Paxillin在大鼠胰腺不同发育阶段的表达

目的:探讨与胰岛形成和功能完善相关的基因在大鼠胰腺发育不同阶段的表达趋势.方法:采用高密度寡核苷酸芯片对孕12.5 d(E12.5),E15.5,E18.5, 新生和成年大鼠胰腺进行基因转录水平分析,并用RT-PCR验证桩蛋白(pxn)和actopaxin在不同发育时期的表达情况.结果:与细胞迁移、聚集黏附相关的基因77.8%在胚胎18.5 d高表达,22.2%在新生期高表达;整合素和激酶(ILK)在胚胎18.5 d表达量最高,pxn和actopaxin在胚胎15.5 d表达量达到高峰;成熟胰腺特异性基因多从胚胎18.5 d开始出现明显高表达,调节胰腺细胞分化的相关转录因子表达量多从胚胎18.5 d开始下降.结论:Pxn在胚胎发育中后期的高表达可能与胰岛形成及功能完善有关.     

环磷酰胺对成年大鼠卵巢的损伤以及GnRHR在卵巢的表达

目的 探讨化疗药物对卵巢的损伤及其可能机制.方法 将成年SD大鼠分为2组:生理盐水组和环磷酰胺组.大鼠腹腔注射环磷酰胺;8周后固定一侧卵巢,连续切片,观察卵巢形态学改变并计数卵泡数目;免疫组化法检测GnRHR在卵巢的表达.RT-PCR法检测对侧卵巢GnRHR mRNA的表达.结果 环磷酰胺可引起卵巢皮质区原始卵泡发生大量丢失,卵巢间质严重损害,血管发生特征性病理改变;局部发生纤维化.GnRHR mRNA和蛋白质可表达于大鼠卵巢.与对照组相比,环磷酰胺组颗粒细胞GnRHR蛋白表达减少;化疗组GnRHR mRNA表达量低于对照组(P＜0.05).结论 GnRHR在化疗卵巢较低水平的表达,提示化疗晚期卵巢局部微环境的紊乱.     

一氧化氮合酶在不同年龄大鼠睾丸中的表达

目的研究一氧化氮合酶(NOS)在不同年龄大鼠睾丸中的表达情况，探讨NO在睾丸生殖功能中的作用。方法将健康雄性Wistar大鼠按月龄分为成年组和未成年组，4％多聚甲醛灌流固定，取大鼠睾丸，常规石蜡切片，免疫组化SABC法检测NOS在不同年龄大鼠睾丸中的表达。结果成年组大鼠睾丸间质细胞和间质血管中均有nNOS、iNOS和eNOS阳性物质表达，生精小管周围肌样细胞和腔面精子可见nNOS阳性物质；未成年组大鼠睾丸间质血管中偶见iNOS和eNOS阳性物质表达。结论3种NOS在睾丸中均有表达，但定位不同，且与年龄相关。     

促甲状腺激素受体的裂解和脱落

促甲状腺激素受体(TSHR)是一种重要的自身抗原,TSHR的裂解和脱落可诱发自身免疫。裂解的TSHR是甲状腺主要的功能性受体,α亚单位的脱落对于刺激型TSHR抗体(TSAb)的形成及TSAb和阻断型TSHR抗体(TBAb)之间的平衡有重要意义,对于TSHR胞外域裂解和脱落的相关研究不仅有助于深入理解TSHR的结构和功能,而且有助于阐明自身免疫性甲状腺疾病的发病机制及探寻新的治疗方法。该文就TSHR概况、受体裂解和脱落的机制及其意义作一综述。     

