金黄色葡萄球菌耐药机制的研究

目的探讨金黄色葡萄球菌的耐药性及耐药机制。方法按NCCLS推荐的琼脂平皿对倍稀释法测定分离鉴定的198株金黄色葡萄球菌对苯唑西林的耐药性（MIC值）;用Nitroeephin纸片法测定各菌株产酶情况,统计对苯唑西林不同耐药水平的金黄色葡萄球菌产酶率并分析其耐药水平和产酶率的相关关系;PCR测定各菌株含mecA基因情况。结果198株金黄色葡萄球菌对苯唑西林的耐药率为64．65％;128株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）中,高耐菌株为118株（92．19oA）,低耐株为10株（7．81%）。敏感株产酶率为58．57％（41株）,高耐株产酶率53．39％（63株）,低耐株产酶率40．00％（4株）,苯唑西林敏感株与高耐株之间产β-内酰胺酶的差别有统计学意义,前者高于后者;含mecA基因的高耐株占95．76％（113／118）、低耐株占60．00％（6／10）、敏感株占10．00％（7／70）,高耐株与敏感株含mecA基因的差别有统计学意义,前者高于后者。结论金黄色葡萄球菌耐药机制主要是产β-内酰胺酶和mecA基因的表达。     

多重聚合酶链反应用于检测、鉴定耐甲氧西林葡萄球菌的研究

目的 建立一种快速的多重聚合酶链反应(PCR)方法，用于检测葡萄球菌对甲氧西林的耐药性，同时对金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌的种进行鉴定。方法 对临床分离的武汉地区金黄色葡萄球菌80株。表皮葡萄球菌70株，其余凝固酶阴性葡萄球菌60株，提取其基因组DNA，针对金黄色葡萄球菌独有的femA基因，表皮葡萄球菌的种特异性序列，决定葡萄球菌对甲氧西林耐药性的mecA基因，和细菌共有的16srRNA基因的保守序列设计四对引物。同时加入PCR体系中对相应片段进行扩增。结果 在210株葡萄球菌中，mecA基因检测结果与苯唑西林敏感试验结果的一致率为96．2％。mecA基因阳性但苯唑西林敏感的5个菌株，通过由低到高浓度的苯唑西林筛选培养后。均表现出耐药性。mecA基因阴性但苯唑西林耐药的3个菌株，经过对阿莫西林-克拉维酸敏感性试验后，被证明是β-内酰胺酶的高产株。结论 此多重PCR方法不仅可以对临床分离葡萄球菌菌株的甲氧西林耐药性作出判断。同时还可以对金黄色葡萄球菌及表皮葡萄球菌做出种的鉴定，是一种高效、敏感、特异性高的检测技术。     

金黄色葡萄球菌耐药表型与femA表达水平关系研究

目的 探讨不同表型金黄色葡萄球菌femA基因的表达.方法 用琼脂对倍稀释法和产β-内酰胺酶纸片法筛选出来不同表型(苯唑西林敏感、低水平耐药、高水平耐药)、非产酶金黄色葡萄球菌临床株共15株以及瑞士捐赠的实验株4株,提取RNA,进行电泳分析及实时荧光定量PCR检测femA表达,实验株BB270的femA表达量设为100%,其他菌株值与之相比.结果 所有的菌株均检测到femA的表达,femA缺失株BB308表达量为37.82%,重组株BB586表达量为240.50%,同质性耐药株COL表达量为862.61%.4株敏感株表达量介于0.00353%～29.92%,4株低耐株表达量介于0.00554%～310%,7株高耐株表达量介于13.88%～55000%,3组间femA表达水平不全相同,苯唑西林敏感组与低水平耐药组之间femA表达量的差异无统计学意义(P1=0.83),高水平耐药组与敏感组及低水平耐药组之间femA表达量的差异均有统计学意义(P2=0.006、P3=0.01)).结论 非产酶金黄色葡萄球菌femA的表达水平在甲氧西林高水平耐药组中高于低水平耐药组和敏感组,femA是耐甲氧西林金黄色葡萄球菌高水平耐药表达的必需因子.     

