高良姜素下调Bcl-2通过线粒体途径促进人肝癌Hep3B细胞凋亡

目的 研究高良姜素对人肝癌Hep3B细胞凋亡的影响并探讨相关机制. 方法 体外培养人肝癌Hep3B细胞,经高良姜素处理后,RT-PCR和Western blot检测Bcl-2 mRNA和蛋白的表达水平,MTT法测定细胞生长抑制率,Annexin V-FITC/PI双标记法测定细胞凋亡率,流式细胞仪分析线粒体膜电位,Western blot检测Caspase-3、9及Cytochrome C蛋白的表达水平. 结果 高良姜素使Hep3B细胞中Bcl-2 mRNA和蛋白的表达水平明显下降.不同剂量的高良姜素(40、80、120 μmol/L)对细胞生长抑制率分别为6.38％±1.32％,21.58％±1.97％和43.18％±3.89％,明显高于对照组(t低剂量组=13.01,t中剂量组=15.12,t高剂量组=14.79,均P＜0.01);细胞凋亡率分别为21.58％±1.97％,34.18％±3.89％和43.18％±3.89％,明显高于对照组(分别t低剂量组=24.67,t中剂量组=32.35,t高剂量组=25.89,均P ＜0.01);线粒体膜电位绿色荧光蛋白表达百分比分别为18.93％±2.3％,31.11％±2.67％和46.06％±2.95％,明显高于对照组(分别t低剂量组=16.70,t中剂量组=31.38,t高剂量组=48.15,均P ＜0.01);Caspase-3、9和胞质内Cytochrome C表达水平明显高于对照组(Caspase-3:分别t低剂量组 =11.94,t中剂量组=10.18,t高剂删量组=18.82,均P＜0.01;Caspase-9:分别t低剂量组=15.11,t中剂量组=20.41,t高剂量组=21.25,均P＜0.01;Cytochrome C:t低剂量组=15.11,t中剂量组=28.47,t高剂量组=16.01,P＜0.01),而线粒体中Cytochrome C表达水平明显低于对照组(分别t低剂量组=16.70,t中剂量组=12.00,t高剂量组=27.61,均P＜0.01). 结论 高良姜素可下调Bcl-2 mRNA和蛋白表达促进人肝癌Hep3B细胞凋亡,其作用机制可能与线粒体途径相关.     

细胞凋亡的线粒体机制

细胞凋亡分为凋亡的信号启动、调控与执行、特征性结构改变3个阶段,线粒体在第二阶段发挥重要作用.cytC、 bcl-2s、Ca2+、ROS及轴浆转运系统等线粒体因素参与了调控细胞凋亡的过程。     

细胞凋亡的线粒体机制

细胞凋亡分为凋亡的信号启动、调控与执行、特征性结构改变3个阶段，线粒体在第二阶段发挥重要作用，cytC、bcl-2s、Ca^2 、ROS有轴浆转运系统等线粒体因素参与了调控细胞凋亡的过程。     

西罗莫司诱导人肝癌细胞株BEL-7402凋亡及其机制

目的探讨西罗莫司（SRL）在体外诱导人肝癌细胞株BEL-7402的凋亡作用及其机制。方法以不同浓度的SRL（5、10、20、30、40和50nmol／L）作用于体外培养的人肝癌细胞株BEL-7402，应用流式细胞仪检测培养24、48和72h时的细胞凋亡情况；Hoechst 33258荧光染色法观察细胞凋亡时的形态学变化；Western Blot法观察BEL-7402细胞中Caspase-3、Bcl-2、Bcl-xl和Bax基因的表达变化；采用Caspase-3试剂盒检测Caspase-3酶的活性；JCl染色法检测细胞线粒体膜电位（△ψbm）。结果SRL可诱导BEL-7402细胞凋亡，并与药物浓度和作用时间呈正相关。SRL作用BEL-7402细胞后48h，在Hoechst33258荧光染色图片上可见核浓缩及核碎裂等典型的细胞凋亡特征，凋亡过程中线粒体膜电位下降及Caspase-3酶原蛋白激活，伴有Bcl-2、Bcl-xl蛋白表达的降低和Bax蛋白上调。结论SRL能使抗凋亡蛋白Bcl-2、gcl-xl表达降低，促凋亡蛋白Bax表达上调，线粒体膜电位下降，激活Caspase-3酶原蛋白，从而诱导细胞凋亡。     

