反义端粒酶RNA抑制胶质瘤细胞系BT—325细胞端粒酶活性表达

目的：观察反义端粒酶RNA对BT－325细胞的作用,探讨粒酶在恶性胶质瘤发生过程中的可能作用及反义端粒酶RNA在恶性胶质瘤基因治疗中的意义。方法：经脂质体介导的方法将pBBS 212-hTR(反义端粒酶RNA真核表达载体）导入BT－325细胞中,细胞克隆转移扩大培养后,采用TRAP－PAGE电泳,电镜和TUNEL技术检测BT－325／pBBS 212-hTR的细胞的端粒活性表达,细胞凋亡的情况。结果：与对照组比较,反义端粒酶RNA显著抑制BT－325细胞端粒酶活性,诱发细胞发生凋亡。结论：转染反义端粒酶RNA在封闭细胞粒酶活性表达的同时,可促进BT－325细胞凋亡,在研究恶性胶质瘤发病机制及治疗方面做了有益的探讨。     

hTERT基因反义核酸对Hela宫颈癌细胞端粒酶活性的影响

研究人类端粒酶催化亚单位（hTERT)基因的反义寡核苷酸对宫颈癌细胞的影响。方法：采用TRAP－ELISA检测Hela细胞在反义核酸处理前后端粒酶活性的变化。结果：hTERT基因反义核酸能有效抑制Hela细胞端粒酶活性。结论：hTERT基因反义核酸能显著抑制肿瘤细胞的端粒酶活性，为肿瘤治疗提供了一个有效的新途径。     

大蒜素对人胃腺癌SGC-7901细胞株端粒酶活性和细胞凋亡的影响

为观察大蒜素对胃腺癌SGC 790 1细胞端粒酶活性和细胞凋亡的影响。采用不同浓度的大蒜素处理SGC 790 1细胞后 ,用流式细胞仪检测细胞周期和凋亡的改变 ;用TRAP PCR ELISA法检测端粒酶活性的变化。结果显示 ,大蒜素能够改变细胞周期的分布 ,增加G2 /M期细胞比例 ;呈剂量依赖性诱导其凋亡 ;大蒜素对端粒酶活性的抑制作用也有时间和剂量依赖性。提示大蒜素能够抑制端粒酶的活性 ,促进细胞凋亡     

抑制端粒酶活性对1,25-（OH）2D3诱导肝癌细胞增殖分化的影响

目的：观察抑制端粒酶活性对1,25-（OH）2D3诱导肝癌细胞增殖分化的影响作用。方法：经脂质体介导,将反义端粒酶RNA转染肝癌细胞系SMMC7721细胞。转染细胞扩大培养后,添加1,25-（OH）2D3分别作用于各实验组细胞后,采用MTT法、平板克隆形成实验检测细胞的存活和生长;光镜和电子显微镜检测细胞分化形态改变。结果：对照组与转染组的吸光度值分别为1.685和0.686,说明转染反义端粒酶RNA可显著抑制肝癌细胞的端粒酶活性;而在抑制肝癌细胞端粒酶活性的基础上,1,25-（OH）2D3抑制肝癌细胞增殖和诱导细胞分化的作用得以显著的增强。形态学检查也进一步证实存在诱导分化改变。结论：在降低细胞端粒酶活性的基础上,1,25-（OH）2D3抑制肝癌细胞增殖、诱导细胞分化的作用得到增强。     

