蛇毒精氨酸酯酶Agkihpin对人鼻咽癌CNE-2细胞系E-钙粘素表达的影响

目的探讨蛇毒精氨酸酯酶Agkihpin对人鼻咽癌CNE-2细胞系中表皮钙粘素（E-CD）表达的影响,并试图阐明Agkihpin抑制人鼻咽癌CNE-2细胞的机制。方法用不同浓度的Agkihpin处理鼻咽癌细胞株72h后,应用免疫细胞化学、RT—PCR法检测E—CD在CNE一2细胞中的表达。结果不同浓度Agkihpin作用CNE-2细胞72h后E—CD表达均降低,并呈现出一定的浓度依赖效应,显示Agkihpin可显著下调CNE-2细胞中E—CD表达。各加药组与不加Agkihpin纽比较,差异具有统计学意义（P〈0．05）。结论在人低分化鼻咽癌CNE-2细胞系中,Agkihpin能抑制E-CD的表达,并且随浓度的增大有明显的抑制作用。     

蛇毒精氨酸酯酶Agkihpin对人鼻咽癌CNE-2细胞系环氧合酶-2表达的影响研究

目的 探讨蛇毒精氨酸酯酶Agkihpin对人鼻咽癌CNE-2细胞系环氧合酶-2 (COX-2)表达的影响.方法 用不同浓度的Agkihpin处理鼻咽癌CNE-2细胞系72 h后,应用免疫细胞化学、Western Blotting、反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测COX-2在CNE-2细胞系中的表达.结果 不同浓度Agkihpin处理CNE-2细胞系72 h后,COX-2的平均吸光密度比较,差异有统计学意义(P＜0.05);其中A1组、B1组和C1组较D1组均明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05),A1组较B1组、C1组和D1组均明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05).Western Blotting检测经不同浓度Agkihpin处理72 h后COX-2表达差异有统计学意义(P＜0.05),随着Agkihpin浓度的降低,COX-2表达水平升高,各组间比较差异均有统计学意义(P＜0.05).不同浓度Agkihpin处理72 h后COX-2 mRNA的相对转录水平比较差异有统计学意义(P＜0.05),随着Agkihpin浓度的降低,COX-2 mRNA的相对转录水平升高,各组间比较差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 在人低分化鼻咽癌CNE-2细胞系中,Agkihpin能抑制COX-2的表达,并且随着浓度的增大更明显;Agkihpin对COX-2的抑制作用,可能成为鼻咽癌化疗的有效药物.     

蛇毒精氨酸酯酶Agkihpin上调人肝癌细胞株SMMC-7721中表皮钙黏素的表达研究

目的探讨蛇毒精氨酸酯酶Agkihpin对人肝癌SMMC-7721细胞株中表皮钙黏素(E-CD)表达的影响及Agkihpin抑制人肝癌SMMC-7721细胞的机制。方法采用不同浓度的Agkihpin处理肝癌细胞株72 h后,应用免疫细胞化学、Western Blotting和逆转录PCR(RT-PCR)法检测E-CD在SMMC-7721细胞中的表达。结果不同浓度Agkihpin作用SMMC-7721细胞72 h后E-CD表达均上升,差异有统计学意义(P<0.05),并呈现出一定的剂量依赖效应。Agkihpin可显著上调SMMC-7721细胞中E-CD表达。结论在人低分化肝癌SMMC-7721细胞株中,Agkihpin能促进E-CD的表达,因而可能抑制肝癌细胞的迁移和降低肝癌组织的恶性程度。     

E-钙粘素和膀胱肿瘤

目的　探讨E 钙粘素的表达与膀胱移性细胞癌病理分级、临床分期以及预后的关系。方法　检索近 10年来有关E 钙粘素与膀胱肿瘤的研究文献 ,加以复习与综述。结果　体内和体外的一系列实验显示 ,E cd不仅与膀胱肿瘤细胞活动能力和浸润行为有关 ,而且与肿瘤的病理分级、临床分期和病人预后有关。结论　E 钙粘素异常表达与膀胱肿瘤的恶性程度有关 ,可以作为检测膀胱移行细胞癌分期、分级及预后的重要指标     

