应用双重PCR技术检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌

目的 应用敏感、快速的双重聚合酶链反应（PCR）技术检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）。方法 临床分离得葡萄球菌,挑取单个菌落,用碱煮沸法制备DNA模板,进行双重PCR反应,以扩增femA基因和mecA基因。结果 100株葡萄球菌中,38株凝固酶阳性的葡萄球菌,其femA基因均为阳性,而mecA基因阳性者为30株,占78．9％（30,38）,mecA基因阴性8株,占21．1％（8／38）。62株凝固酶阴性的葡萄球菌femA基因均为阴性,mecA基因阳性48株,占77．4％（48／62）,mecA基因阴性14株,占22．6％（14／62）。结论 应用双重PCR技术检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌是一种敏感敏感、快速、特异的实验诊断方法,可防止临界MRSA漏检为MSSA。     

葡萄球菌耐消毒剂基因qacA／B检测及临床意义

目的 了解临床分离的葡萄球菌mecA基因及耐消毒剂基因qacA/B的存在状况.方法 临床分离的40株葡萄球菌,分别用头孢西丁(30 μg)筛查法和聚合酶链反应(PCR)法检测mecA基因,同时采用PCR法检测其耐消毒剂基因qacA/B.结果 40株葡萄球菌中36株mecA基因阳性,占90.0%(36/40);11株检出qacA/B基因者均为mecA阳性葡萄球菌,其中10株为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA),1株为耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS),qacA/B阳性率为27.5%(11/40).结论 含qacA/B基因的葡萄球菌全部为mecA基因阳性,提示对临床常用消毒剂耐药的金黄色葡萄球菌同时也对甲氧西林耐药.因此检测葡萄球菌耐消毒剂基因,对合理选用消毒剂,控制葡萄球菌感染传播具有临床意义.     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌产色培养基临床应用评估

目的通过头孢西丁纸片法、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）产色筛选平板法和聚合酶链反应（PCR）检测MRSA,评估MRSA产色筛选平板的敏感性和特异性。方法收集仁济医院2008年8月至9月临床分离的金黄色葡萄球菌68株,分别采用头孢西丁纸片法、MRSA产色筛选平板法和PCR检测MRSA,以PCR检测femA基因和mecA基因结果为金标准,比较MRSA产色筛选平板的敏感性和特异性。结果甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌（MSSA）除万古霉素、替考拉宁和利奈唑胺外,对其他11种抗菌药物的敏感率明显高于MRSA。68株金黄色葡萄球菌中,头孢西丁纸片法筛选出50株MRSA,产色平板法筛选出51株MRSA,PCR检测到51株mecA基因阳性,MRSA产色筛选平板结果和mecA基因检测结果符合率为100%。结论MRSA产色筛选平板可用于临床快速检测MRSA。     

头孢西丁纸片扩散法检测耐甲氧西林葡萄球菌的临床应用评价

目的用PCR法检测葡萄球菌的mecA基因为参比方法,评价头孢西丁纸片扩散法检测耐甲氧西林葡萄球菌(MRS)的临床应用价值。方法临床分离的163株葡萄球菌,分别用头孢西丁、苯唑西林纸片扩散法、PCR法检测mecA基因,以PCR扩增法检测mecA基因作为参比方法进行比较。结果163株临床分离的葡萄球菌经PCR法检测mecA基因,阳性率为81.0%,其中,耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)和耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS)的发生率分别为74.1%和83.8%。头孢西丁、苯唑西林纸片扩散法用于检测MRSA与PCR法检测mecA基因有很好的一致性,其敏感性和特异性均为100.0%,而对于凝固酶阴性葡萄球菌,头孢西丁纸片扩散法比苯唑西林纸片扩散法检测MRS的敏感性和特异性高,敏感性分别为100.0%和94.3%,特异性分别为96.0%和88.0%。结论头孢西丁纸片扩散法检测耐甲氧西林葡萄球菌具有很高的灵敏度,但对于mecA基因阴性的凝固酶阴性葡萄球菌,用头孢西丁纸片法检测,约有5%菌株要误报为MRCNS。由于头孢西丁纸片扩散法操作简单,较苯唑西林纸片扩散法检出MRS的敏感度和特异性高,结果与PCR法检测mecA基因有很好的相关性,不需特殊仪器设备,可在临床微生物实验室常规开展。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌产色培养基临床应用评估