VEGF反义寡核苷酸对C6胶质瘤细胞VEGF 表达抑制作用的定量和定性检测

为观察VEGF反义寡核苷酸对C6胶质瘤细胞VEGF表达抑制作用，应用免疫荧光流式细胞技术和免疫细胞化学定量和定性观察反义、正义、错义寡核苷酸对C6胶质瘤细胞VEGF表达的影响。结果显示，VEGF反义寡核苷酸对C6胶质瘤细胞VEGF的表达有明显抑制作用，而且抑制作用存在浓度依赖性。提示VEGF反义寡核苷酸能够有效地抑制C6胶质瘤细胞VEGF的表达。     

hTERT-siRNA表达载体的构建及对MCF-7细胞生长、端粒酶活性的抑制作用

目的 构建人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因的RNA干扰(RNAi)表达载体,并研究该载体对乳腺癌MCF-7细胞端粒酶活性及细胞增殖的影响,为针对端粒酶的乳腺癌基因治疗提供新的途径.方法 设计针对人端粒酶逆转录酶催化亚基(hTERT)的干扰靶序列TGTTCAGCGTGCTCAACTA,构建重组siRNA表达质粒pGenesil-hTERT,同时构建不针对任何基因的阴性对照重组pGenesiL-HK.两种重组质粒经酶切、电泳分析和测序鉴定后,用脂质体转染法分别转染乳腺癌MCF-7细胞,应用端粒酶重复序列扩增聚合酶链反应(TRAP-PCR)及聚丙烯酰胺凝胶电泳检测端粒酶活性,流式细胞仪测定细胞凋亡率.结果 酶切电泳测序分析表明插入序列正确,重组质粒构建成功.转染pGenesil-hTERT的MCF-7细胞,凝胶电泳见端粒酶特征性条带明显减少,端粒酶活性受到明显抑制pGenesil-hTERT转染细胞后凋亡率较对照组明显升高(P＜0.01),且转染48h凋亡率最高,达54.7%±2.41%.结论 hTERT-siRNA可有效抑制乳腺癌MCF-7细胞端粒酶活性、促进细胞凋亡,此法有望应用于肿瘤基因治疗.     

γ射线诱导细胞死亡过程中端粒酶活性的研究

目的 观察γ射线照射人肿瘤细胞和正常细胞后端粒酶的变化及其与细胞死亡的关系。方法 检测照射后不同时间细胞端粒酶活性，细胞内端粒酶原位表达以及死亡细胞总数和形态观察。结果 在1－5Gy吸收剂量范围内A549和L02细胞辐射诱导死亡以凋亡为主要途径；在凋亡发生的过程中，端粒酶原位检测显示60％－90％的细胞中存在强烈的端粒酶信号，TRAP检测示端粒酶活性表达增强，提示放射损伤可诱导端粒酶活性增高，高端粒酶活性可持续至细胞发生凋亡。结论 γ射线诱导人肿瘤和正常细胞凋亡可能不是通过直接抑制端粒酶活性的机理，辐射诱导端粒酶活性增高可能是细胞修复辐射损伤的机理之一。     

反义STAT3寡核苷酸对B16细胞辐射敏感性的研究

目的 探讨反义STAT3转染鼠恶性黑色素瘤B16细胞后,肿瘤细胞辐射敏感性的变化。方法 利用反义寡核苷酸转染B16细胞后,以不同剂量γ射线照射。通过CCK-8试剂盒检测细胞增殖变化,Hoechst33258染色对细胞凋亡作形态学上的观察。用Annexin V/PI复染,流式细胞仪检测细胞早期凋亡率的变化。结果 反义STAT3转染后加以γ射线照射,B16细胞的增殖相比于两者单独作用组受到明显抑制,细胞凋亡水平也增加。结论 反义STAT3寡核苷酸联合γ射线对B16细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用明显增强,提高了鼠黑色素瘤B16细胞的辐射敏感性;表明阻断STAT3蛋白表达可能成为一种新的提高肿瘤辐射敏感性的有效手段。     

反义寡核苷酸联用对肺腺癌A549细胞增殖的抑制作用

目的　研究多基因靶向的反义寡核苷酸联用对肺腺癌细胞A5 4 9增殖的抑制作用 ,建立初步筛选、分析组合靶点的实验方法及统计学方法。方法　选择以端粒酶、PKC α、Bcl 2和IGF 1R为靶点的 4种反义寡核苷酸 ,进行两药组合。以脂质体介导进行反义寡核苷酸转染 ,用MTT法染色并计算细胞生长抑制率 ,用SAS统计软件及金正均Q值法进行数据分析。结果　联合用药对A5 4 9细胞增殖的抑制作用显著高于单药 (P <0 0 5 ) ,并筛选出有协同作用的药物组合 (Q≥ 1 15 )。结论　反义寡核苷酸联合用药可以靶向多个与肿瘤发生发展密切相关的基因 ,提高对肿瘤细胞增殖的抑制效果。     

