。结论:肺腺癌组织MADD表达明显增高;MADD可通过抑制凋亡来促进肺腺癌细胞生存。     

Integrin-mediated entry into S phase of human gastric adenocarcinoma cells

The integrins are a family of integral membrane receptors that participate in binding to various extracellular and cell surface proteins during adhesion, migration, and homing of normal and neoplastic cells. In this study, we characterized the involvement of integrins in mediating the growth of an adhesion-dependent gastric adenocarcinoma line, ST2. This line was distinguished and selected for study based on its inability to grow when suspended in soft agar or plated on poly(2-hydroxyethyl methacrylate)-coated dishes. ST2 cells arrested in G0/G1 of the cell cycle when deprived of adhesion to substrate. Using purified matrix components, collagen was found to be highly active in promoting 1 integrin-mediated cell attachment and spreading. Subsequent to spreading on collagen, the cells were released from G0/G1 block and progressed into S phase. Monoclonal antibodies to 2 or 1 integrin blocked the reinduction of both cell spreading and entry into S phase. These studies suggest that during the metastatic process, integrin receptor interaction with the insoluble matrix may be an important step leading to proliferation of some tumors.