人肝硬化肝细胞生长激素受体及其mRNA的表达变化

目的　探讨人肝硬化肝组织和肝硬化肝细胞生长激素受体的表达变化。方法　采用放射配体法、逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)检测 32例癌旁肝硬化肝组织和 6例癌旁肝硬化肝细胞中生长激素受体及其mRNA的表达水平 ,并分别与 5例正常肝组织、3例正常肝细胞比较。结果　人肝硬化肝组织表达生长激素受体 ,其表达数量较正常肝组织明显减少 [RT,(2 2 4± 5 0 )fmol/mg蛋白 ,n =32vs (41 3± 5 3)fmol/mg蛋白 ,n =5 ;P <0 0 5 ],并且随着肝硬化程度的加重进一步减少 (P <0 0 5 ) ;人肝硬化肝细胞生长激素受体的位点数量较正常肝细胞明显减少 [位点 ,(2 4 0± 0 93)× 10 4/细胞 ,n =6vs (4 6 8± 1 14 )× 10 4/cell,n =3;P <0 0 5 ],人肝硬化肝组织生长激素受体mRNA的表达量也较正常肝组织明显减少 [riOD ,30 8%± 8 2 % ,n =32vs 4 4 9%± 6 3% ,n =5 ;P <0 0 5 ],并且随着肝硬化程度的加重进一步减少 (P <0 0 5 )。结论　肝硬化肝细胞表达生长激素受体 ,其表达水平降低 ;肝硬化越严重 ,该表达下调越明显。肝硬化肝组织生长激素受体表达下调的可能机制是肝硬化肝组织生长激素受体mRNA的表达明显减少     

大鼠睾丸AQP7 mRNA与蛋白质的表达及定位研究

目的:探讨AQP7在大鼠睾丸的基因与蛋白质表达及定位.方法:取4周和12周Wistar大鼠睾丸,采用RT-PCR、Westernblot检测AQP7 mRNA和蛋白质表达,免疫组化检测进行其定位研究.结果:大鼠睾丸有AQP7 mRNA和蛋白质表达,定位于减数分裂后的精子细胞和精子膜上,管周细胞也有AQP7的阳性染色.结论:AQP7在睾丸的表达可能与精子发育及曲细精管的功能有着密切的关系.     

Toll样受体2胞外域及其氨基端和羧基端片段的克隆与序列分析

目的：为研究TLR2胞外域在肽聚糖诱导的信号转导中的功能，构建TLR2胞外域及其氨基端和羧基端片段真核表达载体。方法：提取HL－60细胞总RNA，以RT－PCR方法获取了TLR2胞外域cDNA片段，将其与pGEM-T Easy载体连接，转化E.coli JM109,建立了TLR2胞外域的cDNA克隆；籍此，又相继克隆了胞外域的氨基端和羧基端片段，然后将这三个片段克隆到真核表达载体pcDNA3中。结果：序列分析表明，与GenBank中的人TLR2全长cDNA序列比较，仅4个碱基不同，同源性为0．998。结论：成功获得了HL－60细胞TLR2胞外域及其氨基端和羧基端片段的克隆。     

人膀胱组织中P2X受体亚型表达的实验研究

目的:检测正常儿膀胱颈部和顶部的P2X受体亚型mRNA的表达情况,并探讨其临床意义。方法:提取正常儿膀胱颈部和顶部的总mRNA,以β-actin为内参照,采用RT-PCR方法检测P2X受体各亚型mRNA在膀胱中的表达情况。结果:膀胱颈部和顶部均发现了P2X受体的7种亚型mRNA表达。颈部及顶部受体亚型的表达水平顺序分别为:P2X7>P2X1>P2X4>P2X3>P2X2>P2X5>P2X6和P2X4>P2X2>P2X1>P2X3>P2X7>P2X5>P2X6。结论:正常儿膀胱内有P2X受体的7种亚型mRNA表达,提示P2X受体亚型对膀胱感觉和运动功能的调节作用具有深入研究的价值。     