目的通过头孢西丁纸片法、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)产色筛选平板法和聚合酶链反应(PCR)检测MRSA,评估MRSA产色筛选平板的敏感性和特异性。方法收集仁济医院2008年8月至9月临床分离的金黄色葡萄球菌68株,分别采用头孢西丁纸片法、MRSA产色筛选平板法和PCR检测MRSA,以PCR检测femA基因和mecA基因结果为金标准,比较MRSA产色筛选平板的敏感性和特异性。结果甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA)除万古霉素、替考拉宁和利奈唑胺外,对其他11种抗菌药物的敏感率明显高于MRSA。68株金黄色葡萄球菌中,头孢西丁纸片法筛选出50株MRSA,产色平板法筛选出51株MRSA,PCR检测到51株mecA基因阳性,MRSA产色筛选平板结果和mecA基因检测结果符合率为100%。结论MRSA产色筛选平板可用于临床快速检测MRSA。     

医院感染MRSA的mecA基因和耐消毒剂基因qacA的流行病学研究

目的了解耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的mecA基因和耐消毒剂基因qacA携带情况。方法采用全自动微生物分析系统VITEK2-COMPACT及配套鉴定卡、药敏卡对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌进行鉴定和药敏试验．并用WHONET5．6软件进行数据统计分析;用PCR扩增mecA基因和qacA基因,并对阳性基因进行测序分析。结果2009年1月至12月共分离金黄色葡萄球菌260株,其中耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌（MRSA）140株f53．8％1．对其中50株进行mecA基因和qacA基因检测,发现mecA基因阳性50株,阳性率为100％。未检出qacA基因。结论50株MRSA菌株均携带meCA基因,均未检测到耐消毒剂基风ⅡacA。     

乳胶结合试验快速检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌

目的：评价乳胶结合试验检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的试验方法。方法：收集81株金黄色葡萄球菌临床分离株，通过药敏试验将其分为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）和对甲氧西林敏感的金葡菌（MSSA），应用乳胶结合试验和基因扩增分别检测青霉素结合蛋白2a(PBP2a)和mecA基因。结果：33株mecA基因扩增阳性菌株中的28株PBP2a检测呈阳性，5株为阴性，46株MSSA中，meca基因扩增及PBP2a检测全部为阴性。与聚合酶链反应检测mecA基因相比，乳胶结合试验检测MRSA的特异性和敏感性分别为100％和91．3％（74／81）。结论：乳胶结合试验是一种简便、快速、准确地检测MRSA的方法，适于在普通临床微生物实验室开展。     

一种快速检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌方法的评价

目的评价胶体金法检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)和耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS)临床应用价值。方法采用头孢西丁纸片扩散法、PCR扩增mecA基因和胶体金法对临床分离的150株金黄色葡萄球菌(100株MRSA和50株MSSA)、68株溶血葡萄球菌(58株MRSH和10株MSSH)、135株表皮葡萄球菌(97株MRSE和38株MSSE)进行检测并作比较。结果 MRSA、MSSA、MRSE、MSSE、MSSH三种方法检测结果一致。58株MRSH中6株胶体金法检测阴性。结论胶体金法可作为MRSA简便而准确的检测方法,同时也可分析MRCNS。     

新生儿血培养中耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌的耐药基因及细胞间黏附基因A和D的研究

目的探讨新生儿血培养中耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌的耐药基因状况,并对分离株的细胞间黏附基因A和D在菌血症诊断中的意义进行了研究。方法对新生儿血培养中分离到的耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌进行抗生素药敏试验及菌株鉴定,采用PCR法进行mecA、icaA及icaD基因的检测。结果 100株耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌的分离株中mecA、icaA及icaD基因阳性检出率分别54株(58.7%)、62株(67.4%)、13株(14.1%)。在11例icaA和icaD同时阳性的病例中,有10例被诊断为新生儿菌血症。结论新生儿败血症感染耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌携带耐药基因十分严重,应重视对其监测与控制。icaA和icaD基因同时阳性是临床诊断凝固酶阴性葡萄球菌败血症的一种潜在实验室方法。     