压电基因传感器阵列检测MRSA的实验研究

目的：探讨以压电传感阵列技术检测耐甲氧西林葡萄球菌的可行性。方法：收集临床64株葡萄球菌标本，对其耐药标志基因mecA基因和金黄色葡萄球菌特有基因femA增后应用压电传感器阵列进行检测，并以PCR电泳检测作参照，与目前采用的常规药物敏感试验进行对比分析。结果：传感器分析与PCR电泳分析结果完全一致，而此两种方法与常规培养加药敏法比较。结果略有差异。所有64株葡萄球菌中，2株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）的mecA为阴性，2株甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌（MSSA)的mecA为阳性，1株耐甲氧西林凝固酶性葡萄球菌（MRCNS）的mecA为阴性；2株甲氧西林敏感凝固酶阴性葡萄球菌（MSCNS）的mecA为阳性。结论：以压电传感阵列技术同时检测femA基因和mecA基因，既可鉴定出是否为金黄色葡萄球菌，又可判断其耐药类型，能为危重病人感染MRSA时的诊断和治疗提供依据。     

PCR扩增法检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的mecA基因

[摘要] 目的 应用mecA基因PCR扩增法检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)。方法 对临床分离的84株金黄色葡萄球菌,应用mecA基因PCR扩增法鉴定MRSA,并与苯唑西林纸片扩散法和头孢西丁纸片扩散法进行比较。结果 84株金黄色葡萄球菌中, 41株金黄色葡萄球菌的mecA基因扩增呈阳性,其中有1株表现为对苯唑西林敏感;苯唑西林纸片扩散法检出42株阳性,其中有2株mecA基因呈阴性. 头孢西丁纸片扩散法与PCR扩增法的试验结果完全符合。结论 mecA基因PCR扩增法可以准确、快速判定MRSA。     

慢性鼻窦炎耐甲氧西林葡萄球菌对抗生素的耐药分析

目的:了解慢性鼻窦炎耐甲氧西林葡萄球菌(methicillin-resistant staphylococcus,MRS)的感染情况及耐药特点,为临床合理选用抗菌药物、有效控制MRS的感染提供依据。方法:采用苯唑青霉素纸片法和琼脂筛选法,对临床分离的葡萄球菌行MRS检测,并测定了它们对20种常用抗生素的耐药谱和β-内酰胺酶。结果:72株金黄色葡萄球菌中,耐甲氧西林株占37.6%,其中产β-内酰胺酶菌株占77.8%。凝固酶阴性的葡萄球菌(CoN葡菌)中,耐甲氧西林株占38.3%,其中产β-内酰胺酶菌株占72.7%。MRS菌株耐药程度明显高于甲氧西林敏感葡萄球菌(P<0.05)。金黄色葡萄球菌耐甲氧西林株和凝固酶阴性葡萄球菌耐甲氧西林株多重耐药数分别为6~17种和5~15种。结论:万古霉素、利福平、丁胺卡那对MRS显示了较强的抗菌活性。万古霉素是治疗感染的首选药物,MRS的多重耐药性应引起广泛关注,需加强抗生素使用的管理和MRS对抗生素耐药性的监测。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌对苯唑西林耐药表型与femB基因表达水平关系研究

目的 了解金黄色葡萄球菌femB基因表达水平与其对苯唑西林不同耐药表型的关系.方法 从临床送检标本中分离71株非重复金黄色葡萄球菌,琼脂对倍稀释法测定苯唑西林的最低抑菌浓度,产色头孢菌素纸片法测定菌株产β-内酰胺酶情况;将28株非产β-内酰胺酶金黄色葡萄球菌株按对苯唑西林的最低抑菌浓度分为敏感组、低耐组、高耐组,采用实...     

