丝素蛋白／壳聚糖复合材料软骨组织工程支架的制备初探

目的三维多孔支架材料是软骨组织工程研究的重要基础,本实验用全物理过程将天然材料丝素蛋白（silk fibroin,SF）和壳聚糖（Chitosan,CS）适当比例混合制备三维支架材料,探索其方法的可行性。方法将蚕丝脱胶、溶解并提纯得到适当浓度的丝素蛋白溶液,将丝素蛋白溶液与壳聚糖溶液按适当比例混合,用冷冻干燥法制备成SF—CS三维支架材料。观察指标：采用液体替代法检测SF-CS支架材料空隙率,并应用显微镜观测其平均孔径及扫描电镜观察其超微结构。结果SF—CS三维支架材料平均孔径为60um,孔隙率为82．9％,完全符合作为组织工程材料的要求。结论用全物理过程可初步制备SF-CS三维支架材料,具有良好的三维结构和较好孔隙率,该方法有简单易操作,可重复性好等优点,该材料有望作为软骨组织工程研究中较为理想的支架材料。     

海螵蛸作为组织工程支架材料的实验研究

目的了解并观察海螵蛸的空间结构及作为组织工程支架的生物相容性。方法将脱脂海螵蛸切成薄片,计算孔隙率,从光学显微镜和扫描电镜观察其空间结构。在小鼠背部皮下分别埋置海螵蛸支架和聚乙酸醇（PGA）,在术后1、2、4、8周观察炎症反应和吸收情况。四甲基偶氮唑蓝比色法（MTT assay）分别检测海螵蛸支架对细胞增殖功能的影响。结果网格状的海螵蛸具有92%得孔率。皮下埋植术后1、2周仅少许淋巴细胞浸润,4周部分吸收,8周完全吸收,炎症细胞基本消退,与PGA比较无统计学差异。MTT assay测得细胞在海螵蛸支架中增殖能力较强。结论从结构上观察,海螵蛸符合细胞培养支架的多孔隙要求,且具有良好的生物相容性。     

一种新型肝组织工程支架的制备及生物相容性评价

目的:构建一种新型肝组织工程支架,并对其生物相容性进行评价,探讨其作为肝组织工程支架的可行性.方法:选用壳聚糖及明胶材料,通过微制造技术制备一种新型壳聚糖/明胶肝组织工程支架,并与大鼠原代肝细胞共培养,采用HE染色、扫描电镜、MTT法及肝细胞功能学指标等多种检测方法,对支架的细胞毒性及生物相容性进行评价.结果:成功制备了一种新型壳聚糖/明胶复合肝组织工程支架,其孔隙率高、表面积大,有利于肝细胞的黏附与生长,种植在新型壳聚糖/明胶肝组织工程支架上的肝细胞呈现良好的生长增殖趋势,保持良好的生理功能,新制备的支架呈缓慢匀速降解,保持良好的空间结构.结论:制备的壳聚糖/明胶肝组织工程支架具有良好的生物相容性及低细胞毒性,满足肝组织工程的要求.     

软骨组织工程中支架材料的研究

随着材料学、生命科学及相关学科的发展,一门新的学科正在兴起,即组织工程技术。其基本方法是:将体外培养的高浓度的功能相关的活细胞种植于具备良好生物相容性和可降解性的支架,形成细胞支架复合物,然后,将这种复合物移植到动物体内组织缺损部位,最终形成一个与机体本身在组织学及生化组成上完全相同的组织,从而完成组织缺损的修复与再造。组织工程学的中心环节是支架材料,如何在原有研究的基础上研获理想的生物活性支架,已成为组织工程这一重大课题的核心热点和难点。     

丝素/明胶组织工程支架的生物相容性初探

目的 初步研究丝素/明胶（silk fibroin/gelatin,SFG）支架的生物相容性。方法 利用冷冻干燥法制备SF/G支架,将1×10⁵/ml的第3代人牙周膜干细胞（human periodontal ligament stem cells,hPDLSCs）接种于SF/G支架上,设置对照组（人牙周膜干细胞悬液）,通过MTT试验测试两组人牙周膜干细胞第1、3、5、7天的吸光度值,利用细胞扫描电镜观察第5天和第7天两组细胞的生长增殖状况。结果 MTT显示接种于SF/G支架上的hPDLSCs的吸光度值在第1、3、5、7天分别为0.053、0.113、0.197、0.399,对照组分别为0.069、0.105、0.176、0.283。细胞扫描电镜显示第5、7天的hPDLSCs在SF/G支架上相互融合,分泌大量细胞外基质,细胞触须几乎铺满整个支架表面,并且有朝向支架空隙内部生长的趋势。结论 冷冻干燥法制备的SF/G支架能够促使细胞在其上增殖生长,具有一定的生物相容性,在牙周组织工程领域具有一定的应用潜力。     