引物标记技术在耐甲氧西林金黄色葡萄球菌检测中的应用

目的在GeXP系统中应用CY5标记的特异引物代替通用引物,建立一种检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的方法。方法设计mecA与nuc基因引物,经聚合酶链反应(PCR)扩增琼脂糖电泳验证引物特异性并优化PCR反应条件。用荧光染料CY5标记单条引物(单独标记上游或下游引物)。以提取的MRSA、甲氧西林耐药凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS)、甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA)核酸为模板液,采用已标记引物进行单重及多重PCR,产物经琼脂糖电泳与GeXP毛细管电泳分析,验证应用效果。再通过采用混合标记引物的GeXP系统检测100株MRSA,分析其应用效果。结果单标记下游引物的GeXP-PCR的杂质扩增峰较少。经GeXP系统检测分析的MRSA、MRCNS、MSSA均出现目的特征峰,能明确辨别其含有大小不同的基因片段,结果与琼脂糖电泳一致;经GeXP系统分析的100株MRSA均含有nuc与mecA片段,与VITEKⅡCompact检测结果相符。结论单独标记下游引物应用于GeXP检测MRSA的方法可行。     

头孢西丁纸片扩散法筛选耐甲氧西林葡萄球菌

目的:评价头孢西丁纸片法筛选耐甲氧西林葡萄球菌(MRS)的方法.方法:采用2004年NCCLS推荐的30μg/片头孢西丁纸片法检测MRS,以PCR方法检测mecA基因为"金标准".结果:在60株临床分离的葡萄球菌中,金黄色葡萄球菌36株,凝固酶阴性葡萄球菌24株.用PCR方法检测mecA基因阳性43株(金黄色葡萄球菌25株,凝固酶阴性葡萄球菌18株),阴性17株(金黄色葡萄球菌11株,凝固酶阴性葡萄球菌6株);用头孢西丁纸片法筛查MRS耐药(+)41株(金黄色葡萄球菌23株,凝固酶阴性葡萄球菌18株),敏感(-)19株(金黄色葡萄球菌13株,凝固酶阴性葡萄球菌6株).以PCR检测mecA基因法为"金标准",头孢西丁纸片法的敏感度和特异度分别为95.3%(41/43)、100%(17/17).准确度为96.7%(58/60).结论:头孢西丁纸片法筛查MRS与mecA基因检测法具有很好的一致性,该方法适合在临床微生物实验室中推广使用.     

头孢西丁纸片扩散法检测耐甲氧西林葡萄球菌

目的以PCR法检测葡萄球菌的mecA基因(mecA基因法)为标准，评价头孢西丁纸片扩散法、苯唑西林纸片扩散法和苯唑西林盐平板法检测葡萄球菌中耐甲氧西林葡萄球菌的灵敏度和特异性。方法PCR扩增葡萄球菌的特异性mecA基因片段，头孢西丁纸片扩散法、苯唑西林纸片扩散法和苯唑西林盐平板法检测葡萄球菌中耐甲氧西林葡萄球菌，药敏试验方法按标准K—B(Kirby-Bauer)法进行。结果在190株临床分离的葡萄球菌中金黄色葡萄球菌(金葡菌)138株，表皮葡萄球菌30株，溶血葡萄球菌22株，经。PCR法检测mecA基因，金葡菌中耐甲氧西林金葡菌(MRSA)和凝固酶阴性葡萄球菌中耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS)的发生率分别为81.2％(112／138)、96．1％(50／52)。头孢西丁纸片扩散法检测金葡菌中MRSA和CNS中MRCNS的发生率分别为81.2％(112／138)、94．2％(49／52)，与mecA基因法结果相比较，头孢西丁纸片扩散法检测葡萄球菌中MRS的灵敏度和特异度分别为99．4％(161／162)、100．0％(28／28)，两者符合率为99．5％(189／190)。2种方法所获得的结果经统计学处理，两者差异无显著性。结论头孢西丁纸片扩散法检测耐甲氧西林葡萄球菌具有很高的灵敏度和特异度，适合在临床微生物实验室中进行推广。     