白杨素对人鼻咽癌细胞CNE-2增殖的抑制作用

探讨白杨素对人鼻咽癌细胞CNE-2增殖的抑制作用及机制。采用CCK-8法检测细胞存活率,Hochest 33258染色检测细胞形态变化,流式细胞仪检测细胞凋亡率及细胞周期的变化,caspase-3活性检测试剂盒检测caspase-3的活性。结果表明白杨素对CNE-2细胞的生长具有较强的抑制作用,并具有明显的量-效关系;白杨素可诱导CNE-2细胞凋亡,使G0/G1期细胞明显增多,S期明显减少,使细胞周期被阻滞于G0/G1期;白杨素可升高CNE-2细胞caspase-3的活性。白杨素对CNE-2细胞生长有明显的抑制作用,其机制可能与白杨素诱导的细胞周期阻滞和细胞凋亡有关。     

E-钙粘素和β-连环素在脑膜瘤中的表达及意义

目的通过检测人脑膜瘤中E-钙粘素和β-连环素的表达,以进一步了解脑膜瘤的生物学行为。方法对49例脑膜瘤病理标本采用免疫组化En Vision法,以单克隆抗体直接检测E-钙粘素、β-连环素的表达情况。按染色强度和阳性范围评估免疫组化检测结果,分析粘附分子表达程度与脑膜瘤的WHO分级、瘤周水肿之间的关系。结果脑膜瘤WHO病理级别为I级、Ⅱ级、Ⅲ级者E-钙粘素表达的阳性率分别为92.69％、33.33％、0（P〈0.05）,β-连环素表达的阳性率分别为82.93％、33.33％、20.00％（P〈0.05）。瘤周水肿程度为0级、1级、2级、3级者E-钙粘素表达的阳性率分别为93.75％、85.71％、60.00％、0（P〈0.05）,β-连环素表达的阳性率分别为87.50％、85.71％、30.00％、0（P〈0.01）。结论脑膜瘤中E-钙粘素和β-连环素的表达与其WHO病理分级相关,不典型或恶性脑膜瘤中E-钙粘素和β-连环素呈低表达或缺失;E-钙粘素和β-连环素表达越低,其瘤周水肿越严重。     

子宫内膜癌组织中E-钙粘素与β-连环素的表达

目的:探讨子宫内膜癌组织中E-钙粘素和β-连环素的表达及意义。方法:采用免疫组织化学SP法检测58例子宫内膜癌、32例正常增生期子宫内膜和22例不典型增生子宫内膜石蜡包埋组织中E-钙粘素和β-连环素的表达。结果:在正常增生期子宫内膜、不典型增生子宫内膜和子宫内膜癌组织中E-钙粘素和β-连环素的异常表达率依次增高(P<0.05)。E-钙粘素的表达与肌层浸润、FIGO分期和淋巴结转移有关;而β-连环素的表达与病理分级、FIGO分期和淋巴结转移有关。结论:在子宫内膜癌发生发展过程中E-钙粘素和β-连环素异常表达起重要作用。     

宫颈癌β-连接素和E-钙粘素的表达及意义

目的 :研究 β -连接素 (β -cat)和E -钙粘素 (E -cd)在宫颈癌组织中的表达与其生物学行为的关系。方法 :应用免疫组织化学SP法检测β -cat和E -cd在 4 1例宫颈癌和 10例正常宫颈组织中的表达。结果 :4 1例宫颈癌中 β-cat和E -cd的异常表达率分别为 4 1.5 %和 5 1.2 % ,与正常宫颈组织相比均有显著差异 (P <0 .0 1) ;二者同时正常或异常表达者占 5 1.2 % ,二者中至少有一个异常表达者为 70 .7% ,二者表达之间不具有显著相关性 (P=0 .180 4 )。β -cat的异常表达与宫颈癌淋巴结转移密切相关 (P <0 .0 1)。E -cd表达下调与宫颈癌增殖活性、分化程度和淋巴结转移显著相关 (P <0 .0 5 ,P <0 .0 5 ,P <0 .0 1)。结论 :β -cat和E -cd异常表达与宫颈癌的转移有关。     

Snail与E-钙粘素甲基化协同抑制E-钙粘素的表达

目的探讨去甲基化药物5-氮杂-2’-脱氧胞苷(简称5-Aza)对转录调节因子Snail的作用,转染反义Snail与5-Aza对上皮间质转化相关膜蛋白E-钙粘素的mRNA水平的影响及二者联合作用的可能机制。方法应用MTT、PCR、实时荧光定量PCR、检测低分化胃腺癌细胞株分别转染反义Snail、应用5-Aza单独或协同干预后对细胞的生长增殖及Snail、E-钙粘素mRNA表达的影响。结果与空白对照组比较5-Aza干预、转染反义Snail分别及二者共同干预均增加E-cadherin的mRNA的表达,空质粒组无显著差异。5-Aza上调Snail基因mRNA的表达。两种干预方式处理均能抑制胃癌细胞的生长。结论 5-Aza、转染反义Snail均使E-cadherin mRNA表达增强,且药物作用呈时间浓度依赖性。5-Aza能上调Snail基因的表达,提示甲基化作用在同时下调转录调节子Snail基因表达和抑制E-钙粘素表达。     