壳聚糖在组织工程中的应用

壳聚糖是甲壳素脱乙酰化后的产物,具有良好的生物相容性和生物可降解性,并且具有低毒、无免疫原性等特点。作为自然界唯一的天然阳离子多糖并且拥有良好的生物学性质,使得壳聚糖在药学、医学、组织工程等领域的研究备受关注。近年来,壳聚糖及其衍生物材料作为天然高分子组织工程支架越来越受到重视。本文综述了壳聚糖及其衍生物在不同器官（骨、软骨、皮肤、肝等）组织工程中的研究现状。     

组织工程支架-复合细胞载体的研制

目的：研制出符合组织工程要求的载体。方法：根据细胞的生长特点，研制了一种胶原一壳聚糖复合载体，并对该载体进行了系统的生物相容性研究和细胞培养的应用研究。结果：显示这种复合载体具有良好的生物相容性，对人体无毒性，对细胞有一定的亲和作用，并适合细胞的三维生长，起到良好的支架作用。是一种符合组织工程要求的复合细胞载体。     

组织工程化皮肤支架的研究进展

本文综述近年来国内外关于皮肤支架材料的研究现状 ,说明只要通过一定的手段对现有材料进行物理或化学的表面改性 ,提高生物材料对细胞的表面亲和性和相容性等 ,即可达到组织工程支架对材料的要求。     

壳聚糖制作组织工程软骨支架的研究

目的:探讨在动物体内,利用新型生物材料壳聚糖制作软骨组织的可行性。方法:在体外,将培养的兔关节软骨细胞,种植于多聚赖氨酸包埋的壳聚糖支架上。体外培养4周,对组织工程软骨进行标本观察,HE染色,检测软骨内DNA含量。结果:制备的复合支架成形良好,交联后的机械强度明显提高。结论:壳聚糖适合细胞的贴附生长,可作为间充质干细胞的载体。     

壳聚糖制作组织工程软骨支架的研究

目的：探讨在动物体内,利用新型生物材料壳聚糖制作软骨组织的可行性。方法：在体外,将培养的兔关节软骨细胞,种植于多聚赖氨酸包埋的壳聚糖支架上。体外培养4周,对组织工程软骨进行标本观察,HE染色,检测软骨内DNA含量。结果：制备的复合支架成形良好,交联后的机械强度明显提高。结论：壳聚糖适合细胞的贴附生长,可作为间充质干细胞的载体。     

丝素蛋白/壳聚糖/纳米羟基磷灰石骨组织工程支架材料的体外细胞毒性评价

目的 探讨丝素蛋白/壳聚糖/纳米羟基磷灰石生物支架与兔骨髓间充质干细胞的体外细胞毒性.方法 采用丝素蛋白/壳聚糖/纳米羟基磷灰石构建的生物支架与兔骨髓间充质干细胞体外共培养,用材料的细胞毒性、细胞黏附率、细胞增殖活力指标以MTT法、倒置显微镜及电镜观察来评价.结果 细胞在支架材料上黏附、生长良好,分裂增殖活跃,细胞毒性检测CTG均为0级,实验组与时照组细胞黏附率比较无统计学差异（P＞0.05）,实验组与对照组细胞增殖活力随着时间增加,细胞在支架增殖速度增快.第1、3、5、7天实验组与对照组比较有统计学差异（P＜0.05）.扫描电镜观察发现细胞培养7天后生长良好,分裂正常,与支架材料黏附紧密.结论 支架材料对细胞无毒性,具有很好的细胞相容性.     

组织工程支架在脊髓损伤中的应用

运用组织工程支架修复脊髓损伤的新思路已日益受到临床重视,新型材料的出现促进了该领域的快速发展。目前应用于脊髓的组织工程支架多采用可降解的天然或合成高分子生物材料,但它们各有其优缺点。该文作者对常用的脊髓组织工程支架作一简要综述。     

组织工程骺板在骺板损伤治疗中的作用

目的 探索组织工程骺板在氍板损伤治疗中的作用.方法 将骺板软骨细胞与可降解多孔聚乳酸复合构建组织工程骺板植入骺板损伤的动物模型中,同时设单纯植入材料和空白对照.应用组织学Masson三色染色、BrdU细胞示踪、X线等检测方法,观察组织修复、短缩畸形和成角畸形情况.结果 组织工程骺板组发现柱状排列细胞,存在较小的短缩畸形和成角畸形;单纯植入支架材料组发现类似柱状排列细胞,短缩畸形和成角畸形明显;空白对照组未见柱状排列细胞,短缩畸形和成角畸形显著.3种方法短缩畸形和成角畸形程度的差异均存在统计学意义（均P〈0.01）.结论 组织工程骺板治疗骺板损伤是一种有效的方法,其疗效优于单纯植入生物支架材料.     