抗卵泡刺激素自身抗体引起大鼠睾丸生精细胞凋亡

目的：研究抗卵泡刺激素（FSH）自身抗体大鼠模型睾丸生精功能低下的可能机制.方法：SD大鼠（21d龄,30只）,随机分为实验组和对照组,每组各15只.实验组用18肽-KLH免疫,对照组用KLH免疫,每隔2周加强免疫1次,共7次,直至实验结束.分别于免疫第77、91及105 d时心脏取血处死实验组和对照组大鼠各5只,收集血清.采用ELISA法检测模型大鼠血清FSH、黄体生成素（LH）和抑制素B水平,并以Rpl19为内参照,用荧光定量PCR法检测睾丸内Bax mRNA水平,同时用末端标记技术（TUNEL）检测睾丸生精细胞凋亡情况.结果：免疫后第77和91 d的实验组大鼠血清FSH水平显著低于对照组（P＜0.05）,免疫105 d后,实验组大鼠FSH水平有所回升.与对照组相比,实验组大鼠血清抑制素B水平均显著降低（P＜0.05）.血清LH水平在两组大鼠间无显著差异.免疫后第77、91及105 d的实验组大鼠睾丸内Bax mRNA水平,分别为对照组的2.15、3.77和1.89倍,TUNEL检测结果也显示实验组大鼠睾丸生精细胞凋亡指数显著高于对照组.结论：抗FSH自身抗体可能通过与FSH形成抗原抗体免疫复合物,以降低外周血中FSH浓度,进而激活Bax相关凋亡通路,诱导生精细胞凋亡,导致模型大鼠睾丸生精功能低下.     

甲亢大鼠心肌甲状腺激素受体mRNA的表达

【目的】探讨正常与甲亢大鼠心肌甲状腺激素受体mRNA表达差异。【方法】将16只实验大鼠随机分为正常对照组和甲亢组两组,每组8只:实时荧光定量PCR(FQ-PCR)方法检测正常对照组与甲亢组大鼠心肌甲状腺激素受体各亚型mRNA表达差异。【结果】与正常大鼠心肌相比,甲亢大鼠心肌甲状腺激素受体α1 mRNA表达上调51%(t=9.17,P<0.01),甲状腺激素受体α2 mRNA表达下调58%(t=10.02,P<0.01),甲状腺激素受体β1 mRNA表达不受影响(t=0.96,P>0.05)。【结论】高甲状腺激素水平对甲状腺激素受体α1、α2、β1mRNA表达影响不一致,甲亢大鼠心肌甲状腺激素受体αmRNA的异常表达变化可能与甲亢心脏病的发病密切相关。     

大鼠尾动脉平滑肌中多巴胺受体亚型分布的分析

长期以来认为在内脏血管中含有两种亚型的多巴胺受体ＤＡ１和ＤＡ２，而躯体血管中只存在多巴胺受体ＤＡ２亚型。但在实验中偶然发现大鼠尾动脉对ＤＡ１亚型特异性激动剂ｆｅｎｏｌｄｏｐａｍ有明显反应，因此应用离体血管环法和反转录聚合酶链反应方法对大鼠尾动脉平滑肌中多巴胺受体两亚型的分布情况进行了观察。结果显示：亚型选择性多巴胺受体激动剂ｆｅｎｏｌｄｏｐａｍ和ＰＢＤＡ（ＤＡ２亚型激动剂）在尾动脉均产生浓度依赖性舒张反应，该效应分别被亚型特异性拮抗剂部分或完全阻断；来自尾动脉之ＲＮＡ的ＰＣＲ结果可见到预期长度为２４７ｂｐ的特异性阳性扩增条带，而未加反转录酶之结果呈现阴性，说明该产物来自ｃＤＮＡ而非基因组ＤＮＡ。结论：大鼠尾动脉平滑肌中同时存在有多巴胺受体ＤＡ１和ＤＡ２两种亚型     

人β-防御素-3基因的克隆和序列测定

目的 克隆人β-防御素－3的基因。方法 提取人皮肤组织的总RNA，反转录为cDNA作为模板，采用PCR的方法克隆人β－防御素－3基因。PCR产物连接入pGEM-T-EASY载体，转化DH－5α受感态细胞，蓝白筛选，对酶切及PCR鉴定含有目的片段的克隆进行测序。结果 获得预期大小的PCR产物，经序列鉴定证实为人β－防御素－3基因。结经 获得了人β-防御素－3基因。     