姜黄素对鼻咽癌细胞株CNE-2Z-H5增殖的影响

目的:研究姜黄素对人低分化鼻咽癌细胞系亚克隆株CNE-2Z-H5生长、增殖的作用。方法:应用姜黄素体外干预培养人低分化鼻咽癌细胞系亚克隆株CNE-2Z-H5,以绘制生长曲线、MTT及平板克隆形成实验观察姜黄素对CNE-2Z-H5细胞生长、增殖的作用。结果:细胞生长曲线、MTT及平板克隆形成实验均表明姜黄素对CNE-2Z-H5细胞生长、增殖具有抑制作用,并呈剂量效应关系。同时,超过一定浓度的姜黄素对CNE-2Z-H5细胞还具有细胞毒作用,可以体外杀伤CNE-2Z-H5细胞。结论:姜黄素可以有效抑制CNE-2Z-H5细胞的生长和增殖,具有明显的量效关系,可能对鼻咽癌的治疗具有一定价值。     

姜黄素对人鼻咽癌细胞CNE-2Z细胞骨架的影响

目的:观察姜黄素对鼻咽癌细胞CNE-2Z细胞骨架的影响,探讨姜黄素对鼻咽癌细胞直接杀伤作用的可能机制。方法:用考马斯蓝染色和图像分析方法检测不同浓度姜黄素作用24 h后CNE-2Z细胞骨架的染色变化;用免疫组织化学方法观察表皮生长因子受体(EGFR)、增殖细胞核抗原(PCNA)、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、Tubulin-β在各组细胞中的表达情况;运用RT-PCR方法检测不同浓度姜黄素作用后的CNE-2Z细胞中EGER的表达水平。结果:CNE-2Z细胞在10μmol/L姜黄素处理后细胞体积有所增大,随后姜黄素浓度升高细胞骨架染色逐渐降低(P<0.01);不同浓度的姜黄素可抑制CNE-2Z细胞中EGFR、PCNA、PI3K和Tubulin-β的表达,并使EGFR mRNA在CNE-2Z细胞中的表达下调。结论:姜黄素可能通过下调EGFR影响细胞骨架,从而起到直接杀伤鼻咽癌细胞CNE-2Z的作用。     

干扰TCAB1基因表达对鼻咽癌CNE-2细胞放射敏感性的影响

目的:探讨siRNA抑制TCAB1表达对鼻咽癌CNE-2细胞放射敏感性的影响及分子机制。方法:构建靶向抑制TCAB1的siRNA干扰质粒及阴性对照质粒,转染至CNE-2细胞,RT-PCR和Western-blot检测TCAB1表达;克隆形成实验检测细胞放射敏感性参数D0、SF2等;QPCR检测转染前后CNE-2细胞端粒的相对长度变化。结果:成功构建CNE-2/phTCAB1-siRNA干扰质粒,转染后RT-PCR和Western-blot分析表明TCAB1mRNA和蛋白表达均受到明显抑制,干扰组细胞D0和SF2值分别为2.490和0.460,明显低于空白对照组(D0和SF2值分别为3.186和0.607),P<0.01;QPCR检测端粒相对长度发现干扰组T/S值(0.19±0.01)均小于正常细胞(0.52±0.06)和转染阴性质粒细胞(0.42±0.01),P<0.05,而正常细胞组和转染阴性质粒细胞T/S值比较差异没有统计学意义(P>0.05)。结论:抑制TCAB1表达可以通过影响端粒长度增加鼻咽癌CNE-2细胞的放射敏感性,TCAB1有望成为一种新的肿瘤放射增敏靶点。     