耐甲氧西林葡萄球菌的实验诊断和药敏监测分析

为了解当地耐甲氧西林葡萄球菌的流行情况和耐药特征，从189株各类葡萄球菌中检出耐甲氧西林葡萄球菌126株，并进行了21种抗生素药敏和β-内酰胺酶测定，调查了医院环境中的耐甲氧西林葡萄球菌流行情况，其各项结果均与临床分离株一致，所有耐甲氧西林葡萄球菌均对青霉素G、氨苄青霉素、苯唑青霉素耐药；但均对万古霉素敏感，其次为利福平、环丙氟哌酸、氟嗪酸、头孢噻肟抗菌活力较强，耐甲氧西林葡萄球菌产β-内酰胺敏高于不耐甲氧西林葡萄球菌，两有非常显性差异（P<0.001)，耐甲氧西林金黄色葡萄球菌噬菌体分型，以Ⅰ群为主。     

438株金黄色葡萄球菌耐药性分析

目的 了解金黄色葡萄球菌感染的耐药情况，指导临床合理使用抗生素。方法 采用琼脂筛选法检测金黄色葡萄球菌对苯唑西林耐药情况，β-内酰胺酶采用产色头孢菌素法测定，药敏试验按K-B纸片扩散法进行。结果 438株金黄色葡萄球菌中，β-内酰胺酶阳性菌占401株，产酶率为91．55％，检出MRSA236株，占53．88％，β-内酰胺酶阳性金黄色葡萄球菌的耐药率高于阴性金黄色葡萄球菌耐药率，耐苯唑西林金黄色葡萄球菌的耐药率高于对苯唑西林敏感的金黄色葡萄球菌。未检出耐万古霉素的金黄色葡萄球菌。 结论 金黄色葡萄球菌是临床感染的主要病原菌之一；分析金黄色葡萄球菌耐药情况，可以指导临床合理选用抗生素。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌抗生素耐药和耐药基因的检测

目的探讨北京地区社区感染和院内感染中金黄色葡萄球耐药情况变化。方法用琼脂稀释法检测了471株从北京地区收集的金黄色葡萄球菌对11种抗生素的敏感水平(其中422株菌株从1993年至2000年门诊脓疱疮患儿分离获得,49株从2000年烧伤病房住院患者分离获得)。用聚合酶链反应方法对上述菌株进行了mecA耐药基因的检测。结果引起社区感染的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的比率由1993年的12.2%上升至2000年的29.8%,对甲氧西林均表现为低度耐药。引起院内感染的金黄色葡萄球菌对甲氧西林的耐药率为63.3%,表现为高度耐药。所有的金黄色葡萄球菌对青霉素100%耐药,对红霉素、四环素、克林霉素和氯霉素的耐药率分别约80%、70%、60%和50%。引起社区感染的金黄色葡萄球菌中未发现庆大霉素和利福平耐药菌株,对环丙沙星的耐药率由1993年的2.4%上升至2000年的21.3%;引起院内感染的金黄色葡萄球菌中对庆大霉素、环丙沙星和利福平的耐药率分别为63.3%、63.3%和57.1%。所有的金黄色葡萄球菌均对夫西地酸和万古霉素敏感。2000年分离的多重耐药菌株比例较1993年有所增加。PCR对mecA耐药基因的测定结果显示,所有对甲氧西林高度耐药的金黄色葡萄球菌mecA耐药基因均呈阳性;对甲氧西林低度耐药的金黄色葡萄球菌mecA耐药基因均呈阴性。结论在本实验所及范围内,北京地区金黄色葡萄球菌的耐药率逐渐上升,mecA耐药基因测定是筛选耐药MRSA菌株的快速、简易手段。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的多重聚合酶链反应检测方法

目的 建立多重聚合酶链反应9multiplex poly-merase chain reaction,mt-PCR)快速检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）。方法 对临床分离的63株金黄色葡萄球菌，采用mt-PCR快速检测MRSA的决定基因mec和辅助基因femA,用16SrRNA基因作内参照。结果 mt-PCR的预期扩增结果为耐药株出现3条扩增区带，敏感株只有femA基因和16SrRNA基因出现2条扩增区带。在63株金黄色葡萄球菌中，药敏法34.9%（22/63）耐药；mt-PCR增增mecA基因34.5%(23/63)阳性，femA基因和16SrRNA基因100%阳性；单引物PCR与mt-PCR两者阳性扩增符合率为100%。结论 采用多重聚合酶链反应，可在同一扩增体系内同时检出mecA基因，femA基因，对MRSA临床株的快速，及时检出，有效控制MRSA造成的感染，限制其传播等具有重要的现实意义。     