组织工程支架材料研究进展

细胞支架材料作为组织工程组织再生的框架,其特性直接影响细胞的粘附、生长和代谢功能,因此它是组织工程的关键要素之一。目前应用于组织工程的支架材料可分三大类：人工合成高分子可降解聚合物,天然材料提取物和细胞外基质,结合近年来的相关文献,对组织工程支架材料研究进展进行总结。     

丝素蛋白支架材料生物可控降解性的研究进展

 丝素蛋白是目前组织工程领域研究较为广泛的生物支架材料之一,其降解速率受许多因素的影响,通过控制这些影响因素,有望对丝素蛋白的降解速率进行更可靠的控制。本文通过查阅国内外关于丝素蛋白生物材料降解性的研究文献,对丝素蛋白支架材料生物学可控降解性的研究进展作一综述。     

鼓膜组织工程学研究进展

鼓膜穿孔是耳鼻喉科常见的临床症状,慢性鼓膜穿孔治疗主要通过手术修补,各种自体移植材料常被作为移植物来修补穿孔鼓膜。近年来,鼓膜再生领域的研究逐渐趋向于应用组织工程学治疗技术。许多新型组织工程材料在鼓膜修复中体现出良好的鼓膜再生和听力重建效果。然而,组织工程鼓膜的制作需要考虑多种因素。本综述通过总结概括目前在鼓膜穿孔修复中所使用的支架材料、生物活性分子和细胞来阐述鼓膜再生的组织工程学研究进展。     

应用组织工程材料栓塞动脉瘤的初步研究

目的 探讨壳聚糖-甘油磷酸钠-成纤维细胞水凝胶作为颅内动脉瘤栓塞材料的可行性.方法 配制2%(w/v)壳聚糖与56%(w/v)甘油磷酸钠溶液,不同比例混合,测定混合液pH、37℃成胶时间及力学强度,体外观察兔皮肤成纤维细胞在不同配比壳聚糖-甘油磷酸钠水凝胶中生长状态,选择最佳比例.将Brdu标记的成纤维细胞与壳聚糖-甘油磷酸钠水凝胶混合栓塞兔颈动脉,评价组织相容性.最终栓塞兔动脉瘤模型.结果 当壳聚糖/甘油磷酸钠在7:1时,pH值为7.28,成胶时间为(260±18)s,力学强度可达14 kPa,细胞生存率最高,达(89.0±2.7)%.颈动脉栓塞,透视下可见混合物显影良好,局部组织切片显示(HE染色):1周时凝胶中散在较多细胞及钽粉,凝胶与血管壁边界较清,内皮细胞完整.4周时凝胶与血管壁边界不清,可见周边凝胶被细胞成分包绕降解.免疫荧光显示,4周标本中可见较多标记的成纤维细胞.兔动脉瘤栓塞术中见动脉瘤不显影,术后3d病理见动脉瘤被凝胶栓塞,内膜细胞形态正常,动脉壁内未见明显炎性细胞浸润.结论 短期观察,壳聚糖-甘油磷酸钠-成纤维细胞水凝胶可用于动脉瘤栓塞.     

可降解聚合物在组织工程心脏瓣膜中应用的皮下埋植实验研究

目的 :评价作为组织工程心脏瓣膜支架的聚羟乙酸 聚乳酸共聚物 (PGLA)、聚 β 羟基丁酯 (polyhydroxybu tyrate ,PHB)、胶原膜三种生物可吸收材料的组织相容性和皮下吸收情况。　方法 :本文对照研究三种材料经皮下埋植后 2、4、6、8周和 12周的大体观察及组织学检查。　结果 :胶原膜皮下包埋 8周仍保持膜状结构 ,8～ 12周完全降解 ,组织相容性及皮下吸收情况优于PHB及PGLA。　结论 :胶原膜符合组织工程心脏瓣膜支架材料的基本要求     

神经干细胞构建的工程化组织的最佳移植时间

目的:探索神经干细胞与生物活性材料壳聚糖或明胶体外共培养构建的工程化组织的最佳体内移植时间。方法:从胎龄14～16 d的Wistar大鼠大脑分离培养神经干细胞,以105 cells/ml密度种植于壳聚糖、明胶膜表面,每天观察神经干细胞的分化情况。结果:培养获得的神经干细胞具有自我更新和多向分化潜能,接种于壳聚糖和明胶膜后24 h均贴附牢固,48 h后均有细胞分化。结论:神经干细胞与壳聚糖或明胶体外共培养构建的工程化组织的最佳移植时间为神经干细胞接种后24～48 h之间。