金黄色葡萄球菌耐药基因及致病毒素基因的相关性研究

目的研究携带TSST-1和PVL基因的金黄色葡萄球菌耐药特点、分布特征及与致病性的关系。方法临床收集74株金黄色葡萄球菌,采用PCR法检测TSST-1、PVL和mecA基因,纸片扩散法进行17种抗菌剂的耐药性检测。结果 74株金黄色葡萄球菌中mecA基因检出率为55.4%,其中22株检出PVL基因(30.3%),PVL阳性的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)为15株(36.6%),甲氧西林敏感的金黄色葡萄球菌(MSSA)为7株(21.2%),两者间差异无统计学意义(P>0.05)。5株金黄色葡萄球菌中检出TSST-1基因(6.3%),均为MRSA。MRSA耐药性严重,并呈多重耐药性,携带基因PVL和TSST-1的MRSA除对万古霉素敏感外,对其他抗菌剂均耐药。结论携带基因TSST-1和PVL的金黄色葡萄球菌耐药性及致病力更强,增加了临床抗感染治疗的难度。     

头孢西丁纸片法筛查耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的评价

目的评价头孢西丁纸片法筛选耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的方法.方法采用NCCLS推荐的30μg头孢西丁纸片法和苯唑西林纸片法检测MRSA,以PCR方法检测mecA基因为金标准.同时做头孢西丁对金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度(MIC).结果用PCR方法检测145株金黄色葡萄球菌,其中mecA基因阳性83株,阴性62株.用头孢西丁纸片法筛查MRSA阳性82株,阴性63株.敏感性为98.8%,特异性为100%.而苯唑西林纸片法检测MRSA敏感性为95.2%,特异性为96.8%.结论头孢西丁纸片法筛查MRSA与mecA基因检测具有很好的一致性,该方法可在常规工作中推广使用.     

聚合酶链反应检测mecA和mecI及其对葡萄球菌甲氧西林耐药的影响

目的了解葡萄球菌甲氧西林耐药基因mecA和调节基因mecR中的抑制基因mecI在葡萄球菌中的分布,探讨mecA、mecI和β-内酰胺酶对甲氧西林耐药性的影响。方法琼脂稀释法测定158株葡萄球菌苯唑西林MIC;聚合酶链反应检测mecA和mecI;用内切酶TrulⅠ进行mecI酶切分型。结果 158株葡萄球菌中,金黄色葡萄球菌(SA)66株,凝固酶阴性葡萄球菌(CNS)92株,葡萄球菌对苯唑西林的总耐药率达44.3%(70/158)。158株葡萄球菌中,检出mecA阳性70株,其中SA 8株,CNS 62株。70株mecA阳性葡萄球菌中,检出mecI阳性12株,其中SA7株,CNS 5株;88株mecA阴性葡萄球菌中未检出mecI。对mecA阴性、苯唑西林MIC≥4μg/mL的菌株进行抑制实验后,再测定苯唑西林MIC,抑制后MIC下降8倍以上。结论耐甲氧西林葡萄球菌以mecA为其主要的甲氧西林耐药决定子;β-内酰胺酶和mecI基因对葡萄球菌甲氧西林耐药有一定的影响。     

一种简单的筛选耐甲氧西林葡萄球菌方法

目的　推荐美国国家临床实验室标准化委员会 (NCCLS)关于 6 μg/ml苯唑西林 +4%NaCl盐平板 (以下简称盐平板法 )检测甲氧西林耐药葡萄球菌。方法　使用NCCLS推荐的盐平板法检测华山医院临床分离的葡萄球菌共 894株。结果　 (1)耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 (MRSA)苯唑西林纸片法的检出率为 84 .2 % (5 38/6 39) ,盐平板法的检出率为 86 .4 % (5 5 2 / 6 39) ,而耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌 (MRCNS)的检出率 2种方法分别为 82 .0 (2 0 9/ 2 5 5 )、90 .6 % (2 31/ 2 5 5 ) ;(2 )有 14株纸片法测定为中介的金黄色葡萄球菌和 2 2株纸片法检测为甲氧西林敏感 (MS)的凝固酶阴性葡萄球菌 ,盐平板检测均为甲氧西林耐药 (MR) ,经聚合酶链反应 (PCR)检测mecA基因结果均为阳性 ,显示PCR检测与盐平板检测结果一致 ;(3)随机取上述纸片法和盐平板 2种方法检测均为MS者 9株、MR者 15株 ,同时进行mecA基因的PCR检测 ,结果显示全部与盐平板法和苯唑西林纸片法检测结果符合。结论　在临床微生物实验室应该采用NCCLS推荐的 6 μg/ml苯唑西林 +4%NaCl盐平板对MRSA和MRCNS进行检测 ,以供临床诊断和选用抗生素。     