阻断血管内皮生长因子表达对食管癌细胞放射敏感性的影响

目的 观察转染反义VEGF cDNA质粒和反义寡核苷酸后,TE-1食管癌细胞在体外的生长状况、VEGF表达水平及其放射敏感性的变化。方法 分别用反义VEGF cDNA质粒及空载体质粒和反义VEGF寡核苷酸经Lipofectamine^TM2000介导转染TE-1细胞,然后经γ射线照射。采用RT-PCR、Western blotting、流式细胞术、MTT法和克隆形成实验分别检测4组细胞照射前后VEGF基因的表达、凋亡率和细胞周期变化、细胞增殖情况以及转染细胞放射敏感性的变化。结果 将反义VEGF cDNA和反义寡核苷酸成功转入食管癌TE-1细胞后,VEGF表达水平明显降低,细胞增殖反应、细胞周期无明显变化,亦未见明显凋亡发生。照射后4组细胞增殖情况未见明显差异;反义组细胞凋亡率略有上升, 放射敏感性增加。结论 转染反义VEGF cDNA质粒和反义寡核苷酸可抑制食管癌TE-1细胞VEGF表达,联合放射线作用,对TE-1细胞的增殖无明显影响,而对其放射敏感性有增强作用。     

制动对兔膝关节韧带力学特性和形态学的影响

本文通过对兔膝关节制动前后股骨—内侧副韧带—胫骨复合装置抗张强度的测定,以及对外侧副韧带和韧带附着骨端的形态学观察,研究制动及制动后进行被动运。动对骨—韧带—骨复合装置抗张强度的影响并探讨其机制。结果表明,制动可导致股骨—内侧副韧带—胫骨复合装置的最大载荷、能量吸收明显下降。这种改变可能与韧带附着胫骨端破骨细胞增多,骨膜下骨吸收增加,导致韧带附着力减弱,以及韧带组织中胶原纤维束减少有关。去制动后,由于韧带附着胫骨端的形态结构恢复较慢,韧带—骨复合装置抗张强度的完全恢复需较长的时间。制动后的早期被动运动对韧带—骨复合装置抗张强度的恢复及韧带组织结构的恢复有一定促进作用。     

改善珊瑚表面成骨细胞粘附和增殖的研究

新西兰兔骨央基质成骨细胞作为接种珊瑚的种子细胞。珊瑚块分别用多聚赖氨酸、纤维粘连蛋白（Fn)和单纯培养液处理，接种成骨细胞后形成细胞／珊瑚复合物，在体外培养7、14、21天进行观察。电镜显示，第7天和14天，Fn处理的珊瑚表面有更多的成骨细胞粘附和骨基质的形成。经多聚赖氨酸处理的珊瑚与培养液处理的珊瑚比较，虽然在第7天通过DNA含量的测定具有较多的的细胞数，但在第14、21天差异无显著性意义。Fn处理的珊瑚在各时间点细胞数和 碱性磷酸酶活性均高于多聚赖氨酸和培养液处理组，同时细胞数随培养时间呈增长趋势。本文实验结果提示Fn处理珊瑚表面可以明显促进成骨细胞的粘附和增殖。     

高原环境下止血带安全时限的实验研究

为探讨高原环境对止血带安全应用的影响，采用犬为动物实验模型，在高原低氧环境下，探讨止血带下不同缺血时间和不同再灌流时间对肢体骨骼 影响，并与低海拔环境下的实验组进行比较，其结果表明：（１）高原组和平原组缺血期间的组织学改变基本相惟；（２）高原组平原止血带缺血１小时组再灌流后的损伤程度无显著差异；（３）缺血３－６小时，其高原组的缺血再灌流损伤显著重于平原组，并发生严重的肺损伤。因此，高原环境下，止血     