大鼠睾丸AQP7、AQP8表达随龄变化及人参二醇皂苷对其表达的影响

目的：探讨水通道蛋白7和8（aquaporin 7,AQP7;aquaporin 8, AQP8）的表达与睾丸生精功能的关系,以及人参二醇皂苷（PDS）对睾丸水通道蛋白表达的影响。 方法：4、12周龄Wistar大鼠分为盐水对照组(Con组)（n=6）和PDS腹腔注射组(PDS组)(n=6)。PDS组每日给予PDS腹腔注射（25 mg•kg^-1•d^-1,1　mL）,Con组注射等体积生理盐水,给药2周。采用半定量RT-PCR和Western blotting比较睾丸AQP7与AQP8的mRNA和蛋白质表达水平。 结果：随增龄睾丸AQP7和AQP8 mRNA和蛋白表达明显增高;4周龄大鼠PDS腹腔注射2周后睾丸AQP7和AQP8表达增强,PDS对4周龄大鼠睾丸AQP7蛋白质表达有明显的上调作用,12周龄大鼠接受14 d PDS腹腔注射后其AQP8蛋白质表达水平略有下降。 结论：睾丸AQP7和AQP8的表达随性成熟明显增高;PDS对睾丸水通道表达有明显的调节作用。     

桩蛋白在大鼠星形胶质细胞中的表达

目的：初步探讨桩蛋白（paxillin）在大鼠星形胶质细胞及神经元中的表达。方法：通过组织切片、细胞培养、免疫荧光和RT-PCR方法,观察桩蛋白在大脑皮层及体外培养的星形胶质细胞以及神经元中的表达。结果：桩蛋白在大鼠脑皮质的星形胶质细胞中表达,神经元未见明显表达;在体外培养的星形胶质细胞以及神经元中的表达情况与体内一致,主要表达于星形胶质细胞的胞浆及突起中。结论：桩蛋白主要表达于星形胶质细胞而非神经元中。本实验结果为进一步研究桩蛋白在星形胶质细胞中的生物学作用奠定了基础。     

雌激素受体β亚型在大鼠睾丸发育过程中的表达和定位

目的：研究雌激素受体β亚型（ERβ）在大鼠睾丸发育过程中的作用。方法：采用免疫组织化学染色和免疫荧光组织化学染色方法，观察在出生后3，7，16及28d的大鼠睾丸和成年大鼠睾丸中ERβ的表达和分布情况。结果：在出生后3，7d的大鼠睾丸中ERβ主要分布于睾丸间质细胞，在出生后，16，28d分布于睾丸间质细胞胞质，大鼠睾丸中ERβ的表达随出生天数增加而呈逐渐上升的趋势，成年大鼠睾丸间质细胞中ERβ分布较幼年大鼠密度增加。结论：ERβ可能作为一种特异性受体在大鼠睾丸发育过程中影响睾丸间质细胞雄性激素的分泌；进而调节生精过程和精子发育成熟。     

靶向维生素D受体的miRNA的筛选及其对继发性甲状旁腺功能亢进患者甲状旁腺激素分泌的影响

目的 探讨靶向维生素D受体（VDR）基因的miRNA及其对继发性甲状旁腺功能亢进甲状旁腺激素（PTH）分泌的影响。方法 用胶原酶消化法提取、分离和培养出继发性甲状旁腺功能亢进的甲状旁腺组织的原代细胞;运用生物信息学方法及全转录组测序的方法筛选得到靶向VDR的miRNA,双荧光素酶报告基因实验验证筛选出的miRNA与VDR的靶向关系;qRT-PCR及Western blotting检测过表达或抑制miRNA后的对VDR mRNA水平及蛋白水平和对PTH分泌的影响;qRT-PCR和免疫组织化学分别验证部分miRNA、VDR mRNA和蛋白水平的表达差异。结果 成功培养得到甲状旁腺原代细胞;筛选并验证了hsa-miR-149-5p、hsa-miR-221-5p、hsa-miR-222-3p、hsa-miR-29a-5p、hsa-miR-301a-5p、hsa-miR-873-5p、hsa-miR-93-3p均与VDR存在靶向关系;筛选并验证的7个miR中,过表达hsa-miR-149-5p、hsa-miR-301a-5p PTH分泌增加。hsa-miR-149-5p在继发性甲状旁腺功能亢进中高表达（P=0.046）,VDR mRNA（P=0.0267）和蛋白水平表达均下降。结论 hsa-miR-149-5p、hsa-miR-301a-5p可能通过下调VDR基因的表达促进继发性甲状旁腺功能亢进患者PTH的分泌。