原发性肝癌细胞凋亡的研究进展

肿瘤的生物学特性与共细胞凋亡关系密切，有关肿瘤凋亡的研究日益深入，细胞凋亡与原发性肝癌关系密切，多种受体介导的细胞信号传导参与原发性肝癌细胞凋亡的启动，多种基因参与了原发性肝癌细胞凋亡的调控。     

NOB1基因对膀胱癌细胞凋亡的影响及其机制研究

目的探讨干扰NOB1基因对膀胱癌细胞凋亡和Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法将膀胱癌T24细胞分为对照组(CON组),不进行转染、siRNA阴性对照组(siRNA-CON)、NOB1-siRNA组。分别采用RT-PCR和Western blot检测转染后三组细胞中NOB1 mRNA和蛋白的表达水平;MTT法检测细胞活力;流式细胞技术检测细胞凋亡情况;Western blot检测β-catenin和c-Myc蛋白表达水平。用Wnt/β-catenin信号通路抑制剂FH535处理NOB1-siRNA组细胞,设置为NOB1-siRNA-FH535组,检测细胞活力、细胞凋亡情况和β-catenin、c-Myc蛋白表达水平。结果NOB1-siRNA组NOB1 mRNA和蛋白表达水平均低于siRNA-CON组和CON组,差异有统计学意义(P<0.05)。NOB1-siRNA组细胞活力低于siRNA-CON组和CON组,差异有统计学意义(P<0.05)。流式细胞检测结果显示,NOB1-siRNA组细胞凋亡率高于siRNA-CON组和CON组,差异有统计学意义(P<0.05)。NOB1-siRNA组β-catenin和c-Myc蛋白表达水平均低于siRNA-CON组和CON组,差异有统计学意义(P<0.05)。NOB1-siRNA-FH535组细胞活力低于NOB1-siRNA组(P<0.05)。流式细胞技术检测结果显示,NOB1-siRNA-FH535组细胞凋亡率高于NOB1-siRNA组(P<0.05)。Western blot检测结果显示,NOB1-siRNA-FH535组β-catenin及c-Myc蛋白表达水平低于NOB1-siRNA组(P<0.05)。结论干扰NOB1表达可能通过抑制Wnt/β-catenin信号通路的激活而促进膀胱癌细胞的凋亡。     

线粒体融合素基因-2对乳腺癌细胞增殖的影响及其机制

目的 观察外源性线粒体融合素基因-2(Mfn2)对乳腺癌细胞(MCF-7)增殖的影响,探讨其抑制乳腺癌细胞产生增殖的机制.方法 将含有Mfn2cDNA的质粒在阳离子聚合物的介导下在体外转染MCF-7,蛋白印记法(Western blot)检测绿色荧光蛋白(GFP)、p21waf1、CDK2蛋白的表达,细胞计数测定Mfn2对MCF-7细胞增殖的影响,DNA直方图分析法测定Mfn2对MCF-7周期分布的影响,用Cyclins/DNA双参数流式细胞术对Cyclin A进行标记,Cellquest软件分析.结果 转染Mfn2基因的MCF-7细胞可以稳定高表达GFP蛋白;细胞计数测定表明转染Mfn2cDNA后,MCF-7细胞增殖明显受抑,DNA直方图分析法测定显示细胞停滞于S期;转染质粒组S期细胞占42.70%,转染空质粒组和空白对照组分别为17.15%、19.58%(P《0.05);用Cyclins/DNA双参数流式细胞术检测转染质粒组Cyclin A较对照两组明显升高;Western blot显示转染质粒组p21高表达,磷酸化CDK2低表达.结论 转染Mfn2基因可以明显抑制MCF-7细胞的增殖,并使细胞停滞于S期.     

细胞凋亡

对细胞凋亡的认识已百余年，Ｖｏｇｔ１８４２年即曾观察到两栖动物发育过程中的形态改变［１］。１９７２年Ｋｅｒ，Ｗｙｌｉｅ及Ｃｕｒｉｅ以细胞凋亡是一种基本生物现象为题介绍了细胞凋亡在生物学中的广泛意义，并对凋亡细胞的形态改变及与细胞坏死进行了区别、分析，...     