ARRIF-Ⅲ型内固定器治疗腰椎滑脱症的初步临床报告

应用自行设计的ARRIF Ⅲ型内固定器对 15例不同程度的腰椎滑脱症患者进行切开复位融合内固定 ,从滑脱复位结果、融合的成功率、术后下肢根性症状的改善情况以及并发症等方面进行观察。结果发现 ,ARRIF Ⅲ型内固定器术中操作方便 ,椎间植骨时不需调节内固定器的螺丝帽 ,滑脱复位率为 94 % ,椎间及横突间植骨融合率为 87% ;术后平均随访 2年 2个月 ,86 7% (13/ 15 )的患者症状完全消失 ,内固定器无断裂、弯曲及松动。说明该内固定器能方便地对不同程度的腰椎滑脱症进行复位和融合固定 ,是一种使用方便、固定确实的经椎弓根内固定器     

蚯蚓背肌胆碱能受体的药理学性质及梭曼直接作用的进一步证实

我们曾报道梭曼(GD)在蚯蚓背纵肌上的肌收缩效应可以通过生化膜处理方法或药理学受体阻断方法与乙酰胆碱(ACh)效应区别开。说明梭曼有一个胆碱能受体(ChR)以外的特殊作用部位,暂假定为“梭曼受体”。究竟蚯蚓背纵肌上这种与梭曼直接肌收缩效应无关的ChR具有什么样的药理学性质,是-烟碱(N)-ChR,还是毒蕈碱(M)-ChR,或者是N-M混合型ChR,这方面还无明确的文献报导。系统研究这种ChR的药理学性质对认识梭曼的作用机制很有意义。梭曼是     

第一恒磨牙建与龋病的调查分析

为研究第一恒磨牙的建及建(期延长与龋病发生发展的关系,及了解各年龄组龋均等情况,共调查2984人,其中6—8岁358人,9—12岁277人。结果:龋牙总数4663牙例,6—12岁组龋均最高(2.66),36—45岁组最低(0.87),年龄与龋均呈反关系;6—8岁组(牙合)接触率31.84％、龋发率61.93％,9—12岁组接触率62.20％、龋发率82.88％,表明建期的延长与龋病的发生、发展有直接关系。结果提示,(牙合)的正常建立与适宜的食物结构成份对发育的生理刺激十分重要;建(牙合)后,牙体通过食物磨擦的自洁功能对龋病的预防起着关键作用。     

耐力训练对心肌超微结构的影响

作者对大白鼠进行长期游泳耐力训练,在安静状态下、大运动量后和超常运动量后杀死取材,用H—600电镜观察结果显示肌节长度、线粒体形态、结构和相对面积等心肌超微结构均有显著意义的变化。     

腭裂早期修复手术问题的探讨：附105例报告

总结<2周岁早期腭裂手术105例,无瘘孔、裂开及死亡。具有出血少、术后反应轻、愈合能力强等优点,介绍了手术操作及术后管理的要点,指出早期手术是安全可行的,除语言效果好外,且有利于患儿的心理发育,并认为唇腭裂患者的上颌骨发育障碍,尚与唇裂的手术方法有关。     

Semmes-Weinstein单丝检测糖尿病足部神经感觉的应用研究

应用５．０７／１０ｇ Ｓｅｍｍｅｓ－Ｗｅｉｎｓｔｅｉｎ Ｍｏｎｏｆｉｌａｍｅｎｔ（单丝）随机检测１３２例糖尿病患者右足５个部位的感觉,结合足部震颤阈值分析研究每个单丝的敏感性和特异性。同时应用弯曲力分别为５ｇ和１５ｇ的单丝随机对２００例糖尿病患者右足５个部位进行检测。