FUDR对鼻咽癌CNE-1细胞系的放射增敏作用

目的研究氟尿嘧啶脱氧核苷(FUDR)对鼻咽癌细胞系CNE-1的细胞毒性作用及联合放疗的放射增敏作用,同时和5-氟尿嘧啶(5-Fu)作比较。方法应用CCK-8法分析FUDR及5-Fu对鼻咽癌细胞的毒性作用,绘制药物的浓度抑制率曲线。通过成克隆分析法研究低浓度的FUDR及5-Fu(浓度均<50%半数致死浓度ID50的1/5)联合照射对鼻咽癌细胞系CNE-1的体外放射增敏作用。流式细胞仪分析加药后各时间段的细胞周期变化。Western blot分析5-Fu和FUDR处理后细胞p53蛋白表达变化。结果从浓度抑制率曲线得出FUDR和5-Fu的ID50分别为0.078和0.509 mg/mL;成克隆分析法得出FUDR的放射增敏比和放疗2 Gy时的增敏比分别为1.504和1.677;5-FU的放射增敏比和放疗2 Gy时的增敏比分别为1.159和1.287;加入FUDR或5-Fu后各时间段S期细胞较对照组均增多,加药12 h后各时间段的差异均有统计学意义(P<0.05),但两药比较无统计学差异。Western blot结果显示,应用FUDR和5-FU处理后CNE-1细胞系p53蛋白表达增加,FUDR组增加更明显。结论低浓度的FUDR和5-Fu分别联合放疗均能增加鼻咽癌细胞系CNE-1的放射敏感性,且FUDR的增敏作用强于5-Fu;FUDR和5-Fu作用于鼻咽癌CNE-1细胞系均增加p53蛋白表达,FUDR作用更明显。FUDR和5-Fu作用于CNE-1细胞系后未见细胞周期重新分布于放射敏感时相,且二者对细胞周期的影响无明显差异。     

山奈酚抑制人鼻咽癌CNE-2细胞增殖及诱导其凋亡的实验研究

目的 探讨山奈酚(Kaempferol)体外对人鼻咽癌细胞株CNE-2增殖和凋亡的影响.方法 以不同浓度的山奈酚作用于体外培养的CNE-2细胞,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测IC50,用流式细胞仪、Hoechest33258染色及DNA片段化检测细胞凋亡.结果 山奈酚对鼻咽癌CNE-2细胞株的生长抑制作用随着其作用时间的延长和浓度的增加而明显增强,不同浓度山奈酚分别处理细胞24、48和72h后,其IC50值分别为(184.1±10.1)、(53.9±3.1)及(27.5±1.8)μmol/L,各IC50值间比较差异有显著性(P＜0.01);荧光显微镜下可见到典型的细胞凋亡形态学改变;流式细胞术显示,经不同浓度山奈酚作用72h后细胞凋亡率均增加,以80μmol/L显著(P＜0.01);60、80和100μmol/L山奈酚处理组可见明显的DNA梯带.结论 山奈酚可通过抑制CNE-2细胞株的增殖而诱导其凋亡.     

蛋白激酶C对鼻咽癌CNE-2Z细胞端粒酶活性的影响

为进一步探讨蛋白激酶C（PKC）调控入低分化鼻咽癌CNE－2Z细胞生长的机制，观察了PKC对CNE－2Z酶粒酶活性的影响。结果显示：CNE－2Z细胞有较高的端粒酶活性；PKC的抑制剂Staurosporine显著降低细胞端粒酶活性（P＜0．001）。提示抑制PKC可以抑制CNE－2Z细胞的端粒酶活性，PKC可通过调控端粒酶活性从而影响CNE－2Z细胞的生长。     

奈达铂提高鼻咽癌CNE-2细胞放射敏感性的体外实验研究

目的:研究奈达铂(NDP)对鼻咽癌细胞的放射增敏作用及其机制。为寻求治疗鼻咽癌的新策略奠定理论基础。方法:用CCK-8法检测奈达铂对鼻咽癌CNE-2细胞增殖影响和IC50;用克隆形成实验分析奈达铂对CNE-2细胞的放射增敏作用。用流式细胞术(FCM)检测奈达铂对CNE-2细胞凋亡和周期的影响。结果:奈达铂能够抑制CNE-2细胞的增殖,其IC50为32.576 mg/L。1/5IC50浓度(6.515 mg/L)的奈达铂联合放疗与单纯放疗相比,其放射增敏比(SER)为1.542。奈达铂可诱导CNE-2细胞凋亡,奈达铂组、单纯放疗组凋亡率为(22.7+2.24)%、(30.4+2.17)%(P<0.05),奈达铂加放疗组凋亡率最高,为(44.3+1.85)%(P<0.01)。奈达铂作用48 h,对CNE-2细胞周期分布的改变无明显影响。结论:奈达铂通过增强鼻咽癌细胞的凋亡增加放射敏感性。