转染XIAP基因对丝裂霉素诱导膀胱癌细胞凋亡的影响

目的：探讨XIAP基因对低剂量丝裂霉素C(MMC)诱导膀胱癌细胞凋亡的影响。方法：脂质体介导XIAP基因转染膀胱癌T24细胞3天后．用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测XIAP基因的表达．用低剂量MMC诱导细胞凋亡启动,用MTT比色法分析检测癌细胞生长活性．用3末端脱氧核苷酰转移酶介导生物素标记法检测细胞凋亡率。结果：各组癌细胞在低剂量MMC的诱导下发生凋亡、与单用MMC组比较．转染XIAP基因的癌细胞组的凋亡率显著降低。结论：XIAP基因在癌细胞中的过度表达可以明显降低化疗药物诱导的膀胱癌细胞凋亡,其可能在膀胱癌多药耐药中起一定作用。     

丝裂霉素诱导人肝癌细胞凋亡的研究

本研究旨在观察在体外丝裂霉素(ＭＭＣ)对人肝癌细胞凋亡的诱导作用 ,从凋亡的角度探讨其抗癌机理 ,现将结果报道如下。一、材料与方法1.细胞培养及实验分组 :人肝癌ＢＥＬ 740 2细胞株来自中国科学院上海细胞所 ,用含高糖的ＤＭＥＭ培养液 ,补充体积分数为 12 %的胎牛血清、青霉素 (10 4 Ｕ/Ｌ)、键霉素 (10 0 μｇ/Ｌ) ,于37℃ ,体积分数为 5 %的ＣＯ2 孵箱中培养。实验分药物处理组与对照组 ,处理组又分 2× 10 -2 、2× 10 -3 、2× 10 -4 ｇ/ＬＭＭＣ 3种浓度 ,作用时间为 2 4ｈ。2 .透射电镜 :将浓度为 2× 10 -2ｇ/Ｌ的ＭＭＣ处理Ｂ…     

线粒体融合素基因2对肝癌细胞的增殖及对化疗敏感性的影响

目的：探讨线粒体融合素基因2(mfn2)对肝癌细胞的增殖及对化疗敏感性的影响。 方法：实验分3组：重组质粒pEGFPmfn2转染HepG2细胞为实验组,空质粒pEGFP–N2转染HepG2细胞为阴性对照组,HepG2细胞为空白对照组。RT-PCR和Western Blot 分别检测转染后各组细胞mfn2 mRNA和蛋白水平的表达。采用细胞计数法和MTT法检测mfn2基因对肝癌细胞增殖的影响;流式细胞术检测转染后细胞周期的分布情况;MTT法检测转染mfn2基因对化疗敏感性的影响。 结果：转染48 h 后,转染mfn2组细胞生长开始受到明显抑制,明显低于空白对照组和转染空载体组,差异均有显著性(P< 0.05);转染pEGFPmfn2组G0/G1期所占比例为(83.2±1.5)%,明显高于转染空质粒pEGFP组与空白对照组G0/G1期所占比例,差异均有显著性 (P<0.05)。实验组HepG2细胞对化疗药物5-氟尿嘧啶的敏感性增强。 结论：mfn2对肝癌细胞具有增殖抑制作用,其机制可能与细胞周期阻滞有关;mfn2可增强化疗药物的敏感性。     

Galectin-1表达对LoVo细胞凋亡的影响

目的 观察galectin-1对LoVo细胞生长的影响.方法 构建galectin-1真核表达载体转染LoVo细胞,观察LoVo细胞生长情况.用免疫细胞化学方法检测转染后细胞galectin-1蛋白表达水平,免疫印迹检测转染后细胞Bc1-2表达的变化.结果 成功构建了 galectin-1真核表达载体pEGFP-C1/GAL1(p-GAL1),并建立了稳定的空载体(LoVo)细胞和真核表达载体转染细胞(P-LoVo细胞和p-GAL1-LoVo细胞).p-GAL1细胞可表达galectin-1,而另2组细胞则不能.galectin-1表达可降低LoVo细胞Be1-2的表达,诱导的细胞凋亡增加,3组细胞凋亡率分别为(9.61±0.56)%,(3.56±0.53)%和(3.46±0.46)%(P<0.001).而细胞生长曲线表明,P-GAL1-LoVo细胞增殖与P-LoVo和LoVo细胞相似.结论 galectin-1可促进LoVo细胞凋亡可能与galecfin-1可降低LoVo细胞Be1-2的表达有关.     