多重PCR在诊断慢性上颌窦炎耐甲氧西林金黄色葡萄球菌中的作用

目的　设计慢性上颌窦炎中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 (MRSA)的快速检出方法。方法　利用多重聚合酶链反应 (MPCR)技术 ,同时检测同一DNA模板中的金黄色葡萄球菌耐药基因mecA及金黄色葡萄球菌固有的femA基因。结果　femA基因为金黄色葡萄球菌的特有基因 ,mecA基因在MRSA中检出率为 96 .2 %(5 1/ 5 3例 )。结论　MPCR方法能快速准确地鉴定MRSA。     

mecA、femA基因PCR联合扩增法检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌

目的 探讨mecA、femA基因PCR联合扩增快速检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的敏感性及特异性。方法 用纸片扩散法及mecA、femA基因PCR联合扩增检测178株葡萄球菌中的MRSA，并与琼脂稀释法的结果比较。结果 纸片扩散法筛检MRSA(耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌，MRCNS)的敏感性、特异性分别为94．4％(89．5％)、92．4％(73．7％)。在金黄色葡萄球菌中若以mecA基因阳性为判定MRSA的指标，则敏感性、特异性分别为91．7％、95.5％。在178株葡萄球菌中若以mecA、femA基因阳性作为判定MRSA的指标，特异性提高到97．9％．结论 PCR mecA、femA基因联合扩增既可用于筛检MRSA，又可免去常规生化鉴定，具快速、特异性强的优点。     

院内外环境分离金黄色葡萄球菌的耐药性及毒素基因检测

目的检测医院及环境样中金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus,SA）耐药基因及毒素基因,了解其分布情况。方法采用多重聚合酶链反应（multiplex polymeras chain reaction,PCR）技术分别检测耐药基因mecA、femA与毒素基因TSST、PVL。结果 83株金黄色葡萄球菌,仅3株（3.61%）菌检出mecA基因,22株菌（26.50%）检出femA基因,15株菌（18.07%）同时检出mecA与femA基因。医院样本检出12株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（methicillin-resistantStaphylococcus aureus,MRSA）,3株甲氧西林耐药凝固酶阴性的金黄色葡萄球菌（methicillin-resistant and coagulasenegative Staphylococcus aureus,MRCNS）。83株分离自医院及环境样本SA,2株分离自咽拭子的样本检出TSST基因,检出率4.54%（2/44）;1株分离自血液的样本检出PVL基因,检出率2.27%（1/44）,其余菌株未检出毒素基因。结论院内样本中,部分菌株携带mecA基因,环境样本未发现携带mecA菌株,两者存在差异。83株SA菌,毒素基因携带率较低。检测耐药、毒素基因携带率,为临床治疗及院内感染控制,食物中毒溯源提供依据。     

耐甲氧西林葡萄球菌的多重PCR快速检测

目的 采用多重聚合酶链反应（PCR）检测耐甲氧西林葡萄球菌（MRS）,并对我院葡萄球菌的耐药率进行调查。方法 对262株葡萄球菌（金黄色葡萄球菌86株,凝固酶阴性葡萄球菌176株）进行多重PCR扩增,并与琼脂稀释法作比较。对我院葡萄球菌的耐药率进行统计分析。结果 以mecA基因阳性判断MRS,灵敏度为100％,特异度为96．6％,阴性预测值为1.0％,阳性预测值为99．0％;以mecA基因和femA基因阳性判断耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）,灵敏度为100％,特异度为99．5％,阴性预测值为100％,阳性预测值为98．5％。我院葡萄球菌耐药率为78．6％,其中凝固酶阴性葡萄球菌耐药率为79．0％,金黄色葡萄球菌耐药率为78．0％。结论 多重PCR技术检测mecA基因能快速、敏感、准确地检测MRS,与femA基因联合检测能有效检测MRSA。MRS已成为日益严重的葡萄球菌感染问题。     