一种简单的筛选耐甲氧西林葡萄球菌方法

目的推荐美国国家临床实验室标准化委员会(NCCLS)关于6ug／ml苯唑西林 4％NaCl盐平板(以下简称盐平板法)检测甲氧西林耐药葡萄球菌。方法使用NCCLS推荐的盐平板法检测华山医院临床分离的葡萄球菌共894株。结果(1)耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)苯唑西林纸片法的检出率为84．2％(538／639)，盐平板法的检出率为86．4％(552／639)，而耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS)的检出率2种方法分别为82．0(209／255)、90．6％(231／255)；(2)有14株纸片法测定为中介的金黄色葡萄球菌和22株纸片法检测为甲氧西林敏感(MS)的凝固酶阴性葡萄球菌，盐平板检测均为甲氧西林耐药(MR)，经聚合酶链反应(PCR)检测mecA基因结果均为阳性，显示PCR检测与盐平板检测结果一致；(3)随机取上述纸片法和盐平板2种方法检测均为MS者9株、MR者15株，同时进行mecA基因的PCR检测，结果显示全部与盐平板法和苯唑西林纸片法检测结果符合。结论在临床微生物实验室应该采用NCCLS推荐的6ug／ml苯唑西林 4％NaCl盐平板对MRSA和MRCNS进行检测，以供临床诊断和选用抗生素。     

三种检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌方法的比较

[摘要]目的:对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)3种检测方法的可靠性和临床实用性进行评价。方法：用检测mecA基因的PCR扩增法、苯唑西林纸片扩散法、头孢西丁制片扩散法对临床分离的84株金黄色葡萄球菌进行检测并作比较。结果:苯唑西林纸片扩散法检的敏感性、特异性分别为97.6%、95.3%,mecA基因的PCR扩增法和头孢西丁纸片扩散法的敏感性、特异性均为100.0%。结论:PCR技术检测MRSA具有快速、敏感和特异的特点,是一种非常有效的鉴别方法。纸片扩散法简便易行,成本低廉, 尤其是头孢西丁纸片扩散法的敏感性和特异性较苯唑西林纸片扩散法更高,值得在临床实验室中推广应用。 [关键词]　耐甲氧西林金黄色葡萄球菌；mecA基因；PCR；苯唑西林；头孢西丁     

实时荧光PCR在检测MRSA引起血流感染中的研究

目的建立检测引起血流感染中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）mecA基因的实时荧光PCR法。方法设计mecA引物,优化荧光实时PCR实验条件,并用该法检测临床分离的78株金黄色葡萄球菌引起血流感染标本,其结果与头孢西丁纸片扩散法的结果进行比较。结果 78株金黄色葡萄球菌中,荧光实时PCR法检测出mecA基因阳性38株、阴性40株;头孢西丁纸片扩散法检测出MRSA 27株、MSSA 51株,经配对卡方检验,荧光实时PCR法检出率显著高于头孢西丁纸片扩散法（P〈0.01）。结论荧光实时PCR法能敏感、特异检测MRSA引起的血流感染,比一般MRSA表型检测更加简便、快速。     

实时荧光定量PCR在快速检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌中的应用评估

目的评价实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)在快速检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)中的应用。方法采用头孢西丁纸片扩散法和mecA基因PCR检测法,将85株临床分离的金黄色葡萄球菌区分为MRSA和甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA),并采用实时荧光定量PCR对这些菌株进行检测,评价MRSA检测中实时荧光定量PCR与目前常规检测方法的一致性。结果根据头孢西丁纸片扩散法和mecA基因扩增结果进行分组,85株金黄色葡萄球菌中MRSA组菌株45株,MSSA组菌株40株;实时荧光定量PCR检测结果与上述结果完全一致,符合率为100%。结论实时荧光定量PCR检测MRSA的结果与常规方法一致性好,且具有操作简便、耗时短等特点。作为一种快速检测方法,实时荧光定量PCR能将金黄色葡萄球菌的鉴定和MRSA的筛选结合起来,对于指导临床用药及MRSA医院感染控制具有重要意义。