mitofusin-2对乳腺癌细胞RECK基因表达及MMPs活性的影响

目的 探讨线粒体融合素基因-2(mitofusin-2)对乳腺癌MCF-7细胞株中RECK表达及MMP-9,MMP-2活性的影响.方法 利用脂质体lipofectamine2000将构建的重组真核表达质粒pEGFPmfn2转染MCF-7细胞.RT-PCR检测细胞mfn2和RECK基因mRNA的转录水平;Weastem Blot法检测mfn2及RECK蛋白的表达;明胶酶谱试验检测转染前后MMP-9及MMP-2的活性.结果 转染pEGFP-mfn2质粒的MCF-7细胞可以稳定高表达Mfn2;RECK基因在转染空质粒组和未转染组细胞中无表达;转染mfn2基因后RECK基因mRNA转录及蛋白的表达显著升高,且MMP-9及MMP-2的活性显著降-低(P＜0.05).结论 mfn2基因可激活MCF-7细胞中RECK基因的表达,并显著抑制其MMP-9及MMP2的活性.该途径可能是mfn2基因抗肿瘤作用的新机制.     

糖酵解抑制剂对低氧胰腺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的：研究低氧条件下乳酸脱氢酶抑制剂2-脱氧-D-葡萄糖(2-DG)对胰腺癌细胞panc-1的影响。方法：建立细胞体外低氧培养模型。应用MTT法检测不同浓度2-DG (0,0.5,1.0,2.0,3.0 mg/mL)对癌细胞增殖的影响;以流式细胞仪检测不同浓度干预下细胞周期的变化及其细胞凋亡率。结果：低氧培养下,不同浓度2-DG对胰腺癌细胞panc-1生长均有明显抑制作用(P<0.05),并呈剂量依赖性;细胞凋亡率也明显增加(P<0.05),且细胞滞留于G 2/M及S期。结论：低氧条件下,2-DG能明显抑制人胰腺癌细胞的生长,并可阻滞细胞周期及诱导细胞凋亡。     

雷帕霉素对人肝癌裸鼠原位移植瘤生长的影响

目的：探讨免疫抑制剂雷帕霉素对肝癌细胞生物学行为的影响。方法：建立肝癌裸鼠原位移植瘤模型80只,随机分为空白对照组、环孢霉素(CsA)处理组、雷帕霉素常规剂量处理组和高剂量处理组,每组20只。用药2周后观察肿瘤生长情况,RT-PCR方法检测肿瘤组织中CD44v6 mRNA的表达。结果：雷帕霉素常规剂量组及高剂量组肿瘤体积较空白对照组明显缩小, CD44v6的表达显著下调(P<0.05);CsA组肿瘤体积较之空白对照组明显增大, CD44v6的表达显著上调(P<0.05)。结论：CsA可促进肝癌的生长和转移;雷帕霉素具有显著抑制肝癌侵袭转移的作用,能抑制肝癌细胞CD44v6基因的表达。     

COX-2对脓毒症大鼠肝损伤和代谢的影响

目的：探讨环氧合酶-2（COX-2）在脓毒症大鼠肝组织炎症反应中的表达及其对代谢反应的影响。方法：选择体质量相近的Wistar大鼠54只随机分为3组。A组为假手术组;B组为脓毒症模型组;C组为B组+NS-398干预组。通过建立盲肠结扎穿孔（CLP）脓毒症动物模型,用RT-PCR方法检测各组肝组织COX-2 mRNA的表达;采用放射免疫法检测前清蛋白(PA)、转铁蛋白(Tf);同时检测ALT,AST和血浆清蛋白(Alb),并观察肝脏病理变化。结果：（1）COX-2 mRNA 在A 组呈低表达,B,C组表达明显增高,但C组较B 组各时点明显降低(P＜0.05);（2）ALT和AST在B组各时点改变较A,C组明显增高（P＜0.05）;（3）B组病理损伤重,C组肝脏病理损伤减轻;（4）B,C组PA,Tf,Ab较A组下降明显,但C组各时点显著高于B 组（P＜0.05）。结论：COX-2在脓毒症肝损伤中发挥重要作用,它促进分解代谢,抑制合成代谢;其选择性抑制剂可以减轻肝损伤,减弱蛋白分解。     