神经外科病房金黄色葡萄球菌的耐药性及MRSA基因多态性研究

目的了解某院神经外科病房金黄色葡萄球菌的耐药性及耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)分子流行病学特点。方法采用纸片扩散法检测2008-2011年从神经外科住院患者分离的金黄色葡萄球菌254株的耐药性,MRSA的鉴定采用头孢西丁纸片扩散法和检测femA、mecA基因的双重PCR方法;采用随机引物多态性技术(RAPD)对分离的32株MRSA做同源性分析。结果神经外科病房MRSA的分离率92.9%,对万古霉素、替考拉宁和利奈唑胺的敏感率为100%,对复方新诺明和克林霉素的敏感率分别为82.3%和74.4%,对左氧氟沙星、环丙沙星、红霉素和青霉素耐药率均大于95%;32株MRSA的RAPD图谱有4种类型(Ⅰ-Ⅳ型),Ⅰ型20株(62.5%),Ⅱ型7株(21.9%),Ⅲ型3株(9.3%),Ⅳ型2株(6.2%)。结论某院神经外科病房存在基因型为Ⅰ型的MRSA菌株的暴发流行。     

外源性甘氨酸对金黄色葡萄球菌耐药及femA表达水平的影响

目的探讨外源性甘氨酸对金黄色葡萄球菌苯唑西林耐药水平及femA表达的影响。方法用琼脂平皿对倍稀释法检测不同浓度甘氨酸下苯唑西林对30株金黄色葡萄球菌的MIC值,用实时荧光定量PCR方法检测不同浓度甘氨酸下金黄色葡萄球菌femA表达水平。结果30株金黄色葡萄球茵中MSSA4株,低耐MRSA2株,高耐MR-SA24株,在0．2M外源性甘氨酸存在时MIC下降4-256倍,在0．3M外源性甘氨酸存在时MIC均〈0．25μg／ml。在所有金黄色葡萄球菌中均检测到femA表达,在0．2M甘氨酸存在时femA表达下降50％-80％,0．3M甘氨酸存在时femA表达下降75％-90％。结论外源性甘氨酸能降低金黄色葡萄球菌对苯唑西林的耐药水平及femA表达水平。     

金黄色葡萄球菌抗生素耐药相关基因检测

目的检测医院及环境样中金黄色葡萄球菌（Staphylococcusaurell,SA）耐药基因,了解耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌（MethicillinResistantStaphylococcusaUleus,MRSA）和甲氧西林耐药凝固酶阴性葡萄球菌（MethiciUinResistantcoagulaseStaphylococcusanl＇e118,MRCNS）检出率以及金黄色葡萄球菌耐药基因分布情况。方法应用多重聚合酶链反应（Multiplexpolymeraschmnreaction,muhiplexPCR）检测医院及环境样中金黄色葡萄球菌的mecA、居mA基因。采用聚合酶链反应（Polymeraschmnreaction,PCR）技术检测金黄色葡萄球菌的11种耐药基因,分别是Bβ内酰胺类耐药基因blaTEM,氨基糖苷类耐药基因Aac（6’）／aph（2”）、aph（3’）-Ⅲ、ant（3”）-I、ant（4’,4”）与ant（6）-I,四环素耐药基因tetM,红霉素耐药基因erm,万古霉素耐药基因vanA、vanB,耐消毒基因qacA。结果44株菌分离自医院病人样本,检出12株MRSA,3株MRCNS。其中29株菌携带1种以上耐药基因,14株携带tetM基因,5株携带vanB基因,7株携带A0c（6’）伽h（2”）基因,9株携带aph（3’）-Ⅲ基因,7株携带ant（4＇,4”）基因,5株携带ant（6）-I基因。29株菌分离自环境样本,未检出MRSA与MRCNS。仅1株检出Aac（6’）/aph（2”）基因,16株检出ant（4＇,4”）基因,其余10种耐药基因未检出。结论院内样本中,不同样本分离菌株携带耐药基因存在差异,未检出携带qacA基因的菌株。环境样本携带肌￡（4’,4”）基因较高。检测耐药基因分布情况,为指导临床用药、控制院内感染及监测环境中菌株耐药情况提供依据。