甲状旁腺癌的诊治：附6例报告

目的 总结甲状旁腺癌(PTC)的诊治经验.方法 回顾分析6例PTC的临床资料.结果 5例有原发性甲状旁腺功能亢进症的表现,3例可扪及颈部肿块,4例高钙血症[(3.62±0.56 )mmol/L],4例血甲状旁腺素(PTH)升高达正常上限的2倍以上.3例术中快速病检确诊,2例术后石蜡病检及免疫组化确诊,1例术后石蜡病检及免疫组化结合临床资料确诊.5例行甲状旁腺切除术 患侧甲状腺次全切除术,随访1~5年,其中1例术后复发;1例仅行甲状旁腺肿瘤切除术的甲状旁腺癌伴多发性骨转称患者,术后16 d死于多器官功能衰竭.结论 PTC术前诊断困难,术前血生化检查,PTH,99mTc-MIBI,超声、CT检查及术中大体标本观察和快速病检有利于明确诊断.手术方式以选择甲状旁腺切除术 患侧甲状腺次全切除术为宜.     

胰腺癌细胞转染hSSTR2基因对下游波形蛋白表达的影响及其意义

目的 探讨生长抑素2型受体(Hsstr2)基因转染胰腺癌细胞对下游蛋白表达的影响及其意义.方法 利用腺病毒载体Ad.CMV.Hsstr2.GFP将Hsstr2全长Cdna导入胰腺癌细胞Panc-1;采用荧光差异双向凝胶电泳技术分离并筛选Hsstr2基因转染胰腺癌细胞前后差异表达蛋白;用反射式基质辅助激光解吸附电离串联飞行时间质谱鉴定差异蛋白.利用免疫印迹验证差异表达的波形蛋白;采用免疫组化检测波形蛋白在胰腺癌组织中的表达,并分析其临床意义.结果 有统计学意义的差异蛋白质点21个;选择1.3倍以上的差异点18个,经质谱鉴定得到13个蛋白质,包括翻译调节蛋白、代谢酶类、与细胞通讯信号传导相关蛋白、细胞结构蛋白、分子伴侣、具有GTPase活性的蛋白及动力蛋白等.波形蛋白在胰腺癌细胞转染Hsstr2基因后表达降低,免疫组化显示波形蛋白主要在低分化的胰腺癌细胞中高表达.结论 筛选的波形蛋白等差异蛋白可能成为新的胰腺癌敏感治疗靶点.波形蛋白也可能成为预测肿瘤恶性程度的一个指标.     

肝巨大血管瘤手术切除可行性分析

目的:探讨巨大肝海绵状血管瘤的诊断手段和外科治疗的可行性。方法:对31例巨大肝海绵状血管瘤的临床资料进行回顾性分析。术前影像学检查行B超＋MRI 16例,B超＋CT 11例,B超＋CT＋MRI 4例; 诊断为肝血管瘤29例（93.6%）,误诊肝癌2例（6.4％）; 均行根治性手术切除。结果:全组均获完全切除,无手术死亡。术中出血平均量800 mL（400～2 000 mL）,自体血回收平均600 mL（250～1 500 mL）。术中发生胆道损伤2例; 术后发生胸腔积液18例,膈下积液6例,肺炎4例,均治愈出院。结论:B超＋MRI是肝巨大血管瘤手术前最合适的检查,术前应仔细分析肝血管瘤影像学表现、设计合理手术方案、术中精细操作是手术成功的关键。     

利用Tet-on调控系统建立人肝癌HepG2Tet-on细胞系

目的 构建可以用强力霉素调控表达的人肝癌HepG2Tet-on细胞系,为进一步研究肝癌相关基因功能奠定基础.方法 用脂质体转染法将pWHE146质粒转染到人肝癌HepG2细胞中,用G418筛选出稳定表达细胞克隆;单克隆分别扩增后,瞬时转染pTRE-hyg-luc质粒;强力霉素诱导表达后,检测荧光素酶表达活性,挑选出受强力霉素调控的低背景、高表达的HepG2Tet-on细胞株.结果 成功构建了一株受强力霉素调控的高表达低背景的HepG2Tet-on细胞株(诱导倍数达154.106倍).结论 HepG2Tet-on细胞株可用于外源基因的真核调控高表达,为研究真核基因功能提供一种可靠的细胞株.